Účinky polysacharidu Cistanche Deserticola na imunitné bunky a aktivitu telomerázy u starnúcich myší

Zhang Hongquan, Li Yuan, Song Yuanyuan (Inštitút medicíny, Univerzita Yangzhou, Yangzhou 225001, Jiangsu)

Abstraktné: Cieľ Študovať účinky polysacharidu z Cistanche deserticola (PCD) na obsah malondialdehydu (MDA), telomerázovú aktivitu a imunitnú funkciu v tkanive myší so subakútnym starnutím. Metódy Subakútny model starnutia myší bol indukovaný D-galaktózou. Obsah MDA sa detegoval kolorimetriou s kyselinou tiobarbiturovou; Telomerázová aktivita bola detegovaná pomocou PCR-ELISA; Reakcia proliferácie lymfocytov bola meraná metódou MTT; Fagocytárna funkcia myších peritoneálnych makrofágov sa merala neutrálnym červeným testom; Obsah IL-2 v sére bol stanovený enzýmovou imunoanalýzou (ELISA). Výsledky Obsah MDA v srdci, pečeni a mozgu modelovej skupiny sa významne zvýšil, zatiaľ čo aktivita telomerázy, proliferačná reakcia lymfocytov, fagocytóza peritoneálnych makrofágov a obsah IL-2 v periférnej krvi sa významne znížili. Po podaní PCD sa obsah MDA v srdci, pečeni a mozgu myší výrazne znížil a aktivita telomerázy v srdci a mozgovom tkanive, proliferačná reakcia lymfocytov, fagocytóza peritoneálnych makrofágov a obsah IL-2 v periférna krv sa výrazne zvýšila. Záver PCD môže antagonizovať poškodenie voľnými radikálmi, zvýšiť aktivitu telomerázy v srdcovom a mozgovom tkanive a imunitnú funkciu starnúcich myší a zlepšiť starnutie vyvolané D-galaktózou.

Kľúčové slová: Cistanche deserticolapolysacharid; malondialdehyd; telomeráza;Imunizácia; byť senilný

Doplnok Cistanche blízko mňa— Zlepšiť imunitu

Kliknite sem pre zobrazenie produktov Cistanche Enhance Immunity

【Ask for more】 Email: xue122522@foxmail.com /  Whats App:  0086 18599088692 /  Wechat:  18599088692

Klasifikácia čínskej knižnice č.: Kód dokumentu R284: A Číslo článku: 1001-2494 (2011) 14-1081-05

Cistanche deserticola je sušená dužinatá stonka s fosforečnými listami Cistanche deserticola, ktorá má funkciu tonizácie pečene a obličiek a prospieva esencii a čchi [1]. Polysacharid Cistanche deserticola je surový polysacharid oddelený od Cistanche deserticola, ktorý je odstránený z malých molekulárnych nečistôt rozpustných vo vode, deproteinovaný metódou Sevag a opakovane ošetrený vodou a alkoholom, čím sa získa PCD [2]. Tento experiment začína imunitnou teóriou a telomérovou teóriou starnutia a využíva myšací model starnutia D-galaktózy na pozorovanie účinku PCD na obsah malondialdehydu (MDA) a telomerázovú aktivitu v srdci, pečeni a mozgu a predbežne skúmal jeho mechanizmus.

1.materiál a metódy

1.1 Zvieratá, lieky, činidlá a nástroje

3-mesačné myši ICR, čistého stupňa, 26-32g, polovica samcov a polovica samičiek [Centrum experimentálnych zvierat univerzity Yangzhou, číslo certifikátu kvality experimentálnych zvierat: SCXK (Su) 2002-0009] . Teplota v miestnosti je 20 ~ 25 stupňov, prirodzené osvetlenie a prostredie je vhodné na kŕmenie jeden týždeň pred experimentom. PCD poskytuje Nanjing Wildlife Research Institute a rozpúšťa sa v destilovanej vode; D-galaktóza (D-Gal, Shanghai Second Reagent Factory); Testovacia súprava telomerázovej aktivity (MB Company, USA); Detekčná súprava MDA a súprava IL{8}} ELISA pre myši (Nanjing Jiancheng Biological Engineering Research Institute). ELX800UV enzýmový marker (BIO-TEK, USA); PT-MR3100D tkanivový homogenizátor (Polytron, Švajčiarsko); Stolná mraziaca odstredivka MODEL550 (Eppendorf, Nemecko); Elektronická váha BP110S (Sartorius, Nemecko).

Cistanche deserticola— Zlepšiť imunitu

1.2 Zoskupovanie zvierat, príprava modelu a podávanie

Model starnúcej myši bol pripravený podľa metódy v literatúre [3]. 10 percent D-Gal sa pripravilo s vodou na injekciu a 10 ml · kg-1 sa subkutánne injikovalo do krku a chrbta myší raz denne počas 6 týždňov. Myši boli náhodne rozdelené do piatich skupín: normálna kontrolná skupina, modelová kontrolná skupina, skupiny PCD25, 50 a 100 mg · kg-1 (skupiny PL, PM, PH), pričom v každej skupine bolo 12 myší. Myši v modelovej skupine a skupine, ktorej sa podávala PCD, boli založené podľa zákona a sondou sa podávali PCD25, 50 a 100 mg · kg-1 s objemom 20 ml · kg-1 každý deň. Normálnym kontrolným myšiam bol injekčne podaný rovnaký objem vody na injekciu a sondou bol podaný rovnaký objem normálneho fyziologického roztoku.

1.3 Stanovenie obsahu MDA a telomerázovej aktivity

24 hodín po poslednom podaní sa vybrala očná buľva a odobrala sa krv, myši sa usmrtili, srdce, pečeň a mozog sa rýchlo vybrali a pri nízkej teplote sa odstredil čerstvý tkanivový homogenát a odobral sa supernatant. Obsah MDA sa stanovil kolorimetriou s kyselinou tiobarbiturovou. Telomerázová aktivita bola detegovaná pomocou PCR-ELISA. Prevádzkové kroky sa uskutočňovali podľa pokynov na súprave. Hodnota A bola meraná pri 450 nm enzýmového markera.

1.4 Stanovenie proliferačnej reakcie lymfocytov [4]

Vyberte myšaciu slezinu asepticky na ultračistom pracovnom stole, pripravte suspenziu buniek myšacej sleziny a upravte hustotu buniek na 1 × 109 · L-1, konkanavalín A (ConA) sa kultivoval ako stimulátor in vitro na 48 hodín a reakcia bunkovej proliferácie sa merala metódou MTT. Hodnota A sa merala pri vlnovej dĺžke 570 nm meranej enzýmovým linkerom a výsledok sa vyjadril ako stredná hodnota troch komplexných otvorov A.

1.5 Stanovenie fagocytárnej funkcie peritoneálnych makrofágov neutrálnou červenou metódou

Cistanche mužské výhody-Impreukázať imunitu

24 hodín po poslednom podaní boli myši dekapitované a usmrtené. Peritoneálna tekutina myší sa asepticky zhromaždila a odstredila pri 1000r.min-1, bunky sa trikrát premyli Hanksovým roztokom a bunková suspenzia sa pripravila s 1640 kultivačným roztokom. Vezmite 3 ml a vložte do kultivačnej misky, kultivujte pri 37 stupňoch a 5 percentách CO2 počas 2 hodín. Makrofágy priľnú k povrchu nádoby, nafúknu a nasajú 4-stupňovým Hanksovým roztokom, odoberú priľnuté bunky, spočítajú na doštičke na počítanie krviniek a upravia hustotu buniek na 2 × 109 buniek · L-1, kultivovaných v v 37 stupňovom inkubátore počas 2 hodín, supernatant a neadherentné bunky sa odstránili. Vezmite adherentné makrofágy, pridajte 0,1 percenta neutrálneho červeného fyziologického roztoku, pokračujte v kultivácii pri 37 stupňoch počas 30 minút, zlikvidujte neutrálnu červenú, opakovane premyte makrofágy PBS pri 37 stupňoch, zrieďte objemom 50 percent kyseliny octovej a 50 percent etanolu a zmerajte hodnota A.

1.6 Stanovenie sérovej hladiny IL-2

Odoberte krv z očnej buľvy, odstreďte (3000r · min-1, 10 minút), aby ste oddelili sérum, a stanovte obsah IL-2 v sére pomocou enzýmovej imunoanalýzy (ELISA). Konkrétna operácia je podľa návodu k súprave. Hladina IL-2 v sére myší v každej skupine sa deteguje pri 450 nm enzýmového markera.

1.7 Štatistická analýza

Údaje boli spracované pomocou SPSS11.0 a namerané údaje boli vyjadrené s priemerom ± štandardná odchýlka (x ± s) pomocou jednosmernej ANOVA a medziskupinového t-testu.

Púštny ženšen -Impreukázať imunitu

2.Výsledky

2.1 Vplyv PCD na obsah MDA v srdci, mozgu a pečeni starnúcich myší

Bola významne vyššia ako u normálnej kontrolnej skupiny (P<0.01). After intragastric administration of PCD25, 50 and 100 mg · kg-1, the content of MDA in the heart, brain, and liver of mice decreased in a dose-dependent manner compared with the model group (P<0.01, P<0.05), and the content of MDA in the high-dose group was close to the normal level (Table 1).

2.2 Vplyv PCD na aktivitu telomerázy v srdci, mozgu a pečeňových tkanivách starnúcich myší

Compared with the normal control group, the telomerase activity of the heart, liver, and brain tissue in the model group was significantly reduced. After intragastric administration of PCD, the activity of telomerase in heart and brain tissue was increased in a dose-dependent manner, and the level of the high dose group was close to that of the normal control group. There was no significant effect on telomerase activity in the liver tissue of aging mice (P>0.05) (tabuľka 2). 2.3 Účinky PCD na reakciu proliferácie lymfocytov, fagocytózu peritoneálnych makrofágov a obsah sérového IL-2 u starých myší boli významne nižšie ako v normálnej kontrolnej skupine (P<0.01). After intragastric administration of PCD, the lymphocyte proliferation reaction, peritoneal macrophage phagocytosis and serum IL-2 content of aging mice increased in dose dependence, which was significantly different from the model group (P<0.01, P<0.05) (Table 3).

3.Diskusia

Presný mechanizmus starnutia je stále nejasný. V priebehu rokov vedci doma aj v zahraničí predložili desiatky teórií starnutia, ako je teória voľných radikálov. Molekulárny kyslík je potrebný na prežitie organizmov a živiny v organizmoch uvoľňujú energiu oxidáciou. Oxidačný stav buniek hrá dôležitú úlohu pri starnutí, výskyte nádorov a vývoji. Voľné radikály sa však budú tvoriť v niektorých oxidačných procesoch a starnutie úzko súvisí s abnormálnymi reakciami voľných radikálov. Keď sa v tele nahromadí príliš veľa voľných radikálov, spôsobí to peroxidáciu nenasýtených mastných kyselín v tele, najmä v biologickej membráne, čo má za následok zmeny v štruktúre bunkovej membrány, poškodenie funkcie membrány a produkciu MDA. a lipofuscín (LPF) [5].

MDA je mimoriadne aktívne sieťovacie činidlo. Môže sa kovalentne zosieťovať s proteínmi, enzýmami a voľnými aminokyselinami na nukleových kyselinách za vzniku Schiffových báz. Kvôli svojim abnormálnym väzbám nemôže byť po prehltnutí lyzozómami trávený hydrolázou a môže sa zhromažďovať v bunkách a vytvárať lipofuscín, ktorý môže otráviť bunky, blokovať prenos látok a správ v bunkách a viesť k jadrovému zrýchleniu starnutie a smrť buniek.

Preto môže byť MDA použitý ako spoľahlivý indikátor starnutia orgánov a buniek. Teória telomér verí, že dĺžka chromozómu (teloméra) na vrchole chromozómu úzko súvisí so starnutím a dĺžkou života. Dĺžka teloméry je asi 2 až 15 kb. Kvôli problému terminálnej replikácie telomérová DNA stratí 50 až 200 bp zakaždým, keď sa DNA skopíruje. S nárastom počtu bunkových delení sa telomérová DNA bude postupne skracovať. Keď sa skráti na určitú hranicu, neudrží si stabilitu sfarbenia a bunka stratí schopnosť deliť sa a množiť sa a zomrieť starnutím. Toto skrátenie je znakom starnutia [6]. Bunka vstupuje do štádia proliferatívneho zlyhania a bunka naďalej prežíva, ale nemôže sa deliť a proliferovať [7]. Preto sú teloméry známe aj ako „biologické hodiny“ buniek a starnutie buniek určuje starnutie celého tela. Brymov výskum zistil, že dĺžka teloméry súvisí s aktivitou telomerázy. Čím vyššia je aktivita telomerázy, tým dlhšia je teloméra, tým lepšia je stabilita a integrita chromozómov, tým dlhší je čas delenia buniek a tým dlhšia je životnosť.

Doplnok Cistanche v mojej blízkosti—Zlepšenie imunity

Imunitný systém ako kompletný a autonómny systém zohráva dôležitú úlohu pri udržiavaní a úprave životných aktivít a pokles imunitných funkcií je najvýraznejšou črtou starnutia. Imunitná dysfunkcia môže urýchliť starnutie tela[8]. Výsledky tohto experimentu to ukázaliPCD by mohlo významne znížiť obsah MDA v tkanivách srdca, mozgu a pečene, zvýšiť aktivitu telomerázy v srdcovom a mozgovom tkanive starnúcich modelových myší, ako aj reakciu proliferácie lymfocytov, fagocytózu peritoneálnych makrofágov a obsah IL{{0 }} v periférnej krvi starnúcich myší. Možno konštatovať, že PCD má dobrú úlohu pri antagonizácii poškodenia voľnými radikálmi, môže podporovať proliferáciu lymfocytov, zlepšovať nešpecifickú bunkovú imunitu a imunitnú regulačnú funkciu tela a zohrávať úlohu pri oddialení starnutia tela.

LITERATÚRA

[1] MAZG.Different of Processed Cistanche sinensis G.Beck a Herba Cistanche pomocou odtlačkov HPLCF[ J] .ChinPharmJ, 2011, 46(12):899-902.

[2] SHIHF, LINAP, ZHANGHQ, etal. Účinok polysacharidov z Cistanche deserticola YCMa na potkany so syndrómom nedostatku sleziny[ J] .Chin Wild Plant Res, 2000, 19(6):49-51.

[3] XUSY, BIANRL, CHENX. Metóda farmakologických experimentov)[ M] .Vol 3. Peking:People's Medical Publishing House, 2002:1465-1466.

[4] LIUYQ, SUW, WUJJ, et al. Vplyv extrakcie cynomorium coccineum na imunitnú funkciu a metabolizmus voľných radikálov starnúcich myší[J] .JCell MolI mmunol=, 2009, 25(1):1155-1157 .

[5] YANGHJ, WANGZL, XUESH. Pokrok v štúdiách mechanizmu starnutia[ J] .Chin J Control Endem Dis=, 2008, 23(1):35-37.

[6] YANGJ, ZHANXH, SUNY, et al. Účinok sijunzidecoction na obsah malondialdehydu a telomerázovú aktivitu v srdci, pečeni a mozgovom tkanivesodD-galaktózou indukované starnutie modelových myší[J] .ChinJ Integr Tradit Chin West Med=, 2005, 25 (6):531-533.

[7] ZHANGXH, ZHANGJN. Teloméra, telomeráza, starnutie a rakovina[ J] .IntJGenetics=, 2007, 30(1):69-71.

[8] SONGSX, LVZJ. Pokrok vo výskume starnutia buniek T,B a ich molekulárneho mechanizmu[J] .JCell MolI mmunol, 2002, 18(3):306-308.