Klonovanie a funkčná identifikácia génu tyrozíndekarboxylázy z Cistanche Tubulata

Cistanche tubulosa(Schrenk) Wish je trváca bylinná parazitická rastlina z rodu Cistanche z čeľade Lewandaceae.Je to vzácna tradičná čínska medicína sladkej, slanej a hrejivej povahy. Má funkcie ako tonizácia jangu obličiek, prospieva esencii a krvi, zvlhčuje črevá a vyprázdňuje sa. Jeho hlavnými aktívnymi zložkami sú fenyletanolové glykozidy. 

Superman bylinky cistanche

Tieto zlúčeniny majú rôzne štruktúry a rozsiahle farmakologické aktivity, čo z nich robí dôležitý zdroj hlavných zlúčenín pre medicínsku aktivitu. Prirodzené zdroje týchto zlúčenín sú však obmedzené, cesta chemickej syntézy je ťažkopádna, reakčné podmienky sú drsné a náklady sú vysoké, čo nie je možné splniť pri komerčnej výrobe.

Hlavné chemické zložky Cistanche deserticola

A preskúmajte kľúčové enzýmové gény zapojené do biosyntézyfenyletanoidové glykozidya prostredníctvom genetického inžinierstvaMetóda môže poskytnúť možnosť enzymatickej syntézy štrukturálne rôznorodýchfenyletanoidové glykozidy.

Fenyletanolglykozid je hlavnou aktívnou zložkou Cistanche deserticola

Výskumná skupina vykonala predbežný výskum glykozyltransferáz a acyltransferáz modifikovaných po katalýze biosyntézy tyrozolov (kľúčových medziproduktov fenyletanoidných glykozidov).Syntéza tyrozolu vyžaduje použitie tyrozínu ako prekurzora, ktorý je katalyzovaný tyrozíndekarboxylázou na produkciu tyramínu, ktorý potom vzniká sériou reakcií, ako je monoaminooxidáza a alkoholdehydrogenáza. Katalyzované tyrozíndekarboxylázoudekarboxylácia tyrozínu je kľúčovým krokom jeho počiatočnej reakcie.

Experiment Cistanche deserticola

V tejto štúdii bol tyrozíndekarboxylázový gén TDC klonovaný z genómu Cistanche tubulosa metódou RT-PCR v kombinácii s technológiou RACE. Proteín kódujúci gén obsahuje 509 aminokyselín, ktorý bol úspešne exprimovaný v E. coli, a rekombinantný proteín s molekulovou hmotnosťou 61 kDa bol izolovaný a purifikovaný.

Prášok z extraktu cistanche

Kliknite sem pre zobrazenie produktov Cistanche

【Ask for more】 Email: xue122522@foxmail.com /  Whats App:  0086 18599088692 /  Wechat:  18599088692

Výsledky funkčnej identifikácie in vitro ukázali, že TDC môže katalyzovať dekarboxyláciu tyrozínu (1) za vzniku tyramínu (2) a produkt bol identifikovaný pomocou HR-MS a kontroly referenčnej látky. Uskutočnil sa ďalší výskum subcelulárnej lokalizácie, optimálnych katalytických podmienok a enzymatickej selektivity rekombinantného proteínu. Tento gén môže byť použitý ako dôležitý biosyntetický prvok pri konštrukcii inžinierskych baktérií na biosyntézu fenyletanolamínových glykozidov a na enzymatickú syntézu štruktúrne rôznorodých fenyletanolamínových glykozidov.

referencia:

(1) Song Zhihong, Lei Li, Tu Pengfei, čínska bylinná medicína, 2003,9113-115

(2) Song Zhihong, Tu Pengfei, Zhao Yuying, Zheng Junhua, čínska bylinná medicína, 2000,11,10-12