Kapitola 1: Imunitné reakcie na SARS-CoV-2 infekciu a očkovanie u dialyzovaných pacientov a príjemcov transplantácie obličky

Pre viac info. kontakttina.xiang@wecistanche.com

Abstraktné: Dialyzovaní pacienti atransplantácia obličkyPríjemcovia (KTX) trpia oslabeným imunitným systémom a vykazujú zníženú odpoveď na očkovanie proti závažnému akútnemu respiračnému syndrómu proti koronavírusu typu 2 (SARS-CoV-2). Vykonali sme retrospektívnu analýzu 1505 sérologických meraní SARS-CoV-2 získaných od 887 dialyzovaných pacientov a príjemcov 86 KTX. Výsledky boli rozdelené podľa podskupín pacientov (dialýza/KTX), ako aj podľa stavu SARS-CoV-2. Posledné kritérium zahŕňalo pacientov, ktorí neboli predtým liečení SARS-CoV{11}} s očkovaním proti COVID{12}} alebo bez neho, a pacientov v rekonvalescencii, ktorí dostávali preočkovanie. Ako referenčná skupina slúžili sérológie 27 očkovaných zdravých jedincov. Bunková imunitná odpoveď vyvolaná vakcínou bola kvantifikovaná testom uvoľňovania interferónu u 32 príjemcov KTX. U dialyzovaných pacientov očkovaných buď BNT162b2, mRNA-1273 alebo AZD1222 sme určili miery sérokonverzie 92,6 percenta, 93,4 percenta a 71,4 percenta. Titre protilátok proti SARS-CoV-2 vyvolané očkovaním boli u dialyzovaných pacientov nižšie v porovnaní so zdravými jedincami a očkovanie pomocou mRNA-1273 vyvolalo vyššie titre ako BNT162b2. Počiatočná miera sérokonverzie bola 39,5 percenta u príjemcov KTX očkovaných BNT162b2. Model lineárnej regresie identifikoval liečbu mykofenolát-mofetilom/kyselinou mykofenolovou ako nezávislý rizikový faktor chýbajúcej sérokonverzie. V rámci kohorty 32 príjemcov KTX bola bunková a humorálna imunitná reaktivita na SARS-CoV-2 detegovateľná len u troch pacientov. Je presvedčivé, že miera sérokonverzie vyvolanej vakcínou bola podobná u dialyzovaných pacientov v porovnaní so zdravými jedincami, ale u príjemcov KTX bola silne narušená. Titre anti-SARS-CoV-2 IgG vyvolané dvojitou aktívnou imunizáciou boli významne nižšie v oboch kohortách v porovnaní so zdravými jedincami a imunitné reakcie na očkovanie rýchlo zmizli.

Kľúčové slová: COVID-19;imunosupresia; ochrana; titer; protilátky; ochorenie obličiek

Kliknutím sem sa dozviete, na čo sa cistanche používa

1. Úvod

Hemodialyzovaní (HD) pacienti a príjemcovia transplantácie obličky (KTX) sú vystavení riziku závažného koronavírusového ochorenia-19 (COVID-19)[1,2]. Prekvapivo, hoci je počet obmedzený, pozorovacie štúdie neodhalili žiadny rozdiel v imunitnej odpovedi na závažný akútny respiračný syndróm koronavírus typu 2 (SARS-CoV-2) po prirodzenej infekcii u chronicky imunosuprimovaných pacientov a imunokompetentných jedincov [3]. Zdá sa, že vek a krehkosť, ako aj počet a závažnosť už existujúcich komorbidít - viac ako farmakologická imunosupresia - sú prognostickými faktormi pre závažnúCOVID-19priebeh u imunokompromitovaných aj imunokompetentných pacientov [4,5]. Napriek tomu naznačujú európske údaje o verejnom zdravíchronické ochorenie obličiek(CKD) a dialýza ako kritické prognostické komorbidity spojené so zvýšenou úmrtnosťou po infekcii SARS-CoV-2 [6]. Okrem toho zhoršená sérokonverzia a dlhovekosť SARS-CoV-2imunitné odpovedepo infekcii ďalej ohrozuje HD a KTX pacientov [4,7,8].

Aktívna imunizácia proti SARS-CoV-2, najmä vakcínami s mediátorovou ribonukleovou kyselinou (mRNA), sa považuje za najúčinnejšiu preventívnu stratégiu na ochranu zraniteľných jedincov pred infekciou a ťažkými priebehmi COVID-19 [9]. Intenzita ani trvanie imunitnej odpovede po očkovaní u špecifických skupín pacientov však neboli úplne charakterizované. V porovnaní s bežnou populáciou sa u HD pacientov predpokladá, že majú znížené titre protilátok proti SARS-CoV-2 a majú oneskorenú imunitnú odpoveď [10-12]. Po druhej injekcii môže byť miera sérokonverzie až 90 percent a bunková imunitná odpoveď sa dá zistiť približne u 80 percent očkovaných jedincov[13-15]. Pribúdajúce dostupné údaje z rôznych štúdií o účinnosti očkovania proti SARS-CoV{11}} u príjemcov transplantácie solídneho orgánu (SOT) odhalili silne narušenú humorálnu a bunkovú imunitnú odpoveď v porovnaní s bežnou populáciou s hlásenou sérokonverziou pod 45 percenta a navyše zhoršenú bunkovú odpoveď [16-19].

Doposiaľ sa stále intenzívne skúma definícia titra protilátok poskytujúcich ochranu a stanovenie hladín protilátok sa rutinne nevykonáva [20]. Systematicky sme analyzovali mieru sérokonverzie a titer protilátok u 681 HD pacientov a 86 príjemcov KTX, aby sme charakterizovali humorálnu odpoveď na infekciu SARS-CoV-2 potvrdenú PCR a očkovanie (BNT162b2(BioNTech/Pfizer, Mainz , Nemecko/New York, NY, USA), mRNA-1273 (Moderna, CA, USA) a AZD1222 (AstraZeneca/University of Oxford, Cambridge/Oxford, Spojené kráľovstvo)) retrospektívnym spôsobom. Ako referenčná skupina slúžili sérológie 27 zdravých jedincov očkovaných mRNA. Okrem toho bola bunková imunitná odpoveď prospektívne kvantifikovaná u 32 príjemcov KTX, aby sa úplne charakterizovala ochrana vyvolaná vakcínou mRNA.

2. Materiály a metódy

2.1. Dizajn štúdie, pacienti a etické vyhlásenie

Aby sme charakterizovali humorálnu odpoveď na infekciu aj očkovanie, retrospektívne sme analyzovali sérológie SARS-CoV{1}} od pacientov na dialýze a pacientov s KTX vykonaných v Univerzitnej nemocnici v Kolíne nad Rýnom v Nemecku, počnúc začiatkom pandémie COVID-19 od apríla 2020 do júna 2021. Táto kohorta obsahovala 206 SARS-CoV-2-neliečených dialyzovaných pacientov, u ktorých sa každé tri mesiace počas jedného roka od apríla 2020 do apríla 2021 vyšetrovali protilátky proti SARS-CoV{10}}. Čo sa týka očkovania, merania protilátok sa získali medzi marcom 2021 a júnom 2021 od 627 pacientov na dialýze bez predchádzajúcej liečby SARS-CoV, z ktorých 475 dostalo BNT162b2(BNT162b2(BioNTech/Pfizer, Mainz, Nemecko/New York, NY, USA), 138 mRNA-1273 (Moderna, CA, USA) a 14 AZD1222 (AstraZeneca/University of Oxford, Cambridge/Oxford, Spojené kráľovstvo). Okrem toho boli k dispozícii sérologické vyšetrenia 54 dialyzovaných pacientov, ktorí sa zotavil zo SARS-CoV-2

bolo získaných, z ktorých 38 dostalo posilňovaciu dávku (všetky BNT162b2). Pokiaľ ide o SARS-CoV-2-naivných príjemcov KTX, séra boli získané od 86 pacientov na sledovanie očkovania BNT162b2. Sérológie 27 zdravých jedincov očkovaných mRNA-1273 slúžili ako kontrolná skupina. Všetky vakcíny boli podávané v klinickej rutine podľa uváženia ošetrujúceho lekára a podľa odporúčaní výrobcov. Všetky merania sa uskutočňovali klinickou rutinou a analyzovali sa retrospektívne po schválení miestnou inštitucionálnou revíznou komisiou (Etická komisia Lekárskej fakulty Univerzity v Kolíne nad Rýnom, Nemecko, EK21-1398). Okrem toho boli v období od júna do septembra 2021 prospektívne skúmané humorálne a bunkové imunitné odpovede u 32 SARS-CoV-2-naivných príjemcov KTX. Túto štúdiu schválila aj Etická komisia Lekárskej fakulty Univerzity v Kolíne nad Rýnom v Nemecku ( EK21-1112)a prebiehala v súlade s Helsinskou deklaráciou.

2.2. Sérologické testy na detekciu anti-SARS-CoV-2 protilátok

Anti-SARS-CoV-2 IgG zacielený na vrcholový (S) proteín bol detegovaný semikvantitatívnou Euroimmun anti-SARS-CoV-2 IgG ELISA pomocou Euroimmun Analvzer I (Eu-roimmun Diagnostik, Lübeck, Nemecko ) a kvantitatívnym testom IDKeanti-SARS-CoV-2 IgG ELISA (Immundiagnostik AG, Bensheim, Nemecko) s použitím DYNEX DSX (Dynex Technologies, Chantilly, VA, USA), pričom oba používajú rekombinantný antigén S1 hrotu proteín alebo chemiluminiscenčný mikročasticový imunotest od Abbott na kvantitatívnu detekciu anti-spike RBD (receptor binding domain)IgG (SARS-CoV-2 IgG II Quant) pomocou automatizovaného systému Alinity i(Abbott, Abbott Park, IL , USA). Výsledky kvantitatívnych testov IgG zameraných na S1 alebo RBD boli vyjadrené v BAU/ml (jednotka väzbovej protilátky) s použitím konverzného faktora vytvoreného z interného štandardu Svetovej zdravotníckej organizácie (WHO) a poskytnutého každým výrobcom. Okrem toho bolo 29 pacientov z hemodialyzovanej skupiny paralelne vyšetrených pomocou týchto dvoch kvantitatívnych testov SARS-CoV-2 IgG, aby sa zistilo, či poskytli porovnateľné titre IgG. Protilátky zacielené na nukleokapsidový (NC) proteín boli detegované pan-imunoglobulínovým imunotestom Elecsys anti-SARS-CoV-2 elektrochemiluminiscenčným imunotestom (ECLIA) s použitím Cobas 8000 (Roche Diagnostics, Mannheim, Nemecko). Všetky testy boli interpretované podľa odporúčaní výrobcu.

2.3. Určenie odpovede T-buniek na SARS-CoV-2

CD4 plus a CD8 plus T-bunkami sprostredkovaná odpoveď na SARS-CoV-2 bola meraná komerčným testom uvoľňovania interferónu z plnej krvi (IFN-）(IGRA）QuantiFERON⑧ SARS-CoV-2) RUO( QIAGEN GmbH, Hilden, Nemecko). T-bunky boli stimulované epitopmi S1 a S2 podjednotiek vrcholového proteínu SARS-CoV-2 (antigén 1 a 2). Koncentrácia IFN-y sa merala chemiluminiscenčným imunotestom (CLIA), ako už bolo opísané [21]. Hladina IFN-y > 0,15 IU/ml bola hodnotená ako reaktívna [22].

2.4.Štatistika

Štatistické analýzy sa uskutočnili pomocou softvéru GraphPad Prism verzie 5 (Graph-Pad Prism Software Inc. San Diego, CA, USA) a SPSS verzie 27.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA). Nenormálne distribúcie titrov protilátok boli vyjadrené ako medián ± interkvartilný rozsah a porovnané pomocou Kruskal-Wallis/Mann-Whitney U testov a Spearmanovej korelácie. Pokiaľ ide o charakteristiky pacientov, kategorické premenné boli zhrnuté podľa absolútnych čísel a frekvencií a číselné premenné podľa mediánu a medzikvartilového rozsahu. Kategorické premenné boli analyzované pomocou chí-kvadrát testu a numerické premenné pomocou Mann-Whitneyho U testu opisným spôsobom. Korelácie - upravené pre použitý test, vek a čas medzi udalosťou a vzorkou krvi - boli vypočítané pomocou lineárneho regresného modelu so Spearmanovou analýzou. p<0.05 was="" considered="" statistically="" significant.="" to="" examine="" the="" comparability="" of="" the="" two="" immunoassays,="" a="" passing-bablok="" regression="" was="" carried="" out="" using="" the="" software="" analyze-it="" v5.50(analyse-it="" software,="" ltd.="" leeds,="">