Doplnok pri ochorení obličiek ako potenciálny prispievateľ k arteriálnej hypertenzii

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Lisa-Maren Fischer a kol

Abstraktné

Cieľ:Ukladanie komplementu prevláda v biopsiách obličiek u pacientov s arteriálnou hypertenziou a hypertenznou nefropatiou, ale spojenie hypertenzie a ukladania komplementu alebo zapojenie komplementu do patogenézy hypertenznej nefropatie sa doteraz nepreukázalo.

Metódy:V tejto štúdii sme analyzovali depozíciu komplementu C1q a C3c na potkanom modeli preťaženia a hypertenzie subtotálnou nefrektómiou (SNX) a v archívnych ľudských obličkových biopsiách od 217 pacientov so známou hypertenziou a 91 kontrolných pacientov bez anamnézy hypertenzie pomocou semikvantitatívneho hodnotenia Imunohistochémia C1q a C3c a korelácia s parametrami funkcie obličiek. Aby sa riešilo, či bol komplement len ​​pasívne uložený alebo aktívne exprimovaný obličkovými bunkami, dodatočne sa analyzovala expresia mRNA C1q a C3.

Výsledky:Glomerulárne ukladanie komplementu C1q a C3c bolo významne vyššie v obličkách hypertenzných potkanov SNX a hypertonikov v porovnaní s nehypertenznými pacientmi. Priemerný arteriálny krvný tlak (BP) u potkanov SNX dobre koreloval s množstvom glomerulárnej depozície C1q a C3c a s hmotnosťou ľavej komory, ako nepriamym parametrom vysokého TK. Kvantitatívna analýza mRNA ukázala, že C3 bol nielen uložený, ale aj aktívne produkovaný glomerulárnymi bunkami hypertenzných potkanov SNX a v ľudských obličkových biopsiách. Je potrebné poznamenať, že u pacientov štádium CKD významne korelovalo s intenzitou farbenia glomerulov C3c, ale nie s intenzitou C1q.

Záver: Ukladanie komplementu v obličkách korelovalo s experimentálnou hypertenziou, ako aj s prítomnosťou hypertenzie v rôznychobličkovéchoroby. Na zodpovedanie otázky, či a ako presne je renálny komplement kauzálny pre patogenézu arteriálnej hypertenzie u mužov, sú potrebné ďalšie štúdie.

Kľúčové slová:Obličky, ukladanie komplementu, hypertenzia,Renálnachoroba

Cistanche dokáže liečiťobličkovéchoroba

Úvod

The complement system and its regulatory proteins are components of the innate immune system consisting of >20 rozpustných faktorov, ktoré hrajú dôležitú úlohu pri (i) opsonizácii, (ii) stimulácii rôznych zápalových dráh a (iii) osmotickej lýze patogénov a poškodených buniek pri mnohých ochoreniach, najmä zápalovýchobličkychoroba[1]. Systém komplementu pozostáva z 3 dráh: (i) klasická dráha, aktivovaná akoukoľvek štruktúrou, ktorá je rozpoznávaná C1q [2], (ii) dráha lektínu, aktivovaná, keď sú sacharidové vzorce rozpoznávané komplexmi rozpoznávajúcimi vzory [3] a (iii) alternatívna dráha aktivovaná spontánnou hydrolýzou C3 [4].

Posledné 2 desaťročia zintenzívnili naše poznatky o systéme komplementu a jeho úlohe v patogenéze rôznych systémových aobličkovéchorobyako postinfekčná glomerulonefritída (GN), IgA nefropatia (IgAN), lupusová nefritída (LN), membranoproliferatívna GN a C3 glomerulopatie [1, 5]. Dôležitá úloha komplementového systému a jeho dysfunkcie je známa aj v patogenéze trombotických mikroangiopatií, vrátane atypického hemolyticko-uremického syndrómu [6], IgA vaskulitídy (bývalá Henochova-Schönleinova purpura) [7] a malígnej hypertenzie [8]. Zatiaľ čo patomechanizmy trombotickej mikroangiopatie sú už známe [6, 7], naše poznatky o význame komplementového systému vo vzťahu k hypertenzii sú stále relatívne vágne. Väčšina pacientov s CKD má zvýšený krvný tlak (BP) [9], ale presná patogenéza hypertenzie nie je známa. K dispozícii je niekoľko štúdií popisujúcich súvislosť medzi plazmatickým C3 a hypertenziou [10, 11], zatiaľ čo iná štúdia nemohla tieto pozorovania potvrdiť [12]. V potkanom modeli DOCA-soľnej hypertenzie bola glomerulárna depozícia C3 zvýšená u DOCA-soľných potkanov a znížená antihypertenzívnou liečbou, to znamená spironolaktónom a trojitou liečbou hydrochlorotiazidom, rezerpínom a hydralazínom [13]. Nedávne štúdie využívajúce predklinické modely hypertenzie naznačili úlohu komplementu v patogenéze hypertenzie [14] sprostredkovanej rôznymi imunitnými bunkami, ako sú makrofágy a regulačné T-bunky (Tregs) [15–17], a aktivácia systému renín-angiotenzín vedúca k fenotypové zmeny v bunkách hladkého svalstva ciev [18]. Podrobná úloha ukladania renálneho komplementu pri rozvoji zvýšeného TK je stále nejasná. Preto sme v tejto štúdii skúmali C1q ako štiepny produkt klasického štiepenia a C3c ako spoločný marker všetkých 3 dráh aktivácie komplementu v renálnych biopsiách od hypertenzných a normotenzných pacientov, ako aj v zavedenom potkanom modeli preťaženia a následného hypertenzia subtotálnou nefrektómiou (SNX).

Metódy

Zvierací model

Na skúmanie ukladania obličkového komplementu, poškodenia obličiek a srdcových zmien u hypertenzných zvierat sme použili model potkanov, ktorý sa vyznačuje glomerulárnou hyperfiltráciou a preťažením v dôsledku redukcie nefrónov, fokálnej segmentálnej a globálnej glomerulosklerózy, tubulointersticiálneho zjazvenia a progresívneho CKD s významným zvýšený TK. Potkany boli chované v špecifickom zariadení bez patogénov v prostredí s kontrolovanou teplotou a svetlom a mali ad libitum prístup k štandardnej potrave (sniff Spezialdiäten GmbH, Soest, Nemecko) a vode. Potkany boli držané na klasickej podstielke z osikového dreva (sniff Spezialdiäten GmbH, Soest, Nemecko) v makrolonových klietkach typu IV (Tecniplast Deutschland GmbH, Hohenpeißenberg, Nemecko) s maximálnou populáciou 3. Na modelovú indukciu sa použilo 12 samcov Dark Agouti (DA/). HanRj, Janvier, Le Genest-Saint-Isle, Francúzsko) potkany vo veku 12 – 14 týždňov boli SNX v 2-krokovom protokole počnúc neinspirovanou tomiou, po ktorej nasledovala hmotnostne štandardizovaná resekcia horných a dolných pólov zo zvyšnej obličky 1 týždeň neskôr. Na tento účel bol zvieratám pred chirurgickým zákrokom subkutánne podaný Buprenovet (Bayer, Leverkusen, Nemecko) v dávke 0.05 mg/kg telesnej hmotnosti. Po anestézii izofluranom sa oholil pravý bok, dezinfikoval sa tinktúrou KO-DAN forte (Schülke & Mayr GmbH, Norderstedt, Nemecko), bok sa otvoril 1,5 cm rezom a oblička sa opatrne vybrala a zafixovala 2 sterilnými výtery, po ktorých nasleduje podviazanie krvného zásobenia obličiek a močovodu a odstránenie obličky. Abdominálny rez bol uzavretý vstrebateľným stehom a súvislým švom, ako aj koža bola uzavretá švami s jedným gombíkom. O týždeň neskôr sa ľavá oblička vybrala presne tak, ako je opísané pre pravú obličku. Potom sa renálna artéria upevnila atraumatickou svorkou a horný a dolný pól obličky sa resekoval skalpelom a povrch rezu sa uzavrel kolagénovou špongiou (Resorba medical GmbH, Nürnberg, Nemecko). Nakoniec sa zvyšná oblička vrátila do pôvodnej polohy a brušný rez sa uzavrel, ako je opísané vyššie. Hodnotila sa pooperačná aktivita, príjem tekutín, hmotnosť, štruktúra srsti a správanie zvierat, ale nevykazovali žiadne známky pooperačnej bolesti. Analgézia sa však udržala aspoň 3 dni po operácii. Kontroly podstúpili falošnú operáciu (sham, n=11). Na konci experimentu sa zvieratá umiestnili na 24 hodín do metabolických klietok na odber moču na meranie proteinúrie pomocou Bio-Rad Protein Assay (Bio-Rad Laboratories GmbH, Mníchov, Nemecko). Adsorpcia sa merala vo vzorkách moču zriedených PBS pri 595 nm v čítačke mikrodoštičiek a proteinúria sa vypočítala pomocou štandardnej krivky zo štandardov hovädzieho sérového albumínu v rozsahu od 0,15 do 2 mg (Thermo Scientific, Rockford, IL, USA). Po 12 týždňoch boli potkany usmrtené po intraarteriálnom meraní BP počas 30 minút vložením katétra do A. carotid s použitím systému AD Instruments power lab system (ADInstruments Ltd., Oxford, UK). Nakoniec sa odobrali obličky a srdcia a rozdelili sa na 2 časti, jedna sa rýchlo zmrazila na analýzu RNA a druhá časť sa spracovala na imunohistochémiu. Krv sa odobrala na detekciu sérového kreatinínu pomocou autoanalyzátora (Beck man Instruments, Brea, CA, USA).

Cistanche dokáže liečiťobličkové choroba

Kvantitatívna analýza mRNA

Celková RNA z obličiek potkana bola izolovaná pomocou RNeasy Mini kolón (Qiagen, Hilden, Nemecko). Reverzné transkripčné reakcie a real-time PCR sa uskutočnili s použitím Power SYBR Green na 7500 Fast Real-Time PCR systéme (oba Applied Biosystems, Weiterstadt, Nemecko) podľa inštrukcií výrobcu. Údaje z PCR v reálnom čase sa analyzovali pomocou softvéru SDS v1.3 (Applied Biosystems) a relatívna expresia hladín mRNA cieľového génu sa vypočítala pomocou porovnávacej delta Ct metódy [19]. Normalizácia sa uskutočňovala proti hladinám endogénnej 18S rRNA aplikovaným na výsledné relatívne násobné zmeny. Boli použité nasledujúce priméry: 18 s (fw 5'TTGATTAAGTCCCTGC-CCTTTGT3'; rev 5'CGATCCGAGGGCCTCACTA3'); C3 (fw 5′ TGCGGCTGGAGAGTGAAG3′; rev 5′ TTACTGGCTGGAATC-TTGATGG3′) [20]; a C1qB (fw 5′TCATAGAACACGAGGAT TCCATACA3′; rev 5′GACCCAGTACAGCTGCTTTGG3′) [20].

Imunohistochémia

Pre imunohistochemické biopsie obličiek alebo SNX a falošnú obličku potkana boli vzorky fixované vo formalíne, zaliate do parafínu a narezané na rezy s hrúbkou 1 μm a zafarbené vo farbe Ventana Benchmark (Roche Diagnostics Deutschland GmbH, Mannheim, Nemecko) s použitím nasledujúceho protokolu : získanie antigénu sa uskutočnilo použitím štiepenia pronázou E počas 40 minút pri 37 stupňoch. Po blokovaní pomocou Avidin-Biotin Block (Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA) boli rezy normálneho kozieho séra a blotto (1:5) inkubované 1 hodinu pri 37 stupňoch s použitím nasledujúcich protilátok zriedených 1 percentom BSA v 50 mM Tris pH 7.4: Clq, králičia polyklonálna protilátka proti ľudskému Clq (A0126; DAKO Deutschland, Hamburg, Nemecko) a; C3c, králičia polyklonálna protilátka proti ľudskému C3c (A0062; DAKO Deutschland). Po premytí 50 mM Tris pH 7,4 boli naviazané primárne protilátky detegované pomocou "ultra view Universal DAB Detection Kit" (Roche Diagnostics Deutschland GmbH, Mannheim, Nemecko). Negatívne kontroly zahŕňali buď deléciu alebo substitúciu primárnej protilátky ekvivalentnými koncentráciami irelevantnej myšacej monoklonálnej protilátky alebo preimunitného králičieho IgG.

Vzorky ľudského obličkového tkaniva

V prvom kroku sa neselektovaná kohorta 308 po sebe idúcich archívnych biopsií obličiek fixovaných vo formalíne a zaliatych do parafínu (Katedra nefropatológie, Friedrich-Alexander-Universität Erlangen-Nürnberg [FAU]) analyzovala na ukladanie komplementu v obličkách pomocou imunohistochémie a porovnávaním prípadov s prítomnosťou alebo absencia arteriálnej hypertenzie podľa klinických súborov, bez ohľadu na primárnuobličkovéchoroba. Zahrnuté boli iba biopsie od hypertenzných a nehypertenzných pacientov s klinicky dobre zdokumentovaným BP. Okrem toho 46 nulových biopsií z transplantovaných obličkových aloštepov darovaných od nehypertenzných žijúcich darcov slúžilo ako kontrola.

V druhom kroku sme sa zamerali na porovnanie vybraných spoločných skupínobličkovéchoroby, menovite kontroly (nulové biopsie; n=46), IgAN (n=65), membránové GN (MGN, n=18), LN (n=10), ohniskové segmentálna glomeruloskleróza (FSGS, n=17) a diabetická nefropatia (DN, n=28), čo viedlo k reprezentatívnej podskupine 184 biopsií. V tejto podskupine sa podrobnejšie analyzoval vzťah arteriálnej hypertenzie a ukladania komplementu v kontexte rôznych bežných nefropatií. Základné charakteristiky pacientov sú popísané v tabuľke 1.

Histopatologické hodnotenie

Diagnostiku renálnej biopsie vykonali 3 veľmi skúsení špecializovaní neuropatológovia počas rutinného vyšetrenia s konsenzuálnou diskusiou o všetkých nejednoznačných prípadoch (vrátane MBH a KA). Posúdenie podrobnej morfológie ľudských renálnych biopsií vykonal jeden veľmi skúsený vedec (CD) s použitím dobre zavedeného semikvantitatívneho skóre glomerulosklerózy, skóre tubulárneho poškodenia a skóre vaskulárneho poškodenia (VSI) na parafínových rezoch zafarbených PAS, ako bolo opísané vyššie [21]. Intersticiálna fibróza/tubulárna atrofia (IF/TA) bola klasifikovaná podľa klasifikácie BANFF pre biopsie obličkového transplantátu [22].

Hodnotenie retrospektívy

Klinické údaje Boli zhromaždené klinické parametre, ktoré boli dostupné v časovom bode renálnej biopsie. Nasledujúce parametre boli zahrnuté do korelačnej analýzy so skóre C1q a C3c, lokalizáciou komplementu a skóre poškodenia pomocou softvéru SPSS: vek pacienta, prítomnosť alebo neprítomnosť hypertenzie a cukrovky, proteinúria, sérový kreatinín, sérová močovina, sérový cholesterol, sérový proteín a sérové ​​C3 a C4 komplementové faktory. Žiaľ, informácia o dĺžke trvaniaobličkovéchorobaand current medication was not consistently available and could therefore not be systematically analyzed. In renal patients, BP is measured regularly and particularly before performing a kidney biopsy. BP measurements and grading was done according to the KDIGO guidelines for renal patients [23]. Proteinuria was measured by analysis of a 24 h urine collection and significant proteinuria was defined as urinary protein excretion >300 mg/deň. V 2/3 všetkých prípadov bola proteinúria uvádzaná ako g/24 h moču. Len niektorí pacienti mali proteinúriu dokumentovanú bodovým meraním moču a pre veľmi málo pacientov neboli dostupné žiadne údaje o proteinúrii. Keďže 24-hodinové a bodové hodnoty proteinúrie možno len ťažko porovnávať, zaradili sme len pacientov s 24-hodinovým odberom moču na koreláciu proteinúrie s ukladaním komplementu. Aby sme ďalej štandardizovali naše zistenia, rozdelili sme pacientov aj podľa rôznych tried CKD pomocou vzorca CKD-EPI na výpočet GFR [24] a tried CKD podľa klasifikácie KDIGO 2012 [25].

Cistanche dokáže liečiťobličkové choroba

Semikvantitatívne hodnotenie ukladania komplementu v renálnych biopsiách

Farbenie komplementu imunohistochémiou v renálnych biopsiách bolo hodnotené oddelene v glomerulách a tubulointersticiálnom kompartmente. Semikvantitatívne skóre {{0}}}–4 opisuje intenzitu pozorovateľných C3c alebo C1q v biopsiách obličiek pri 200-násobnom zväčšení. Skóre 0 znamená žiadne usadeniny, skóre 1: slabé zafarbenie postihujúce až 25 percent skúmaného kompartmentu. Skóre 2: mierne zafarbenie postihujúce až 50 percent alebo silné zafarbenie<25% of="" the="" compartment.="" score="" 3:="" substantial="" staining="" affecting="" up="" to="" 75%="" of="" the="" investigated="" compartment.="" score="" 4:="" highest="" staining="" intensity="" affecting="">75 percent skúmaného kompartmentu.

Clq a C3 mRNA v ľudských renálnych biopsiách

Údaje pre C1q a C3 v glomeruloch a tubulointerstíciu z ľudských renálnych biopsií s rôznymi chorobami boli vyhodnotené z databázy Nephroseq pomocou súboru údajov Ju CKD [26].

Štatistické analýzy

Po testovaní normálnej distribúcie hodnôt pomocou Kolmogorov-Smirnovovho testu boli údaje analyzované pomocou Mann-Whitneyho testu na porovnanie 2 skupín a Kruskal-Wallisovho testu s Dunnovým viacnásobným porovnávacím testom ako post hoc test na porovnanie viacerých skupín. Vo všetkých testoch bolo p < 0.05="" prijaté="" ako="" štatisticky="" významné.="" spearmanov="" test="" sa="" použil="" na="" testovanie="" korelácie="" ukladania="" komplementu="" so="" skóre="" poškodenia="" obličiek="" a="" klinickými="" údajmi.="" štatistické="" analýzy="" sa="" uskutočnili="" pomocou="" softvéru="" spss="" pre="" windows="" (verzia="" 19.0="" spss,="" ibm,="" mníchov,="" nemecko)="" alebo="" graphpad="" prism="" 8="" pre="" softvér="" windows="" (verzia="" 8.3,="" graphpad="" software="" inc.,="" san="" diego,="" ca,="">

Výsledky

Ukladanie renálneho komplementu C3c a C1q je prítomné v modeli stabilného CKD u potkanov s hypertenziou a koreluje so zmenami obličiek a srdca

Ukladanie komplementu sa skúmalo na modeli CKD u hypertenzných potkanov, to znamená u potkanov Dark Agouti s úplnou nefrektómiou (SNX), u ktorých bol priemerný arteriálny TK 12 týždňov po modelovej indukcii významne (p < 0.0="" 01)="" sa="" zvýšil="" (175,7="" ±="" 21,0="" mm="" hg)="" v="" porovnaní="" s="" falošne="" operovanými="" kontrolami="" (135,8="" ±="" 2,8="" mm="" hg)="" (obr.="" 1a).="" proteinúria="" bola="" tiež="" významne="" vyššia="" u="" snx="" v="" porovnaní="" s="" falošne="" operovanými="" kontrolami="" (78,5="" ±="" 16,6="" vs.="" 8,9="" ±="" 0,8="" mg/24="" h).="" tento="" model="" preťaženia="" potkanov="" hypertenzie="" a="" progresívnej="" renálnej="" insuficiencie="" sa="" zdal="" vhodný="" na="" skúmanie="" zmien="" v="" ukladaní="" a="" expresii="" komplementu="" v="" obličkách="" spojených="" s="" hypertenziou.="" glomerulárna="" depozícia="" c3c="" a="" c1q="" chýbala="" u="" normotenzných,="" falošne="" operovaných="" kontrolných="" potkanov="" (obr.="" 1b,="" c)="" a="" významne="" sa="" zvýšila="" u="" hypertenzných="" potkanov="" snx="" (obr.="" 1d,="" e,="" g,="" h).="" u="" potkanov="" snx="" sa="" komplementový="" faktor="" c3c="" nielen="" uložil="" v="" obličkovom="" tkanive,="" ale="" tiež="" významne="" upreguloval="" na="" úrovni="" mrna="" (obr.="" 1f).="" renálna="" expresia="" clq="" mrna="" vykazovala="" tendenciu="" k="" vyšším="" hladinám="" u="" snx="" potkanov="" ako="" u="" kontrol,="" ale="" tento="" rozdiel="" nedosiahol="" významnosť="" (obr.="" 11).="" je="" zaujímavé,="" že="" u="" potkanov="" ukladanie="" c3c="" a="" c1q="" v="" glomeruloch="" vysoko="" korelovalo="" s="" priemerným="" arteriálnym="" bp="" (obr.="" 2a,="" d)="" a="" srdcovou="" hypertrofiou,="" ako="" bolo="" hodnotené="" hmotnosťou="" ľavej="" komory="" (obr.="" 2b,="" e).="" okrem="" toho="" v="" modeli="" snx="" ukladanie="" komplementu="" v="" obličkách="" koreluje="" s="" poškodením="" obličiek,="" ako="" aj="" s="" funkciou="" obličiek.="" glomerulárna="" depozícia="" c3c,="" ako="" aj="" depozícia="" c1q,="" vykazovali="" silnú="" koreláciu="" so="" sérovým="" kreatinínom="" (obr.="" 2c,="" f)="" a="" proteinúriou="" (obr.="" 2g,="" h).="" korelácia="" sérového="" kreatinínu="" a="" proteinúrie="" s="" komplementom="" nebola="" prekvapivá,="" pretože="" oba="" parametre="" tiež="" vykazovali="" silnú="" vzájomnú="" koreláciu="" v="" tomto="" modeli="" potkanov="" (obr.="" 21).="" naše="" údaje="" na="" potkanom="" modeli="" hypertenzného="" ckd="" v="" dôsledku="" redukcie="" hmoty="" obličiek="" a="" preťaženia="" teda="" naznačujú="" súvislosť="" medzi="" ukladaním="" komplementu="" v="" obličkách="" a="" hypertenziou.="" preto="" sme="" sa="" zamerali="" na="" potvrdenie="" týchto="" zistení="" v="" ľudskej="" kohorte="" hypertonikov="" verzus="" normotenzných="" pacientov,="" u="" ktorých="" bola="" z="" rôznych="" dôvodov="" vykonaná="" renálna="">

Ukladanie komplementu je nezávislé od základného ochorenia obličiek

Tu sme použili 2-krokový prístup: najprv sme zahrnuli všetkých pacientov s hlásenou hodnotou BP nezávisle od podkladuobličkychoroba(n=308, podrobnosti nájdete v tabuľke 1). Je potrebné poznamenať, že 217 z 308 pacientov (70,5 percenta) malo hypertenziu. Po druhé, pre ďalšiu analýzu sme sa zamerali na podskupiny najrozšírenejších foriem GN, to znamená IgAN, MGN a LN, a 2 sprostredkované neimunitným komplexomobličkovéchorobymenovite DN a fokálna segmentálna glomeruloskleróza (FSGS). 46 nulových biopsií z aloštepov transplantovanej obličky darovaných od normotenzných žijúcich darcov slúžilo ako kontrolná skupina (pozri tabuľku 1).

Na preskúmanie potenciálneho vzťahu medzi hypertenziou a renálnym komplementom sa analyzovalo ukladanie C1q a C3c v glomerulárnom a tubulointersticiálnom kompartmente semikvantitatívnym hodnotením imunohistologických zafarbení. Množstvo a intenzita farbenia C1q a C3c sa v skúmaných biopsiách značne líšili (podrobnosti pozri na obr. 3). V tubulointersticiálnom kompartmente bol C3c uložený pozdĺž tubulárnych bazálnych membrán a v intersticiálnej matrici (obr. 3G), zatiaľ čo farbenie C1q bolo zvyčajne slabé a obmedzené na interstícium (obr. 3H).

Glomerulárna depozícia C3c bola u mnohých zvýšenáobličkovéchorobyvrátane IgAN, MGN, LN a FSGS v porovnaní s normotenznými nulovými biopsiami (obr. 4A). Celkovo bola glomerulárna depozícia C1q slabšia ako glomerulárna depozícia C3c. Bol významne zvýšený v IgAN, MGN, LN a DN, ale nie FSGS v porovnaní s kontrolami s nulovou biopsiou (obr. 4B). Je zaujímavé, že komplement C3 a C1q sa neukladal len v chorých obličkách, ale zvýšila sa aj lokálna renálna expresia mRNA. Údaje z Nephroseq ukázali, že expresia mRNA C3 aj C1q bola významne zvýšená v IgAN, LN, DN a FSGS v porovnaní s kontrolnou skupinou, teda zdravými žijúcimi darcami (obr. 4C, D). Expresia Clq mRNA bola nižšia ako expresia C3. Tubulointersticiálna depozícia C3c bola tiež zvýšená vo väčšine v porovnaní s nulovými biopsiamiobličkovéchoroby(Obr. 4E), zatiaľ čo C1q sa významne nelíšil od kontrol s nulovou biopsiou (údaje nie sú uvedené). Stručne povedané, výrazné ukladanie komplementu v obličkách je bežným nálezom u rôznychobličkychoroby. Ďalej sme skúmali potenciálny význam vysokého TK pre ukladanie komplementu v obličkách.

Obr. 3. Ukladanie C3c a C1q v obličkových biopsiách. Ľudské renálne biopsie boli zafarbené na C3c (A, C, E, G) a C1q (B, D, F, H) pomocou imunohistochémie (hnedé farbenie). Reprezentatívne obrázky glomerulárneho a tubulointersticiálneho ukladania C3c a C1q ukazujú príklady rôznych skóre ukladania komplementu. Žiadne farbenie na C3c v nulových biopsiách (A) a C1q pri akútnej tubulárnej nekróze (B). Príklady glomerulárnej depozície C3c pri hypertenznej/ischemickej NP, skóre 1 (C) a depozície C1q v triede II LN, skóre 2 (D). Výraznejšia depozícia C3c v IgAN, skóre 4 (E) a depozícia C1q, skóre 4, v inom prípade triedy II LN (F). Ukladanie C3c v tubulointersticiálnom kompartmente pri intersticiálnej nefritíde, skóre 4 (G) a ukladanie C1q, skóre 4 (H) v prípade postinfekčnej GN. Mierka predstavuje 100 um. LN, lupusová nefritída; GN, glomerulonefritída.

Obr. 4. Ukladanie a expresia komplementu v obličkách v rôznychobličkychoroby. Semikvantitatívna analýza glomerulárneho farbenia C3c (A) a C1q (B) vo vybranýchobličkovéchoroby. IgAN, MGN, LN, DN, FSGS a biopsie z aloštepov transplantovanej obličky darovaných od nehypertenzných darcov (0-biopsia) slúžili ako kontroly. Údaje z databázy Nephroseq ukázali glomerulárnu expresiu C3c (C) a C1q (D) mRNA v rôznychobličkovéchorobya príslušná kontrolná skupina, to znamená HLD. V tubulointersticiálnom kompartmente bol primárne C3c (E) detegovaný v renálnych biopsiách od pacientov s rôznymi chorobami. Významné rozdiely sú označené hviezdičkami: *p < 0.05;="" **p="">< 0,01="" a="" ***p="">< 0,001="" indikujú="" významné="" rozdiely="" oproti="" nulovým="" biopsiám.="" gn,="" glomerulonefritída;="" mgn,="" membránový="" gn;="" ln,="" lupusová="" nefritída;="" fsgs,="" fokálna="" segmentálna="" glomeruloskleróza;="" dn,="" diabetická="" nefropatia;="" hld,="" zdravý="" žijúci="" darca;="" igan,="" iga="">

Renálna depozícia C3c a C1q je významne zvýšená u hypertonikov v porovnaní s normotenznými pacientmi

Aby sme zistili, či je prítomnosť vysokého TK u pacientov spojená s ukladaním komplementu v obličkách, analyzovali sme biopsie od normotenzných a hypertenzných pacientov s rôznymiobličkychorobya porovnali ich s ukladaním komplementu v nulových biopsiách z transplantovaných obličkových aloštepov darovaných od nehypertenzných darcov (nulové biopsie). V IgAN, najrozšírenejšom GN v našom regióne [27], len biopsie od pacientov s hypertenziou mali signifikantne vyššie glomerulárne (obr. 5A) a tubulointersticiálne C3c (obr. 5C), ako aj glomerulárnu depozíciu C1q (obr. 5E), v porovnaní s nulovými biopsiami. Keď sme porovnávali depozíciu C3c (obr. 5B, D) a C1q (obr. 5F) v renálnych biopsiách celej kohorty, normotenzné aj hypertenzné vzorky vykazovali významne zvýšenú reaktivitu v porovnaní s kontrolami. Navyše v biopsiách glomerulárnych a tubulointersticiálnych pacientov s hypertenziou bol C3c významne vyšší ako u normotenzných pacientov (obr. 5B, D). Keďže tubulárna depozícia C1q bola nízka vo všetkých skúmaných biopsiách, nepozorovali sme žiadne rozdiely medzi skupinami ani v IgAN (obr. 5G), ani v analýze všetkých vyšetrovaných prípadov (obr. 5H). Naše údaje preto naznačujú, že najmä ukladanie C3c sa zdá byť relevantné pri hypertenziiobličkovéchoroby.

Obr. 5. Ukladanie komplementu v obličkách v biopsiách obličiek od hypertenzných a normotenzných pacientov. Ukladanie C3c sa analyzovalo v biopsiách od pacientov s IgAN (A, C) a všetkých skúmaných biopsiách sobličkovéchoroby(B, D) oddelené u pacientov s normálnym TK a vysokým TK v porovnaní s biopsiami z transplantovaných obličkových aloštepov darovaných od nehypertenzných darcov (nulové biopsie) ako kontroly v glomerulárnom (A, B) a tubulointersticiálnom (C, D) kompartmente. Podobne sa depozícia C1q analyzovala aj v biopsiách od pacientov s IgAN (E, G) a všetkých skúmaných biopsiách sobličkychoroby(F, H) v glomerulárnom (E, F) a tubulointersticiálnom (G, H) kompartmente. Významné rozdiely sú označené hviezdičkami: *p < {{0}}.05;="" **p="">< 0,01="" a="" ***p="">< 0,001="" naznačujú="" významné="" rozdiely.="" bp,="" krvný="">

Ukladanie komplementu obličiek je spojené s poškodením a funkciou obličiek

Hodnotenie histopatologických zmien, hodnotené glomerulosklerózou (obr. 6A), skóre tubulointersticiálneho poškodenia (obr. 6B) a VSI (obr. 6C), ukázalo signifikantne vyššie poškodenie obličiek v biopsiách od pacientov s dokumentovanou hypertenziou ako u normotenzných pacientov. Rozsah glomerulárneho ukladania C3c pozitívne koreloval s glomerulosklerózou (obr. 6D) a tubulointersticiálnym C3c s tubulointersticiálnym poškodením (obr. 6E) a VSI (obr. 6F), čo naznačuje, že ukladanie komplementu je spojené s chronickým poškodením obličiek. Okrem toho, intersticiálna fibróza/tubulárna atrofia (IF/TA) bola významne vyššia v renálnych biopsiách hypertenzných pacientov (obr. 6G) a dobre korelovala s rozsahom tubulárnej depozície C3c (obr. 6J). Funkcia obličiek, ako bola hodnotená pomocou sérového kreatinínu, bola tiež významne nižšia u pacientov s hypertenziou (obr. 6H) a korelovala s glomerulárnou depozíciou C3c (obr. 6K). Pokiaľ ide o proteinúriu, nezistil sa signifikantný rozdiel medzi normotenznými a hypertenznými pacientmi (obr. 6I). Avšak medzi proteinúriou a glomerulárnou C3c bola slabá korelácia (r=0 0,238; p=0 0,008; obr. 6L). Tieto výsledky potvrdili súvislosť medzi poškodením obličiek, funkciou, ukladaním komplementu a hypertenziou.

Nakoniec sme skúmali, do akej miery bolo ukladanie komplementu závislé od štádia CKD. Ako sa očakávalo, priemerný vek pacientov sa zvýšil s vyšším štádiom CKD (obr. 7A). Naopak, podiel pacientov s hypertenziou bol nezávislý od štádia CKD (obr. 7B), čo potvrdzuje naše vyššie uvedené zistenia. Glomerulárny (obr. 7C) a tubulárny C3c (obr. 7D) boli významne nižšie v štádiách 1 a 2 CKD ako vo vyšších štádiách CKD, zatiaľ čo pri C1q nebola pozorovaná žiadna takáto asociácia (obr. 7E, F).

Obr. 6. Ukladanie komplementu v obličkách v ľudských biopsiách koreluje s poškodením a funkciou obličiek. Poškodenie obličiek hodnotené pomocou GSI (A), TSI (B) a VSI (C) bolo významne zvýšené u pacientov s vysokým TK a GSI korelovalo s glomerulárnou depozíciou C3c (D), TSI korelovalo s tubulointersticiálnym C3c (E) a VSI koreloval s tubulointersticiálnym C3c (F). IF/TA (G) a sérový kreatinín (H) boli zvýšené u pacientov s hypertenziou, zatiaľ čo proteinúria bola podobná v oboch skupinách (I). Tubulárny C3c koreloval s IF/TA (J) a glomerulárny C3c so sérovým kreatinínom (K) a v menšej miere glomerulárny C3c s proteinúriou (L). Významné rozdiely sú označené hviezdičkami: **p < 0.01="" a="" ***p="">< 0,001="" označujú="" významné="" rozdiely="" medzi="" pacientmi="" s="" normálnym="" tk="" a="" vysokým="" tk="" alebo="" signifikantné="" korelácie.="" bp,="" krvný="" tlak;="" gsi,="" glomeruloskleróza;="" tsi,="" tubulointersticiálne="" poškodenie;="" vsi,="" poranenie="" ciev;="" if/ta,="" intersticiálna="" fibróza/tubulárna="">

Obr. 7. Renálna depozícia C3 v ľudských biopsiách, ale nie hypertenzia, koreluje so štádiom CKD. Priemerný vek pacientov s CKD sa zvyšoval so zvyšujúcim sa štádiom CKD (A), zatiaľ čo percento pacientov s hypertenziou nesúviselo so štádiom CKD (B). C3c (C, D), ale nie C1q (E, F), pekne koreluje s rôznymi štádiami CKD. Glomerulárny C3c (C), tubulárny C3c (D), glomerulárny C1q (E) a tubulárny C1q (F). Významné rozdiely sú označené hviezdičkami: *p < 0.{{10}}5;="" **p="">< 0,01;="" a="" ***p="">< 0,001="" označujú="" významné="" rozdiely="" medzi="" skupinami="" spojenými="">

Diskusia

ProgresiaobličkovéchorobaUkázalo sa, že najmä tubulointersticiálne poškodenie je aspoň čiastočne sprostredkované aktiváciou komplementu [28], ale úloha ukladania komplementu pri hypertenzii a poškodení obličiek je stále nejasná. V našej štúdii sme zistili zvýšené ukladanie faktorov komplementu v obličkách, najmä C3c, ktoré silne korelovalo so zvýšeným poškodením obličiek a nižšou funkciou obličiek. Navyše veľmi častoobličkychorobaje spojená s výskytom hypertenzie, ktorá je sama osebe spojená so zvýšeným rizikom kardiovaskulárnych ochorení a progresiou CKD [9]. Tu sme preukázali vyššiu renálnu depozíciu produktov štiepenia komplementu C1q, ako marker klasickej aktivačnej dráhy, a C3c, zložku všetkých 3 aktivačných dráh, v obličkách od hypertonikov s rôznymiobličkovéchorobynež normotenzných pacientov. Existujú určité dôkazy, že komplement hrá dôležitú úlohu pri rozvoji a zhoršovaní hypertenzie, ale úloha ukladania komplementu v obličkách v tomto procese nie je známa. V ľudských obličkových biopsiách a našom modeli hypertenzného preťaženia potkanov sa ukázalo, že C3c je detegovateľný častejšie ako C1q, čo naznačuje, že klasická dráha nie je výlučne zodpovedná za aktiváciu komplementu vobličkové choroba. Zistilo sa však, že C1q sa kriticky podieľa na hypertenznej arteriálnej remodelácii prostredníctvom aktivácie -katenínovej signalizácie [29]. Otázka, či komplement indukuje hypertenziu alebo hypertenzia aktivuje komplement, zostáva dodnes nejasná. V tejto štúdii sme pozorovali silnú koreláciu medzi ukladaním komplementu v obličkách, najmä faktora C3c, so stupňom poškodenia a funkcie obličiek. Hypertenzia s najväčšou pravdepodobnosťou vedie k ďalšej aktivácii komplementového systému, ale existujú správy podporujúce hypotézu, že komplement nie je len sekundárny, ale je aj príčinou hypertenzie. V longitudinálnej štúdii so sledovaním 15 rokov bol výskyt hypertenzie signifikantne vyšší u pacientov so zvýšenými plazmatickými hladinami komplementu C3 na začiatku liečby, čo naznačuje úlohu plazmatického C3 v patogenéze hypertenzie [10]. Okrem toho pacienti s arteriálnou hypertenziou rezistentnou na liečbu mali významne vyššie plazmatické hladiny C3 v porovnaní s pacientmi s kontrolovanou hypertenziou [11]. Naopak, v populačnej kohortovej štúdii boli zvýšené hodnoty C3 v plazme spojené so zvýšeným výskytom prvej hospitalizácie v dôsledku CKD, ale nezávisle od TK [12]. Posledná štúdia sa však obmedzila na skúmanie plazmatických hladín C3, zatiaľ čo lokálna expresia faktorov komplementu a aktivácia komplementu sa neskúmali. Produkty štiepenia C3, to znamená C3c, boli nielen pasívne uložené, ale C3 mRNA bola tiež lokálne exprimovaná v chorých obličkách od hypertenzných pacientov a potkanov SNX. Neurčili sme však zdroj obličkového C3, ale existujú správy, že okrem pečene je väčšina C3 mRNA exprimovaná v monocytoch a makrofágoch [30]. Okrem toho sa uvádza, že fibroblasty, epitelové a endotelové bunky sú tiež potenciálnymi extrahepatálnymi zdrojmi C3- [31]. Aktivácia komplementu bola tiež pozorovaná v modeli hypertenzie indukovanej angiotenzínom II u myší. U spontánne hypertenzných potkanov by nedostatok C3 mohol odstrániť hypertenziu citlivú na soľ [18], čo naznačuje, že C3 sa kriticky podieľa na dráhach indukujúcich hypertenziu. Tieto účinky však môžu byť sprostredkované aj ďalej po prúde v komplementovej kaskáde. Použitím myší s deficitom C5a receptora (C5aR) Zhang et al. [32] preukázali, že C5aR-signalizácia hrá patologickú úlohu pri zápale srdca a remodelácii. Hoci inhibícia C5aR neovplyvnila zvýšený TK indukovaný angiotenzínom II, poškodenie srdca hodnotené srdcovou hypertrofiou, zápalom a perivaskulárnou fibrózou sa mohlo znížiť [33]. V našom modeli hypertenzie potkanov SNX sme potvrdili, že ukladanie komplementu v obličkách dobre koreluje s poškodením obličiek, ale aj s hypertrofiou srdca a BP. Hypertenzia vyvolaná komplementom bola sprostredkovaná receptormi komplementu pre C3a a C5a. Regulačné Tregs môžu inhibovať aktiváciu efektorových Tregs a majú protizápalové účinky. V modeli hypertenzie indukovanej angiotenzínom II sa ukázalo, že Tregs je dôležitým modulátorom BP a prevenciou poškodenia koncových orgánov [15, 34]. Liečba angiotenzínom II stimulovala expresiu C3a a C5a receptora na Tregs, čo viedlo k zníženiu počtu Tregs u myší divokého typu, ale nie u myší s dvojitým knockoutom C3a a C5a receptorov [35]. Okrem toho sa u týchto myší s dvojitým knockoutom vyvinula otupená hypertenzia a menej renálnej fibrózy a glomerulárneho poškodenia [35]. Asociácia aktivácie komplementu a glomerulárneho poškodenia a renálnej fibrózy, ako bola hodnotená glomerulosklerózou a IF / TA, bola tiež potvrdená v našej štúdii biopsie. Mechanicky bolo zvýšenie TK indukované C3-sprostredkovanou aktiváciou systému renín-angiotenzín v bunkách hladkého svalstva ciev s downstream molekulami, ako je TGF-ß/PDGF-A a zmenou fenotypu mezenchymálnych buniek a indukciou epitelu -k-mezenchymálny prechod [31]. Komplementová signalizácia bola zameraná aj pri iných hypertenzných ochoreniach. V normálnej gravidite je aktivácia komplementu prítomná, ale pri hypertenzných poruchách gravidity je nadmerná a zdá sa, že genetické polymorfizmy komplementových proteínov predisponujú k preeklampsii [36]. Inhibícia signalizácie komplementu liečbou solubilným komplementovým receptorom 1 viedla k oslabeniu hypertenzie v modeli preeklampsie placentárnej ischémie [37].

Obmedzenia štúdie

Hoci sme sa snažili posilniť naše zistenia v ľudských obličkových biopsiách rôznychobličkovéchorobys arteriálnou hypertenziou a bez nej pomocou začlenenia vhodného zvieracieho modelu na preukázanie asociácie medzi ukladaním komplementu v obličkovom tkanive a hypertenziou, musíme uznať niekoľko obmedzení a výberových skreslení. V štúdii na ľuďoch čelíme obmedzeniu variabilnej kohorty s mnohými rôznymi mätúcimi faktormi, ktoré nemožno jasne identifikovať alebo vylúčiť. Aby sme sa zaoberali týmto aspektom a harmonizovali študijnú skupinu, analyzovali sme aj koreláciu komplementu s renálnou fibrózou (IF/TA) ako náhradného markera straty nefrónov a progresie základného ochorenia.obličkovéchorobaako aj so štádiami CKD, kde by sme mohli preukázať podobné nálezy. Navyše, údaje o trvaní príslušných chorôb alebo aktuálnej lekárskej liečbe neboli systematicky dostupné, takže tieto aspekty sú ďalším možným mätúcim faktorom, ktorý musíme spomenúť. Keďže sme formálne vylúčili tých niekoľko pacientov bez klinicky dobre zdokumentovaného BP, je pravdepodobné, že títo pacienti nemusia mať žiadnu hypertenziu alebo kontrolovanú hypertenziu do tej miery, že by mohli prísť k pravidelnému sledovaniu, čo by mohlo potenciálne spôsobiť skreslenie výberu. Na rozdiel od experimentu na zvieratách v našej ľudskej kohorte proteinúria v čase renálnej biopsie nebola konzistentne hlásená u všetkých pacientov, takže do príslušných analýz sme mohli zahrnúť iba 2/3 všetkých pacientov, čo môže ovplyvniť niektoré výsledky. Je potrebné poznamenať, že proteinúria nebola signifikantne vyššia u renálnych pacientov s vysokým TK a bez neho, čo znamená, že významná odchýlka proteinúrie je nepravdepodobná.

Záver

Celkovo vzaté, naša štúdia podčiarkuje silnú súvislosť ukladania komplementu s hypertenziou, ale aj poškodením obličiek u ľudí a experimentálnychobličkovéchoroba. Hoci sme nedokázali odpovedať na otázku, či je ukladanie komplementu príčinou rozvoja hypertenzie, údaje podporujú zapojenie aktivácie komplementu do patogenézy alebo progresie hypertenzie pri rôznychobličky choroby, čo naznačuje potenciálnu úlohu stratégií inhibujúcich komplement pri budúcom manažmente prípadov hypertenzie refraktérnych na liečbu aobličkovéchoroba. Na riešenie presnej úlohy komplementu v patogenéze hypertenzných ochorení sú však potrebné ďalšie štúdie.

Cistanche dokáže liečiťobličkové ochorenie

Od: 'Doplňte vRenálnaChorobaako potenciálny prispievateľ k arteriálnej hypertenziiLisa-Maren Fischer a kol

---Kidney Blood Press Res 2021;46:362–376

Referencie

1 Couser WG. Základné a translačné koncepty imunitne sprostredkovaných glomerulárnych ochorení. J Am Soc Nephrol. 2012 Mar;23 (3): 381–99.

2 Kojouharova M, Reid K, Gadjeva M. Nové poznatky o molekulárnych mechanizmoch klasickej aktivácie komplementu. Mol Immunol. 2010 august;47(13):2154–60.

3 Dobo J, Pal G, Červeňák L, Gal P. Objavujúce sa úlohy serínových proteáz spojených s lektínom (MASP) viažucich manózu v lektínovej dráhe komplementu a mimo nej. Immunol Rev. november 2016;274(1):98–111.

4 Pangburn MK, Schreiber RD, Muller-Eber tvrdý HJ. Tvorba počiatočnej C3 konvertázy alternatívnej komplementovej dráhy. Získanie aktivít podobných C3b spontánnou hydrolýzou predpokladaného tioesteru v natívnom C3. J Exp Med. 1. september 1981;154(3):856–67.

5 Ricklin D, Hajishengallis G, Yang K, Lambris JD. Doplnok: kľúčový systém pre imunitný dohľad a homeostázu. Nat Immunol. september 2010;11(9):785–97.

6 Nozal P, Lopez-Trascasa M. Autoprotilátky proti proteínom alternatívnej dráhy komplementu pri obličkových patológiách. Nefrologia. 2016 Sep-Oct;36(5):489–95. 7 Lau KK, Suzuki H, Novak J, Wyatt RJ. Patogenéza Henoch-Schönleinovej purpury ne fritis. Pediatr Nephrol. 2010 Jan;25(1):19–26.

8 Wenzel U, Turner JE, Krebs C, Kurts C, Harrison DG, Ehmke H. Imunitné mechanizmy pri arteriálnej hypertenzii. J Am Soc Nephrol. 2016 Mar;27(3):677–86.

9 Drawz PE, Beddhu S, Kramer HJ, Rakotz M, Rocco MV, Whelton PK. Meranie krvného tlaku: perspektíva KDOQI. Am J Kidney Dis. marec 2020;75(3):426–34.

10 Engstrom G, Hedblad B, Berglund G, Janzon L, Lindgarde F. Plazmatické hladiny komplementu C3 sú spojené s rozvojom hypertenzie: longitudinálna kohortová štúdia. J Hum Hypertens. 2007 apríl;21(4):276–82.

11 Magen E, Mishal J, Paskin J, Glick Z, Yosefy C, Kidon M a kol. Rezistentná arteriálna hypertenzia je spojená s vyššími hladinami komplementu C3 a C-reaktívneho proteínu v krvi. J Clin Hypertens. september 2008;10(9):677–83.

12 Bao X, Borne Y, Muhammad IF, Schulz CA, Persson M, Orho-Melander M, et al. Doplnok C3 a incidentová hospitalizácia v dôsledku chronicobličkychoroba: populačná kohortová štúdia. BMC Nephrol. 21. februára 2019; 20(1):61.

13 Klanke B, Cordasic N, Hartner A, Schmieder RE, Veelken R, Hilgers KF. Krvný tlak verzus priame mineralokortikoidné účinky na zápal obličiek a fibrózu pri hypertenzii DOCA-soľ. Transplantácia nefrolového číselníka. 2008 november;23(11):3456–63.

14 Chen L, Fukuda N, Shimizu S, Kobayashi H, Tanaka S, Nakamura Y a kol. Úloha komplementu 3 pri tvorbe renínu počas diferenciácie mezenchymálnych kmeňových buniek na bunky hladkého svalstva. Am J Physiol Cell Physiol. 1. mája 2020; 318(5): C981–C990.

15 Kvakan H, Kleinewietfeld M, Qadri F, Park JK, Fischer R, Schwarz I, et al. Regulačné T bunky zlepšujú poškodenie srdca vyvolané angiotenzínom II. Obeh. 9. júna 2009;119(22): 2904–12.

16 Ruan CC, Ge Q, Li Y, Li XD, Chen DR, Ji KD a kol. Komplementom sprostredkovaná polarizácia makrofágov v perivaskulárnom tukovom tkanive prispieva k vaskulárnemu poškodeniu u myší s deoxykortikosterónacetátom a soľou. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2015 Mar;35(3):598–606.

17 Carney EF. Hypertenzia: úloha C3aR a C5aR v Treg bunkách. Nat Rev Nephrol. 2018 apríl; 14(4):214.

18 Negishi E, Fukuda N, Otsuki T, Katakawa M, Komatsu K, Chen L a kol. Zapojenie komplementu 3 do hypertenzie citlivej na soľ aktiváciou renálneho renín-angiotenzínového systému u spontánne hypertenzných potkanov. Am J Physiol Renálny Physiol. 1. decembra 2018; 315(6):F1747–F1758.

19 Dimmler A, Haas CS, Cho S, Hattler M, Forster C, Peters H a kol. Mikrodisekcia laserového záchytu a PCR v reálnom čase na analýzu expresie génu glomerulárneho endotelínu-1 pri mesangiolýze potkanej anti-Thy 1.1 a glomerulonefritídy z hadieho jedu Habu. Diagn Mol Pathol. jún 2003;12(2):108–17.

20 Diez M, Abdelmagid N, Harnesk K, Strom M, Lidman O, Swanberg M a kol. Identifikácia génových oblastí regulujúcich zápalovú mikrogliálnu odpoveď v CNS potkana po poškodení nervu. J Neuroimmunol. 25. júla 2009;212(1–2):82–92.

21 Hainz N, Thomas S, Neubert K, Meister S, Benz K, Rauh M, et al. Inhibítor proteazómu bortezomib zabraňuje lupusovej nefritíde na myšom modeli NZB/W F1 zachovaním glomerulárnej a tubulointersticiálnej architektúry. Nephron Exp Nephrol. 2012; 120(2):e47-58.

22 Solez K, Racusen LC. Prehodnotená Banffova klasifikácia. Kidney Int. 2013 február;83(2):201–6.

23 Usmernenie klinickej praxe KDIGO pre manažment krvného tlaku u chronickýchobličkychoroba. Kidney Int Suppl. 2012 december; 2(5):343.

24 Levey AS, Stevens LA, Schmid CH, Zhang YL, Castro AF 3rd, Feldman HI, a kol. Nová rovnica na odhad rýchlosti glomerulárnej filtrácie. Ann Intern Med. 5. mája 2009;150(9):604–12.

25 Skupina KCW. KDIGO 2012 usmernenie klinickej praxe pre hodnotenie a manažment chronickýchobličkychoroba. Kidney Int Suppl. 2013;3:1–150.

26 Ju W, Greene CS, Eichinger F, Nair V, Hodgin JB, Bitzer M a kol. Definovanie špecificity bunkového typu na transkripčnej úrovni pri ľudských chorobách. Genome Res. 2013 Nov;23(11):1862–73.

27 Barratt J, Feehally J, Smith AC. Patogenéza IgA nefropatie. Semin Nephrol. 2004 máj;24(3):197–217.

28 Hsu SI, Couser WG. Chronická progresia tubulointersticiálneho poškodenia pri proteinuriiobličkovéchorobaje sprostredkovaná aktiváciou komplementu: terapeutická úloha inhibítorov komplementu? J Am Soc Nephrol. 2003 Júl;14(7 Suppl 2): ​​S186–91.

29 Sumida T, Naito AT, Nomura S, Nakagawa A, Higo T, Hashimoto A a kol. Aktivácia -katenínovej signalizácie indukovaná komplementom C1q spôsobuje hypertenznú arteriálnu remodeláciu. Nat Commun. 2015;6:6241.

30 de Bruijn MH, Fey GH. Komponent ľudského komplementu C3: cDNA kódujúca sekvencia a odvodená primárna štruktúra. Proc Natl Acad Sci US A. 1985 feb;82 (3): 708–12.

31 Chen L, Fukuda N, Matsumoto T, Abe M. Úloha komplementu 3 v patogenéze hypertenzie. Hypertens Res. apríla 2020; 43 (4): 255-62.

32 Zhang C, Li Y, Wang C, Wu Y, Cui W, Miwa T a kol. Receptor komplementu 5a sprostredkuje angiotenzínom II-indukovaný srdcový zápal a remodeláciu. Arterioscler Thromb Vasc Biol. jún 2014;34(6):1240–8.

33 Zhang C, Li Y, Wang C, Wu Y, Du J. Antagonista C5aR zabraňuje remodelácii srdca pri hypertenzii indukovanej angiotenzínom II. Am J Hypertens. jún 2014;27(6):857–64.

34 Barhoumi T, Kasal DA, Li MW, Shbat L, Lau rant P, Neves MF a kol. T regulačné lymfocyty zabraňujú angiotenzínom II indukovanej hypertenzii a vaskulárnemu poškodeniu. Hypertenzia. 2011 Mar;57(3):469–76.

35 Chen XH, Ruan CC, Ge Q, Ma Y, Xu JZ, Zhang ZB a kol. Nedostatok receptorov komplementu C3a a C5a zabraňuje hypertenzii indukovanej angiotenzínom II prostredníctvom regulačných T buniek. Circ Res. 30. marec 2018;122(7):970–83.

36 Regal JF, Burwick RM, Fleming SD. Systém komplementu a preeklampsia. Curr Hypertens Rep. 2017 Október 18;19 (11):87.

37 Regal JF, Lund JM, Wing CR, Root KM, Mc Cutcheon L, Bemis LT a kol. Interakcie medzi komplementovým a endotelínovým systémom v normálnom tehotenstve a po placentárnej ischémii. Mol Immunol. október 2019;114: 10.–8.