skJazyk
Domov / Vedomosti / Obsah

Vedomosti

Antioxidačné a protiúnavové zložky Okra

Mar 21, 2022

Fangbo Xia, Yu Zhong, Mengqiu Li, Qi Chang, Yonghong Liao, Xinmin Liu * a Ruile Pan *


Inštitút rozvoja liečivých rastlín, Peking Union Medical College, Čínska lekárska akadémiaSciences, č. 151, North Road Malianwa, okres Haidian, Peking 100193


Pre viac informácií:ali.ma@wecistanche.com



Abstraktné


Okra (Abelmoschus esculentus (L.) Moench), zdravá zelenina, je rozšírená v tropických a subtropických oblastiach. Predchádzajúce štúdie dokázali, že okra struky majúaktivita proti únave,a cieľom tohto výskumu je objasniťproti únavezložky. Aby sme to dosiahli, rozdelili sme okry (OPD) na semená (OSD) a šupky (OSK) a porovnali sme obsah celkových polysacharidov, celkových polyfenolov, celkových flavonoidov, izokvercitrínu a kvercetínu-3-O-gentiobiózy a antioxidantu aktivita in vitro aprotiúnavová aktivitain vivo medzi OSD a OSK. Obsah celkových polyfenolov a celkových polysacharidov bol 29,5 percenta a 14,8 percenta v OSD a 1,25 percenta a 43,1 percenta v OSK, v uvedenom poradí. Celkové flavonoidy, izokvercitrín a kvercetín-3-O-gentiobióza (5,35 percenta, 2,067 percenta a 2,741 percenta, v uvedenom poradí) boli zistené iba v OSD. Antioxidačné testy vrátane vychytávania 1-difenyl-2-pikrylhydrazylu (DPPH), antioxidačnej sily redukujúcej železo (FRAP) a testu znižovania sily a testu plávania pri zaťažení ukázali, že OSD má významný antioxidant aúčinky proti únave. Okrem toho biochemické stanovenie ukázalo, žeprotiúnavová aktivitaOSD je spôsobené znížením hladín kyseliny mliečnej (BLA) a močovinového dusíka (BUN), zvýšením ukladania glykogénu v pečeni a podporou antioxidačnej schopnosti znížením hladiny malondialdehydu (MDA) a zvýšením superoxiddismutázy (SOD) a glutatiónperoxidázy (GSH- Px) úrovne. Tieto výsledky ukázali, že ide o semená okryproti únavečasť strukov okry a polyfenoly a flavonoidy boli aktívnymi zložkami.


Kľúčové slová: okra; proti únave; antioxidant; polyfenoly



Cistanche

1. Úvod


Únava je komplexný fyziologický jav, ktorý je definovaný ako ťažkosti pri začatí alebo udržiavaní dobrovoľných aktivít [1]. Okrem toho, že sa s vekom zvyšuje a prejavuje sa u pacientov s rakovinou, depresiou, infekciou HIV, sklerózou multiplex a Parkinsonovou chorobou, únava sa stáva čoraz bežnejším príznakom u normálnych ľudí so zvyšujúcim sa tempom moderného života [2–4]. Veľké komunitné prieskumy ukázali, že viac ako polovica dospelej populácie sa sťažuje na únavu [5,6]. Dlhodobo nahromadená alebo chronická únava nielen znižuje kvalitu života, ale vedie aj k chronickému únavovému syndrómu a iným organickým ochoreniam a dokonca vedie ku karoshi (abnormálne úmrtia na akútne kardiovaskulárne ochorenia spôsobené prepracovaním [7]). Existuje niekoľko teórií o príčinách únavy, ako je teória vyčerpania, ktorá tvrdí, že únava je spôsobená nedostatkom dostupného ATP pre spojenie aktín-myozín, pumpovaním Na`/K` a absorpciou Ca2` sarkoplazmatickým retikulom [8–11 ]; teória porúch homeostázy, ktorá naznačuje, že únava je spôsobená akumuláciou rôznych metabolických vedľajších produktov [10,12]; a teória katastrof naznačujúca, že únava sa môže vyvinúť v dôsledku zlyhania na jednom alebo viacerých miestach pozdĺž dráhy tvorby sily [13]. Spomedzi nich sa všeobecne predpokladá, že oxidačný stres zohráva dôležitú úlohu v etiológii únavy [10,13–16]. Ukázalo sa, že antioxidanty z niektorých bylín majú značné protiúnavové účinky, čo naznačuje, že antioxidačná liečba môže byť cenným terapeutickým prístupom proti únave [17–20]. Preto spotrebitelia vo svojej strave vyhľadávajú viac prírodných antioxidačných zložiek, aby znížili oxidačné poškodenie a bojovali proti únave. Okra (Abelmoschus esculentus (L.) Moench, Čeľaď: Malvaceae), tiež známa ako dámsky prst, bhindi a gumbo, je jednoročná rastlina pôvodom z Afriky a bola pestovaná v rôznych krajinách sveta, najmä v tropických, subtropických, a teplé oblasti mierneho pásma.


Lusky okry sa už dlho používajú ako zelenina a zdroj diétnych liekov. V tradičnej ázijskej a africkej medicíne sa struky okry používajú ako slizovitá potravina v boji proti gastritíde [21]. Farmakologické štúdie odhalili, že okra má antioxidačné, neuroprotektívne, antidiabetické, antihyperlipidemické a protiúnavové účinky [22–26]. Hoci protiúnavová aktivita strukov okry bola dokázaná už skôr [26], o ich protiúnavových aktivitách a zložkách sa vie len málo. Predchádzajúca literatúra uvádzala, že struky okry obsahujú vysoký obsah polysacharidov, polyfenolov a flavonoidov [27–34]. V predchádzajúcich štúdiách sa tiež preukázalo, že polyfenoly a flavonoidy majú silné antioxidačné a protiúnavové účinky [15,18,20,35,36]. Navyše, náš predbežný kvalitatívny experiment, v ktorom sme použili roztok chloridu železitého ako činidlo vyvolávajúce farbu, odhalil, že extrakt zo semien okry vykazoval silnú fenolovú reakciu; extrakt z jej šupky však takmer nevykazoval takú reakciu (doplnkové materiály), ktorá preukázala, že semená okry obsahovali vyšší obsah polyfenolov a flavonoidov ako šupky okry. Preto by sa dalo špekulovať, že semienka okry môžu byť protiúnavovou súčasťou strukov okry a polyfenoly a flavonoidy môžu byť aktívnymi zložkami. Cieľom štúdie bolo objasniť protiúnavové zložky strukov okry. Aby sme to dosiahli, rozdelili sme čerstvé struky okry na semená a šupky a porovnali sme chemický obsah celkových polysacharidov, celkových polyfenolov, celkových flavonoidov, izokvercitrínu a kvercetín-3-O-gentiobiózy a antioxidačné aktivity in vitro a anti- únavové aktivity in vivo medzi semenami okry a šupkami. Všetky tieto výsledky odhalili, že semená okry boli súčasťou strukov okry proti únave a polyfenoly a flavonoidy boli aktívnymi zložkami. Študovali sa aj potenciálne mechanizmy protiúnavových aktivít v okre.


2. Experimentálna časť


2.1. Rastlinný materiál a ťažba


Čerstvé struky okry boli zakúpené na trhu (Sanya, provincia Hainan, Čína) v júli 2013. Rastlinu overil profesor Bengang Zhang, Inštitút liečivých rastlín, Čínska akadémia lekárskych vied a Peking Union Medical College, Peking, Čína, kde sú vzorky poukážok (č. 20130705) uložené v herbári ústavu. Pripravili sa dve porcie 2,5 kg čerstvých strukov okry. Jedna časť sa lyofilizovala priamo, čím sa získali sušené okra struky (251,3 g). Druhá časť sa rozdelila na semená okry a šupky z okry, lyofilizovala sa, aby sa získali sušené semená okry (50,1 g) a sušené šupky okry (200,5 g). Lusky okry, semená a šupky sa dobre pomleli a extrahovali oddelene 1 500 ml vriacej vody, každý 1 hodinu (3 krát). Každá prefiltrovaná kvapalina sa spojila a zahustila vo vákuu, čím sa získali zvyšky strukov okry (OPD, 105,4 g), semien okry (OSD, 20,5 g) a šupiek okry (OSK, 84,1 g). Preto je pomer extraktu OPD:OSK:OSD približne 5:4:1. Všetky vzorky boli skladované pri teplote 20 ˝C až do následnej chemickej analýzy a pokusov na zvieratách.


Acteoside of Cistanche

2.2. Chemikálie a činidlá


Izoquercitrín a kvercetín-3-O-gentiobióza boli izolované zo strukov okry v našom laboratóriu s čistotou nad 98 percent analýzou vysokoúčinnou kvapalinovou chromatografiou (HPLC). Štandardy rutín, kyselina gallová a D-glukóza boli zakúpené od Národného inštitútu pre kontrolu potravín a liečiv (Peking, Čína). Na stanovenie fenolov sa použilo Folin-Ciocalteuovo fenolové činidlo (1N, Coolaber Science & Technology, Peking, Čína). Súprava na zníženie antioxidačnej sily Ferric (FRAP) bola zakúpená od Beyotime Biotechnology (Peking, Čína). 1,1-difenyl-2-pikrylhydrazyl (DPPH) a Trolox boli zakúpené od Sigma-Aldrich Inc. (St. Louis, MO, USA). Fosfátový pufor (PBS, Gibco) bol zakúpený od Thermo Fisher (Waltham, MA, USA). Rozpúšťadlá, vrátane acetonitrilu (Thermo Fisher, MA, USA) a kyseliny mravčej (CNW, Dusseldorf, Nemecko), boli čistoty pre HPLC a voda sa získala zo systému na čistenie vody Milli-Q (Millipore, MA, USA). Testovacie súpravy na stanovenie krvného laktátu (BLA), močovinového dusíka v sére (BUN), pečeňového glykogénu (HG), glutatiónperoxidázy (GSH-Px), kyseliny tiobarbiturovej (TBA) a superoxiddismutázy (SOD) boli zakúpené od Nanjing Jiancheng Biotechnology Inštitút (Nanjing, Čína). Všetky ostatné činidlá a chemikálie použité v tejto štúdii boli analytickej kvality.


2.3. Zvieratá


Samce myší ICR (20–22 g) boli zakúpené od Vital River Laboratories (kvalifikované číslo: SCXK 2012-0001, Peking, Čína). Myši boli umiestnené v skupinách po 6 zvieratách na klietku pri konštantnej teplote (23 ˝C ˘ 2 ˝C) a vlhkosti (50 percent ˘ 10 percent) v 12/12-hodinovom cykle svetlo/tma (svetlá zapnutá od 8:{11}} do 20:{13}} večer). Zvieratá mali voľný prístup k štandardnej strave a sterilizovanej pitnej vode v SPF (Specific Patogen Free) zvieracom dome. Všetky experimentálne postupy sa uskutočňovali pod dohľadom a schválením Centra akadémie experimentálnych zvierat Ústavu vývoja liečivých rastlín av prísnom súlade s NIH Guide for the Care and Use of Laboratory Animals (ôsme vydanie)[37].



2.4. Chemická analýza OSD a OSK


2.4.1. Stanovenie celkového obsahu flavonoidov (TF).


Obsah TF bol meraný kolorimetrickým testom NaNO{{0}}}Al(NO)3 podľa Technických štandardov pre testovanie a hodnotenie funkčných potravín, ktoré vydala Národná komisia pre zdravie a rodinné plánovanie ČĽR. v 2{{20}}03 s malými úpravami. Stručne, 50 mg vzorka sa rozpustila v 40 ml destilovanej vody a roztok vzorky sa trikrát extrahoval 50 ml chloroformu. Potom sa vodný roztok zriedil na 50 ml a 2 ml zriedeného roztoku sa adsorbovalo 5 g polyamidovej živice a eluovalo sa 20 ml 70 % etanolu. Elúcia 70 percentným etanolom sa skoncentrovala na 10 ml vo vákuu. Tri mililitre koncentrovaného eluátu sa umiestnili do 10 ml odmernej banky a potom sa pridali 2 ml 70 percentného etanolu, 0,3 ml NaN02 (5 percent) a 0,3 ml Al(NO)3. Po 5 minútach sa k roztoku zmesi pridali 2 ml roztoku NaOH (1,0 M) a zmes sa nechala stáť 6 minút. Nakoniec sa pridalo 2,4 ml 30 percentného etanolu. Absorbancia sa merala oproti slepému pokusu pri 510 nm pomocou spektrofotometra UNICO-2012 UV-VIS (Shanghai, Čína). Celkový obsah flavonoidov sa vypočítal z kalibračnej krivky s použitím rutínu ako štandardu (20–100 mg/l). Výsledky boli uvedené ako mg ekvivalentu rutínu na mg vzoriek.


Echinacoside of Cistanche

2.4.2. Stanovenie celkového obsahu polyfenolov (TP).


Obsah TP bol stanovený metódou Folin – Ciocaiteu s miernou modifikáciou [38]. Stručne povedané, 50 mg vzorka sa zmiešala s 25 ml 50-percentného metanolového roztoku, potom stačilo 0,5 ml roztoku vzorky, 0,3 ml Folin-Ciocaiteuovho činidla a 10 ml uhličitanu sodného (10 percent). a potom sa objem upravil na 25 ml destilovanou vodou. Zmes sa nechala stáť pri 50 °C v tme počas 1 hodiny. Absorbancia sa merala pri 765 nm. Pripravila sa kalibračná krivka kyseliny galovej. Výsledky boli vyjadrené ako mg ekvivalentov kyseliny galovej na mg vzoriek.


2.4.3. Stanovenie izokvercitrínu a kvercetínu-3-O-gentiobiózy


Kvantifikácia izokvercitrínu a kvercetínu{{0}}O-gentiobiózy sa uskutočnila pomocou HPLC-UV s použitím päťbodovej kalibračnej krivky (r2=0.999) v rozsahu 5–5{{23 }}0 µg/ml. Izoquercitrín a kvercetín-3--O-gentiobióza (5 mg) a vzorky (10 mg) sa rozpustili v 10 ml metanolu. Všetky roztoky sa pred HPLC analýzou prefiltrovali cez 0,{14}}um polytetrafluóretylénové filtre. Na separáciu zlúčenín cez kolónu s reverznou fázou (Thermo synchronize aQ, 4,6 mm ˆ 250 mm, 5 um) sa použila pumpa Waters 600 HPLC s detektorom Waters 2489 UV/Visible pri rýchlosti 1 ml/min. Mobilná fáza pozostávala z acetonitrilu (A) a 0,1 % kyseliny octovej vo vode (B). Program gradientovej elúcie bol nasledujúci: 10 percent A po 0 minútach a lineárne až do 40 percent za 40 minút, 90 percent po 41 až 50 minútach a 10 percent po 51 až 65 minútach. Vlnová dĺžka pre UV detekciu bola 354 nm a teplota kolóny bola nastavená na 25 ˝C. Zlúčeniny sa identifikovali porovnaním s retenčným časom štandardov a kvantifikovali sa výpočtom plochy pod krivkou s vonkajšími štandardmi.


2.4.4. Stanovenie celkového obsahu polysacharidov (TPS).


Obsah TPS bol stanovený metódou fenol-kyselina sírová [39,40]. Stručne povedané, 80 mg vzorka sa rozpustila v 50 ml destilovanej vody a potom sa proteín odstránil divokou metódou (roztok vzorky:chloroform:N-butylalkohol=20:4:1). Potom sa k výslednému viskóznemu roztoku pridalo štvornásobné množstvo etanolu, aby sa vyzrážal surový polysacharidový extrakt. Etanolový roztok sa centrifugoval pri 617,4 ˆg počas 30 minút, aby sa získala zrazenina. Zrazenina sa postupne premyla etanolom, acetónom a éterom a rozpustila v 250 ml destilovanej vody. Potom sa 0,1 ml roztoku polysacharidu zmiešalo s 0,9 ml destilovanej vody, 1 ml 5% roztoku fenolu a 5 ml kyseliny sírovej v skúmavke a udržiavalo sa pri teplote miestnosti počas 30 minút. Absorbancia sa merala pri 490 nm spektrofotometrom UNICO-2012 UV-VIS (Shanghai, Čína). Zostavila sa kalibračná krivka glukózy a obsah TPS sa určil z regresnej rovnice kalibračnej krivky. Výsledky boli vyjadrené ako mg ekvivalentov glukózy na mg vzoriek.


2.5. Antioxidačné testy in vitro


Antioxidačná kapacita OPD, OSK a OSD bola detekovaná tromi metódami, vrátane {{0}}}difenyl-2-pikrylhydrazyl (DPPH) zachytávania, železa redukujúceho antioxidačnú silu (FRAP) a znižovania výkonu, podľa literatúry [19,41] s miernou úpravou. Trolox bol použitý ako pozitívna kontrola a výsledky boli vyjadrené ako Trolox ekvivalentná antioxidačná kapacita. Keďže OPD pozostával z OSK a OSD, na osvetlenie aktívnych zložiek okra strukov sa ako ekvivalent OPD použili koncentrácie OSK a OSD. Podľa predbežných testov boli rozsahy koncentrácií OPD, ODS, OSK 0.0{{10}}4–0,8, {{17 }}.0{{20}}32–0.64 a 0.0008 –{{40}}.16 mg/ml pre test DPPH; 1.0–4.0, 0.8–3.2 a {{50}}.2–0.8 mg/ml pre test FRAP; a 0,1 – 4, 0,08 – 3,2 a 0,02 – 0,8 mg/ml pre test zníženia výkonu, v tomto poradí Pre test DPPH roztok vzorky (50 µL) s proporcionálnym rozsahom (0,004 – 0,8 mg OPD/ml, 0,0032 – 0,64 mg OSK/ ml a 0,0008–0,16 mg OSD/ml) sa zmiešal s roztokom DPPH (100 µl, 1,28 ˆ 10'4 mol/L) na meranie aktivity zachytávania voľných radikálov (A1) a 95 percentným etanolom (100 µl) na kontrolu (A2). Destilovaná voda (50 ul) sa zmiešala s roztokom DPPH (100 ul) pre slepý pokus (A0). Absorbancia sa merala pri 517 nm po zmiešaní roztokov a udržiavaní pri teplote miestnosti počas 30 minút. Schopnosť zachytávať radikál DPPH sa vypočítala pomocou nasledujúcej rovnice:


Flavonoids of Cistanche

Čistiaca aktivita ( percentá ){{0}}[ 1-(A1-A2/{A0]* 100 percent . (1)


FRAP troch roztokov vzoriek (1.0–4{3}} mg OPD/ml, 0,8–3,2 mg OSK/ml a 0,2– {{10}}.8 mg OSD/ml) boli zistené podľa pokynov Beyotime Institute of Biotechnology. Zriedený roztok vzorky (5 ul) sa zmiešal s pracovným roztokom FRAP (180 ul) a udržiaval sa 5 minút pri 37 °C. Absorbancia reakčnej zmesi sa potom zaznamenala pri 593 nm. Štandardná krivka bola pripravená s použitím FeSO4 v rozsahu od 0,15 do 1,5 mm. Pri určovaní redukčného výkonu použite roztok vzorky (0,5 ml pre 0,1–4 mg OPD/ml, 0.08–3,2 mg OSK/ml a 0.02–{{50}},8 mg OSD/ml) sa zmiešalo s rovnakým objemom PBS (0,2 mol/l , pH 6,6) a roztok ferrikyanidu draselného (1 percento, w/v) a inkubácia sa uskutočňovala 20 minút pri 50 °C. Do zmesi sa pridala kyselina trichlóroctová (0,5 ml, 10 percent, w/v) a zmes sa centrifugovala pri 201,6 ˆg počas 10 minút. Potom sa horná vrstva roztoku (0,5 ml) zriedila destilovanou vodou (0,5 ml) a potom sa k nej pridal chlorid železitý (0,1 ml, 0,1 percenta, w/v). Absorbancia sa merala pri 700 nm.



2.6. Protiúnavové účinky OPD, OSK a OSD a biochemická analýza


Na základe rovnakého dôvodu ako antioxidačné testy in vitro boli dávky OPD, OSK a OSD proti únave navrhnuté ako skupiny OPD (0.75, 1.50 a 3.{{{101} 6}} g/kg telesnej hmotnosti), skupiny OSK (0,60, 1,20 a 2,40 g/kg telesnej hmotnosti) a skupiny OSD (0,15, 0,30 a 0,60 g/kg telesnej hmotnosti). Myši boli pred experimentmi kŕmené základnou stravou v experimentálnom prostredí. Po 3 dňoch adaptácie bolo 120 myší náhodne rozdelených do desiatich skupín: kontrolná skupina (CG), 3 skupiny OPD, OSK a OSD každá. Každá skupina mala 12 myší. Kontrolná skupina (CG) bola ošetrená sterilnou vodou, zatiaľ čo ostatné skupiny boli ošetrené zodpovedajúcim extraktom. Voda/extrakty sa podávali orálne (8:00 ráno) myšiam raz denne počas 21 dní a test na otvorenom poli a test plávania so zaťaženým plávaním (WLST) sa uskutočnili 20. a 21. deň v tomto poradí. Po WLST boli myši vybraté z bazéna, vysušené papierovými utierkami a umiestnené späť do svojich pôvodných klietok. Experimentátori WLST a testu v otvorenom poli boli zaslepení voči experimentálnym podmienkam a zvieratá boli randomizované pred účasťou na experimentoch. Aby sa objasnil účinok OSD proti únave počas zotavovania, myši sa anestetizovali éterom a vzorky krvi sa odobrali z každej skupiny po 24 hodinách WLST. Vzorky séra sa získali centrifugáciou (896 ˆ g, 15 minút, 4 ˝C). Pečene sa rýchlo vypreparovali a premyli v ľadovo chladnom fyziologickom roztoku. Všetky vzorky boli zmrazené v tekutom dusíku a uchovávané pri 80 °C na ďalšiu analýzu.


2.6.1. Test v otvorenom poli


Na overenie účinkov OPD, OSK a OSD na lokomotorické aktivity boli myši vyhodnotené automaticky pomocou nami vyvinutého počítačom podporovaného riadiaceho systému v otvorenom poli [42,43]. Prístroj pozostáva zo štyroch kovových nádrží (priemer 30 cm, výška 40 cm) s videokamerou pripevnenou na vrchu. Experimenty sa uskutočňovali v tichej miestnosti a prístroj bol osvetlený svetelným zdrojom 120 Lux na strope. Jednu hodinu po podaní dávky sa každá myš umiestnila do stredu kovovej nádrže a nechala sa voľne skúmať 2 minúty a pomocou softvéru sa vypočítala vzdialenosť prejdená za 4 minúty, čo je index lokomotorickej aktivity. Súčasne boli testované štyri myši.


Cistanche can relieve chronic fatigue syndrome symptoms

2.6.2. Test plávania so záťažou (WLST)


WLST bola vykonaná na vyvolanie únavy podľa predtým opísanej metodiky s miernou modifikáciou [19,44,45]. Jednu hodinu po podaní dávky boli myši naložené olovenými plátmi, ktoré boli pripevnené k rovnakej polohe ich chvostov a vážili približne 3 percentá ich telesnej hmotnosti. Potom boli zaťažené myši jednotlivo nútené plávať vo valcových nádobách (priemer 40 cm), ktoré boli naplnené vodou (25 ˘ 1 ˝C) do hĺbky 30 cm. Vyčerpanie bolo klasifikované ako strata koordinovaných pohybov a nevyzdvihnutie sa na hladinu do 10 s a okamžite sa zaznamenal čas plávania. Voda v bazéne bola vymenená po každom sedení.



2.6.3. Analýza biochemických parametrov súvisiacich s únavou


Sérum bolo pripravené na stanovenie dusíka močoviny v krvi (BUN) a kyseliny mliečnej v krvi (BLA). Pečene boli pripravené na stanovenie ekvivalentov malondialdehydu (MDA), celkovej superoxiddismutázy (SOD), glutatiónperoxidázy (GSH-Px) a pečeňového glykogénu (HG). Všetky biochemické parametre boli stanovené pomocou komerčne dostupných súprav a všetky postupy boli v súlade s pokynmi výrobcu. Stručne, obsah HG bol stanovený pomocou anthrónového činidla pri 620 nm, zatiaľ čo BLA bol stanovený pomocou nitrotetrazóliovej modrej chloridového činidla pri 530 nm. BUN bol hodnotený ureázou s enzýmovou metódou spojenou s glutamát dehydrogenázou pri 640 nm. Aktivita GSH-PX sa merala v združenom systéme meraním poklesu trifosfopyridínového nukleotidu (NADPH) pri 340 nm. Skúška aktivity SOD bola založená na jej schopnosti inhibovať oxidáciu O2 produkovanou systémom xantín-xantín oxidázy. Jedna jednotka aktivity SOD bola definovaná ako množstvo, ktoré znížilo absorbanciu pri 450 nm o 50 percent. Obsah ekvivalentov MDA sa stanovil pri 532 nm reakciou s TBA za vzniku stabilného chromoforického produktu.


2.7. Štatistická analýza


Chemické stanovenia boli uskutočnené trojmo a výsledky sú vyjadrené ako stredné hodnoty. Antioxidačné testy sa uskutočnili trojmo a výsledky sa vyjadrili ako priemerné hodnoty ˘ štandardné odchýlky. Údaje o správaní a biochemické údaje boli analyzované štatistickým softvérom SPSS (SPSS 19.0 Inc., Chicago, IL, USA). Na porovnanie medzi skupinami sa použila jednosmerná analýza rozptylu (One-way ANOVA) s testom najmenej významného rozdielu (LSD). Hodnoty P menšie ako 0,05 sa považovali za štatisticky významné. Výsledky boli vyjadrené ako priemer ˘ štandardná chyba priemeru (SEM).


3. Výsledky


3.1. Chemická analýza OSK a OSD


Ako je uvedené v tabuľke 1, obsah TF a TP v OSD bol oveľa vyšší ako v OSK, zatiaľ čo obsah TPS v OSD bol oveľa nižší ako v OSK. Zlúčeniny izokvercitrínu a kvercetín-3-O-gentiobiózy boli detegované iba v OSD pomocou HPLC (zobrazené na obrázku 1).


image

image

3.2. Antioxidačná aktivita in vitro OPD, OSK a OSD


Ako je uvedené v tabuľke 2, antioxidačná aktivita OPD a OSD bola preukázaná pomocou DPPH, FRAP a testov na zníženie výkonu a OSD vykazovali oveľa lepšiu antioxidačnú aktivitu ako OPD. OSK však preukázal slabý účinok v teste zníženia výkonu a žiadny účinok v testoch DPPH a FRAP. Preto bola OSD aktívnou súčasťou strukov okry pre antioxidačnú aktivitu



image


3.3. Účinky OPD, OSK a OSD na pohybovú aktivitu


Lokomotorické aktivity myší boli testované na 20. deň po liečbe OSD. Ako je znázornené na obrázku 2, vysoká dávka OSD skupín (0,6 g/kg) významne znížila celkovú vzdialenosť myší v novom prostredí v porovnaní s kontrolnou skupinou (p=0. 04). Neboli však pozorované žiadne významné účinky pre ostatné skupiny na celkovú vzdialenosť. Tieto výsledky ukázali, že struky a semená okry nemali žiadny excitačný účinok na centrálny nervový systém. Okrem toho by sa dalo vyvodiť, že OSD môže mať pri vysokej dávke (0,6 g/kg) mierny sedatívny účinok.



image


3.4. Účinky na vyčerpávajúci čas plávania OPD, OSK a OSD (WLST)


Ako je znázornené na obrázku 3, po doplnení OPD, OSK a OSD počas 21 dní by liečba OPD (3 g/kg) a OSD (0,3 a 0,6 g/kg) mohla výrazne predĺžili čas plávania myší, ktorý sa natiahol až na 57,84 ˘ 12,37, 46,51 ˘ 5,82 a 70.05 ˘ 12.07 min (p < 0="" .05,="" p="">< 0.05="" a="" p="">< 0.{{70}}1),="" v="" tomto="" poradí,="" oveľa="" dlhšie="" v="" kontrolnej="" skupine="" (15,20="" ˘="" 1,49="" min).="" medzitým="" liečba="" opd="" (0,75="" a="" 1,5="" g/kg),="" osd="" (0,15="" g/kg)="" a="" osk="" (0,6,="" 1,2="" a="" 2,4="" g/kg)="" nepreukázala="" významné="" zvýšenie="" času="" plávania="" u="" myší="" (="" 14,73="" ˘="" 1,28,="" 23,96="" ˘="" 3,70="" a="" 27,34="" ˘="" 5,72="" min="" v="" porovnaní="" s="" kontrolnou="" skupinou="" (p="0,897," p="0,398" a="" p="0,268," v="" tomto="" poradí="" ),="" ale="" osd="" (0,15="" g/kg)="" vykazovalo="" trend="" zvyšovania="" času="" plávania,="" ale="" neodhalilo="" významný="" rozdiel="" (p="0,225)." navyše,="" jednosmerné="" anova="" vykazovali="" významné="" rozdiely="" v="" vyčerpávajúcom="" čase="" plávania="" myší="" medzi="" skupinami="" (f="" (3,="" 40)="12" 0,839,="" p="">< 0,001).="" čas="" plávania="" v="" skupine="" s="" vysokou="" dávkou="" osd="" (0,6="" g/kg)="" ukázal="" výrazný="" rozdiel="" v="" porovnaní="" so="" skupinou="" so="" strednou="" dávkou="" (0,3="" g/kg)="" (p="0,019)" a="" pozoroval="" sa="" rovnaký="" výsledok="" medzi="" 0.3-g/kg="" a="" 0.{79}}g/kg="" skupiny="" (p="0.034)," čo="" dokazuje,="" že="" osd="" môže="" predĺžiť="" vyčerpávajúci="" čas="" plávania="" v="" závislosti="" od="">

image

3.5. Vplyv OSD na biochemické parametre u myší po teste plávania so záťažou


Ako ukázal výsledok testu plávania so záťažou, OSD môže výrazne predĺžiť vyčerpávajúci čas plávania myší; liečba OSK však neukázala významné zvýšenie času plávania u myší. Preto boli biochemické parametre stanovené iba na myšiach liečených OSD.


3.5.1. Vplyv OSD na BLA, BUN a HG


Rozdiel v obsahu BLA, BUN a HG medzi skupinami bol významný (BLA: F (3, 40)=8.257, p < {{1{16}}}}.{{="" 20}}01;="" bun:="" f="" (3,="" 40)="8.596," p="">< 0.{{3{{32="" }}}}01;="" hg:="" f="" (3,="" 36)="6.960," p="">< 0.{{40}}="" 01).="" ako="" je="" uvedené="" v="" tabuľke="" 3,="" hladiny="" bla="" a="" bun="" v="" skupinách="" s="" osd="" boli="" významne="" nižšie="" ako="" v="" kontrolnej="" skupine="" 24="" hodín="" po="" teste="" plávania="" so="" záťažou="" (bla:="" p="">< 0.05,="" s.="">< 0,05="" a="" p="">< 0,01="" pre="" 0,15,="" 0,3="" a="" 0,6="" g/kg,="" v="" tomto="" poradí;="" bun:="" p="">< 0,01="" pre="" 0,15,="" 0,3="" a="" 0,6="" g/kg).="" hladiny="" hg="" v="" skupinách="" osd="" boli="" významne="" vyššie="" v="" porovnaní="" s="" kontrolnou="" skupinou="" (p="">< 0,05,="" p="">< 0,01="" a="" p="">< 0,01="" pre="" 0,15,="" 0,3="" a="" 0,6="" g/kg,="" v="" danom="">


image


3.5.2. Vplyv OSD na GSH-PX, MDA a SOD


Rozdiely v aktivitách SOD, GSH-PX a ekvivalente MDA medzi skupinami boli významné (MDA: F (3, 40)=8.355, p < 0.{{18}="" }01;="" sod:="" f="" (3,="" 42)="9,876," p="">< 0.001;="" gsh-px:="" f="" (="" 3,="" 40)="7.959," p="">< 0.001).="" ako="" je="" uvedené="" v="" tabuľke="" 4,="" ekvivalent="" mda="" v="" skupinách="" s="" osd="" bol="" významne="" nižší="" ako="" v="" kontrolnej="" skupine="" po="" teste="" plávania="" so="" záťažou="" (p="">< 0.01,="" p="">< 0.{101}="" {45}}1="" a="" p="">< 0.01="" pre="" 0,15,="" 0,3="" a="" 0,6="" g/kg).="" okrem="" toho="" hladiny="" sod="" a="" gsh-px="" v="" skupinách="" osd="" boli="" významne="" vyššie="" v="" porovnaní="" s="" kontrolnou="" skupinou="" (sod:="" p="">< 0,01,="" p="">< 0,01="" a="" p="">< 0,01;="" gsh-px:="" p="">< 0,05,="" p="">< 0,01="" a="" p="">< 0,01="" pre="" 0,15,="" 0,3="" a="" 0,6="" g/kg,="" v="" tomto="">


image



4. Diskusia


Nezrelý struk okry je zdravá zelenina, ktorá sa konzumuje vo väčšine oblastí sveta. Predchádzajúce štúdie uviedli, že nezrelé struky okry mali antioxidačné a protiúnavové účinky [25,46], ale jeho aktívne zložky a potenciálne mechanizmy neboli jasné. Aby sme preskúmali antioxidačné a protiúnavové aktivity strukov okry, rozdelili sme čerstvé struky okry na semená a šupky a získali sme OSD, OSK a OPD extrakčným procesom, potom antioxidačnú aktivitu in vitro OSD, OSK a OPD sa detegoval pomocou DPPH, FRAP a redukčného výkonu a protiúnavový účinok in vivo OSD, OSK a OPD sa študoval pomocou testu plávania so záťažou. Naše výsledky ukázali, že OSD mala nielen dobrú antioxidačnú aktivitu in vitro, ale tiež významne predĺžila čas plávania myší v porovnaní s kontrolnou skupinou, zatiaľ čo OSK nevykazoval žiadny účinok v oboch. Vyčerpávajúci čas plávania je priamym meraním objektívne odrážajúcim záťažovú vytrvalosť tela [47] a podpora záťažovej vytrvalosti koreluje s dlhšími časmi plávania. Preto by sa antioxidačná a protiúnavová časť OPD mala odvodiť ako jej semená. Okrem toho v tejto štúdii OSD (0.3{{10}}, 0,60 g/kg) môže výrazne predĺžiť čas plávania myší a ekvivalentné dávky semien okry u ľudí môžu byť 0,9 ~1,8 g/kg (4,5~8,9 g/kg pre okra struky) podľa plochy povrchu tela [48]. Tieto dávky možno dosiahnuť ľudskou porciou zeleniny. Aktívne zložky okry sú však stále nejasné. Výsledky chemickej analýzy v tejto štúdii ukázali, že obsah polyfenolov v OSD je asi 24-krát vyšší ako v OSK, ale obsah polysacharidov v OSD je oveľa nižší ako v OSK (tabuľka 1).


Moreover, total flavonoids content and two compounds of isoquercitrin and quercetin-3-O-gentiobiose were only detected in OSD and were not detected in OSK (Table 1). It has been proven that okra seeds contained epigallocatechin oligomers, catechin, and its oligomers, isoquercitrin, quercetin-3-O-gentiobiose, and other catechin and quercetin derivatives [27–29]. Furthermore, previous studies have reported that polyphenols like catechin and flavonoids like quercetin possess anti-fatigue activity due to their antioxidant activity [35,36,49–51]. Therefore, we deduced that polyphenols and flavonoids of OSD might be the antioxidant and anti-fatigue constituents. As for the reason that the effect of OPD was less than the effect of OSD, it might be that the high content of mucilaginous polysaccharides can affect the assimilation of polyphenols and flavonoids in OPD, which needs to be researched in the future. When it comes to the anti-fatigue mechanism of OSD, an open-field test showed that OSD had no central nerve stimulation in mice, which proved that the anti-fatigue of OSD was not through central excitation. Apart from this, it was likely that OSD possessed a slight sedative effect in high doses (>0,6 g/kg). Na preukázanie toho je potrebných viac údajov, pretože malé zníženie lokomócie môže byť tiež výsledkom zníženej motivácie skúmať alebo možného anxiogénneho účinku. V tomto výskume sa však test na otvorenom poli použil na vylúčenie možnosti, že OSD vykonávala aktivitu proti únave excitačným účinkom na centrálny nervový systém, a viac údajov na preukázanie sedatívnych účinkov OSD nebolo prítomných. Okrem toho sa ukázalo, že hlavnou zložkou fyzickej únavy je nadmerné množstvo reaktívnych druhov oxidov (ROS) produkovaných počas vyčerpávajúceho cvičenia. Nadmerné ROS môže ovplyvniť rôzne metabolické a enzymatické procesy napadnutím polynenasýtených mastných kyselín za vzniku MDA a viesť k dysfunkcii biofilmov [13,52].


Z tohto dôvodu ROS nielen priamo ovplyvňuje enzymatickú aktivitu počas dodávania energie a procesov spájania excitácie a kontrakcie, ale tiež urýchľuje akumuláciu odpadu vrátane BLA a BUN. Navyše, zvyšujúca sa hladina BLA je dôležitou príčinou únavy z dôvodu zníženia pH v tkanivách a vyšší obsah BUN indikuje nižšiu vytrvalosť pri cvičení. Preto by mohol nielen zvýšiť vytrvalosť pri cvičení, ale aj zmierniť fyzickú únavu a podporiť regeneráciu podporou aktivity enzymatických antioxidačných systémov vrátane SOD a GSH-PX alebo priamo doplniť antioxidanty. V tejto štúdii stanovenie biochemických parametrov, ktoré sa uskutočnilo 24 hodín po teste plávania, naznačuje, že liečba OSD významne znížila hladiny BLA a BUN v krvi, MDA v pečeni a zvýšila hladiny HG, SOD a GSH v pečeň počas zotavovania z únavy, čo dokázalo, že OSD môže zmierniť fyzickú únavu a podporiť zotavenie. Vzhľadom na výsledky antioxidačných testov in vitro v našom výskume by sa dalo vyvodiť, že OSD malo účinok proti únave nielen prostredníctvom priameho zachytávania voľných radikálov, ale aj podporou aktivít antioxidačných enzýmov vrátane SOD a GSH-PX.


23

Kliknutím na obrázok zobrazíte Cistanche Uk proti únave

5. Závery


Na záver, táto štúdia ukázala, že OSD je súčasťou okry proti únave a polyfenoly a flavonoidy sú pravdepodobne aktívnymi zložkami OSD kvôli ich antioxidačnej aktivite. Únava je však komplexný jav a súčasná štúdia o mechanizmoch okry proti únave je veľmi predbežná. V budúcnosti je ešte potrebné objasniť ďalšie podrobnosti.



Referencie


1. Chaudhuri, A.; Behan, PO Únava pri neurologických poruchách. Lancet 2004, 363, 978-988. [CrossRef]

2. Belluardo, N.; Westerblad, H.; Mudó, G.; Casabona, A.; Bruton, J.; Caniglia, G.; Pastoris, O.; Grassi, F.; Ibáñez, CF Demontáž neuromuskulárneho spojenia a svalová únava u myší s nedostatkom neurotrofínu-4. Mol. Bunka. Neurosci. 2001, 18, 56–67. [CrossRef] [PubMed]

3. Tharakan, B.; Dhanasekaran, M.; Brown-Borg, HM; Manyam, BV Trichopus zeylanicus bojuje proti únave bez amfetamín-mimetickej aktivity. Phytother. Res. PTR 2006, 20, 165–168. [CrossRef] [PubMed]

4. Huang, L.-Z.; Huang, B.-K.; Áno, Q.; Qin, L.-P. Frakcionácia riadená bioaktivitou pre protiúnavovú vlastnosť acanthopanax senticosus. J. Ethnopharmacol. 2011, 133, 213–219. [CrossRef] [PubMed]

5. Pawlikowska, T.; Chalder, T.; Hirsch, SR; Wallace, P.; Wright, DJ; Wessely, SC Populačná štúdia únavy a psychického stresu. BMJ 1994, 308, 763–766. [CrossRef] [PubMed]

6. Li, G. Únavová situácia 2823 zdravých ľudí na kontrolu a jej korelácia s fyzikálnymi indikátormi; Pekinská univerzita čínskej medicíny: Peking, Čína, 2013.

7. Uehata, T. Karoshi, smrť prepracovaním. Nippon Rinsho Jpn. J. Clin. Med. 2005, 63, 1249-1253.

8. Layzer, RB Svalový metabolizmus pri únave a práci. Bailliere's Clin. Endocrinol. Metab. 1990, 4, 441-459. [CrossRef]

9. Hultman, E.; Bergstrom, M.; Spriet, LL; Söderlund, K. Energetický metabolizmus a únava; Kinetika človeka: Champaign, IL, USA, 1990.

10. Glaister, M. Viacnásobná práca v šprinte: Fyziologické reakcie, mechanizmy únavy a vplyv aeróbnej zdatnosti. Sports Med. 2005, 35, 757-777. [CrossRef] [PubMed]

11. Nozaki, S.; Mizuma, H.; Tanaka, M.; Jin, G.; Tahara, T.; Mizuno, K.; Yamato, M.; Okuyama, K.; Eguchi, A.; Akimoto, K.; a kol. Tiamín tetrahydrofurán disulfid zlepšuje energetický metabolizmus a fyzickú výkonnosť pri zaťažení fyzickou únavou u potkanov. Nutr. Res. 2009, 29, 867–872. [CrossRef] [PubMed]

12. McCully, KK; Authier, B.; Olive, J.; Clark, BJ, 3. Svalová únava: Úloha metabolizmu. Môcť. J. Appl. Physiol. 2002, 27, 70-82. [CrossRef] [PubMed]

13. Carter, GT únava. In Encyklopédia neurologických vied, 2. vydanie; Aminoff, MJ, Daroff, RB, Eds.; Academic Press: Oxford, UK, 2014; s. 276–280.

14. Filler, K.; Lyon, D.; Bennett, J.; McCain, N.; Elswick, R.; Lukkahatai, N.; Saligan, LN Asociácia mitochondriálnej dysfunkcie a únavy: Prehľad literatúry. BBA Clin. 2014, 1, 12–23. [CrossRef] [PubMed]

15. Lin, Y.; Liu, H.-L.; Fang, J.; Yu, C.-H.; Xiong, Y.-K.; Yuan, K. Protiúnavové a vazoprotektívne účinky kvercetín-3-O-gentiobiózy na oxidačný stres a vaskulárnu endoteliálnu dysfunkciu vyvolanú vytrvalostným plávaním u potkanov. Food Chem. Toxicol. 2014, 68, 290–296. [CrossRef] [PubMed]

16. Edwards, RH Ľudská svalová funkcia a únava. Ciba nájdený. Symp. 1981, 82, 1–18. [PubMed]

17. Gupta, A.; Vij, G.; Sharma, S.; Tirkey, N.; Rishi, P.; Chopra, K. Kurkumín, polyfenolický antioxidant, zmierňuje syndróm chronickej únavy v modeli stresu z ponorenia do vody u myší. Imunobiológia 2009, 214, 33–39. [CrossRef] [PubMed]

18. Wu, CY; Chen, R.; Wang, XS; Shen, B.; Yue, W.; Wu, Q. Antioxidačné a protiúnavové aktivity fenolového extraktu z obalu semena Euryale Ferox salisb. A identifikácia troch fenolových zlúčenín pomocou lc-esi-ms/ms. Molekuly 2013, 18, 11003–11021. [CrossRef] [PubMed]

19. Jiang, D.-Q.; Guo, Y.; Xu, D.-H.; Huang, Y.-S.; Yuan, K.; Lv, Z.-Q. Antioxidačné a protiúnavové účinky antokyanov z čistenia morušovej šťavy (MJP) a čistenia morušových výliskov (MMP) z rôznych odrôd plodov moruše v Číne. Food Chem. Toxicol. 2013, 59, 1–7. [CrossRef] [PubMed]

20. Swamy, MSL; Naveen, S.; Singsit, D.; Naika, M.; Khanum, F. Protiúnavové účinky polyfenolov extrahovaných zo šupky granátového jablka. Int. J. Integr. Biol. 2011, 11, 69–72.

21. Messing, J.; Thole, C.; Niehues, M.; Shevtsova, A.; Glocker, E.; Boren, T.; Hensel, A. Antiadhezívne vlastnosti extraktu z nezrelého ovocia Abelmoschus esculentus (Okra) proti priľnavosti Helicobacter pylori. PLoS ONE 2014, 9, e84836. [CrossRef] [PubMed]

22. Tongjaroenbuangam, W.; Ruksee, N.; Chantiratikul, P.; Pakdeenarong, N.; Kongbuntad, W.; Govitrapong, P. Neuroprotektívne účinky kvercetínu, rutínu a okry (Abelmoschus esculentus Linn.) u myší liečených dexametazónom. Neurochem. Int. 2011, 59, 677–685. [CrossRef] [PubMed]

23. Fan, S.; Zhang, Y.; Sun, Q.; Yu, L.; Li, M.; Zheng, B.; Wu, X.; Yang, B.; Li, Y.; Huang, C. Extract of Okra znižuje hladinu glukózy v krvi a sérové ​​lipidy u obéznych myší C57Bl/6 vyvolaných diétou s vysokým obsahom tukov. J. Nutr. Biochem. 2014, 25, 702–709. [CrossRef] [PubMed]

24. Wang, H.; Chen, G.; Ren, D.; Yang, ST Hypolipidemická aktivita Okra je sprostredkovaná inhibíciou lipogenézy a upreguláciou degradácie cholesterolu. Phytother. Res. PTR 2014, 28, 268–273. [CrossRef] [PubMed]

25. Hu, L.; Yu, W.; Li, Y.; Prasad, N.; Tang, Z. Antioxidačná aktivita extraktu a jeho hlavných zložiek zo semien okry na hepatocytoch potkanov poškodených tetrachlórmetánom. BioMed Res. Int. 2014, 2014, 341291. [CrossRef] [PubMed]

26. Yang, Y.; Jin, Z.; Mao, P.; Jin, J.; Huang, J.; Yang, M. Štúdia o protiúnavovom účinku výťažkov z okry. Brada. J. Mod. Appl. Pharm. 2012, 29, 4. [CrossRef]

27. Arapitsas, P. Identifikácia a kvantifikácia polyfenolových zlúčenín zo semien a šupiek okry. Food Chem. 2008, 110, 1041–1045. [CrossRef] [PubMed].

28. Sengkhamparn, N.; Sagis, LMC; de Vries, R.; Schols, HA; Sajjaanantakul, T.; Voragen, AGJ Fyzikálnochemické vlastnosti pektínov z okry (Abelmoschus esculentus (L.) Moench). Food Hydrocoll. 2010, 24, 35–41. [CrossRef]

29. Karakoltsidis, PA; Constantinides, semená SM Okra: Nový zdroj bielkovín. J. Agric. Food Chem. 1975, 23, 1204–1207. [CrossRef] [PubMed]

30. Zhou, Y.; Jia, X.; Shi, J.; Xu, Y.; Jing, L.; Jia, L. Dva nové pentacyklické triterpény z Abelmoschus esculentus. Helv. Chim. Acta 2013, 96, 533–537. [CrossRef]

31. Jia, L.; Zhong, LJ; Li, HF; Jing, LL Chemické zložky vo vodnej frakcii Abelmoschus esculentus. Brada. Tradícia. Herb. Drogy 2011, 42, 2186–2188.

32. Jia, L.; Guo, M.; Li, D.; Jing, L. Chemické zložky z petroléterovej časti Abelmoschus esculentus II. Zhongguo Zhong Yao Zazhi 2011, 36, 891–895. [CrossRef] [PubMed]

33. Jia, L.; Li, HF; Jing, LL Chemické zložky v N-butanolovom extrakte z Abelmoschus esculentus L. Chin. Tradícia. Herb. Drogy 2010, 41, 1771–1773.

34. Jia, L.; Li, D.; Jing, LL; Guo, MM Štúdie o chemických zložkách z petroléterovej časti Abelmoschus esculentus. J. Chin. Med. Mater. 2010, 33, 1262–1265.

35. Kobori, M.; Takahashi, Y.; Akimoto, Y.; Sakurai, M.; Matsunaga, I.; Nishimura, H.; Ippoushi, K.; Oike, H.; Ohnishi-Kameyama, M. Chronický vysoký príjem kvercetínu znižuje oxidačný stres a indukuje expresiu antioxidačných enzýmov v pečeni a viscerálnych tukových tkanivách u myší. J. Funct. Potraviny 2015, 15, 551–560. [CrossRef]

36. Nogueira, L.; Ramirez-Sanchez, I.; Perkins, GA; Murphy, A.; Taub, PR; Ceballos, G.; Villarreal, FJ; Hogan, MC; Malek, MH (-)-epikatechín zvyšuje odolnosť proti únave a oxidačnú kapacitu svalov myši. J. Physiol. 2011, 589, 4615–4631. [CrossRef] [PubMed] .

37. Výbor pre aktualizáciu Príručky starostlivosti a používania laboratórnych zvierat. Príručka starostlivosti a používania laboratórnych zvierat, 8. vydanie; The National Academies Press: Washington, DC, USA, 2011.

38. Liao, H.; Dong, W.; Shi, X.; Liu, H.; Yuan, K. Analýza a porovnanie aktívnych zložiek a antioxidačných aktivít extraktov z Abelmoschus esculentus L. Pharmacogn. Mag. 2012, 8, 156–161. [PubMed]

39. Zhu, Z.; Li, N. Štúdia o metóde stanovenia obsahu polysacharidu okry. Jiangsu Agric. Sci. 2012, 40, 2. [CrossRef]

40. Dubois, M.; Gilles, KA; Hamilton, JK; Rebers, PA; Smith, F. Kolorimetrická metóda na stanovenie cukrov a príbuzných látok. Anal. Chem. 1956, 28, 350–356. [CrossRef]

41. Luo, J.; Li, L.; Kong, L. Preparatívna separácia fenylpropanoidových glyceridov z cibúľ Lilium lancifolium vysokorýchlostnou protiprúdovou chromatografiou a vyhodnotenie ich antioxidačných aktivít. Food Chem. 2012, 131, 1056–1062. [CrossRef]

42. Dang, H.; Chen, Y.; Liu, X.; Wang, Q.; Wang, L.; Jia, W.; Wang, Y. Lôžkové jadro stria terminalis: Anatómia, fyziológia, funkcie lôžkového jadra. Prog. Neuro-Psychopharmacol. Biol. Psychiatria 2009, 33, 1417–1424. [CrossRef] [PubMed]

43. Wang, Q.; Mai, WL; Li, YH; Chen, SG; Wang, LW; Feng, ZQ; Zhu, YF; Liu, XM Vytvorenie počítačového systému na spracovanie obrazu pre pohybovú aktivitu zvierat a sedatívne overenie kaixinovým práškom. Brada. Tradícia. Herb. Drogy 2009, 40, 1773–1779.

44. Qi, B.; Liu, L.; Zhang, H.; Zhou, G.-X.; Wang, S.; Duan, X.-Z.; Bai, X.-Y.; Wang, S.-M.; Zhao, D.-Q. Protiúnavové účinky proteínov izolovaných z Panax quinquefolium. J. Ethnopharmacol. 2014, 153, 430–434. [CrossRef] [PubMed]

45. Tan, W.; Yu, KQ; Liu, YY; Ouyang, MZ; Yan, MH; Luo, R.; Zhao, XS Protiúnavová aktivita polysacharidov extrahovaných z radix Rehmannia preparata. Int. J. Biol. Macromol. 2012, 50, 59–62. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Wang, J.; Zhou, J.; Tang, G. Štúdia o účinku Okra proti únave. Brada. J. Mod. Appl. Pharm. 2003, 20, 2. [CrossRef]

47. Contarteze, RV; Manchado Fde, B.; Gobatto, CA; de Mello, MA Stresové biomarkery u potkanov podrobených plávaniu a behu na bežiacom páse. Comp. Biochem. Physiol. A Mol. integrovať. Physiol. 2008, 151, 415–422. [CrossRef] [PubMed]

48. Xu, SY Experimentálna metodológia farmakológie; Ľudové lekárske vydavateľstvo: Peking, Čína, 2002.

49. Zanwar, AA; Badole, SL; Shende, PS; Hegde, MV; Bodhankar, SL Antioxidačná úloha katechínu v zdraví a chorobe. In Polyfenoly v ľudskom zdraví a chorobách; Watson, RR, Preedy, VR, Eds.; Academic Press: San Diego, CA, USA, 2014; s. 267–271.

50. Jadhav, SB; Konjugát Singhal, RS Laccase–arabská guma na prípravu vo vode rozpustného oligoméru katechínu so zvýšenou antioxidačnou aktivitou. Food Chem. 2014, 150, 9.–16. [CrossRef] [PubMed]

51. Liudong, F.; Feng, Z.; Daoxing, S.; Xiufang, Q.; Xiaolong, F.; Haipeng, L. Hodnotenie antioxidačných vlastností a protiúnavového účinku polyfenolov zeleného čaju. Sci. Res. Eseje 2011, 6, 2624–2629.

52. Ty, L.; Zhao, M.; Regenstein, JM; Ren, J. In vitro antioxidačná aktivita a in vivo protiúnavový účinok loach (misgurnus anguillicaudatus) peptidov pripravených štiepením papaínom. Food Chem. 2011, 124, 188–194. [CrossRef]


Tiež sa vám môže páčiť