Antioxidačná aktivita Lactobacillus Plantarum NJAU-01 vo zvieracom modeli starnutia

Prosím kontaktujteoscar.xiao@wecistanche.comPre viac informácií

Abstraktné

Pozadie:Nadmerné reaktívne formy kyslíka (ROS) môžu spôsobiť vážne poškodenie ľudského tela a môžu spôsobiť rôzne chronické ochorenia. Štúdie zistili, že baktérie mliečneho kvasenia (LAB) majú antioxidačné účinky a účinky proti starnutiu a sú dôležitými zdrojmi pre vývoj mikrobiálnych antioxidantov. Táto práca mala preskúmať potenciálnu úlohu antioxidačného kmeňa Lactobacillus plantarum NJAU-01 skrínovaného z tradičného suchého mäsového výrobku Jinhua Ham pri regulácii subakútneho starnutia myší vyvolaného D-galaktózou. Celkom 48 myší Kun Ming bez špecifických patogénov (myši SPF KM) bolo náhodne rozdelených do 6 skupín: kontrolná skupina so sterilným fyziologickým roztokom, starnúca skupina so subkutánnou injekciou D-galaktózy, liečebné skupiny s injekciou D-galaktózy a intragastrickým podávaním. 10', 10 stupňov a 10 stupňov FU/ml L. plantarum NJAU-01 a pozitívna kontrolná skupina s injekciou D-galaktózy a intragastrickým podaním 1 mg/ml vitamínu C.

Výsledky:Výsledky ukázali, že liečená skupina L. plantarum NJAU-01 pri 10 stupňoch FU/ml vykazoval vyššiu celkovú antioxidačnú kapacitu (T-AOC) a antioxidačné enzymatické aktivity superoxiddismutázy (SOD), glutatiónperoxidázy (GSH-Px) a katalázy (CAT) ako iných skupín v sére, srdci a pečeni. Naopak, obsah markera oxidačného stresu malondialdehydu (MDA) vykazoval nižšie hladiny ako ostatné skupiny (P<0.05). the="" antioxidant="" capacity="" was="" improved="" with="" the="" supplement="" of="" the="" increasing="" concentration="" of="" l.="" plantarum="">

Ak chcete vedieť viac, kliknite sem

Závery:Táto štúdia teda ukazuje, že L plantarum NJAU-01 môže zmierniť oxidačný stres zvýšením aktivít enzýmov zapojených do oxidačnej odolnosti a znížením úrovne oxidácie lipidov u myší. Kľúčové slová: Lactobacillus Plantarum NJAU-01, Jinhua Halm, starnúce zviera vyvolané D-galaktózou, Malondialdehyd, Antioxidačná kapacita

Pozadie

Oxidácia je proces nevyhnutne potrebný pre bunkový metabolizmus v tele. Za oxidáciu boli zodpovedné reaktívne formy kyslíka (ROS) ako voľné radikály produkované endogénnymi oxidačno-redukčnými (REDOX) reakciami. Keď však bunky dostávajú vonkajšie stimuly vyvolané oxidačným stresom, nadmerná produkcia ROS prekoná bunkovú kapacitu zachytávania ROS [1]. Niektoré výskumné údaje ukázali, že oxidačný stres súvisí s dĺžkou života organizmov [2]Neschopnosť metabolizovať zvyšné ROS môže spôsobiť vážne poškodenie ľudského tela a môže spôsobiť rôzne chronické ochorenia súvisiace so starnutím, ako je cukrovka, srdcové ochorenia, vysoké hladiny lipidov v krvi, artritída, neurodegeneratívne ochorenia, kardiovaskulárne a cerebrovaskulárne ochorenia [3]. Za normálnych okolností má telo sériu enzýmov alebo neenzýmov a opravných systémov, ktoré sa podieľajú na antioxidačnej obrane a chránia ich pred oxidačným poškodením [4-6]. Napríklad kyselina askorbová spotrebováva kyslík samooxidáciou, redukuje kovové ióny, čím znižuje oxidačno-redukčný potenciál a podieľa sa na antioxidačnej obrane [7]. Superoxiddismutáza (SOD) je schopná premieňať škodlivé superoxidové radikály na peroxid vodíka [8]. Kataláza (CAT) sa podieľa na bunkovej antioxidačnej obrane rozkladom peroxidu vodíka, čím bráni Fentonovej reakcii produkovať voľné hydroxylové radikály [9]. Nadbytočné ROS by však viedli k oxidačnému poškodeniu spôsobenému mnohými faktormi, ako je ožiarenie (röntgenové žiarenie, y-lúče, ultrafialové žiarenie), chemické činidlá (kovové ióny, HONO, HOCl a HOBr), liečivo a ich metabolity a dokonca fajčenie. Tieto prirodzené antioxidačné systémy v tele často nestačia na to, aby zabránili oxidačnému poškodeniu a vyžadujú si doplnky antioxidantov, ako je astaxantín a kyselina listová [10]. Preto sa značná pozornosť venovala hľadaniu dostupného prístupu, ktorý môže zmierniť alebo inhibovať bunkové oxidačné poškodenie.

Baktérie mliečneho kvasenia (LAB) boli široko nájdené a používané vo fermentovaných mäsových výrobkoch. Okrem zlepšenia živín, chuti a konzervácie fermentovaných potravín majú LAB aj ďalšie probiotické vlastnosti [11, 12]. Niektoré štúdie zistili, že LAB majú antioxidačné účinky a účinky proti starnutiu a sú dôležitými zdrojmi pre vývoj mikrobiálnych antioxidantov [13]. Napríklad sa zistilo, že prípad Lactobacillus oddelený od čínskeho domáceho likéru účinne zmierňuje peroxidáciu lipidov a zlepšuje metabolizmus lipidov vďaka vysokej schopnosti zachytávať cholesterol a schopnosti adhézie ľudských črevných buniek [14]. Predtým sme izolovali a testovali baktérie mliečneho kvasenia pomocou celkovej antioxidačnej kapacity zo šunky Jinhua a identifikovali sme ich ako Lactobacillus plantarum detekciou biochemických charakteristík, koloniálnej morfológie a sekvenovania 16 s rDNA s názvom L. plantarum NJAU{{10} } [15]. L. plantarum NJAU-01 preukázala vynikajúcu schopnosť zachytávať a znižovať voľné radikály DPPH, voľné radikály hydroxylových skupín a voľné radikály superoxidových aniónov in vitro [16]. V bunkovom modeli spojenom s elektrochemickým senzorom bola schopnosť makrofágu RAW264.7 reagovať na oxidačný stres významne zvýšená inkubáciou s L. plan-tarum NJAU-01 [15].Cistanche Extract Anti RadiationOkrem toho, L. plantarum NJAU-01 môže tiež zmierniť stupeň oxidácie bielkovín vo fermentovanej klobáse [17]. Takže, L. plantarum NJAU-01 bolo preukázané, že má antioxidačný účinok in vitro, čo je sľubné potenciálne využitie pri regulácii oxidačného stresu in vivo.

Cistanche môže proti starnutiu

Preto je nevyhnutné vyhodnotiť antioxidačný účinok L. Plantarum NJAU-01 in vivo pomocou zvieracieho modelu, ktorý dokáže efektívne pozorovať absorpciu, transport a metabolizmus u zvierat. D-galaktózou indukované starnúce myši boli vyvinuté na simuláciu výskytu oxidačného poškodenia v procese starnutia tela po celé desaťročia [18]. D-galaktóza prispieva k tvorbe ROS prostredníctvom reakcie s aminokyselinami za vzniku konečných produktov glykácie prostredníctvom neenzymatickej glykácie s výhodami nízkej toxicity, pomalého oxidačného procesu a bez letálneho účinku [19,20]. Často sa uvádza, že model starnutia myší vyvolaný D-galaktózou hodnotí antioxidačnú kapacitu probiotík, ako je L-karnitín, kyselina ursolová a L. Plantarum AR501 [19,21,22]. Preto sa tieto dospelé starnúce myši indukované D-galaktózou použili na predbežné skúmanie úlohy L. plantarum NJAU-01 pri zmierňovaní oxidačného stresu u myší. L. plan-tarum NJAU-01 bol kŕmený starnúcim myšiam vyvolaným D-galaktózou, aby sa vyhodnotili jeho antioxidačné účinky in vivo meraním celkovej antioxidačnej kapacity (T-AOC), antioxidačných enzymatických aktivít SOD, glutatiónu peroxidáza (GSH-Px) a CAT, ako aj obsah markera oxidačného stresu malondialdehydu (MDA) v myšom sére, srdci a pečeni.cistanche herbaTo poskytne základ pre ďalší výskum vývoja a využitia L. plantarum NJAU-01 ako probiotika.

Výsledky

Telesná hmotnosť a indexy orgánov u myší

Žiadne zo zvierat neuhynulo počas obdobia kŕmenia a boli zahrnuté dátumy od všetkých myší. Účinky rôznych terapií pomocou L. plantarum NJAU-01 na časti orgánov u myší sú uvedené v tabuľke 1. Myši v starnúcej skupine, ktorým bola podaná injekcia D-galaktózy, vykazovali výrazne nižšiu telesnú hmotnosť v porovnaní s myšou ostatných skupiny (P<0.05). no="" significant="" difference="" was="" ob-served="" in="" kidney="" liver="" index="" and="" lung="" be-tween="" the="" l.="" plantarum="" njau-01="" treatment="" groups="" normal="" positive="" group="" aging="" model="" p="">0.05). Srdcový index skupiny s modelom starnutia bol významne vyšší v porovnaní s indexom normálnej skupiny (P<>

Aktivita T-AOC séra, srdca a pečene myší Aktivita T-AOC myší medzi rôznymi liečenými skupinami je znázornená na obr. 1. Aktivita T-AOC modelovej skupiny starnúcich myší bola 6,68 U/ml a v srdci, sére a pečeni boli 6,62, 3,55 a 3,58 U/mg proteínu, v tomto poradí, čo bolo nižšie ako v iných skupinách (P<0.05). in="" the="" l.="" plantarum="" njau-01="" lp3="" group,="" serum,="" heart,="" and="" liver="" had="" significantly="" higher="" t-aoc="" than="" the="" other="" groups=""><0.05). the="" liver="" t-aoc="" in="" the="" positive="" control="" group="" was="" significantly="" higher="" than="" the="" control="" group="" and="" the="" aging="" model="" group=""><0.05). however,="" the="" antioxidant="" activity="" of="" the="" heart="" and="" liver="" of="" the="" positive="" control="" group="" was="" significantly="" lower="" than="" that="" of="" the="" lp3="" group=""><0.05). the="" above="" results="" indicate="" that="" l.="" plantarum="" njau-01="" can="" enhance="" the="" t-aoc="" of="" the="" mice="" in="" a="" dose-dependent="">

Aktivita SOD v myšom sére, srdci a pečeni

Aktivity SOD myší v skupine s modelom starnutia v sére, srdci a pečeni myší boli 16,72 U/ml, 18,93 U/mg proteínu a 44,82 U/mg proteínu, čo bolo významne nižšie ako v kontrolnej skupine (P<0.05,fig.2).in contrast,the="" sod="" activity="" in="" serum,="" heart="" and="" liver="" of="" mice="" in="" vc="" group="" was="" significantly="" higher="" than="" that="" of="" mice="" in="" the="" aging="" model="" group="" and="" control="" group=""><0.05). the="" sod="" activity="" in="" heart="" of="" mice="" lp2="" group="" was="" 61.85="" mg="" which="" not="" significantly="" different="" from="" that="" positive="" control="" p="">0.05). Na druhej strane, aktivity SOD v sére, srdci a pečeni v skupine s vysokou dávkou boli 48,83 U/ml, 74,67 U/mg proteínu a 69,55 U/mg proteínu, čo bolo významne vyššie ako v ostatných skupinách (P<0.05). these="" results="" showed="" that="" l.="" plantarum="" njau-01="" could="" alleviate="" the="" oxidative="" damage="" induced="" by="" d-galactose="" to="" the="" body,="" and="" increase="" sod="">

GSH-Px v myšom sére, srdci a pečeni

Skupina LP3 vykazovala vyššiu aktivitu GSH-PX ako myši v iných skupinách v sére, srdci a pečeni (P<0.05, fig.="" 3).="" the="" gsh-px="" activity="" in="" the="" heart="" and="" liver="" tissues="" of="" mice="" in="" the="" positive="" control="" group="" was="" signifi-cantly="" higher="" than="" that="" of="" mice="" in="" the="" control="" group="" and="" the="" aging="" model="" group=""><0.05). there="" was="" no="" significant="" difference="" for="" the="" serum="" gsh-px="" activity="" between="" lp1="" and="" control="" group="" p="">0.05). Okrem toho skupiny modelov starnutia v srdci a pečeni myší mali 50,39 U/ml, 8,48 U/mg proteínu a 62,67 U/mg proteínu, pričom vykazovali nižšiu aktivitu GSH-Px ako iné skupiny (P<0.05). therefore,l.="" plantarum="" njau-01="" has="" an="" enhancing="" effect="" on="" the="" antioxidant="" enzymatic="" activity="" of="" gsh-px="" in="" mice,="" and="" the="" strain="" concentration="" is="" related="" to="" the="" antioxidant="">

Aktivita CAT v myšom sére, srdci a pečeni

Ako je znázornené na obr. 4, aktivity CAT séra, srdca a pečene myší LP3 boli 22,98 U/ml, 137,99 U/mg proteínu a 136,31 U/mg proteínu, ktoré mali vyššiu aktivitu CAT ako pri inej liečbe. skupiny (P<0.05), indicating="" that="" the="" concentration="" of="" the="" strain="" had="" a="" marked="" effect="" on="" the="" cat="" activity.="">rast penisu cistancheNa rozdiel od toho skupina s modelom starnutia vykazovala nižšiu aktivitu CAT ako u myší v iných skupinách v sére, srdci a pečeni myší (P<0.05). as="" for="" vc="" group,="" it="" presented="" higher="" cat="" activity="" than="" the="" control="" group="" and="" aging="" model="" group="" in="" serum,="" heart="" and="" liver="" of="" mice=""><0.05). these="" findings="" demonstrate="" that="" l.="" plantarum="" njau-01="" can="" enhance="" the="" cat="" activity="" in="" mice="" serum,="" heart="" and="" liver="">

Obsah MDA v myšom sére, srdci a pečeni

Obsah MDA v sére, srdci a pečeni myší v skupine s modelom starnutia bol významne vyšší ako v kontrolnej skupine (P<0.05, fig.="" 5).="" the="" serum="" mda="" content="" of="" mice="" in="" the="" lp3="" group="" was="" 14.29="" nmol/ml,="" and="" the="" mda="" contents="" in="" the="" heart="" and="" liver="" were="" 8.00="" and="" 26.49="" nmol/mg="" protein,="" respectively,="" being="" significantly="" lower="" than="" that="" in="" the="" other="" groups=""><0.05). there="" was="" no="" significant="" difference="" in="" mda="" content="" among="" the="" positive="" control="" lp1="" and="" lp2="" groups="" p="">0.05).

Diskusia

Model subakútneho starnutia myší pomocou indukcie D-galaktózy je široko používaný a dobre známy [14,23,24]. Model zahŕňa kontinuálne vstrekovanie D-galaktózy, ktorá sa redukuje na galaktózu galaktózo-reduktázou vo vnútri buniek, čo vedie k zmene osmotického tlaku medzi bunkou a prostredím a následne k opuchu a starnutiu buniek [25]. Intracelulárne enzýmy, ktoré zmierňujú oxidačný stres, ako sú SOD, CAT a GSH-Px, nestačia na elimináciu reaktívnych foriem kyslíka, keď sú bunky v tele vystavené akútnemu oxidačnému stresu. Ide o priamu a účinnú metódu na štúdium antioxidačnej aktivity LAB injekciou LAB myšiam so subakútnym starnutím vyvolaným D-galaktózou a porovnaním enzymatickej antioxidačnej aktivity, ako sú SOD, GSH-Px a CAT, s kontrolnou skupinou [21].

V tejto štúdii sa skupina s modelom starnutia a skupina s pozitívnou kontrolou (injekcia s Vc) porovnávali s rôznymi dávkami skupiny liečenej L. plantarum NJAU-01. Orgánový index je pomer hmotnosti orgánu u pokusného zvieraťa k jeho telesnej hmotnosti a zvýšenie orgánového koeficientu indikuje prekrvenie, edém alebo hyperpláziu orgánu, zatiaľ čo zníženie orgánového koeficientu indikuje atrofiu orgánu a iné degeneratívne ochorenia. zmeny. Orgánový index sa tiež použil na vyjadrenie zmien v stupni starnutia, ako dokazujú štúdie Yu et al. (2016) a Xu a kol. (2016) [18,26]. Táto štúdia odhalila, že myši v modelovej skupine starnutia mali nižšiu hmotnosť a vyšší srdcový index ako myši v ostatných skupinách. Podávanie D-galaktózy významne znížilo antioxidačnú enzymatickú aktivitu v sére, srdci a pečeni myší v skupine modelov starnutia. Doplnky L. plantarum NJAU-01 boli navrhnuté na zníženie poškodenia pečene u myší s oxidačným stresom vyvolaným D-galaktózou reguláciou abnormálnych aktivít SOD, GSH-Px a CAT na normálnu úroveň. Je to v súlade s publikovanými štúdiami pri skúmaní antioxidačnej úlohy cieľových kmeňov vrátane L. plantarum AR113 a ARS01 [12],L. del-brueckii subsp. bulgaricus F17 [27]. Model starnutia D-galaktózových subakútnych myší v súčasnej štúdii je teda účinný na poskytnutie dôverných dôkazov na skúmanie antioxidačnej kapacity LAB in vivo.

Predchádzajúce výsledky výskumu ukázali, že antioxidačný mechanizmus LAB sa prejavuje najmä v nasledujúcich aspektoch: chelátové kovové ióny, autotrofné antioxidačné enzýmové systémy, produkcia antioxidačných metabolitov, zvýšená aktivita antioxidačných enzýmov hostiteľa, kontrola antioxidačných signálnych dráh a regulácia skupiny črevných baktérií [28]. Tieto aspekty zohrávajú rozhodujúcu úlohu pri zmierňovaní chorôb, ktorých rozvoj je spojený s oxidačným stresom [29]. MDA sa považuje za biomarker peroxidácie lipidov a môže viesť k zosieťovanej polymerizácii makromolekúl, ktorá hrá potenciálnu úlohu v cytotoxicite a genotoxicite. Obsah MDA sa zvyčajne používa ako základ pre hodnotenie stupňa peroxidácie lipidov a vyjadrenie úrovne poškodenia buniek [30].výhody cistanche salsaSúčasná štúdia zistila, že myši s oxidačným stresom vyvolaným D-galaktózou mali významne znížené hladiny MDA v sére, srdci a pečeni injekciou L. plantarum NJAU-01, čo naznačuje, že L. Plantarum môže účinne znížiť tvorbu peroxid lipidov u myší. To je v súlade so štúdiou in vitro, ktorá preukázala efektívnu schopnosť zachytávať voľné radikály kmeňa L. plantarum NJAU-01 [16]. Podobne odstavené prasiatka kŕmené L. plantarum ZLP001 vykazovali nižší obsah MDA v sére (4,1 nmol/ml) ako kontrolná skupina (6,23 nmol/ml), čo dokazuje, že L. Plantarum ZLP001 má antioxidačnú aktivitu [31]. Súčasná štúdia naznačila, že doplnky L. plantarum NJAU-01 by mohli v podstate zmierniť stupeň oxidácie lipidov u myší vyvolaných D-galaktózou a chrániť myši pred oxidačným stresom.

V tele existuje súbor obranných systémov enzýmov zachytávajúcich voľné radikály, ako sú SOD, GSH-Px a CAT, ktoré synergicky vychytávajú superoxidové radikály, hydroxylové radikály a peroxid vodíka [32]Oxidácia voľných radikálov a antioxidant obranného systému organizmu sú v stave dynamickej rovnováhy. Keď je telo vystavené stimulom vyvolávajúcim oxidačný stres, táto dynamická rovnováha môže byť narušená. Nadmerná produkcia ROS poškodzuje proteíny, lipidy a molekuly nukleových kyselín, čo v konečnom dôsledku vedie k starnutiu organizmov a rozvoju rôznych ochorení [3]. SOD môže konvertovať superoxidové radikály na peroxid vodíka, ktorý je stále cytotoxický a môže generovať hydroxylové radikály Fentonovou reakciou [34]. Hydroxylový radikál je jedným z najaktívnejších ROS, ktorý môže reagovať s organickou hmotou v bunke s vysokou reakčnou rýchlosťou a deštruktívnym účinkom [35]. Okrem toho môže CAT rozkladať hydroxylové radikály a podieľať sa na obrane buniek proti antioxidantom [36]. Za fyziologických podmienok môžu byť v bunkách produkované antioxidačné enzýmy, ako je GSH-Px, ktoré tieto bunky chránia pred oxidačným poškodením [25]. Táto štúdia ukázala, že L. plantarum NJAU-01 môže významne zvýšiť aktivity SOD, GSH-Px, CAT a T-AOC v sére, srdci a pečeni myší, čo naznačuje, že L. plantarum NJAU-01 zmierňuje oxidačné poškodenie spôsobené D-galaktózou. Tento efekt možno pripísať dvom aspektom.L. plantarum NAJU-01 môže podporovať aktivitu antioxidačných enzýmov u myší a regulovať tak rovnováhu ROS na normálnu úroveň u myší. Na druhej strane by tiež mohol zachytávať voľné radikály a pôsobiť synergicky s SOD, GSH-Px a CAT na zníženie oxidačného stresu. Regulácia aktivity antioxidačných enzýmov probiotickými baktériami bola hlásená aj pre Lactobacillus fermentum [37] a Lactobacillus fermen-tum ME-3 [38]. Táto štúdia ukazuje, že L. plan-tarum NJAU-01 má u myší antioxidačný účinok a je sľubnou alternatívou k syntetickým alebo rastlinným antioxidantom. Zvyčajne sa používa ako bio-zdroj antioxidantov na štúdium klobásových predkrmov alebo funkčných produktov [18]. Hoci výskumu antioxidačnej aktivity LAB sa v posledných rokoch venovala veľká pozornosť, výskumy základného mechanizmu L. Plantarum NJAU-01 antioxidácie, najmä metabolických dráh, expresie proteínov a regulácie črevných flóry je stále málo. Okrem toho si kríženie a komplementácia viacerých antioxidačných mechanizmov v baktériách mliečneho kvasenia vyžaduje ďalšie skúmanie.

Závery

Táto predbežná štúdia dokázala účinok L. plan-term NJAU-01 izolovanej zo šunky Jinhua na model starnutia myší vyvolaný D-galaktózou. Zistilo sa, že pridanie L. Plantarum NJAU-01 počas procesu kŕmenia myší môže výrazne zvýšiť aktivitu antioxidačných enzýmov a znížiť obsah MDA. Táto štúdia potvrdzuje možnosť L. plan-tarum NJAU-01 ako bio-antioxidantu a kladie základy pre ďalšie štúdium antioxidačného mechanizmu L.plantarum.

Metódy

Bakteriálny kmeň a príprava zvierat

L. plantarum NJAU{{0}} (CGMCC14194) bol skrínovaný z tradične sušených mäsových výrobkov Jinhua šunka pomocou morfologických, biochemických a molekulárno-genetických metód identifikácie [15]. Tento kmeň mal vysokú antioxidačnú aktivitu a bol zachovaný na Vysokej škole potravinárskej vedy a inžinierstva na Yangzhou University [16]. Lactobacillus Plantarum NJAU-01 bol konzervovaný ako zmrazený (-80 stupeň) v bujóne De Man, Rogosa, Sharpe (MRS) (Bio-way Technology Co., Ltd, Shanghai, Čína) doplnený 20 percentami (v/v) glycerol. Kmeň 1 percenta inokula bol aktivovaný dvakrát a kultivovaný v 10 ml MRS bujónu pri 37 stupňoch počas 18 hodín. Bakteriálna suspenzia 100 μl sa potom naočkovala do tuhého média MRS pomocou automatického riedidla a platne (Referencia 414,000, Interscience, Saint-Nom-la-Breteche, Francúzsko). Naočkované tuhé médium MRS sa kultivovalo pri 37 stupňoch počas 24 hodín a počet životaschopných jedincov sa spočítal pomocou automatického HD počítadla kolónií (Scan 1200, Interscience, Saint-Nom-la-Breteche, Francúzsko) a stupňa skenovania verzia softvéru 8.0 (Interscience, Saint-Nom-la-Breteche, Francúzsko). Koncentrácia bakteriálnej suspenzie bola detegovaná ako 2 x 10' CFU/ml a kultúra kmeňa s objemom 10 ml bola centrifugovaná pri 6,000 g počas 10 minút pri 4 stupňoch, aby sa odstránil supernatant. Peleta sa trikrát premyla sterilným fyziologickým roztokom a potom sa rozpustila v 20 ml sterilného fyziologického roztoku, čím sa získalo 1 x 10 stupňov FU/ml L. plantarum NJAU-01. Potom sa alikvotná časť 2 ml bakteriálnej suspenzie pri 1 x 10 stupňoch FU/ml odobrala do novej skúmavky, aby sa spojila s 18 ml sterilného fyziologického roztoku, aby sa vytvorila dávka baktérií 1 x 10 FU/ml. Analogicky sa koncentrácia 1 x 107 CFU/ml pripravila zriedením 1 x 10 stupňov FU/ml bakteriálnej suspenzie. Ako experimentálne zviera boli vybrané KM myši SPF stupňa (samice, 4 týždne staré, vážiace 18-20 g). Krmivo a podstielku pre zvieratá poskytol Inštitút porovnávacej medicíny Univerzity Yangzhou (Yangzhou, Jiangsu, Čína). Všetky pokusy na zvieratách boli schválené výbormi pre dobré životné podmienky zvierat a etickými výbormi Yangzhou University a boli v súlade s usmerneniami Inštitucionálneho administratívneho výboru a Etického výboru laboratórnych zvierat (číslo licencie IACUC: 201811009). Myši boli chované pri 20 ± 2 stupňoch s relatívnou vlhkosťou 55 ± 5 percent. Potkany boli náhodne kŕmené štandardnou krysou stravou počas poldenného cyklu svetla a tmy (svetlá fáza od 7:00 do 19:00). Štyri myši boli chované v klietke, kŕmené potravou bez patogénov a vodou. Všetky materiály vrátane vrchnákov, podávačov, fliaš a podstielky boli pred použitím autoklávované. Myši sa aklimatizovali jeden týždeň pred vytvorením modelu starnutia myší.

Vytvorenie myšacieho modelu starnutia

Bol vytvorený model starnutia u myší indukovaný subakútnou D-galaktózou a odvolával sa na Zhao et al. s miernymi úpravami [39]. Spôsob podávania galaktózy sa uskutočňoval subkutánnou injekciou do krku a chrbta. Celkom 48 SPF myší bolo náhodne rozdelených do 6 skupín (8 potkanov/skupina) po jednom týždni aklimatizácie. Náhodné čísla boli generované pomocou štandardnej funkcie =RAND() v programe Microsoft Excel. Myšiam v každej skupine, s výnimkou kontrolnej skupiny, bolo subkutánne injikované 500 mg D-galaktózy na kg telesnej hmotnosti (Shanghai Blue Season Biological Co., Ltd, Shanghai, Čína) počas 4 týždňov raz denne (roztok D-galaktózy, 50 g/l). Kontrolnej skupine bolo podaných injekciou 10 ml sterilného fyziologického roztoku na kg telesnej hmotnosti. Okrem toho sa trom liečebným skupinám podávali intragastrické dávky L.cistanche tubulosa dávkovanie redditPlantarum NJAU-01 (10' CFU/ml, 10 stupňov CFU/ml a 10 stupňov FU/ml) v množstve 20 ml na kg telesnej hmotnosti a označené ako skupina LP1, skupina LP2 a skupina LP3. Myši v kontrolnej skupine a starnúcej skupine boli intragastricky kŕmené sterilným fyziologickým roztokom v dávke 20 ml/kg denne. Myši v pozitívnej kontrolnej skupine boli liečené 1 mg/ml vitamínu C (Vc) v dávke 20 ml/kg denne. Celý experiment trval štyri týždne.

Príprava vzoriek tkaniva

Myši boli usmrtené do bezvedomia intraperitoneálnou injekciou 3 percent izofluranu. Zastavenie tlkotu srdca a nereagovanie na škodlivý stimul (privretie zadnej labky) sa použili ako kritériá na overenie smrti. Myšiam sa odstránili očné buľvy a odobrala sa krv. Potom bola krv okamžite centrifugovaná pri 3,{4}}xg počas 10 min pri 4 stupňoch, aby sa získalo sérum, a skladovaná pri -20 stupňoch až do analýzy. Po eutanázii boli myši v bezvedomí popravené vytiahnutím krčných stavcov, odobrali sa im pečeň, srdce, slezina, obličky, pľúca a mozog a odvážili sa, aby sa určili indexy orgánov. Vzorky pečene a srdca sa homogenizovali do 10 percentného tkanivového homogenátu s 0,9 percentami NaCI a supernatant sa zozbieral centrifugáciou, ako je uvedené vyššie.

Detekcia parametrov

T-AOC a antioxidačné enzymatické aktivity SOD, GSH-Px a CAT a obsahy MDA boli stanovené pomocou testovacej súpravy na celkovú antioxidačnú kapacitu (ABTS metóda, A015-2-1), testu superoxiddismutázy (SOD). súprava (metóda WST-1, A001-1-2), súprava na testovanie glutatiónperoxidázy (GSH-PX) (kolorimetrická metóda, A0060201), súprava na testovanie katalázy (CAT) (kolorimetrická metóda, A007-2-1 ) a testovacia súprava na malóndialdehyd (MDA) (metóda TBA, A003-2-1). Všetky súpravy boli zakúpené od Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute Co, Ltd (Nanjing, Jiangsu, Čína). Všetky vzorky sa testovali trojmo a detekčné postupy sa uskutočňovali v súlade s pokynmi.

Štatistická analýza

Údaje boli analyzované pomocou softvéru Data Processing System 7.{2}}5 (Hangzhou Ruifeng Information Technology Co., Ltd, Hangzhou, Čína). Pomocou Duncanovej novej metódy komplexného rozsahu sa porovnávali rôzne priemery. Test štatistickej významnosti sa uskutočnil na hladine 0,05 (P<>

Tento článok je prevzatý z Ge et al. BMC Microbiology (2021) 21:182 https://doi.org/10.1186/s12866-021-02248-5