Analýza chemických zložiek v druhoch Cistanche

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Yong Jiang, Peng-Fei Tu a kol

Abstraktné

Druhy roduCistanche(Rou Cong Rong v čínštine) sú vytrvalé parazitické byliny a sú rozšírené hlavne v suchých krajinách a teplých púšťach. Ako vynikajúce tonikum na liečbu nedostatku obličiek, impotencie, ženskej neplodnosti, chorobnej leukorey, profúznej metrorágie a stareckej zápchy.Cistanchebylinkyzískal česť "Ženšen púšte". V poslednej dobe sa vedecká pozornosť venuje Herba Cistanche pre jej pozoruhodné biologické aktivity vrátane antioxidácie, neuroprotekcie a starnutia. Chemické zložkyCistancherastlinyzahŕňajú najmä prchavé oleje a neprchavéfenyletanoidglykozidy(PhG), iridoidy, lignany, alditoly, oligosacharidy a polysacharidy. Farmakologické štúdie ukazujú, že PhGs sú hlavnými aktívnymi zložkami na liečenie nedostatku obličiek, antioxidáciu a neuroprotekciu; galaktitol a oligosacharidy sú reprezentantmi pri liečbe stareckej zápchy, zatiaľ čo polysacharidy sú zodpovedné za zlepšenie imunity organizmu. V tomto dokumente sú pokroky v oblasti chemických zložiekCistancherastlinya ich príslušné analýzy sú preskúmané.

Kľúčové slová:Cistanche Herba, Cistanches Chemical, analýza zložiek, fenyletanoidové glykozidy

1. Úvod

CistancheHoffmg. Et Link, jeden z rodov čeľade Orobanchaceae s 22 druhmi na svete, je rozšírený najmä v suchých krajinách a púšťach na severnej pologuli, ako je Xinjiang, Vnútorné Mongolsko, autonómne oblasti Ningxia a Gansu, provincie Qinghai Čína, ale aj Irán, India, Mongolsko atď. [1]. Ich rastové prostredie je veľmi náročné: extrémne suché podnebie, prudké kolísanie teplôt, intenzívne slnečné žiarenie, menej ako 250 mm ročných zrážok a depauperované pôdy [2,3]. TheCistanchedruhy patria k viacročným parazitickým bylinám, ktoré sa bežne uchytávajú na koreňoch rastlín viažucich piesok, ako sú Haloxylox ammodendron, H. persicum, Kalidium foliated a Tamarix atď. [3]. Podľa záznamu Taxonomical Index of Chinese Higher Plants [4] existuje v Číne šesť druhov Cistanche. Ďalšia štúdia však potvrdila, že iba štyri druhy a jedna variáciaCistancheexistujú v Číne, tjCistanchedeserticolaYC Ma, C. tubulosa (Schenk) R. Wight, C. salsa (CA Mey.) G. Beck, C. salsa var. albiflflora PF Tu et ZC Lou a C. sinensis G. Beck [5].

Rou Cong Rong (HerbaCistanche), prvýkrát zaznamenaný v Shen Nongovej čínskej Materia Medica, sa týka sušených sukulentných stoniekCistancherastliny.HerbaCistanchebol považovaný za vynikajúce tonikum a získal česť "Ženšen púští". Vedecké hodnoty Herba Cistanche spočívajú v liečbe nedostatku obličiek, impotencie, ženskej neplodnosti, chorobnej leukorey, profuzemetrorágie a stareckej zápchy[6,7]. Bol to najčastejšie predpisovaný liek proti nedostatku obličiek v Číne pre nasledujúce dynastie. Spomedzi druhov Cistanche bola v Čínskom liekopise (vydanie z roku 2000) [8] preradená iba C. deserticola a C. tubulosa bola pridaná do Čínskeho liekopisu z roku 2005 ako alternatíva pre svoje podobné chemické zložky, farmakologické aktivity a relatívne bohatý zdroj v porovnaní s C. deserticola [9–11]. V posledných rokoch je však divoká C. deserticola na pokraji vyhynutia v dôsledku nadmerného zberu a bola zbieraná ako jedna z rastlín triedy II, ktoré potrebujú ochranu v Číne. Vzhľadom na nedostatok prírodných zdrojov úradníkaHerbaCistanche, iné druhy tohto rodu, ako C. salsa a C. Sinensis, sa tiež používajú ako náhrada v mnohých oblastiach [10].

Vedecký výskum naCistancherastlinyzačala v 80. rokoch 20. storočia [12] a chemická analýza ukázala, že rôzne zlúčeniny, vrátane éterických olejov,fenyletanoidglykozidy(PhG), iridoidy, lignany, alditoly, oligosacharidy a polysacharidy sú hlavnými zložkamiCistancherastliny[13,14]. Farmakologický výskum ukázal, že extrakty zCistancherastliny majú široké spektrum aktivít, ako je liečba nedostatku obličiek a stareckej zápchy, zlepšenie schopnosti učiť sa a zapamätanie, liečba Alzheimerovej choroby, posilnenie imunity, proti starnutiu a proti únave [14–21]. So zlepšovaním životnej úrovne a príchodom starnúcej spoločnosti,Cistancherastlinysi získali väčšiu pozornosť a používajú sa stále viac a viac v dôsledku ich významných farmakologických aktivít.

Existuje niekoľko prehľadov o štúdiu chemických zložiek a farmakologických aktivítCistancherastliny[13 – 15]. Tento článok sa zameriava na chemickú analýzu tohto rodu a pokrok v štúdiách chemických zložiek.

2. Prchavé zlúčeniny

Bežne používané metódy extrakcie prchavých zlúčenín TCM zahŕňajú destiláciu vodnou parou a extrakciu lipofilným organickým rozpúšťadlom. Pomocou destilácie vodnou parou sa extrahovali esenciálne oleje C. salsa a C. tubulosa a pomocou GC–MS sa identifikovalo 38 a 21 zložiek (tabuľka 1). Hlavné zložky esenciálnych olejov C. salsa pozostávajú z alkánov, alkoholov, aldehydov a niektorých heterocyklických zlúčenín, zatiaľ čo kyselina palmitová a kyselina linolová sú dve hlavné zložky celkových olejov C. tubulosa [22,23]. Prchavé zlúčeniny C. deserticola sa extrahovali petroléterom a pomocou GC-MS sa identifikovalo 25 zložiek. Tri najbohatšie zložky sú metyl 14-metylpentadekanoát (13,61 percenta), etylpalmitát (12,39 percenta) a 2,5,6-trimetyloletán (7,60 percenta) [24]. Ďalšia správa o prchavých zložkách C. deserticola ukázala, že eugenol bol hlavnou zložkou pri použití metódy simultánnej destilácie a extrakcie [25]. Rozdielne analytické výsledky týchto dvoch prác [24,25] môžu byť spôsobené rôznymi extrakčnými metódami a rôznymi analytickými podmienkami GC–MS.

Okrem toho Ma oznámila metódu extrakcie superkritickou tekutinou (SFE) na extrakciu nepolárnych zložiek z C. salsa. Analýza extraktu pomocou GC–MS ukázala, že okrem alkánov existujú aj niektoré estery a nízkomolekulárne zlúčeniny obsahujúce kyslík alebo dusík. Tento výsledok ukázal, že polárnejšie zlúčeniny možno extrahovať pomocou SFE pridaním polárneho modifikátora [26].

3. Neprchavé zlúčeniny

Neprchavé zlúčeninyCistancherastlinyzahŕňajú najmä fenyletanoidy, iridoidy, lignany, alditoly, oligosacharidy a polysacharidy. Doteraz sa z nich izolovalo viac ako 100 neprchavých zlúčenínRastlina Cistanche. Distribúcia rôznych typov zlúčenín vCistancherastlinyje uvedený v tabuľke 2. V roku 1995 Moriya [27,28] oznámil, že rastlinný materiál C. salsa bol predtým nesprávne identifikovaný, keď skúmal zdroje Herba Cistanches z japonských medicínskych trhov, takže chemické zložky izolované z C. .salsa v 80. rokoch boli v tomto prehľade preradené k C. deserticola.

3.1. Fenyletanoidové glykozidy

3.1.1. Chemické štruktúry PhGs

PhG boli považované za hlavné aktívne zložkyCistanchedruhov. K dnešnému dňu 34 PhG(phenyletanoidglykozidy)boli izolované odRastliny cistanchevrátane 22 disacharidových glykozidov, 10 trisacharidových glykozidov a 2 monosacharidových glykozidov (tabuľka 3). Analýzou štruktúr PhGs vCistanche, boli zhrnuté nasledujúce štruktúrne charakteristiky: cukrová časť disacharidových glykozidov pozostáva z glukózy a ramnózy s Glc (3→1) Rha väzbou. Glukóza sa bežne spája priamo s aglykónom a vo svojej polohe C4 alebo C6, kde sa zvyčajne nachádza kumaroyl alebo kafeoyl. Keď má byť PhG trisacharidový glykozid, ďalšia glukóza alebo ramnóza sa zvyčajne objaví v polohe C6 vnútornej glukózy. Medzi tými PhGs (phenyletanoidglykozidy)odCistanchekrenatozid (34) je výnimočný, pretože medzi polohou aglykónu a polohou C-2 vnútornej glukózy v jeho štruktúre existuje éterový kruh [34]. Nedávno bola po prvýkrát opísaná röntgenová monokryštálová štruktúra salidrosidu (15), PhG izolovanej z C. deserticola [44].

Štúdie farmakologickej aktivity PhG(phenyletanoidglykozidy)preukázali, že majú rôzne funkcie, ako je antioxidácia, neuroprotekcia, posilnenie imunitnej a sexuálnej funkcie, hepatoprotekcia, antiradiácia atď. [15–17,40,48–50]. Medzi nimi sa neuroprotekcia stáva horúcou témou. Niektoré jednotlivé zložky alebo frakcie PhG(phenyletanoidglykozidy)sa uvádza, že inhibujú apoptózu neurónových buniek indukovanú rôznymi chemikáliami [51–57] a ich neuroprotekcia in vitro bola tiež dokázaná na niekoľkých zvieracích modeloch in vivo [58–64]. Tieto výsledky naznačujú, že PhGs(phenyletanoidglykozidy)by mohol byť atraktívnym kandidátom na liečbu neurodegeneratívnych porúch, ako je demencia alebo Parkinsonova choroba.

3.1.2. Analýza PhGs

Ako hlavné aktívne zložky vCistancherastliny, PhGs(phenyletanoidglykozidy)sa zvyčajne používajú ako markery na hodnotenie kvality surových liečiv alebo ich zodpovedajúcich formulácií.

3.1.2.1. Analýza PhG pomocou chromatografie na tenkej vrstve (TLC).

Zhang prvýkrát zaviedol metódu identifikácie TLC pre akteozid (2), echinakozid (11) a cistanozid A (3) v r.HerbaCistanchessilikagélom s použitím etylacetát-metanol-9 % kyseliny octovej (20:3:2) ako vyvíjacieho rozpúšťadla a roztoku FeCl3 ako farbiacich činidiel [65]. Táto metóda bola použitá aj v Čínskom liekopise (2000) na identifikáciu akteozidu (2) [8]. V Čínskom liekopise (2005) sa však adsorbent tenkovrstvovej chromatografie zmenil zo silikagélu na polyamid, aby sa dosiahol oveľa lepší separačný efekt, a použil sa metanol – kyselina octová – voda (2:1:7). ako vyvíjacie rozpúšťadlo. Dva hlavné PhGs vHerbaCistanches, echinakozid (11) a akteozid (2) bolo možné identifikovať súčasne [9].

3.1.2.2. Analýza PhGs ultrafialovou spektrofotometriou (UV).

Ako bolo uvedené vyššie, cinnamoylová skupina sa často vyskytuje v štruktúrach PhG, takže PhG možno určiť priamo UV alebo kolorimetrickou metódou po reakcii s niektorými farbiacimi činidlami [66–72]. Ako však vieme, kolorimetrická metóda nie je rozumným prístupom na presné stanovenie chemických zložiek v TCM z dôvodu jej nestability, zlej reprodukovateľnosti a veľkej chyby pri testovaní. Okrem toho je únavnejšie vopred spracovať vzorky detekované UV žiarením ako inými metódami. V súčasnosti sa teda UV metóda už nepoužíva na kvantifikáciu čistej zlúčeniny, ale len príležitostne na stanovenie celkového PhG.

3.1.2.3. Analýza PhG vysokoúčinnou kvapalinovou chromatografiou (HPLC). Spomedzi všetkých analytických metód je HPLC najčastejšie používanou metódou na kvalitatívnu a kvantifikáciu PhG a Tabuľka 4 sumarizuje metódy publikované v literatúre o analýzach PhG pomocou HPLC, ktoré budú podrobne uvedené nižšie.

3.1.2.3.1. Analýza PhG v surových liekoch, biologických vzorkách a komplexných produktoch pomocou HPLC.

V roku 1995 Xu vykonal porovnanie chemických zložiek C. deserticola s jej náhradou C. salsa. HPLC analýza ukázala, že chemické zloženie PhGs(phenyletanoidglykozidy)medzi týmito dvoma druhmi bolo podobné, ale ich množstvo bolo odlišné [73]. V tom istom roku Moriya porovnal chemické zložky C. deserticola (Cd), C. tubulosa (Ct) a C. salsa (Cs), pričom ako markery použil sedem PhG. Výsledky ukázali, že cistanosidy A (3), C (5) a stopové množstvo tubulozidu A (17) existovali v Cd a Cs, zatiaľ čo v Ct existoval iba tubulozid A (17), bez cistanosidov A (3) a C (5). Tiež sa zistilo, že celkové množstvá PhG v Ct a Cs rastlinách sú vyššie ako v Cd rastlinách [28]. Je cenné, že tento článok porovnáva rozdiel medziCistancherod prostredníctvom viaczložkovej analýzy; je však poľutovaniahodné, že kvantifikácia týchto siedmich PhG(phenyletanoidglykozidy)bola vykonaná iba jednobodovou externou štandardnou metódou, bez systematickej validácie metodiky.

Tu urobil kvalitatívnu analýzu šiestich PhG(phenyletanoidglykozidy)a kvantitatívnu analýzu dvoch PhG v rode Cistanche pomocou Rp-HPLC. Výsledky ukázali, že chemické zložky C. deserticola, C. salsa, C. salsa var. albiflflora a C. tubulosa boli podobné, zatiaľ čo C. Sinensis sa líšili od ostatných [10]. Wang zaviedol metódu na analýzu siedmich PhG v C. deserticola, C. tubulosa a C. salsa pomocou HPLC/MS/MS a výsledky ukázali, že distribúcia chemických zložiek siedmich referenčných PhG je u každého druhu odlišná [ 74]. Fragmentačné dráhy glykozidických väzieb, esterová väzba a niektoré zaujímavé nervové straty PhG boli diskutované v tomto článku [74] a v ďalšom [75]. Výhoda techniky HPLC–MS sa však v týchto analýzach dôkladne nepreukázala, pretože sa študoval iba mechanizmus fragmentácie štandardov PhG. Prijatie týchto mechanizmov na objasnenie neznámych zlúčenín PhG s cieľom poskytnúť viac chemických informácií a štúdium mechanizmu fragmentácie iných zlúčenín kostry sa zanedbalo.

Okrem kvalitatívnej analýzy existuje aj množstvo správ o kvantitatívnej analýzeHerbaČistánchesnajmä dvoch hlavných PhG(phenyletanoidglykozidy)echinakozid (11) a akteozid (2). V roku 2000 Zhang zaviedol štandard kvality pre C. deserticola, vrátane stanovenia obsahu akteozidu (2) pomocou HPLC v kombinácii s kvalitatívnou identifikáciou piatich zložiek pomocou TLC [65]. V roku 2003 bola zavedená metóda Rp-HPLC na detekciu echinakozidu (11) a akteozidu (2) v Herba Cistanches pestovaných na rôznych hostiteľských rastlinách a biotopoch. Na stanovenie echinakozidu (11) a akteozidu (2) autor použil dve rôzne mobilné fázy, tj acetonitril-voda-ľadová kyselina octová (13:86:1) pre echinakozid a metanol-voda-ľadová kyselina octová (32:67:1) pre akteozid. Predbežný výsledok ukázal, že obsahy echinakozidu a akteozidu boli zjavne ovplyvnené rôznymi hostiteľmi a obsahy týchto dvoch zlúčenín v C. tubulosa v kultivovanom Tamalrix L. boli najvyššie [76].

Vzhľadom na to, že je trochu zdĺhavé určovať dve zložky v tej istej rastline s použitím dvoch rôznych rozpúšťadiel, bola zavedená jednoduchšia metóda Rp-HPLC na súčasnú detekciu echinakozidu (11) a akteozidu (2) [77]. Chen potom prijal túto metódu na stanovenie obsahu echinakozidu (11) a akteozidu (2) vo voľnej prírode a kultivovanej C. tubulosa [78]. Výsledky ukázali, že obsah echinakozidu (11) bol výrazne vyšší ako obsah akteozidu (2) vo všetkých vzorkách a obsah týchto dvoch aktívnych zložiek vo voľnej prírode bol vyšší ako v pestovaných [78]. Stojí za zmienku, že príprava vzorky v tomto dokumente prijala metódu zmiešania viacerých šarží, čo znamená, že autor vzal do úvahy zrejmé individuálne rozdiely v kvaliteHerbaCistanches.

Od divočinyCistanchedruhy sú na pokraji vyhynutia, výsadba C. deserticola a C. tubulosa sa vykonáva v Xinjiang a Vnútornom Mongolsku v Číne. S cieľom poskytnúť určité teoretické usmernenia pre kultiváciu boli analyzované rôzne kultivované vzorky. Cao určil obsah PhGs(phenyletanoidglykozidy)na jar a na jeseň pomocou LC-MS, aby sa porovnali vzorky C. deserticola zozbierané v rôznych ročných obdobiach. Štyri PhG(phenyletanoidglykozidy), tj echinakozid (11), akteozid (2), cistanozid A (3) a 2 -acetylakteozid (1) boli vybrané ako markery a ich celkový obsah bol pozorovaný ako vyšší na jar ako na jeseň [79] . Wang urobil štúdiu o variáciách chemických zložiek v rôznych časoch rastu a rôznych častiach kultivovanej C. tubulosa, pričom ako index použil odtlačok prsta a obsah echinakozidu (11). Zistil, že chemická distribúcia PhGs(phenyletanoidglykozidy)bolo podobné medzi rôznymi vzorkami, ale množstvo každého PhG, najmä echinakozidu (11), bolo medzi rôznymi vzorkami významne odlišné. Po porovnaní dospel k záveru, že doba kultivácie C. tubulosa by mala byť viac ako tri roky a čas zberu musí byť prísne kontrolovaný pred kvitnutím. V tomto článku sa zistilo, že kvalita pestovaných rastlín nie je o nič lepšia ako u divo rastúcich, preto autor navrhol, aby sa pestovateľská technológia podporila na zlepšenie obsahu účinných látok [80]. Yang študoval akumuláciu sušiny a obsah echinakozidu (11) v C. tubulosa v rovine Huabei. Výsledok ukázal, že akumulácia sušiny C. tubulosa bola vo variante v tvare „S“ a obsah echinakozidu (11) bol najvyšší, keď C. tubulosa rástla 5 mesiacov [81].

Okrem týchto, odtlačkov prstov, nová technika zameraná na systémové a komplexné charakteristiky analyzovaných vzoriek sa tiež použila na hodnotenie kvalityCistancherastliny. Ako bolo uvedené vyššie, Wang analyzoval chemické zložky a ich variácie v kultivovanej C. tubulosa pomocou odtlačkov prstov a iných indikátorov [80]. Xie stanovil chromatografický odtlačok C. deserticola pomocou HPLC (obr. 1) a použil ho na vyhodnotenie rozdielov v inherentných kvalitách vzoriek z rôznych biotopov. Nakoniec boli zistené výrazné rozdiely v kvalite vzoriek z rôznych biotopov [82]. Rovnaký jav bol dokonca pozorovaný aj počas nášho výskumu hodnotenia kvality C. deserticola, takže neskôr by sa mala venovať väčšia pozornosť kvalitatívnej konzistencii druhov Cistanche.

Okrem výsadby je kultivácia bunkami alebo kalusom ďalšou atraktívnou alternatívou riešenia nedostatku zdrojov HerbyCistanche. Počas kultivačného procesu bolo vytvorených mnoho analytických metód na analýzu kultivačného výsledku a na optimalizáciu kultivačných podmienok [83–88]. Zodpovedajúce analytické podmienky sú tiež zhrnuté v tabuľke 4.

Pokiaľ ide o analýzu PhG v komplexných produktoch, Zhang uviedol metódu kvantifikácie izoakteozidu (12) v celkovom počteCistancheglykozidových kapsúl pomocou HPLC [89]. Zaviedli sme metódu na analýzu akteozidu (2) v kapsulách Shenqiyinao pomocou HPLC [90] a Lei urobil stanovenie echinakozidu (11) v liehu Congrong pomocou HPLC [91]. Kľúčový bod analýzy PhGs(phenyletanoidglykozidy)v komplexných produktoch je zabrániť rušeniu iných zložiek, preto je zvyčajne potrebná predúprava vzorky a optimalizácia chromatografických podmienok.

3.1.2.3.2. Metabolická analýza PhG pomocou HPLC.

V roku 2001 Lei prvýkrát ohlásil proces metabolizmu PhG(phenyletanoidglykozidy)v gastrointestinálnom čreve psov bígla a štyri metabolity, echinakozid (11), akteozid (2), izoakteozid (12) a 2 -acetylakteozid (1) boli izolované z výkalov pomocou preparatívnej HPLC [96]. V roku 2006 sa metabolizmus akteozidu (2) a echinakozidu (11), hlavných aktívnych zložiekHerbaCistanchesboli študované a ich farmakokinetika a biologická dostupnosť u potkanov boli analyzované [97,98,134]. Zaviedli sme citlivú LC-MS/MS metódu s jednoduchou extrakciou na pevnej fáze na detekciu akteozidu (2) v potkanej plazme a tkanivových homogenátoch na skúmanie biologickej dostupnosti a distribúcie mozgu u voľne sa pohybujúcich potkanov [97,134]. Jia vyvinul rýchle a jednoduché spojenie HPLC s UV metódou na stanovenie obsahu echinakozidu (11) v sére potkanov [98]. Zistilo sa však, že biologická dostupnosť echinakozidu a akteozidu je iba {{10}},83 percenta a 0,12 percenta, čo bolo v rozpore s významnými biologickými účinkami PhGs(phenyletanoidglykozidy)u zvierat [58–64]. V budúcnosti je potrebné vykonať ďalšie výskumy na objasnenie metabolického procesu a absorpčného mechanizmu PhG(phenyletanoidglykozidy).

3.1.2.4. Analýza PhGs(phenyletanoidglykozidy)vysokorýchlostnou protiprúdovou chromatografiou (HSCCC).

HSCCC, rozdeľovacia chromatografia kvapalina-kvapalina bez nosiča, eliminuje ireverzibilnú adsorpciu vzorky na stacionárnu fázu a je široko používaná pri preparatívnej separácii prírodných produktov. V porovnaní s tradičnou stĺpcovou chromatografiou tuhá látka-kvapalina poskytuje vyššiu výťažnosť a účinnosť. Lei aplikoval HSCCC na separáciu a čistenie akteozidu (2) a 2-acetylakteozidu (1) z C. salsa kvartérnym dvojfázovým rozpúšťadlovým systémom zloženým z etylacetátu-n-butanolu-etanolu-vody ( 4:{11}}.6:{13}}.6:5, v/v). HPLC analýza frakcií CCC odhalila, že dva PhG(phenyletanoidglykozidy)mali nad 98 percent čistotu [99]. Neskôr Li zaviedol metódu využívajúcu dva systémy rozpúšťadiel, jeden pozostávajúci z etylacetátu – etanolu – vody (5:0 0,5:4,5, v/v/v) a druhý z etylacetátu – n-butanolu –etanol-voda ({{10}}.5:0.5:0,1:1, v/v/v/v) na izoláciu PhG(phenyletanoidglykozidy)z C. deserticola. Päť PhG(phenyletanoidglykozidy)echinakozid (11), cistanozid A (3), akteozid (2), izoakteozid (12) a 2 -acetylakteozid (1) boli izolované a purifikované a čistoty týchto izolovaných zlúčenín boli vyššie ako 92,5 %. stanovené pomocou HPLC [100]. Tieto metódy poskytli dobré referencie pre budúcu izoláciu a purifikáciu PhGs štandardov.

3.2. Benzylglykozidy

Nedávno Lei oznámil izoláciu a objasnenie štruktúry troch nových benzylglykozidov, salsazidov A–C (35–37, obr. 2) z C. salsa, čo boli tiež benzylglykozidy izolované zCistancherastlinyprvýkrát [47]. Štrukturálne rysy týchto benzylglykozidov sú podobné vlastnostiam fenyletanoidov izolovaných z tohto rodu, okrem toho, že benzylalkoholom je fenetylol v aglykóne.

3.3. Iridoidy

Doteraz boli izolované tri iridoidné aglykóny a štrnásť iridoidných glykozidovCistancherastliny(38–54, tabuľka 5) [102–109]. Štrukturálne vlastnosti iridoidných glykozidov zCistancherastlinysú zhrnuté nasledovne: glukóza sa vyskytuje v polohe C1 aglykónu s konfiguráciou v H5 a H9; hydroxylácia sa často vyskytuje v polohách C8 a C10; niekedy môže dôjsť k dehydratácii medzi hydroxylmi C10 s C1 alebo C3 za vzniku epoxidovej skupiny.

3.4. Lignany

Z rastlín C. deserticola a C. tubulosa sa izoloval jeden lignanový aglykón a päť lignanových glykozidov (55–60, tabuľka 6). Základnou kostrou týchto zlúčenín sú tetrahydrofuránové a benzofuránové lignany. Zdroje C. tubulosa, z ktorých sa izolovalo niekoľko lignanov, sú najmä z Pakistanu, zatiaľ čo z C. tubulosa zozbieraného v Číne sa izolovalo len málo lignanov. To ďalej dokázalo, že chemické rozdiely existujú medzi C. tubulosa z Číny a Pakistanu [27,28].

3.5. Sacharidy a ich deriváty

3.5.1. Chemická štúdia o sacharidoch a ich derivátoch

Sacharidy tvoria vysoký podiel sušiny rastlín druhu Cistanche [110]. Spomedzi nich, jeden z monosacharidov, galaktitol, bol hlásený ako hlavná aktívna zložka s laxatívnou aktivitou v Herba Cistanches [18,19,103,104]. Zatiaľ čo polysacharidy boli považované za aktívne zložky s posilňujúcou imunitou tela, proti starnutiu a protirakovinovým účinkom.HerbaCistanches[20,21,111–113].

V 90. rokoch sa štúdie o polysacharidoch oCistanchedruhy boli zamerané na izoláciu/purifikáciu a analýzu zloženia monosacharidov [110,112,114–116]. Presné štruktúry polysacharidov zCistanchedruhy neboli objasnené do roku 1997. V tabuľke 7 sú uvedené objasnené štrukturálne vlastnosti polysacharidov izolovaných z druhov Cistanche. Je zaujímavé, že všetky z nich boli izolované z C. deserticola a polysacharidy v inýchCistancherastlinyneboli študované.

Okrem nich boli izolované aj niektoré deriváty oligosacharidov, ako je cistanozid F, cistanozid I, cistantubulózy A1/A2 a cistansinenzóza A1/A2.HerbaCistanches(obr. 3), čo sú vlastne zvyšky PhGs(phenyletanoidglykozidy)po strate fenetylol aglykónu. Keďže v prírode existujú konfigurácie glukózy, niekedy tieto oligosacharidové deriváty existujú aj ako anoméry a tento jav možno pozorovať z párových NMR signálov [37,39,40,11,45].

3.5.2. Analýza sacharidov a ich derivátov

Aby bolo možné zhodnotiť kvalituHerba Cistancheskomplexne, galaktitol, hlavná aktívna zložka s laxatívnym účinkom v Herba Cistanches [18,19,97,98], bol nedávno vybraný ako indikátor na hodnotenie kvalityHerbaCistanchesv kombinácii s PhGs(phenyletanoidglykozidy). Na komplexné vyhodnotenie kvality C. tubulosa z rôznych oblastí vyvinul Cai metódu kvantifikácie galaktitolu spojeného s echinakozidom (11) a akteozidom (2) pomocou HPLC. ELSD bol vybraný ako detektor galaktitolu pre jeho slabú terminálnu absorpciu v UV spektre a na jeho separáciu bola použitá gélová kolóna Prevail Carbohydrate ES. Boli merané šarže C. deserticola a C. tubulosa z rôznych biotopov a touto metódou bol optimalizovaný aj spôsob spracovania čerstvých kúskov odvaru C. tubulosa [92,93]. Ich výsledky ukázali, že obsah galaktitolu, echinakozidu (11) a akteozidu (2) v kúsku odvaru z C. tubulosa opísaným spôsobom bol niekoľkonásobne vyšší ako obsah vysušený izoláciou alebo tradičnou metódou [93]. Okrem toho Zhang niekedy zaviedol metódu TLC identifikácie manitolu v C. deserticola s použitím zmesi etylacetát-pyridín-voda (7:2:1) ako vyvíjacieho rozpúšťadla a 1% roztoku KMnO4 ako farbiva [65].

Pokiaľ ide o stanovenie obsahu polysacharidov vCistanchedruhov je najčastejšie používanou metódou fenol-kyselina sírová a obsah polysacharidov v C. salsa rôznymi extrakčnými metódami bol stanovený od 11,61 percenta do 13,22 percenta [123–125]. Toto sú však len niektoré predbežné analytické výsledky v dôsledku obmedzení kolorimetrickej metódy.

3.6. Alkaloidy a ich zodpovedajúca analýza

Doteraz boli izolované iba dva alkaloidyCistancheto je betaín (65) a metylester N,N-dimetylglycínu (66) (obr. 3) [126]. Betaín (65) je alkaloid bežne distribuovaný v rastlinách, takže existuje viac správ o jeho kvalitatívnej a kvantitatívnej analýze. Zhang porovnal zmeny obsahu betaínu v C. deserticola pred a po spracovaní pomocou identifikácie TLC kombinovanej s kolorimetrickou metódou [127]. Táto metóda TLC bola tiež zhromaždená v Čínskom liekopise 2000 [8], zatiaľ čo túto metódu kvantifikácie kolorimetriou neskôr prevzali iní na optimalizáciu technológie extrakcieHerbaCistanches[128,129]. V roku 2007 Gong ohlásil metódu HPLC na detekciu betaínu v rastlinách Cistanche spojenú s detektorom ELSD a zistilo sa, že betaín existuje iba v C. deserticola, ale nie v C. tubulosa. Autor teda navrhol, aby sa betaín používal ako marker na rozlíšenie týchto dvoch druhov rastlín Cistanche [101]. Avšak vzhľadom na to, že vzorky vzoriek sú len dve pre každý druh a jeden z biotopov C. tubulosa (Yunnan) je neistý, odporúčame, aby bol tento záver ďalej dokázaný. Okrem toho TLC identifikácia betaínu pre Herba Cistanche bola od roku 2005 odstránená z Čínskeho liekopisu kvôli jeho nešpecifickej vlastnosti. Preto nebolo rozumné brať to ako jediný ukazovateľ na optimalizáciu technológie extrakcie Herba Cistache [129].

3.7. Iné zlúčeniny

V rastlinách Cistanche existujú malé množstvá iných zlúčenín, ako sú fenolové glykozidy, monoterpenoidy, steroly alebo ich glykozidy, mastné kyseliny, aminokyseliny a niektoré stopové prvky atď. [13,41,42,103,105,130–133].

4. Závery

V tomto prehľade sú chemické zložkyCistanchedruhy a metódy ich analýzy. Spomedzi existujúcich analýz sa väčšina sústredila na PhGs(phenyletanoidglykozidy)a HPLC bola najpoužívanejšou metódou kvôli svojej vysokej účinnosti a presnosti. Prostredníctvom analýzy predchádzajúcich výskumných prác, v kombinácii s našimi rokmi štúdia o druhoch Cistanche, niektoré hlavné problémy existujúce pri analýzeCistancherastlinyboli zhrnuté nasledovne: prvým je zmiešané použitie zdroja druhov: C. deserticola a C. tubulosa sú dva oficiálne druhy zozbierané v Čínskom liekopise. V niektorých oblastiach sa však kvôli nedostatku zdrojov používajú aj dva ďalšie druhy Cistanche, C. salsa a C. Sinensis. Hoci existuje niekoľko publikácií, ktoré odkazujú na porovnanie medzi rôznymi druhmi [6–8], nie sú dostatočne presvedčivé z dôvodu obmedzených šarží vzoriek a markerov. Preto je potrebné zaviesť komplexnú metódu, akou je technológia snímania odtlačkov prstov, aby bolo možné porovnateľne analyzovať surové drogy z rôznych zdrojov. Druhým je, že kvalitatívnej nekonzistencii Herba Cistanches sa nevenovala veľká pozornosť. Druhy cistanche sú parazitické byliny. Existuje mnoho faktorov, ktoré ovplyvňujú ich kvalitu, ako je klíma, biotopy, hostitelia, čas zberu, spôsob spracovania a rôzne časti tej istej rastliny. Naše štúdie ukázali, že kvalita druhov Cistanche nie je stabilná, najmä pokiaľ ide o divokú C. deserticola [80,82,92]. Tento problém bol však v niektorých predchádzajúcich analýzach zanedbaný a bola použitá iba jedna alebo dve vzorky [74,76], čo mohlo viesť k nepresným záverom. Takže v budúcnosti by sa malo odobrať a analyzovať oveľa viac vzoriek, aby sa dosiahol objektívnejší záver. Tretím je, že súčasné analýzy sa zameriavajú hlavne na dve hlavné PhG(phenyletanoidglykozidy)echinakozid (11) a akteozid (2), ale ako vieme, farmakologický účinok TČM spočíva v spolupráci viaczložkových alebo rôznych typov zložiek. Simultánne stanovenie aktívnych multikomponentov má teda väčší význam pre kontrolu kvality TCM. Doteraz však nebola vykonaná žiadna kvantitatívna analýza pre viac ako tri PhG vHerbaCistanchesdokonca neexistuje žiadna správa o analýze benzylglykozidov, iridoidov a lignanov. Budúci výskum by potom mal posilniť ich analytickú a farmakologickú štúdiu. Celkovo je súčasný výskum analýzy druhov Cistanche stále na nižšej úrovni. Herba Cistanches sú dôležité posilňujúce drogy, ale v skutočnosti ich kvalitu nemohli efektívne kontrolovať iba dvaja zástupcovia PhG(phenyletanoidglykozidy)[9]. Kombinácia určovania viacerých komponentov s odtlačkom prsta sa považuje za účinný prístup na kontrolu kvality TCM. V budúcnosti by sa úroveň výskumu druhov Cistanche na týchto dvoch poliach mala ďalej zlepšovať. Zavedenie metódy, ktorá by mohla súčasne kvalitatívne a kvantitatívne analyzovať PhG, iridoidy a iné aktívne zložky vHerbaCistanchesbude zmysluplným smerovaním výskumu.

Cistanchetubulosamá veľa účinkov, kliknite sem a dozviete sa viac

Poďakovanie

Táto práca bola finančne podporená Národnou prírodovednou nadáciou Číny (č. 30472070) a Programom talentov Nového storočia, Ministerstvom školstva Číny (č. 985-2-102-113) a autori sú tiež vďační Xiaoming Liu, Zhihong Song, LiLei z Pekingskej univerzity za ich odbornú technickú pomoc.

Od: ' Analýza chemických zložiek vCistanchedruhov' od Yong Jiang, Peng-Fei Tu

---Journal of Chromatography A, 1216 (2009) 1970 – 1979