Enzymatická hydrolýza bola vyvinutá pre príslušné komerčné enzýmy potravinárskej kvality

Prosím kontaktujteoscar.xiao@wecistanche.comPre viac informácií

2.2. Vplyv ultrafiltrácie na vlastnosti kolagénového hydrolyzátu

Ultrafiltračný proces môže byť užitočnou, priemyselne výhodnou metódou na produkciu malých peptidových frakcií s požadovanou veľkosťou molekuly a vysokou bioaktivitou, v závislosti od zloženia východiskového hydrolyzátu a aktivity, ktorá sa študuje [19]. Je uvedená rozpustnosť, obsah voľných aminoskupín a výťažok CH po lyofilizácii (tabuľka 1). Rozpustnosť a obsah voľných aminoskupín kontroly boli 11,95 percent a 0,79 percent, v tomto poradí. Po enzymatickej hydrolýze a ultrafiltrácii s medznou hodnotou molekulovej hmotnosti 3 kDa bola najvyššia rozpustnosť (21,17 percenta) a obsah voľných aminoskupín (14,17 percenta) pozorovaný v CH-Alcalase<3 kda.="" however,=""><3 kda="" was="" the="" lowest="" yield="" (12.42%)observed.="" therefore,="" although="" ultrafiltration="" is="" useful="" in="" separating="" chs="" with="" a="" low="" molecular="" weight="" it="" may="" cause="" a="" reduction="" in="">

Priemerná molekulová hmotnosť proteínových hydrolyzátov je dôležitým faktorom, ktorý určuje ich biologické vlastnosti [19]. Vo všeobecnosti priemerný zlomok s MW<3 kda="" represents="" a="" collagen="" hydrolysate;="" an="" average="" fraction="" with="" mw="">50 kDa represents gelatin, and an average fraction with MW>300 kDa predstavuje kolagén [20,21]. Distribúcia relatívnej molekulovej hmotnosti kontroly (vzorka pred úpravou), CH-Alcalase a CH-Alcalase<3 kda="" is="" depicted="" in="" figure="" 4.="" the="" molecular="" weight="" distribution="" was="" over="" 20,100="" da="" for="" the="" control,="" which="" did="" not="" include="" the="" collagen="" hydrolysate=""><3 kda).="" this="" could="" not="" be="" numerically="" provided="" in="" this="" study,="" as="" the="" detection="" limit="" of="" the="" index="" detector="" system="" only="" ranged="" from="" 106="" to="" 20,100="" da.="" however,="" ch-alcalase="" showed="" detectable="" values="" in="" a="" higher="" range="" of="" relative="" molecular="" weight="" distribution,="" which="" ranged="" from="" 20,100="" da="" to="" 4270="" da="" (maximum="" peak:12,600="" da).="" in=""><3 kda,="" the="" molecular="" weight="" distribution="" mainly="" showed="" three="" peaks:="" one="" with="" an="" mw="" of="" approximately="" 4270="" da="" (maximum="" peak),="" one="" with="" an="" mw="" of="" approximately="" 424="" da,="" and="" one="" with="" an="" mw="" of="" approximately="" 222="" da="" and="" 102="" da.="" ultrafiltration="" is="" an="" effective="" purification="" method="" used="" to="" obtain="" low="" molecular="" weight="" peptides="" from="" crude="" hydrolysates.="" results="" indicated="" that="" enzymatic="" hydrolysis="" by="" alcalase="" clearly="" reduced="" the="" high="" mw="" of="" the="" control="" (either="" collagen="" or="" gelatin),="" and="" that="" ultrafiltration="" was="" an="" effective="" purification="" method="" that="" can="" be="" used="" to="" obtain="" low="" molecular="" weight=""><3 kda)="" from="" crude="" collagen="" hydrolysates.="" reportedly,="" low="" molecular="" weight="" peptides="" (2-20="" amino="" acids)="" are="" more="" biologically="" active="" compared="" to="" their="" parent="" polypeptide/proteins,="" which="" are="" larger="">

Ak chcete vedieť viac, kliknite sem

Zloženie aminokyselín v CH je uvedené (tabuľka 2). CHS rôznymi proteázami mala rôzne zloženie aminokyselín a antioxidačné vlastnosti [23]. Aminokyselinové zloženie kolagénu bolo bohaté na glycín (Gly), prolín (Pro) a kyselinu glutámovú (Glu). Obsah aminokyselín v CHs (CH-Alcalase a CH-Alcalase<3 kda)="" increased="" more="" than="" that="" of="" the="" control,="" following="" enzymatic="" hydrolysis="" with="" or="" without="" ultrafiltration.="" in="" particular,="" the="" content="" of="" gly,="" pro,="" and="" glu="" was="" much="" higher="" in=""><3 kda(gly="" 218="" mg/g,="" pro="" 152="" mg/g,="" and="" glu="" 120="" mg/g)="" than="" ch-alcalase(gly149="" mg/g,="" pro="" 95="" mg/g,="" and="" glu78="" mg/g).="" an="" increase="" in="" the="" content="" of="" these="" amino="" acids="" is="" strongly="" related="" to="" enhanced="" antioxidant="" capabilities="" [16,20].="" gly="" and="" pro="" contain="" hydrophobic="" amino="" acid="" groups,="" and="" glu="" contains="" negatively="" charged="" amino="" acid="" groups.="">cistanche stonkaUvádza sa, že tieto aminokyseliny zvyšujú antioxidačnú aktivitu v dôsledku ich zvýšenej rozpustnosti v lipidoch alebo prostredníctvom reakcií voľných radikálov [1,24].

2.3. Antioxidačné a anti-aging aktivity kolagénových hydrolyzátov

Antioxidačné aktivity CH sa merali pomocou testu aktivity zachytávania radikálov 2,2'-a-bis-(3-etylbenzotiazolín-6-sulfónovej kyseliny)(ABTS) a testu zníženia sily. Aktivita ABTS zachytávajúca radikály kontroly (kolagénová suspenzia), CH-Alcalase a CH-Alcalase<3 kda="" at="" different="" concentrations="" is="" shown="" (figure="" 5a).abts="" radical="" scavenging="" activity="" of="" peptides="" assay="" is="" important="" to="" exclusively="" measure="" the="" ability="" of="" an="" antioxidant="" peptide="" to="" induce="" a="" hydrogen="" atom="" transfer="" [25].="" abts="" radical-scavenging="" effects="" of="" all="" treatments="" increased="" in="" a="" concentration-dependent="" manner=""><0.05). ch-alcalase="" and=""><3 kda="" showed="" much="" higher="" abts="" radical-scavenging="" activity="" values,="" with="" 41.4%-88.2%="" compared="" to="" the=""><8.5%. both="" ch-alcalase="" and=""><3 kda="" had="" high="" abtsradical-scavenging="" abilities="" of="" ~60%="" when="" concentrations="" were="" greater="" than="" 2.5="" mg/ml.=""><3 kda="" showed="" a="" significantly="" higher="" abts="" radical-scavenging="" activity="" value="" than="" ch-alcalase.="">cistanche salsa extraktVo všeobecnosti môže byť antioxidačná aktivita peptidov ovplyvnená ich aminokyselinovými sekvenciami, počtom prítomných voľných aminokyselín, stupňom hydrolýzy a molekulovou hmotnosťou peptidov [26,27]. Najmä hydrolyzáty s nízkou molekulovou hmotnosťou mali silnejšie antioxidačné vlastnosti v porovnaní s hydrolyzátmi s vysokou molekulovou hmotnosťou [2,26].

Obrázok 5. Antioxidačné aktivity kolagénových hydrolyzátov (CH) v 2,2'-a-bis-(3-etylbenzotiazolín-6-sulfónovej kyseline) (ABTS) zachytávaní radikálov (A) a redukčnej schopnosti (B) testy. Údaje označené rôznymi písmenami (ac) vykazujú štatisticky významné rozdiely v závislosti od rôznych spôsobov liečby (str<0.05).>výhody a vedľajšie účinky cistanche tubulosaÚdaje označené rôznymi písmenami (AD) ukazujú štatisticky významné rozdiely v závislosti od koncentrácie (p < 0,05).

Cistanche môže proti starnutiu

Redukčné sily kontroly, CH-Alcalase a CH-Alcalase<3 kda="" are="" shown="" (figure="" 5b).="" the="" reducing="" power="" of="" peptides="" may="" also="" serve="" as="" a="" significant="" indicator="" of="" their="" antioxidant="" potential="" [28,29].="" the="" reducing="" power="" of="" chs="" ranged="" from="" 0.074="" to="" 0.424="" in="" a="" dose-dependent="" manner=""><0.05). the="" control="" group="" had="" the="" lowest="" reducing="" power,="" which="" did="" not="" change="" significantly="" with="" increasing="" concentrations="" of="" the="" control.="" in="" contrast="" to="" abts="" radical-scavenging="" activity,="" the="" reducing="" power="" of="" ch-alcalase="" was="" higher="" than="" that="" of=""><3 kda.="">extrakt z cistanche tubulosaPodobné pozorovania naznačujú, že surový kolagénový hydrolyzát môže byť účinnejší pri znižovaní výkonu ako ultrafiltrované kolagénové peptidy [30].

Inhibícia aktivity tyrozinázy, kolagenázy a elastázy sa použila na overenie ich in vitro účinkov proti starnutiu [20]. Výsledky inhibície aktivity tyrozinázy, kolagenázy a elastázy kontroly, CH-Alcalase a CH-Alcalase<3 kda="" are="" summarized="" (table="" 3).="" tyrosinase,="" collagenase,="" and="" elastase="" inhibitors="" have="" been="" used="" as="" important="" ingredients="" of="" cosmetics="" for="" skin="" whitening,="" anti-aging,="" and="" anti-wrinkling,="" respectively.="" collagenase="" and="" elastase,="" especially,="" are="" known="" to="" be="" major="" enzymes="" responsible="" for="" dehydration="" and="" wrinkle="" formation="" on="" the="" skin="" surface[31].="" the="" results="" indicated="" that="" the="" tyrosinase="" inhibition="" effect="" of="" vitamin="" c(95.50%,1="" mg/ml,="" positive="" control)="" was="" higher="" than="" that="" of="" the="" other="" treatments(table="" 4).="" tyrosinase="" inhibition="" effects="" of="" control,="" ch-alcalase,="" and=""><3 kda="" groups="" were="" 28.21%,="" 15.44%,="" and="" 30.20%,="" respectively.="" thus,="" the="" chs="" did="" not="" show="" a="" better="" skin="" whitening="" effect="" compared="" to="" the="" control.="" collagenase="" inhibition="" by="" the="" control,="" ch-alcalase,="" and=""><3 kda="" groups="" were="" 6.45%,54.37%,="" and="" 61.90%,="" respectively.="" in="" addition,="" ch-alcalase="" and=""><3 kda="" inhibition="" of="" collagenase="" corresponded="" to="" that="" of="" vitamin="" cat="" 1="" mg/ml.="" thus,="" chs="" obtained="" from="" this="" study="" may="" be="" effective="" collagenase="" inhibitors="" that="" may="" possibly="" play="" an="" important="" role="" in="" anti-aging="" activities.="" however,="" all="" collagen="" samples="" did="" not="" display="" elastase="" inhibition="" effects,="" which="" may="" result="" from="" a="" lack="" of="" skin="" elasticity.="" overall,="" vitamin="" c(1="" mg/ml)="" inhibited="" various="" activities="" of="" the="" enzymes="" in="" the="" following="" order:="" tyrosinase(95.50%)="">collagenase(48.09)> elastase(2/.00%o).CH-Alcalase(5 mg/mL)inhibited various activities of the enzymes in the following order: collagenase (54.37%)> tyrosinase (15.44%)>elastáza (žiadna aktivita). CH-Alcalase<3 kda="" (5="" mg/ml)="" inhibited="" these="" activities="" in="" the="" following="" order:="" collagenase="" (61.90%)="">tyrosinase (30.20%)>elastáza (žiadna aktivita). Podobné trendy zaznamenané v inej štúdii ukázali, že hydrolyzáty kolagénu preukázali potenciál pôsobiť ako činidlá proti starnutiu a inhibítory kolagenázy [20].

3. Materiály a metódy

3.1. Predošetrenie bravčovej kože

Prasacia koža bola zakúpená od miestneho dodávateľa (Seoul, Kórea) a všetok viditeľný tuk a spojivové tkanivá z bravčovej kože boli odstránené pomocou žiletky. Prasacia koža použitá v tejto štúdii bola získaná z jedného prasaťa, aby sa minimalizovala biologická variácia. Orezaná bravčová koža sa štyrikrát premyla vo vode pri 90 stupňoch počas 1 minúty, aby sa odstránil tuk a zvyškové materiály. Koža sa potom narezala na 1 cm štvorcové rezy a rozdrvila na prášok v destilovanej vode počas 3 minút pomocou štvorkrídlového mixéra (CNHR-26, Bosch, Hong Kong, Čína). Prášková bravčová koža sa homogenizovala pri vysokej rýchlosti (25, 000ot./min.) počas 5 minút s použitím Ultra Turrax (T25, IKA Labotechnik, Staufen, Nemecko). Približne 100 g zmesi bravčových koží (50 percent konečného obsahu pevných látok) sa vákuovo zabalilo a zmrazilo na -20 stupeň a uskladnilo na použitie do 1 mesiaca.

3.2. Komerčné proteázy a činidlá

Alcalase, Flavorzyme, Neutrase a Protamex boli zakúpené od Novozymes (Bagsvaerd, Dánsko). Bromelain a Papain boli zakúpené od Daesong Sangsa (Soul, Kórea). Všetky chemikálie na antioxidačné testy a testy proti starnutiu boli zakúpené od Sigma-Aldrich Chemical Company (St. Louis, MS, USA). Všetky ostatné činidlá a rozpúšťadlá použité v tejto štúdii boli analytickej kvality.

3.3. Enzýmová hydrolýza

Enzymatická hydrolýza bola vyvinutá pre príslušné komerčné používané potravinárske enzýmy (na základe odporúčaní výrobcu; tabuľka 4). Pripravená zmes bravčových koží sa zriedila destilovanou vodou na konečný obsah pevných látok 5 percent. Táto koncentrácia bola zvolená tak, aby sa zabezpečilo tokové správanie vzhľadom na jej nízku viskozitu. 5-percentná zmes bravčovej kože bola označená ako kolagénová suspenzia (alebo kontrola). Kolagénová suspenzia sa hydrolyzovala v reaktoroch s použitím šiestich komerčných potravinárskych enzýmov v pomere enzým: substrát 1:100. Po 1, 3, 6, 12 a 24 hodinách hydrolýzy sa odobrali alikvóty vzoriek (5 ml) a okamžite sa zahriali na 100 stupňov počas 10 minút, aby sa inaktivoval enzým, potom nasledovalo ochladenie na 0 stupňov pomocou ľadovej vody. Počas odberu vzoriek sa pH kontrolovalo pomocou 1 M NaOH podľa potreby. Po ochladení boli vzorky centrifugované pri 4000 x g počas 15 minút a supernatant (hydrolyzát kolagénu; CH) bol zozbieraný. CH sa ďalej koncentroval ultrafiltráciou s použitím systému AmiconStirred Cells (katalógové č. UFSC 20001, EMD Millipore Corporation, Burlington, MA, USA) s medznou hodnotou molekulovej hmotnosti 3 kDa (MWCO) (UltracelMembrane, EMD Millipore Corporation, Burlington, MA, USA) pri 60 psi plynnom dusíku, pri 20 stupňoch.cistanche tubulosa recenziePripravený CH bol lyofilizovaný a uchovávaný vo vzduchotesných nádobách pri 20 stupňoch až do analýzy.

3.4. Stanovenie pH, regenerácia proteínu, obsah bez rozpustných aminoskupín a produkčný výťažok pH vzoriek (kontrola a CH) sa stanovilo pomocou pH metra (Model S220, Mettler Toledo GmbH, Columbus, OH, USA). Výťažnosť alebo rozpustnosť proteínu sa stanovila odhadom obsahu proteínu pomocou proteínového testu s kyselinou bicinchonínovou (BCA) podľa pokynov výrobcu (Sigma-Aldrich, St. Louis, MS, USA) so sérovým albumínom ako štandardom. Obsah voľných aminoskupín bol stanovený pomocou 2,4,6-trinitrobenzénsulfónovej kyseliny (TNBSA) podľa pokynov výrobcu (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) s použitím L-leucínu ako štandardu. Na výpočet produkčného poľa sa merali mokré aj suché hmotnosti.

3.5. Distribúcia molekulovej hmotnosti

3.5.1. Elektroforéza na dodecylsulfát-polyakrylamidovom géle (SDS-PAGE)

Vzory SDS-PAGE vzoriek (kontrola a CH) sa merali podľa predtým opísanej metódy [10]. Vzorky sa zriedili 8 M močovinou (konečná koncentrácia proteínu 4 mg/ml). Každá vzorka sa zmiešala s jednou časťou vzorkového pufra KTG 020 (10 percent glycerolu, 2 percentá SDS, 0,003 percenta brómfenolovej modrej, 5 percent -merkaptoetanolu a 63 mM Tris-HCl, pH 6,8) od KOMA Biotech Inc. ., (Soul, Kórea) a varte 2 minúty. Zmes vzoriek （20 μl） sa vložila do EzWayTM PAG 6% akrylamidových gélov (KOMA Biotech Inc., Soul, Kórea). Po elektroforéze bol gél fixovaný, zafarbený a odfarbený. Molekulové hmotnosti boli stanovené použitím štandardov so širokým rozsahom molekulovej hmotnosti medzi 10 a 210 kDa.

3.5.2. Gélová permeačná chromatografia (GPC)

Distribúcia molekulovej hmotnosti vzoriek sa stanovila podľa predtým opísanej metódy [3]. Gélová permeačná chromatografia (GPC) sa uskutočnila pomocou systému YL9100 vysokoúčinnej kvapalinovej chromatografie (HPLC) (YL9100, Youngling Instrument Co., Ltd, Gyeonggi-do, Kórea) vybaveného tromi kolónami Ultrahydrogel TM 120 ( 7,8 x 3000 mm) od Waters (Milford, MA, USA). Mobilná fáza bola destilovaná/deionizovaná voda pri prietoku 1,0 ml/min a distribúcia molekulovej hmotnosti kolagénových peptidov bola monitorovaná pomocou detektora indexu lomu YL 9100 pri 40 stupňoch. Ako štandard slúžila súprava štandardov molekulovej hmotnosti (106-67, 500 Da, Polymer Standards Service, Mainz, Nemecko).

3.6.Amin0 Zloženie kyseliny

Aminokyselinové zloženie vzoriek sa analyzovalo derivatizáciou s {{0}}}fluorenyl etoxykarbonyl (FMOC)-chloridom a o-ftaldialdehydom (OPA) na systéme Ultimate 3000 HPLC ( Dionex, Idstein, Nemecko) vybavený dvoma detektormi (fluorescenčný detektor a UV detektor） a VDSpher 100 C18-E （4,6 mm × 150 mm, veľkosť častíc 3,5 μm, VDS Optilab, Berlín, Nemecko). Objem nástreku bol 1,0 1 a mobilná fáza pozostávala z dvoch eluentov: 40 mM hydrogenfosforečnanu sodného (pH 7) a 45 % (o/v) acetonitrilu/45 % (v/v) roztoku metanolu. Spojením UV detektora a fluorescenčného detektora boli detegované ultrafialové lúče pri 338 nm, derivát OPA bol detegovaný pri emisnej vlnovej dĺžke 450 nm a 340 nm pri excitačnej vlnovej dĺžke, FMOC derivát pri vlnovej dĺžke 305 nm a 266 nm excitačnej vlnovej dĺžky. Na kalibráciu sa použila zmes aminokyselín (1,0 nmol ml-1 pre každú aminokyselinu).

kde atotalaminokyselina bola obsahom po hydrolýze s použitím 6 M HCl (pri 130 stupňoch počas 24 hodín) a voľná aminokyselina bola obsahom po rozpustení v destilovanej vode.

3.7. Hodnotenie antioxidačnej aktivity

3.7.1.2,2'-azino-bis-(3-etylbenzotiazolín-6-sulfónová kyselina) (ABTS) Aktivita zachytávajúca radikály

Aktivita CH na zachytávanie radikálov ABTS sa merala podľa predtým opísanej metódy [20]. ABTSradikálový katión sa vytvoril zmiešaním zásobného roztoku ABTS (7,{7}} mM) s persíranom draselným (2,45 mM) a inkubáciou výslednej zmesi v tme pri teplote miestnosti cez noc. Radikálový roztok ABTS sa zriedil v 5{11}} mM fosfátom pufrovanom fyziologickom roztoku (pH 7,4) na úroveň absorbancie 0,70±0,02 pri 734 nm. Jeden ml zriedeného roztoku radikálov ABTS sa zmiešal s 1 ml každej vzorky. O desať minút neskôr sa merali absorbancie vzorky (A vzorka, so vzorkou) a kontroly (A kontrola bez vzorky) pri 734 nm. Aktivita ABTS zachytávajúca radikály (v percentách) bola vypočítaná ako:

3.7.2. Zníženie výkonu

Redukčná sila CH sa merala podľa predtým opísanej metódy [20]. Jeden ml každej vzorky sa zmiešal s 1 ml 0,2 M fosfátového pufra (pH 6,6) a 1 ml 1% ferikyanidu draselného. Zmes sa inkubovala pri 50 stupňoch počas 20 minút a potom sa pridal 1 ml 10-percentnej kyseliny trichlóroctovej. Alikvotná časť 2 ml z tejto inkubačnej zmesi sa zmiešala s 2 ml destilovanej vody a 0,4 ml 0,1 % chloridu železitého. Po 10 minútach sa merala absorbancia výsledného roztoku pri 700 nm na spektrofotometri (OPTIZEN, Mecasys Co., Daejeon, Kórea). Zvýšená absorbancia (pri 700 nm) reakčnej zmesi sa považovala za indikátor zvýšenej redukčnej sily.

3.8. Hodnotenie účinku proti starnutiu

3.8.1. Inhibícia aktivity tyrozinázy

Inhibícia tyrozinázy bola stanovená skôr opísaným spôsobom [20]. Roztok premixu obsahujúci 70 μl 0,1 M fosfátového pufra (pH 6,8), 30 ul hubovej tyrozinázy (167 U/ml; Sigma-Aldrich, USA) a 20 1 vzorky sa inkubovalo 5 minút pri 30 stupňoch. Potom sa pridalo približne 100 μl 3,4-dihydroxyfenyl-L-alanínu （L-DOPA） na spustenie enzymatickej reakcie. Absorbancia pri 492 nm sa merala počas 20 minút, aby sa monitorovala tvorba L-DOPA. Kyselina askorbová (1 mg/ml) slúžila ako pozitívna kontrola, ktorá sa použila na porovnanie. Inhibičný pomer sa vypočítal nasledovne:

kde A bola zmes s tyrozinázou bez vzorky; B bola zmes bez vzorky a tyrozinázy; C bola zmes so vzorkou a tyrozinázou a D bola zmes so vzorkou, ale bez tyrozinázy.

3.8.2. Inhibícia aktivity kolagenázy

Inhibícia kolagenázy bola stanovená skôr opísaným spôsobom [20]. Stručne, bol pripravený 50 mM tricínový pufor (pH 7,5) obsahujúci 10 mM chlorid vápenatý a 400 mM chlorid sodný. Potom 50 ml 1,0 mM roztoku N-[3-(2-furyl)akryloyl]-Leu-Gly-Pro-Ala a 0,2 mg/ml kolagenázy (z Clostridium histolyticum, typ IA, 0.{101} {19}} FALGPA U/mg tuhá látka; Sigma-Aldrich, USA) boli pridané v prítomnosti a neprítomnosti vzoriek. Reakcia sa zastavila pridaním kyseliny citrónovej (6 percent). Reakčná zmes sa oddelila pridaním etylacetátu. Absorbancia supernatantu sa merala pri 345 nm. Kyselina askorbová (1 mg/ml) slúžila ako pozitívna kontrola a bola použitá na porovnanie. Percento inhibície sa vypočítalo takto:

kde A bola zmes s kolagenázou bez vzorky; B bola zmesou bez vzorky a kolagenázy; C bola zmes so vzorkou a kolagenázou a D bola zmes so vzorkou, ale bez kolagenázy.

3.8.3. Inhibícia aktivity elastázy

Inhibícia elastázy bola stanovená skôr opísaným spôsobom [20]. Ako substrát slúžil N-sukcinyl-Ala-Ala-Ala-p-nitroanilid (Suc-Ala-Ala-Ala-pNA) a uvoľňovanie p-nitroanilínu sa monitorovalo 2{{20}}} min pri 25 stupňoch. Časť (1 ug) prasačej pankreatickej elastázy (PPE) typu IV sa rozpustila v 1 ml 0,2 M Tris-HCl pufra (pH 8.0). reakčná zmes obsahovala 0,2 M Tris-HCl pufor (pH 8,0), 1 ppm PPE, 0,8 mM Suc-Ala-Ala-Ala-pNA, vzorku a vyššie uvedený substrát. Merala sa absorbancia pri 214 nm. Kyselina askorbová (1 mg/ml) slúžila ako pozitívna kontrola použitá na porovnanie. Inhibičný pomer sa vypočítal nasledovne:

kde A bola zmes s elastázou a bez vzorky; B bola zmes bez vzorky a elastázy; C bola zmes so vzorkou a elastázou a D bola zmes so vzorkou, ale bez elastázy.

3.9. Štatistická analýza

Údaje sú prezentované ako priemer ± štandardná odchýlka (SD). Významnosť rozdielov medzi skupinami bola hodnotená pomocou viacnásobných porovnaní a analýzy rozptylu (ANOVA), po ktorej nasledoval Tukeyho test poctivého signifikantného rozdielu (HSD). Rozdiely s hodnotami p menšími ako 0,05 sa považovali za štatisticky významné.

4. Závery

V tejto štúdii boli kolagénové hydrolyzáty, funkčná zložka potravín, úspešne vyrobené enzymatickou hydrolýzou, po ktorej nasledovala ultrafiltrácia a čistenie. Rôzne komerčné proteázy boli testované na ich potenciálnu užitočnosť pri výrobe správnych kolagénových hydrolyzátov. CHS hydrolyzovaný Alcalase bol najúčinnejšie hydrolyzovaný CH a ultrafiltrácia nasledovaná čistením bola účinná pri vytváraní aktívnych peptidov s nízkou molekulovou hmotnosťou. Výsledky ukázali, že CH vykazovali vynikajúce antioxidačné a inhibičné aktivity kolagenázy. Preto CH získané touto štúdiou môžu byť použité v potravinárskom, kozmetickom alebo farmaceutickom priemysle ako prírodná prísada, ktorá má antioxidačné vlastnosti a vlastnosti proti starnutiu. Ďalšie štúdie zahŕňajúce in vivo hodnotenie starnutia aktívnych peptidov v ľudskej koži sa môžu ukázať ako užitočné.

Tento článok je extrahovaný z Molecules 2019, 24, 1104; doi:10.3390/molecules24061104 www.mdpi.com/journal/molecules