Polysacharidy Cistanche Deserticola majú neuroprotektívny účinok

pre viac informácií:{0}}

Yue Liu a kol

Abstrakt:

Ischemická cievna mozgová príhoda je ochorenie s vysokou morbiditou a mortalitou.Cistanchedeserticolapolysacharidy(CDP) má široké spektrum priaznivých účinkov, vrátane hepatoprotekcie a imunitnej homeostázy. Pokiaľ vieme, ochranný účinok CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)na neurónoch poškodených kyslíkovo-glukózovou depriváciou/reperfúziou (OGD/RP) sa neskúmalo. V tejto štúdii OGD/RP poškodil bunkový model PC12. Stručne povedané, CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)({{0}},05, 0,5 a 5 ug/ml) bol podaný pred reperfúziou. Ochranný účinok CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)sa potom vyhodnotil na základe bunkovej životaschopnosti, úniku laktátdehydrogenázy (LDH), [Ca2 plus] I, potenciálu mitochondriálnej membrány (MMP) a bunkovej apoptózy, andredoxný stav po reperfúzii sa vyhodnotil testovaním reaktívnych foriem kyslíka (ROS), katalázy ( CAT), glutatión peroxidáza (GSH-Px) a celková antioxidačná kapacita. Na základe skutočnosti, že proteín DJ-1 spojený s Parkinsonovou chorobou sa podieľa na endogénnej antioxidácii a vykonávaneuroprotektívneúčinkov po ischemickej mozgovej príhode sme skúmali interakciu medzi CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)a DJ{{0}}. Expresia DJ-1 sa detegovala pomocou ELISA a analýzy Western blot a translokácia DJ-1 sa hodnotila pomocou imunofluorescencie. Výsledky ukázali, že CDP (0,05, 0,5 a 5 ug/ml) zoslabil bunkovú smrť PC12, zachoval homeostázu MMP a vápnika; inhiboval oxidačný stres a znížil apoptózu buniek. Okrem toho CDP (5 ug/ml) výrazne stimuloval sekréciu a expresiu DJ{10}}. Celkovo výsledky naznačujú, že CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)vyvíja aneuroprotektívneúčinok proti poraneniam vyvolaným OGD/RP inhibíciou oxidačného stresu a reguláciou DJ-1 dráhy

Kľúčové slová:Cistanche deserticola, Polysacharidy, Neuroprotektívum, Nedostatok glukózy/reperfúzia kyslíka, Oxidačný stresDJ-1

Kliknite na produkty Cistanche UK

1. Úvod

Ischemická cievna mozgová príhoda je celosvetovo druhou najčastejšou príčinou mortality a primárnou príčinou dlhodobej invalidity [1]. Očakáva sa, že úmrtnosť v dôsledku mozgovej príhody vzrastie v roku 2030 na 7,8 milióna [2]. V Číne každý rok zomiera na mŕtvicu 58 až 142 zo 100000 ľudí. Preto sa musia vyvinúť účinné stratégie, ktoré zvrátia ischemicko-reperfúzne poškodenie. Rozsiahle dôkazy podporujú, že oxidačný stres je hlavným faktorom, ktorý podporuje rozvoj a progresiu mozgového infarktu počas reperfúzie [3,4]. Preto objavovanie efektívneneuroprotektívnelátky schopné redukovať ROS a potláčať oxidačný stres vzbudil značný záujem vo výskume. Proteín spojený s Parkinsonovou chorobou DJ-1 sprostredkováva neuroprotekciu stimuláciou antiapoptickej a antioxidačnej génovej expresie [4,5]. DJ-1 môže byť translokovaný do mitochondrií oxidačným stresom a mitogénnou stimuláciou a môže byť vylučovaný do extracelulárnej matrice za patologických podmienok, ako je rakovina prsníka, melanóm a poškodenie OGD/RP [6]. Okrem toho je DJ-1 užitočný pri terapeutickom zacielení na ischemickú neurodegeneráciu kvôli jeho kritickej úlohe v antioxidácii [4,7]. Za posledných 10 rokov niekoľko skupín potvrdilo, že DJ-1 ánoneuroprotektívneúčinky na modely in vivofokálnej cerebrálnej ischémie a modely OGD/RP in vitro [6–9]. Niektoré lieky, vrátane cyklosporínu A a fenylbutyrátu sodného, ​​rušia smrť neurónových buniek prostredníctvom DJ-1 upregulácie inischemická mŕtvica [9,10 ].

Cistanchedeserticola, integrálna sušená rastlinaCistanchedeserticolaYCMa a Cistanche tubulosa Wight sa vyrába hlavne v púštnych oblastiach severnej a severozápadnej Číny [11]. C. deserticola je jedlá a bola ocenená ako „Ženšen púští“. Pri predpisovaní akupunktúry sa zápal používa na liečbu chronického ochorenia obličiek, sexuálnej impotencie, ženskej neplodnosti, leukorey, metrorágie a senilnej zápchy [12].C. deserticola polysacharidy, hlavná aktívna zložka izolovaná zCistanche deserticola. CDP, moduluje imunitnú funkciu a rovnováhu lipidov a poskytuje ochranu proti starnutiu, oxidácii a poškodeniu pečene. Okrem toho CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)zabraňuje ischemicko-reperfúznemu poškodeniu srdca a pečene [13,14]. Nedávne štúdie uvádzajú, že CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)sú netoxické[12,15,16] a iné fytochemikálie extrahované z C. Deserticola, vrátane echinakozidu, izoakteozidu, akteozidu a salidrozidu, vykazujúneuroprotektívneúčinky [11,12]. Potenciálne použitie CDP na zlepšenie poškodenia ischemickou mozgovou príhodou však nebolo doteraz hlásené.

V tejto štúdii predpokladáme, že CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)inhibuje oxidačný stres pre neuroprotekciu. Potenciálne ochranné účinky CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)poškodenie inischemickou mŕtvicou sa skúmalo s použitím OGD/RP poškodených buniek PC12. Potom sa preskúmali základné interakcie spojené s DJ-1.

2. Metódy

2.1. Bunková kultúra a OGD/RP model

Bunky PC12 sa kultivovali v médiu RPMI 1640 obsahujúcom 10 percent FBS pri 37 stupňoch v normoxickom inkubátore obsahujúcom 5 percent C02. Médium sa vymieňalo každých 48 hodín. Bol pripravený OGD/RP model. Bunky PC12 sa premyli a vystavili Earlovmu vyváženému soľnému roztoku. Potom sa bunky preniesli do anaeróbnej komory obsahujúcej 5 percent C02 a 95 percent N2 pri 37 stupňoch na 4 hodiny a potom sa nechali podstúpiť reoxygenáciu. Počas tohto kroku sa k bunkám pridal rovnaký objem kultivačného média. Po reoxygenácii sa bunky umiestnili do normoxického inkubátora na 24 hodín.

2.2. Podávanie liekov

CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)bol zakúpený od Yuanye Biological Technology Co., Shanghai, Čína (C23J7Y18405, > 98 percent čistoty). Ako pozitívna kontrolná zlúčenina bol použitý nimodipín, liek prvej línie na prevenciu ischemickej cievnej mozgovej príhody [17–19]. Injekcia nimodipínu bola od Bayer Company. Bunky boli náhodne rozdelené do šiestich skupín, menovite kontrola, nosič (OGD/RP), Nimo (5 ug/ml), CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)(0,05 ug/ml), CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)(0,5 ug/ml) a CDP (5 ug/ml). nimodipín a CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)boli pridané pred reperfúziou. Kontrolná skupina bola kultivovaná v normálnom médiu a inkubovaná za normoxických podmienok.

2.3. Životaschopnosť buniek: MTT a NRU testy

Bunky PC12 (6 x 103 na jamku) sa vysiali do 96-jamkovej kultivačnej platne. Bunky sa ošetrili v súlade s požiadavkami každej skupiny. K bunkám sa pridal MTT (Solarbio, Čína) v koncentrácii 5 mg/ml a inkubovali sa 4 hodiny pri 37 stupňoch. Formazan je produkt redukcie sukcinátdehydrogenázy v živých bunkách [20]. Na rozpustenie vytvoreného modrého formazanu sa pridal DMSO. Absorbancia pri vlnovej dĺžke 490 nm bola detegovaná pomocou Microplate Reader (Thermo, USA) po trepaní buniek počas 10 minút pri 25 stupňoch. Výsledky bunkovej životaschopnosti sa prejavili ako percento kontrolnej skupiny [21].

Test vychytávania neutrálnej červene (NRU) sa uskutočnil podľa predtým publikovaného protokolu [22]. Keď boli reperfúzne periódy ukončené, k bunkám sa pridala neutrálna červená (Solarbio, Čína) v koncentrácii 5 0 ug/ml. Zmes sa inkubovala 3 hodiny. Potom sa bunky rýchlo premyli roztokom obsahujúcim 0,5 percenta formaldehydu a 1 percenta chloridu vápenatého. Bunky sa následne pridali do zmesi obsahujúcej 1 % kyseliny etylovej a 50 % bezvodého etanolu. Doštičky boli odčítané pri absorbancii 540 nm po pretrepávaní buniek počas 20 minút pri 37 stupňoch. Výsledky bunkovej životaschopnosti sa prejavili ako percento kontrolnej skupiny.

Polysacharidy Cistanche deserticolamaťNeuroprotektívny účinok

2.4. Hodnotenie cytotoxicity

LDH je cytoplazmatický enzým katalyzujúci oxidáciu laktáttopyruvátu. LDH sa rýchlo uvoľňuje do extracelulárnej tekutiny, keď je poškodená bunková membrána. Preto sa detekcia LDH zvyčajne vykonáva na hodnotenie cytotoxicity. [23]. Experimentálny postup sa riadil inštrukciami komerčnej súpravy dodanej súpravou na test LDH (Jiancheng, Čína). Absorbancia každej vzorky sa detegovala pri 440 nm pomocou čítačky mikrodoštičiek. Percento bunkovej smrti sa vypočítalo pomocou nasledujúceho vzorca: Životaschopnosť (percento)=(OD ošetrenie - ODT ošetrenie slepý pokus)/(OD Max LDH aktivita - OD Max LDH slepý pokus) × 100 percent.

2.5. Detekcia intracelulárnej koncentrácie Ca2 plus

Intracelulárna koncentrácia Ca2 plus bola meraná pomocou Fluo{1}}/AM [15]. Bunky PC12 sa trikrát premyli PBS a potom sa inkubovali s 2 uM Fluo{5}}/AM (Beyotime, Čína) počas 30 minút pri 37 stupňoch v tme. Bunky sa potom trikrát premyli PBS, aby sa odstránilo extracelulárne farbivo. Intenzita fluorescencie Fluo{8}}/AM bola stanovená na laserovom skenovacom konfokálnom mikroskope (Olympus, Japonsko). Na výpočet hodnôt odtieňov šedej sa použil softvérový balík Olympus FV10-ASW 4.1 Viewer a ImageJ

2.6. Meranie MMP

JC{0}} (5,5′,6,6′-tetrachlór-1,1′,3,3′-tetraetyl-imidakarbocyanín; Beyotime, Čína) je pohodlná sonda citlivá na napätie, ktorá sa všeobecne používa na farbenie buniek a hodnotenie MMP [24]. Bunky PC12 sa dvakrát premyli studeným PBS a potom sa inkubovali so zmesou obsahujúcou 50 percent média a 50 percent pracovnej tekutiny počas 15 minút pri 37 stupňoch v tme. Potom sa zmes vyhodila a nahradila čerstvým médiom. Červené a zelené fluorescenčné obrázky boli zachytené laserovou skenovacou konfokálnou mikroskopiou. Na meranie MMP sa použil relatívny podiel červených a zelených fluorescenčných signálov [25]. Na výpočet hodnôt odtieňov šedej sa použili softvérový balíkOlympus FV10-ASW 4.1 Viewer a ImageJ.

2.7. Test detekcie apoptózy, Hoechest33342, a analýza prietokovou cytometriou

Hoechst33342, farbivo viažuce DNA, sa použilo na vyšetrenie bunkovej apoptózy [26]. Po reperfúzii sa bunky PC12 trikrát premyli PBS a inkubovali sa s Hoechst33342 (Beyotime, Čína) v koncentrácii 5 ug/ml počas 15 minút pri 37 stupňoch v tme. Potom sa bunky pozorovali pod laserovým skenovacím konfokálnym mikroskopom. Theapoptotické bunky vykazovali intenzívnu modrú fluorescenciu a kondenzáciu jadra. Pre každý experiment farbenia boli zachytené a kvantifikované tri náhodné polia. Na výpočet hodnôt odtieňov šedej sa použili prehliadač Olympus FV10-ASW 4.1 a ImageJ. Percentá apoptotických buniek sa vypočítali pomocou nasledujúceho vzorca: apoptotické množstvo/celkové množstvo × 100 percent [27].

2.8. Meranie tvorby ROS

Fluorescenčná sonda 2',7'-dichlórfluoresceín-diacetát (DCFH-DA; Jiancheng, Čína) môže preniknúť cez bunkové membrány a môže byť hydrolyzovaná na nefluorescenčný DCFH. DCFH sa oxiduje intracelulárnym ROS na fluorescenčný DCF [29]. Po reperfúzii sa bunky dvakrát premyli PBS a potom sa inkubovali s DCFH-DA pri konečnej koncentrácii 10 uM počas 45 minút pri 37 stupňoch v tme. Fluorescencia sa pozorovala afluorescenčným spektrofotometrom s vlnovou dĺžkou excitácie 485 nm a vlnovou dĺžkou emisie 535 nm.

Polysacharidy Cistanche deserticolamaťNeuroprotektívny účinok

2.9. Stanovenie indikátorov oxidačného stresu: hladiny CAT, GSH-Px a T-AOC

Bunky boli zoškrabané a resuspendované v PBS. Získané bunkové suspenzie boli sonikované 45-krát na ľade a centrifugované pri 1000 ot./min. počas 10 minút pri 4 stupňoch. Supernatanty boli zadržané a použité na detekciu [24]. Celkový obsah proteínu v bunkovom supernatante sa meral pomocou reagenčnej súpravy BCA proteínového testu (KeyGEN, Čína). Aktivity hladín CAT, GSH-Px a T-AOC boli merané podľa pokynov výrobcu (Jiancheng, Čína). Absorbancia každej vzorky sa detegovala pomocou čítačky mikrodoštičiek.

2.10. Meranie extracelulárnej koncentrácie DJ-1

Bunky PC12 (6 × 103 na jamku) sa naočkovali na 96-jamkové kultivačné platne. Po reperfúzii sa bunkový supernatant odobral a analyzoval pomocou súpravy DJ{4}}/PARK-7 ELISA Kit (Raybio, USA ) podľa pokynov výrobcu [9]. Absorbancia každej vzorky bola detegovaná pomocou Microplate Reader pri dvojitej vlnovej dĺžke 450 nm alebo 540 nm.

2.11. Western blot analýza

Bunkové proteíny sa extrahovali ľadovo studeným lyzačným pufrom podľa pokynov výrobcu (KeyGEN, Čína). Koncentrácia proteínu sa stanovila pomocou reagenčnej súpravy na stanovenie proteínov BCA. Rovnaké množstvá proteínových lyzátov (20 ug) z každej skupiny sa rozdelili v 12 % dodecylsulfát-polyakrylamidovej gélovej elektroforéze sodnej a následne sa preniesli na nitrocelulózovú membránu. Membrána sa inkubovala s PBS obsahujúcim 5 percent odstredeného mlieka počas 2 hodín pri teplote miestnosti a potom sa sondovala s anti-PARK7/DJ-1 protilátkami (ab76008, Abcam; riedenie 1:1000) cez noc pri 4 stupňoch. Potom sa membrána trikrát premyla PBST a inkubovala sa so sekundárnou protilátkou kozej anti-králičej IgG (SA00001-2, Proteintech Group; riedenie 1:5000) pri teplote miestnosti počas 2 hodín. Protilátka anti- -tubulín (10759-1-AP, Proteintech Group; riedenie 1:1000) bola považovaná za kontrolu. Proteínové pásy boli vizualizované reakčnými činidlami zosilnenej chemiluminiscencie (ECL). Hustoty pásov sa merali pomocou softvéru QuantityOne Analysis v.4.6.9.

2.12. Imunocytochemická analýza

Bunky PC12 boli po reperfúznom ošetrení fixované v 4% paraformaldehyde počas 15 minút pri izbovej teplote [9]. Po odstránení nadmerného množstva paraformaldehydu sa bunky inkubovali v PBS obsahujúcom 0,3 % Triton X-100 počas 10 minút pri teplote miestnosti. Potom sa bunky trikrát premyli PBS a potom sa inkubovali s 5% normálnym kozím sérom počas 1 hodiny. Bunky sa potom inkubovali s králičím myšacím monoklonálnym anti-ATP syntázovým reťazcom (MABS1304, EMD Millipore, riedenie 1:200) na farbenie mitochondrií a následne sa inkubovali s anti-PARK7/DJ-1 protilátkou (riedenie 1: 100) na testovanie proteínového DJ-1. Bunky sa premyli a inkubovali s kozím anti-králičím IgG-Alexa 488 (zelený; A11034, Invitrogen; riedenie 1:1000) a kozím anti-myším IgG-Alexa 594 (červený; A11032; Invitrogen; riedenie 1:1000) počas 90 min. Nakoniec boli bunky trikrát premyté PBS a pripevnené na sklenené podložné sklíčka s montážnym médiom obsahujúcim DAPI. Imunofluorescenčné obrazy boli vizualizované pomocou laserového skenovacieho konfokálneho mikroskopu.

Polysacharidy Cistanche deserticolamaťNeuroprotektívny účinok

2.13. Dátová/štatistická analýza

Všetky hodnoty boli uvedené ako priemer ± SD. Významnosť bola stanovená jednosmernou analýzou rozptylu (ANOVA), po ktorej nasledoval Dunnettov multi-porovnávací test. p < 05="" sa="" považovalo="" za="" štatistickú="" významnosť.="" experimentálne="" údaje="" sa="" analyzovali="" pomocou="" štatistického="" softvéru="" spss="">

3. Výsledky

3.1. CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)inhibovalo poškodenie buniek indukované OGD/RP

Bunky PC12 vystavené OGD/RP vykazovali významné zníženie počtu. Tvar bunky sa zmenil a bunková membrána sa zlomila. V MTT teste životaschopnosť buniek v CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)skupiny ({{0}},05, 0,5 a 5 ug/ml) boli 58,91 percenta ± 5,40 percenta, 61,13 percenta ± 3,81 percenta a 68,57 percenta ± 3,24 percenta v uvedenom poradí, p < 0,05="" (obr.="" 1a)="" a="" to="" s="" vozidlom="" malo="" 51,68="" percenta="" ±="" 3,89="" percenta.="" tieto="" hodnoty="" naznačovali,="" že="">(Cistanchedeserticolapolysacharidy)chránili bunky pred poškodením OGD/RP a znižovali bunkovú smrť. Okrem toho životaschopnosť buniek v skupine Nimo bola 77,02 percent ± 5,22 percent, čo je takmer rovnaké ako v 5 ug/ml CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)liečenej skupine.

V teste NRU, životaschopnosť buniek v CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)skupiny ({{0}},05, 0,5 a 5 ug/ml) boli 52,03 percenta ± 4,72 percenta, 58,49 percenta ± 2,50 percenta a 69,17 percenta ± 3,91 percenta, v tomto poradí, (obr. 1B) a to s vozidlom mal 47,14 percent ± 2,88 percent . Hodnoty indikovali ochranný účinok CDP závislý od koncentrácie.

Na rozdiel od vehikula (44,73 percenta ± 3,30 percenta) sa uvoľňovanie LDH v CDP výrazne znížilo(Cistanchedeserticolapolysacharidy)skupiny. V CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)skupiny ({{0}},05, 0,5 a 5 ug/ml), miery úniku LDH boli 32,41 percent ± 3,70 percent, 27,13 ± 2,79 percent a 23,13 percent ± 4,59 percent v uvedenom poradí, p < 0,01="" (obr.="" 1c).="" okrem="" toho="" miera="" úniku="" ldh="" v="" skupine="" nimo="" bola="" 21,99="" percenta="" ±="" 4,02="" percenta,="" čo="" bolo="" takmer="" rovnaké="" ako="" v="" skupine="" liečenej="" 5="" ug/ml="">

3.2. CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)zoslabený OGD/RP-indukovaný nárast [Ca2 plus]i

Intracelulárne hladiny Ca2 plus v bunkách PC12 boli zvýšené na 4146,60 ± 195,97 po poškodení OGD/RP na rozdiel od kontrolnej skupiny (373,62 ± 75,69). CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)skupiny ({{0}},05, 0,5 a 5 ug/ml) mohli v závislosti od dávky znížiť intracelulárnu hladinu Ca2 plus na 2921,25 ± 222,19, 2015,85 ± 230,53 a 1768,43 ± 426,12 A, resp. ). Okrem toho hladina Ca2 plus v skupine liečenej 5 ug/ml CDP klesla na úroveň porovnateľnú s hladinou v skupine Nimo (1591,19 ± 213,21).

3.3. CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)atenuovaný OGD/RP-indukovaný rozptyl MMP

V porovnaní s kontrolnou skupinou (1,67 ± 0,89) skupina s vehikulom (0,48 ± 0,10) vykazovala väčšiu fluorescenciu zelenej FL ako červenej FL fluorescencia (obr. 2B a D). Pomery medzi červenou a zelenou fluorescenciou FL sa znížili na 1,11 ± 0,26 a 1,18 ± 0,16 v 0,5 a 5 ug/ml CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)liečených skupinách, p < 0,01.="" zelená="" fluorescencia="" fl="" bola="" výrazne="">

3.4. CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)zabránili apoptóze buniek indukovanej OGD/RP

Bunky vykazujúce kondenzované chromatíny alebo fragmentované jadrá boli hodnotené ako apoptotické bunky [30]. Výsledky testu Hoechst33342 odhalili výskyt kondenzovaných jadier po OGD/RP (obr. 3A a C). Vysoká intenzita fluorescencie FL bola pozorovaná v jadrách v skupine s vehikulom. Intenzita fluorescencie FL jadier bola oslabená v 5 ug/ml CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)liečenej skupine. Analyzovali sme apoptickú rýchlosť v bunkách PC12 pomocou inej cytometrie s použitím dvojitého farbenia FITC-Annexin V/PI (obr. 3B a D). Kontrolná skupina mala mieru apoptózy buniek 4,16 percent ± 0,24 percent, zatiaľ čo skupina s vehikulom mala 22,98 percent ± 0,66 percent. V skupine liečenej 5 ug/ml CDP bola miera apoptózy buniek 7.86 percent ± 1,16 percenta.

3.5. CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)zoslabil OGD/RP-indukovanú intracelulárnu akumuláciu ROS a zachoval redoxný stav

Účinky CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)na oxidatívny stres boli preukázané na základe tvorby ROS, GSH-Px, CAT aktivít a hladín T-AOC. Hladiny ROS v bunkách PC12 poškodených OGD/RP sa zvýšili a stali sa významne vyššími ako v kontrolnej skupine (p < 0,01).="" medzitým="" sa="" hladiny="" ros="" v="">(Cistanchedeserticolapolysacharidy)skupiny ({{0}},05, 0,5 a 5 ug/ml) sa znížili spôsobom závislým od dávky (p < 0,01;="" obr.="" 4a).="" ďalej="" cdp="" tiež="" významne="" zvýšilo="" hladiny="" t-aoc="" (p="">< 0,05;="" obr.="" 4b),="" cat="" (p="">< 0,05;="" obr.="" 4c)="" a="" gsh-px="" (p="">< 0,05;="" obr.="" 4d)="" v="" porovnaní="" s="" vehikulom="" skupina.="" aktivity="" endogénnych="" antioxidantov="" v="">(Cistanchedeserticolapolysacharidy)skupiny sa zvýšili.

3.6. CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)stimuloval sekréciu dídžeja-1 a zlepšil výraz dídžeja-1

Boli zistené zmeny koncentrácie DJ-1 v bunkovom supernatante a odhalili možný vzťah medzi DJ-1 a CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy). Uvoľňovanie DJ{0}} bolo pozorované z buniek PC12 poškodených OGD/RP (obr. 5). DJ-1 bol značne zvýšený v 5 ug/ml CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)-liečená skupina (38,66 ± 8,44 pg/ml) a došlo k signifikantnému zvýšeniu ako v skupine s vehikulom (18,33 ± 3,80 pg/ml, p < 0,01) a kontrolnej skupine (9,67 ± 3,96 pg/ml, p < 0,01) .

Skúmať účinky CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)na intracelulárnej expresii DJ-1 sme merali hladiny proteínu DJ{1}} pomocou Western blotting. Hladiny expresie proteínu DJ-1 sa významne zvýšili 24 hodín po reperfúzii. Na rozdiel od toho, 5 ug/ml CDP po liečbe významne zvýšilo nadmernú expresiu DJ-1 v porovnaní so skupinou s vehikulom (p < 0,01,="" obr.="">

3.7. CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)vylepšená DJ{0}} translokácia do mitochondrií

Bunky PC12 boli zafarbené protilátkami anti-PARK7/DJ-1 a anti-ATP syntázový reťazec (obr. 7 a 8). Anti-ATP syntáza - reťazec protilátky sa spája s mitochondriálnym komplexom I a väzbový antigén boli lokalizované vo vnútornej membráne mitochondrií. Výsledky odhalili, že DJ{10}} sa translokoval do mitochondriálnej vnútornej membrány po urážke OGD/RP (obr. 8). Medzitým výsledky dvojitého farbenia DJ{12}} a mitochondrií odhalili, že CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)uľahčená DJ{0}} mitochondriálna translokácia a spoločná lokalizácia (obr. 8). Tieto výsledky naznačujú priamu interakciu medzi DJ-1 aneuroprotektívneúčinok CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)(obr. 9).

4. Diskusia

V tejto štúdii sme z prvej ruky informovali o CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)účinne znižuje poškodenie buniek PC12 indukované OGD/RP prostredníctvom zvýšenej regulácie DJ-1 proteínu. CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)zlepšila životaschopnosť buniek, znížila poškodenie bunkovej membrány, zachovala intracelulárnu Ca2 plus homeostázu, zabránila strate MMP, znížila apoptózu buniek, potlačila oxidačný stres, podporila expresiu DJ-1 a zlepšila translokáciu DJ-1 do mitochondrií. DJ-1 bol nedávno zapletený do regulácieneuroprotektívneúčinok a mitochondriálna integrita. Tieto výsledky poskytli presvedčivý dôkazneuroprotektívneúčinky CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)proti ischémii. Okrem toho interakcia medzi CDP a DJ-1 hrá aneuroprotektívneúlohu pri poškodení buniek PC12 indukovanom OGD/RP. Vyššie uvedené výsledky môžu rozvinúť naše chápanie priaznivého účinku CDP a môžu poskytnúť užitočné informácie pre terapiu cievnej mozgovej príhody v budúcnosti.

Ischemická mozgová príhoda sa pripisuje komplexnej sérii biochemických a molekulárnych mechanizmov vrátane excitotoxicity, preťaženia vápnikom a oxidačného stresu [31]. OGD/RP sa široko používa ako in vitro model ischémie-reperfúzie a používa sa na skúmanie neurologických a biochemických zmien. Bunková línia PC12 je citlivá na poškodenie OGD/RP [2]. Vykazuje množstvo vlastností a charakteristík sympatických neurónov [32] a teda široko využívaných neurónových bunkových línií na výskum súvisiaci s mechanizmami neurologického poškodenia v dôsledku mŕtvice [33,34]. Početné štúdie ukázali, že oxidačný stres hrá dôležitú úlohu pri poškodení mozgovej príhody a ischémie mozgu [35–37]. Proteín DJ-1 spojený s Parkinsonovou chorobou môže inhibovať ischemickú neurodegeneráciu a behaviorálnu dysfunkciu znížením poškodenia neurónov sprostredkovaného ROS [7]. Preto sme na skúmanie použili model buniek PC12 s poškodením OGD/RPneuroprotektívneúčinok CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy).

Stupeň poškodenia buniek PC12 indukovaného OGD/RP bol hodnotený testami uvoľňovania MTT, NRU a LDH. Správa CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)({{0}},05, 0,5 a 5 ug/ml) zlepšilo prežitie buniek a znížilo uvoľňovanie LDH. Priaznivé účinky liečby CDP zahŕňali aj zníženie intracelulárneho preťaženia vápnikom a zachovanie MMP. Abnormality intracelulárnej koncentrácie Ca2 plus, najmä preťaženie mitochondriálnym vápnikom, sú spojené s apoptózou neurónov a smrťou vyvolanou ischemickou mozgovou príhodou [38]. MMP môže odrážať účinnosť elektrónového transportného reťazca a bola indikovaná ako index patologickej poruchy tohto systému [39]. Zvýšenie intracelulárnej koncentrácie Ca2 plus a strata MMP môžu viesť k destabilizácii štruktúry neurónov a prípadne viesť k poškodeniu buniek alebo bunkovej smrti [21,40]. V tejto štúdii výsledky ukázali, že CDP významne inhibuje intracelulárne preťaženie Ca2 plus a zvyšuje hladiny MMP v bunkách PC12 s poškodením OGD/RP. Apoptóza hrá dôležitú úlohu v komplexnej patofyziológii cerebrálneho ischemicko-reperfúzneho poškodenia. Rastúce údaje naznačujú, že apoptóza sa podieľa na mitochondriálnej dysfunkcii; disipácia MMP je skorá udalosť vedúca k apoptóze buniek [8,39]. Apoptóza je proces programovanej bunkovej smrti závislej od energie na odstránenie nadbytočných buniek. Mnoho neurónov v ischemickej cievnej mozgovej príhode podstúpi apoptózu [41]. V tejto štúdii sme vykonali farbenie Hoechst33342 a Annexin V-FITC/PI, aby sme preskúmali účinok CDP na apoptózu [23,28]. Výsledky ukázali, že CDP zachováva integritu jadra a znižuje rýchlosť apoptózy buniek. Všetky tieto výsledky naznačujú, že antiapoptotická aktivita CDP prispela k priaznivému účinku pri poškodení neurónov v bunkách PC12.

Bunky podliehajúce ischemickému poškodeniu spôsobenému nadmernou akumuláciou ROS, čo môže viesť k peroxidácii lipidov, poškodeniu bunkovej membrány, preťaženiu vápnikom a mitochondriálnej dysfunkcii, čo v konečnom dôsledku vedie k bunkovej apoptóze a smrti [42]. Konzumácia endogénnych antioxidantov, ako sú SOD, CAT a GSH-Px, tiež naznačila výskyt Obr. 9. Možné mechanizmy ochranných účinkov CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)proti OGD/RP-indukovanému poškodeniu buniek PC12. Liečba CDP potláča oxidačný stres, stabilizuje koncentráciu Ca2 plus a MMP, zvyšuje DJ-1 expresiu a lokalizáciu v mitochondriách. Y. Liu a kol. Biomedicine & Pharmacotherapy 99 (2018) 671 – 680 678 oxidačného stresu počas ischémie-reperfúzie. V tejto štúdii skupina OGD/RP vykazovala významné zvýšenie ROS a zníženie CAT, GSH-Px a T-AOC v porovnaní so skupinou liečenou 5 ug/ml CDP. Pozorovali sme však podstatné zníženie miery tvorby ROS a spotreby endogénnych antioxidantov (CAT, GSH-Px a T-AOC) v skupinách CDP. Priaznivé účinky v skupine 5 ug/ml CDP boli blízke účinkom v skupine Nimo. Výsledky naznačujú, že CDP inhibuje tvorbu ROS a obnovuje enzymatickú antioxidačnú obranu.

DJ-1 je kľúčový redox-reaktívnyneuroprotektívneproteín, ktorý sa podieľa na regulácii oxidačného stresu pri mŕtvici. Priaznivé účinky nadmernej expresie DJ{0}} zahŕňajú prežitie buniek z ischémie-reperfúzie a zachovanie mitochondriálnej funkcie a morfológie, ako je precipitujúce otvorenie pórov prechodu permeability mitochondrií [39,43]. Predchádzajúce štúdie ukázali, že ochranný účinok DJ-1 v bunkách vystavených OGD/RP súvisí s jeho antioxidačnými vlastnosťami a translokáciou mitochondrií [43–45]. DJ-1 vykonáva účinnú endogénnu neuroprotekciu pri zmierňovaní mitochondriálnych defektov prostredníctvom translokácie [46]. Niekoľko štúdií naznačilo, že translokácia DJ{10}} môže mať vplyv na mitochondriálny pohyb, zvyšuje interakciu medzi bunkami a podporuje ďalšie procesy prežitia buniek.

DJ-1 ovplyvňuje niekoľko procesov, ako je migrácia a adhézia buniek, chemotaxia, proliferácia a apoptóza v modeloch in vitro aj in vivo [6,9,47,48]. Pomocou modelu mozgovej príhody poškodených buniek PC12 OGD/RP sme skúmali potenciálny vzťah medzi CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)a DJ-1. Nadmerná expresia DJ{1}} bola identifikovaná testom ELISA a Western blottingom. Spolu s touto funkciou hlavné zistenie v experimentoch preukázalo, že k významnému nadmernému vyjadreniu DJ-1 došlo, keď CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)(5 ug/ml) bol podaný pred reperfúziou. To naznačovalo možnéneuroprotektívnevplyv na vzťah CDP a DJ-1. Okrem toho sme pozorovali, že DJ-1 nachádzajúci sa v mitochondriách v podmienkach OGD/RP a hojnej expresie DJ-1 znížil bunkovú citlivosť na ROS a inhiboval oxidačný stres [45]. Výsledky naznačujú, že CDP reguluje a zvyšuje DJ-1, ktorý pôsobí ako molekulárne spojenie medzi dysfunkciou mitochondrií a oxidačným stresom a poskytuje progresiu sekundárnej bunkovej smrti, ktorá je vlastná mŕtvici [5,47,49–51]. V tandeme so stabilizáciou DJ-1 v mitochondriách, CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)liečba zvýšila prežitie buniek, stabilizovala homeostázu Ca2 plus, zlepšila disipáciu MMP a zabránila apoptóze súvisiacej s mitochondriami [43]. Celkovo naše výsledky naznačili, že CDP predstavuje novinkuneuroprotektívnemechanizmus liečby ischemickej cievnej mozgovej príhody.

5. Záver

Naše výsledky ukázali, že CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)chráni bunky PC12 pred poškodením vyvolaným OGD/RP prostredníctvom svojich antioxidačných účinkov, ktoré sa čiastočne pripisujú dráhe sprostredkovanej DJ-1. Tieto účinky zahŕňajú zníženie rýchlosti poškodenia bunkovej membrány, zachovanie homeostázy [Ca2 plus] I, zlepšenie disipácie MMP, inhibíciu bunkovej apoptózy, zoslabenie intracelulárnych ROS a moduláciu hladín DJ-1. Výsledky tiež ukázali, že interakcie medzi CDP a DJ-1 zosilňujú neuroprotekciu a udržiavajú mitochondriálnu integritu. Preto môžu byť zraniteľné neuróny chránené pomocou CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)prostredníctvom zlepšenia DJ{0}} výrazu počas ischemickej mozgovej príhody.

Poďakovanie

Túto štúdiu podporila Národná nadácia pre prírodné vedy Číny (grant 81360649), Národný kľúčový program pre vedu a technológiu (grant 2015BAK45B01) a Program na podporu vedy a techniky autonómneho regiónu Ningxia Hui (grant 2016BZ07).

Polysacharidy Cistanche deserticolamať Neuroprotektívny účinok

Referencie

[1] HD Tsai, JS Wu, MH Kao, JJ Chen, GY Sun, WY Ong, TN Lin, Clinacanthus nutans chráni kortikálne neuróny pred toxicitou vyvolanou hypoxiou znížením HDAC1/6, Neuromol. Med. 18 (2016) 274–282.

[2] J. Zhao, R. Liu, Mŕtvica 1-2-0: program rýchlej reakcie na mŕtvicu v Číne, Lancet Neurol. 16 (2017) 27.–28.

[3] PM George, GK Steinberg, Nová liečba mozgovej príhody: odhaľovanie patofyziológie mozgovej príhody a jej vplyv na klinickú liečbu, Neuron 87 (2015) 297–309.

[4] H. Yao, T. Ago, T. Kitazono, T. Nabika, patofyziológia súvisiaca s NADPH oxidázou v experimentálnych modeloch mŕtvice, Int. J. Mol. Sci. (2017) 18.

[5] J. Cao, M. Ying, N. Xie, G. Lin, R. Dong, J. Zhang, H. Yan, X. Yang, Q. He, B. Yang, Oxidačné stavy DJ{{ 1}} diktovať bunkový osud ako odpoveď na oxidačný stres vyvolaný 4-hpr: autofágia alebo apoptóza? Antioxidačné redoxné znamenie. 21 (2014) 1443–1459.

[6] Y. Kaneko, H. Shojo, J. Burns, M. Staples, N. Tajiri, CV Borlongan, DJ-1 zlepšuje smrť ischemických buniek in vitro pravdepodobne prostredníctvom mitochondriálnej dráhy, Neurobiol, Dis. 62 (2014) 56–61.

[7] D. Yanagisawa, Y. Kitamura, M. Indian, K. Takata, T. Taniguchi, S. Morikawa, M. Morita, T. Inubushi, I. Tooyama, T. Taira a kol., DJ{{ 1}} chráni pred neurodegeneráciou spôsobenou fokálnou cerebrálnou ischémiou a reperfúziou u potkanov, J. Cereb. Prietok krvi. Met. 28 (2008) 563-578.

[8] Y. Kaneko, N. Tajiri, H. Shojo, CV Borlongan, Primárne neurálne bunky potkana zbaveného kyslíka vykazujú translokáciu DJ-1 do zdravých mitochondrií: silný terapeutický cieľ po mŕtvici, CNS Neurosci. Ther. 20 (2014) 275–281.

[9] N. Tajiri, CV Borlongan, Y. Kaneko, Liečba cyklosporínom A ruší smrť neurónových buniek vyvolanú ischémiou tým, že zachováva mitochondriálnu integritu prostredníctvom upregulácie proteínu spojeného s Parkinsonovou chorobou DJ-1, CNS Neurosci. Ther. 22 (2016) 602-610.

[10] RX Yang, J. Lei, BD Wang, DY Feng, L. Huang, YQ Li, T. Li, G. Zhu, C. Li, FF Lu a kol., Pretreatment with sodium Phenylbutyrate Alleviates cerebral ischemia/ reperfúzne poškodenie upreguláciou DJ-1 proteínu, Front. Neurol. 8 (2017) 256.

[11] C. Gu, X. Yang, L. Huang, Cistanches Herba. Neurofarmakologický prehľad, Front. Pharmacol. 7 (2016) 289.

[12] Z. Li, H. Lin, L. Gu, J. Gao, CM Tzeng, Herba Cistanche (Rou Cong-Rong): Jeden z najlepších farmaceutických darov tradičnej čínskej medicíny, Front. Pharmacol. 7 (2016) 41.

[13] Q. Liu, J. Li, J. Wang, J. Li, JS Janicki, D. Fan, Účinky a mechanizmy čínskej bylinnej medicíny pri zmierňovaní ischemicko-reperfúzneho poškodenia myokardu, Evid.- Based Compl. Alt. (2013) (2013) 925625.

[14] HS Wong, KM Ko, Herba Cistanches stimuluje bunkový redoxný cyklus glutatiónu pomocou reaktívnych foriem kyslíka generovaných mitochondriálnym dýchaním v kardiomyocytoch H9c2, Pharm. Biol. 51 (2013) 64–73.

[15] T. Wang, X. Zhang, W. Xie,Cistanchedeserticola YC Ma, "Desert ginseng": recenzia, Am. J. Chin. Med. 40 (2012) 1123–1141.

[16] L. Gu, WT Xiong, C. Wang, HX Sun, GF Li, X. Liu,Cistanchedeserticolaodvar zmierňuje testikulárnu toxicitu vyvolanú hydroxymočovinou u samcov myší, Asian J. Androl. 15 (2013) 838–840.

[17] E. Herzfeld, C. Strauss, S. Simmermacher, K. Bork, R. Horstkorte, F. Dehghani, C. Scheller, Vyšetrovanieneuroprotektívnevplyv nimodipínu na bunky Neuro2a pomocou modelu stresu podobného chirurgickému zákroku, Int. J. Mol. Sci. 15 (2014) 18453–18465.

[18] G. Vahabzadeh, N. Rahbar-Roshandel, SA Ebrahimi, M. Mahmoudian,Neuroprotektívneúčinok noscapínu na cerebrálne poškodenie kyslíkom a glukózou, Pharmacol. Rep. 67 (2015) 281–288.

[19] CP Wang, LZ Zhang, GC Li, YW Shi, JL Li, XC Zhang, ZW Wang, F. Ding, XM Liang, Mulberrosid A chráni pred ischemickým poškodením v primárnej kultúre kortikálnych neurónov potkana po následnom nedostatku kyslíka a glukózy reperfúziou, J. Neurosci. Res. 92 (2014) 944–954.

[20] X. Qi, R. Zhou, Y. Liu, J. Wang, WN Zhang, HR Tan, Y. Niu, T. Sun, YX Li, JQ Yu, Trans-cinnamaldehydom chránené bunky PC12 proti nedostatku kyslíka a glukózy /reperfúzne (OGD/R)-indukované poškodenie prostredníctvom anti-apoptózy a antioxidačného stresu, Mol. Cell Biochem. 421 (2016) 67–74.

[21] R. Chang, R. Zhou, X. Qi, J. Wang, F. Wu, W. Yang, W. Zhang, T. Sun, Y. Li, J. Yu, Ochranné účinky aloínu na kyslík a glukózovou depriváciou indukované poškodenie v bunkách PC12, Brain Res. Bull. 121 (2016) 75–83.

[22] M. Agrawal, V. Kumar, AK Singh, MP Kashyap, VK Khanna, MA Siddiqui, AB Pant, Trans-resveratrol chráni ischemické bunky PC12 inhibíciou transkripčných faktorov spojených s hypoxiou a zvýšením hladín antioxidačných obranných enzýmov, ACS Chem. Neurosci. 4 (2013) 285–294.

[23] KW Zeng, LX Liao, MB Zhao, FJ Song, Q. Yu, Y. Jiang, PF Tu, Protosappanín B chráni bunky PC12 pred smrťou neurónov vyvolanou nedostatkom kyslíka a glukózy udržiavaním mitochondriálnej homeostázy prostredníctvom indukcie závislej od ubikvitínu degradácia proteínu p53, Eur. J. Pharmacol. 751 (2015) 13-23.

[24] NT Ma, R. Zhou, RY Chang, YJ Hao, L. Ma, SJ Jin, J. Du, J. Zheng, CJ Zhao, Y. Niu a kol., Ochranné účinky aloperínu na neonatálne potkany primárne kultivované hipokampálne neuróny poškodené kyslíkovo-glukózovou depriváciou a reperfúziou, J. Nat. Med. 69 (2015) 575–583.

[25] Y. Wang, W. Ma, A. Jia, Q. Guo, Parecoxib chráni myšie kortikálne neuróny proti neurotoxicite vyvolanej OGD/R zvýšením regulácie Bcl-2, Neurochem. Res. 40 (2015) 1294–1302.

[26] MP Ponnusamy, P. Seshacharyulu, A. Vaz, P. Dey, SK Batra, MUC4 stabilizuje expresiu HER2 a udržuje populáciu rakovinových kmeňových buniek v bunkách rakoviny vaječníkov, J. Ovarian Res. 4 (2011) 7.

[27] R. Wang, L. Peng, J. Zhao, L. Zhang, C. Guo, W. Zheng, H. Chen, A. Gardenamide, Chráni RGC-5 bunky pred H(2)O( 2) indukované urážky oxidačného stresu aktiváciou signálnej dráhy PI3K/Akt/eNOS, Int. J. Mol. Sci. 16 (2015) 22350 – 22367.

[28] LP Sun, X. Xu, HH Hwang, X. Wang, KY Su, YL Chen, Dichlórmetánové extrakty propolisu chránia bunku pred oxidačným stresom vyvolaným nedostatkom kyslíka a glukózy Y. Liu et al. Biomedicine & Pharmacotherapy 99 (2018) 671–680 679prostredníctvom znižovania apoptózy, Food Nutr. Res. 60 (2016) 30081.

[29] L. Wang, Y. Zhang, T. Asakawa, W. Li, S. Han, Q. Li, B. Xiao, H. Namba, C. Lu, Q. Dong,Neuroprotektívneúčinok neuroserpínu v astrocytoch potkanov ošetrených kyslíkovo-glukózovou depriváciou a reoxygenáciou in vitro, PLoS One. 10 (2015) e0123932.

[30] Z. Zhiwen, W. Haitao, S. Fu, Z. Lihua, JL Peter, Q. Remi, Z. Wenhua, Lítiové ióny zoslabujú apoptózu vyvolanú depriváciou séra v bunkách PC12 prostredníctvom regulácie signalizácie Akt/FoxO1 cesty, Psychopharmacology (Berl) 12 (2015) 625–633.

[31] EJB Dariush Mozaffffarian, S. Alan, et al., Zhrnutie štatistík o srdcových chorobách a mŕtvici za rok 2016. Správa od American Heart Association, Circulation 133 (2016) 447–454.

[32] JE Jumblatt, TA, Regulácia väzbových miest muskarínového ligandu nervovým rastovým faktorom v bunkách feochromocytómu PC12, Nature 297 (1982) 152–154.

[33] S. Afrazi, S. Esmaeili-Mahani, V. Sheibani, M. Abbasnejad, Neurosteroid alopregnanolón zmierňuje apoptózu vyvolanú vysokou glukózou a zabraňuje experimentálnej diabetickej neuropatickej bolesti: štúdie in vitro a in vivo, J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 139 (2014) 98-103.

[34] X. Liu, X. Zhu, M. Chen, Q. Ge, Y. Shen, S. Pan, Resveratrol chráni bunky PC12 proti apoptóze vyvolanej OGD/R prostredníctvom mitochondriálne sprostredkovanej signálnej dráhy, Acta Biochem Biophys Sin . 48 (2016) 342–353.

[35] PW Kleikers, K. Wingler, JJ Hermans, I. Diebold, S. Altenhofer, KA Radermacher, B. Janssen, A. Gorlach, HH Schmidt, NADPH oxidázy ako zdroj oxidačného stresu a molekulárny cieľ pri ischémii/reperfúzii zranenie, J. Mol. Med. (Berl) 90 (2012) 1391–1406.

[36] FC Liu, HI Tsai, HP Yu, Orgánovo ochranné účinky extraktu z červeného vína, resveratrol, pri reperfúznom poškodení sprostredkovanom oxidačným stresom, Oxid. Med. Cell Longev. (2015) 568634.

[37] LK Seidlmayer, VV Juettner, S. Kettlewell, EV Pavlov, LA Blatter, EN Dedková, Výrazné mPTP aktivačné mechanizmy v ischémii-reperfúzii: príspevky Ca2 plus, ROS, pH a anorganického polyfosfátu, Cardiovasc. Res. 106 (2015) 237–248.

[38] F. Su, AC Guo, WW Li, YL Zhao, ZY Qu, YJ Wang, Q. Wang, YL Zhu, Predkondicionovanie nízkou dávkou etanolu chráni pred depriváciou kyslíka a glukózy / poškodením neurónov vyvolaným reoxygenáciou aktiváciou veľkej vodivosti , Ca2 plus plus -aktivovaný K plus plus Kanály in vitro, Neurosci. Bull. 33 (2017) 28–40.

[39] Y. Li, M. Wang, S. Wang, Vplyv inhibície mitochondriálneho štiepenia na energetický metabolizmus v hipokampálnych neurónoch potkana počas ischemického/reperfúzneho poškodenia, Neurol. Res. (2016) 1–8.

[40] C. Rui, L. Yuxiang, H. Yinju, Z. Qingluan, W. Yang, Z. Qipeng, W. Hao, M. Lin, L. Juan, Z. Chengjun a kol., Ochranné účinky Polysacharid Lycium barbarum na primárne kultivovaných hipokampálnych neurónoch novorodených potkanov poškodených nedostatkom kyslíka a glukózy a reperfúziou, J. Mol. Histol. 43 (2012) 535–542.

[41] BR Broughton, DC Reutens, CG Sobey, Apoptotické mechanizmy po cerebrálnej ischémii, Stroke 40 (2009) e331–339.

[42] Jordan M. Willcox, AJS Summerlee, Relaxin chráni astrocyty pred hypoxiou in vitro, PLoS One. 9 (3) (2014) e90864.

[43] X. Zhang, D. Yuan, Q. Sun, L. Xu, E. Lee, AJ Lewis, BS Zuckerbraun, MR Rosengart, proteínkináza závislá od vápnika/kalmodulínu reguluje PINK1/Parkin a DJ{{3} } dráhy mitofágie počas sepsy, FASEB J. 31 (2017) 4382–4395.

[44] S. Vasseur, S. Afzal, J. Tardivel-Lacombe, DS Park, JL Iovanna, TW Mak, DJ-1/PARK7 je dôležitým mediátorom hypoxiou indukovaných bunkových reakcií, Proc. Natl. Akad. Sci. USA 106 (2009) 1111–1116.

[45] Z. Xianghong, Y. Du, S. Qian, X. Li, L. Emma, ​​J. Anthony, Brian Lewis, S. Zuckerbraun, Matthew R. Rosengart, Vápnik/kalmodulín-dependentná proteínkináza reguluje PINK1/ Parkinove a DJ-1 dráhy mitofágie počas sepsy, FASEB J. (2017). [

46] MS Choi, T. Nakamura, SJ Cho, X. Han, EA Holland, J. Qu, GA Petsko, JR Yates 3rd, RC Liddington, SA Lipton, Transnitrozylácia od DJ-1 na PTEN zmierňuje smrť neurónových buniek v modeloch Parkinsonovej choroby, J. Neurosci. 34 (2014) 15123–15131.

[47] RK Dongworth, UA Mukherjee, AR Hall, R. Astin, SB Ong, Z. Yao, A. Dyson, G. Szabadkai, SM Davidson, DM Yellon, DJ Hausenloy, DJ-1 chráni pred bunkovou smrťou po akútnom ischemicko-reperfúznom poškodení srdca, Cell Death Dis. 5 (2014) e1082.

[48] ​​A. Di Cello, M. Di Sanzo, FM Perrone, G. Santamaria, E. Rania, E. Angotti, R. Venturella, S. Mancuso, F. Zullo, G. Cuda, F. Costanzo, DJ{ {1}} je spoľahlivý sérový biomarker na rozlíšenie vysokorizikovej rakoviny endometria, Tumor Biol. 39 (2017) 1010428317705746.

[49] H. Aleyasin, MW Rousseaux, PC Marcogliese, SJ Hewitt, I. Irrcher, AP Joselin, M. Parsanejad, RH Kim, P. Rizzo, SM Callaghan a kol., DJ-1 chráni nigrostriátov os z neurotoxínu MPTP moduláciou dráhy AKT, Proc. Natl. Akad. Sci. USA 107 (2010) 3186–3191.

[50] RM Canet-Aviles, MA Wilson, DW Miller, R. Ahmad, C. McLendon, S. Bandyopadhyay, MJ Baptista, D. Ringe, GA Petsko, MR Cookson, DJ proteínu Parkinsonovej choroby-1 jeneuroprotektívnev dôsledku mitochondriálnej lokalizácie riadenej cysteínom-sulfínovou kyselinou, Proc. Natl. Akad. Sci. USA 101 (2004) 9103-9108.

[51] M. Liu, B. Zhou, ZY Xia, B. Zhao, SQ Lei, QJ Yang, R. Xue, Y. Leng, JJ Xu, Z. Xia, Hyperglykémiou indukovaná inhibícia DJ-1 expresia ohrozila účinnosť ischemickej postkondicionačnej kardioprotekcie u potkanov, Oxid. Med. Cell Longev. (2013) (2013) 564902.