Čínska medicína Cistanche Chemické zloženie a analýza zložiek v tele Ⅲ

Kapitola 2 Kvalitatívna štúdia o chemickom zložení Cistanche deserticola

Cistanche je suchá šupinatá listová dužinatá stonkaCistanche deserticola YC.Maa Cistanche tubulosa (Schenk) R.Wight. Je to jedna z najznámejších tradičných čínskych liečiv vyživujúcich obličky a jang. Má funkcievyživujúca oblička-jang, dopĺňanie esencií a krvi a zvlhčovanie Má laxatívny účinok a často sa používa na liečbu impotencie, neplodnosti, bolestí pása a kolien, svalovej a kostnej slabosti, suchosti čriev a zápchy atď. Má farmakologické účinky napr. demenciou, antiparkinsonovou chorobou, ochranou pred cerebrálnou ischémiou a zlepšením schopností učenia a pamäte. S cieľom objasniť materiálny základ preúčinnosť Cistanche deserticola, táto kapitola používa HPLC a LC-IT-TOF-MS na komplexnú charakteristikuchemické zložky Cistanche. Na základe systematického súhrnu pravidiel krakovania rôznych typov chemických zložiek sa systematicky analyzujú vlastnosti Cistanche deserticola. Chemické zloženie, aby sa poskytli bohaté údaje zo spoľahlivých zdrojovhĺbkové objasnenieo liečivých vlastnostiachCistanche deserticolain vivo.

AKO DLHO TRVÁ, KÝM CISTANCHE PÔSOBÍ?

Časť 1 Experimentálne materiály

1.Nástroj

Kvapalný hmotnostný spektrometer Shimadzu HPLC-IT-TOF-MS (vybavený 2 čerpadlami LC-20ADXR, automatickým vzorkovačom SIL-20AC, CTO-20stĺpcovou pecou AC, UV detektorom SPD-M20A, Dekontaminačný plynový stroj DGU-20A3R, CBM-20A kontrolér, zdroj iónov ESI, Shimadzu Company, Japonsko), systém čistenia ultračistej vody Milli-Q (Milipore Company, USA): elektronické analytické váhy Mettler ME204 ( Mettler Toledo Company, Švajčiarsko).

2. Činidlá

Metanol, acetonitril a kyselina mravčia v čistote pre chromatografiu a hmotnostnú spektrometriu boli zakúpené od Thermo-Fisher Company (Pittsburgh, PA, USA). Voda bola ultračistá voda Milli-Q vyrobená v laboratóriu (Millipore, Bedford, MA, USA). Všetky ostatné činidlá sú analytickej kvality.

Salidrozid, 6-deoxykatalpol, 8-kyselina epilogánová, echinakozid, akteozid, izozid Verbaskozid (izoakteozid) a pinorezinol- -D-glukopyranozid (pinorezinol- -D-glukopyranozid) obe poskytla výskumná skupina profesora Tu Pengfeia v Key Laboratory of Natural and Biomimetic Drugs na Pekingskej univerzite. Sarkozid F (cistanozidF) bol zakúpený od Chengdu Mansite Biotechnology Co., Ltd., cistanozid A (cistanozid A), 2'-acetylakteozid (2'-acetylakteozid), 2'-acetylpoliumozid (2'-acetylpoliumozid), cistanozid polyglukozid (poliumozid ), cistanozid E (cistanozid E), izocistanozid E (izocistanozid E), cistanozid C (cistanozid C), izocistanozid C (izocistanozid C) a cistanozid D (cistanozid D) boli všetky zakúpené od Shanghai Shidande Biotechnology Co., Ltd., tubulozid A (tubulozid A) tubulozid B (tubulozid B) boli zakúpené od Chengdu Weikeqi Biotechnology Co., Ltd.

Časť 2 Experimentálny obsah

1. Príprava vzorky

1.1 Príprava referenčnej látky

Presne odvážte vhodné množstvá rôznych referenčných látok vo vyššie uvedenej "Sekcii 1 Experimentálne materiály" a pripravte 10 mM zásobné roztoky s DMSO. Napipetujte presne 2 ml každého zásobného roztoku a zrieďte ho 25 % acetonitrilom, aby ste vytvorili 2 μM zmiešaný kontrolný roztok. 1.2 Príprava skúšobného roztoku

Vodný extrakt z Cistanche deserticola vyrobilo naše laboratórium a vzorka je uložená vo Výskumnom centre modernizácie tradičnej čínskej medicíny, Škole tradičnej čínskej medicíny, Pekinská univerzita čínskej medicíny. Vezmite 20 mg prášku Cistanche deserticola, pridajte 40 ml vody na rozpustenie, vortexujte a premiešajte, centrifugujte pri 10 000 otáčkach za minútu počas 10 minút a odoberte supernatant. To znamená, že sa získa testovací roztok.

3. Podmienky hmotnostnej spektrometrie

Elektrosprejový iónový zdroj (ESI), režim skenovania je skenovať pozitívne a negatívne ióny súčasne a automaticky spustiť viacúrovňovú hmotnostnú spektrometriu. Rozsah hmotnostného skenovania MS'~MS' pre kladné ióny je m/z50~800 a pre záporné ióny je m/z100~1000. Napätie rozprašovacej komory je 4,5 kV a -3,5 kV v tomto poradí: prietok rozprašovacieho plynu (Nz) je 1,5 lmin; tlak sušiaceho plynu je 110 MPa; detekčné napätie je 1,55 kV; teploty zakrivenej trubice desolventizátora (CDL) a vykurovacieho modulu sú obe 200 stupňov. Tlak v kolíznej komore je 1,5 e-Pa; tlak iónovej pasce je 2,8e-Pa; počet opakovaní kladnej a zápornej prvej fázy je 1 a čas akumulácie iónov je 30 ms; počet opakovaní kladnej a zápornej druhej fázy je 2 a doba akumulácie iónov je 20 ms. ; Energia disociácie vyvolanej kolíziou (CID) je 50 %.

Časť 3 Výsledky a diskusia

Výber stĺpcov

Aby sme dosiahli lepšiu chromatografickú separáciu, rozsiahlo sme skrínovali chromatografické kolóny od rôznych výrobcov a špecifikácií, ako je chromatografická kolóna ACEUltraCore 2.5 SuperC8 (3.0x150 mm, 2,5 um, Advance Chromatography Technologies Ltd., Aberdeen, Škótsko), Shiseido Capcell Core Ci8 (2,1 mm x 150 mm, 2,7 μm), kolóna Waters Acquity UPLC HSS T3 (2,1 x 100 mm, 1,8 μm, Milford, MA, USA) a kolóna Capcell Core ADME (2,1 x 150 mm, 2,7 μm, Shiseido Corporation Japonsko). Systematickým porovnávaním sa zistilo, že pri použití chromatografickej kolóny Capcell Core ADME (2,1 x 150 mm, 2,7 μm, Shiseido Co., Ltd., Japonsko) možno každý chromatografický signál lepšie oddeliť (obrázok 3-1).

2. Výber podmienok v kvapalnej fáze

Keďže hlavné chemické zložkyCistanche deserticolasú fenyletanolové glykozidy, lignany, iridoidy a iné zlúčeniny, vo všeobecnosti lepšie reaguje v podmienkach negatívnych iónov. Na identifikáciu nízkoúrovňových chemických zložiek vo vodnom extrakte z Cistanche deserticola sa špekuluje, že môže byť potrebné pridať kyseliny do mobilnej fázy na zvýšenie výkonu. V tomto experimente sa preto ako systémy mobilnej fázy na skúmanie použili voda-metanol, voda-acetonitril, 0,1 % kyselina mravčia voda-metanol a 0,1 % kyselina mravčia voda-acetonitril. Zistilo sa, že 0,1% kyselina mravčia voda-acetonitril mala najlepší separačný účinok s dobrým tvarom píku a veľkou kapacitou píku, takže 0,1% kyselina mravčia voda a acetonitril boli vybrané ako mobilná fáza. 3. Kvalitatívna analýza chemických zložiek. Použite 19 existujúcich referenčných látok na preskúmanie pravidiel fragmentácie hmotnostnej spektrometrie rôznych typov zlúčenín v Cistanche deserticola. Zmiešané referenčné látky sú PDA chromatogramy pri 340 nm na ADME kolóne a BPC grafy v pozitívnom a negatívnom iónovom móde. Pozrite si obrázok 3-1. Preskúmali sme relevantnú literatúru prostredníctvom PubMed, RSC, CNKl, Springer, ScienceDirect, VIP a Wanfang atď., A vytvorili sme vlastnú databázu chemických zložiek Cistanche deserticola. Na základe porovnania pravidiel fragmentácie hmotnostnej spektrometrie a retenčných časov známych zlúčenín sme predbežne identifikovali 45 zlúčenín v Cistanche deserticola. zlúčeniny vrátane 31 fenyletanolových glykozidov, 9 iridoidov, 3 benzylglykozidov a 2 lignanov, ako je uvedené v tabuľke 3-1.

Porovnaním doby utajenia, spektra MS a spektra MS referenčnej látky, zlúčeniny 11, 12, 13, 17, 21, 22, 24, 25, 26, 28, 29, 32, 33, 36, 37, 38 boli postupne presne identifikované ako genipín, cistancheín F, cistancheozid E, echinaceazid, chrysantozid, cistancheín A, tuberozín A, larchrezinol 4-0- -D glukozid, mulleínové glykozidy, monocannabinoid acetylglykozid, pino-bazosid glykozid oside C, izocistankozid C, tuberozín B a cistanchový glykozid D.

Tento experiment využíva technológiu HPLC-IT-TOF-MS na rýchlu a presnú systematickú analýzu zložitých chemických zložiek vo vodnom extrakte z Cistanche deserticola, čo poskytuje základ pre komplexnú analýzu kvality Cistanche deserticola a výskum farmakologických látok in vivo.

Obrázok 3-1 Chromatogram zmiešanej referenčnej látky Hore: BPC graf v režime kladných iónov: Dolný: BPC graf v režime záporných iónov

Obrázok 3-1 Chromatogram zmiešanej referenčnej látky Hore: BPC graf v režime kladných iónov: Dolný: BPC graf v režime záporných iónov