Hodnotenie antioxidačných, bieliacich a antiagingových vlastností hydrolyzátov ryžového proteínu

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Hui-Ju Chen 1,2, Fan-Jhen Dai 2, Cheng-You Chen 3, Siao-Ling Fan 2, Ji-Hong Zheng 4, Yu-Chun Huang 2, Chi-Fai Chau 1, Yung-Sheng Lin 3, 4,5* a Chin-Shuh Chen 1,*

Abstrakt:Proteínové hydrolyzáty rastlinného pôvodu majú potenciálne využitie vo výžive. Ryžové proteínové hydrolyzáty (RPH), vynikajúci zdroj bielkovín, pritiahli pozornosť pre vývoj kozmeceutík. Len málo štúdií však uviedlo potenciálnu aplikáciu analýzy RPH a táto štúdia ich skúmalaantioxidantaktivity a inhibičné aktivity enzýmov starnutia kože. Výsledky ukázali, že celkové koncentrácie fenolov a flavonoidov boli 2.06 ± 0,13 mg ekvivalentu kyseliny galovej/g RPH a 25,96 ± 0,52 µg ekvivalentu kvercetínu/g RPH, resp. RPH preukázali aktivitu závislú od dávky na vychytávanie voľných radikálov z 1,1-difenyl-2-pikrylhydrazylu [polovičná maximálna inhibičná koncentrácia (IC50)=42,58 ± 2,1 mg/g RPH] a 2 ,20-azino-bis (3-etylbenzotiazolín-6-sulfónová kyselina) (IC50=2,11 ± 0,88 mg/g RPH), redukčná kapacita závislá od dávky (6,95 ± 1,40 mg ekvivalentu vitamínu C/g RPH) a kapacita absorbcie kyslíkových radikálov (473 µmol ekvivalentu Troloxu/g RPH). Koncentrácie roztoku RPH potrebné na dosiahnutie 50-percentnej inhibície hyaluronidázy atyrozinázaaktivity boli stanovené na 8,91 a 107,6 mg/ml, v danom poradí. Táto štúdia preukázala, že RPH majúantioxidantantihyaluronidázové a antityrozinázové aktivity pre budúce kozmetické aplikácie.

Kľúčové slová:hydrolyzát ryžového proteínu;antioxidant; hyaluronidáza;tyrozináza; kozmetické

cistanchebielenieúčinokna kožu doantioxidačné

1. Úvod

Expozícia ultrafialového žiarenia je zodpovedná za fotostarnutie (alebo vonkajšie starnutie); naopak, reaktívne formy kyslíka produkované v bunkovom metabolizme a zhoršovanie biologických funkcií sú zodpovedné za prirodzené starnutie [1,2]. Spracované potraviny často obsahujú prírodnéantioxidantyako sú katechíny, kyselina askorbová, tokoferoly, kyselina rozmarínová a fenolové extrakty z rôznych rastlín. Výskum prírodných antioxidantov teraz zvažuje netradičný pôvod. Prírodné zdrojeantioxidantysú žiadanejšie ako chemicky vyrábanéantioxidantypretože niektoré syntetické antioxidanty boli hlásené ako karcinogénne [3]. Ryža (Oryza sativa) je hlavnou stravou ľudí na celom svete, najmä tých, ktorí žijú v Ázii. Ročná produkcia ryže na svete je približne 741 miliónov ton [4]. V ázijských krajinách je ryža údajne zdrojom 75 percent energetického príjmu pre viac ako 2 miliardy ľudí [5]. Rozsiahla produkcia ryže vedie k zodpovedajúcemu množstvu produkcie vedľajších produktov. Zvyškový produkt z procesu výroby ryže obsahuje väčšinu bielkovín v zrne (~ 60–85 percent), ale vyhodí sa alebo použije na kŕmenie zvierat [6–8]. Peptidy získané z rôznych proteínových hydrolyzátov údajne pôsobia ako potenciálantioxidanty[9]. Prírodné a netoxické antioxidanty môžu byť preto potenciálne extrahované z hydrolyzátov potravinových bielkovín. Mnohí vedci použili modely bohaté na lipidy a uviedli, že proteínové hydrolyzáty, ako aj mliečne, zeínové a sójové proteínové peptidy majú kľúčové antioxidačné vlastnosti, vrátane zachytávania voľných radikálov, inhibície potravinovej a in vitro peroxidácie lipidov a chelatácie prechodných kovov [10– 12].

Kyselina hyalurónová (HA) pomáha omladiť pokožku, pretože zvyšuje viskozitu, obsahuje vlhkosť a znižuje priepustnosť extracelulárnych tekutín. Vďaka svojej vynikajúcej schopnosti zadržiavať vodu zvyšuje HA mladistvosť, hydratáciu a hladkosť pokožky a znižuje stupeň vrások [13,14]. Bohužiaľ, hladina HA v pokožke s vekom prirodzene klesá. Hyaluronidáza je enzým, ktorý ničí HA, čo spôsobuje stratu pevnosti, pružnosti a vlhkosti pokožky, čo následne vedie k starnutiu pokožky. Vrásky je preto možné liečiť inhibíciou hyaluronidázy a udržiavaním obsahu HA v pokožke [15,16]. Enzým produkujúci melaníntyrozinázaživotne prispieva k rýchlostnému obmedzujúcemu kroku procesu, ktorým sa produkuje melanín. Preto sa poruchy pigmentácie bežne liečia a rozjasnenie pokožky sa dosahuje inhibíciou alebo znížením regulácietyrozinázaaktivita [17,18].

V niekoľkých štúdiách sa zistilo, že hydrolyzáty obilných bielkovín a peptidy, ktoré sa z nich dajú získať, majú antioxidačné, antihypertenzívne a protinádorové účinky [19,20]. Postupne sa uznáva pozitívny prínos peptidov a proteínov pochádzajúcich z potravín pre ľudské zdravie [21]. Spotrebitelia čoraz viac požadujú, aby kozmetický a zdravotnícky priemysel používal prírodné bioaktívne zlúčeniny. Ryžové proteínové hydrolyzáty (RPH) pritiahli pozornosť ako vynikajúci zdroj bielkovín. Len málo štúdií však uviedlo charakterizáciu a funkčnú analýzu RPH. Preto táto štúdia hodnotila antioxidačnú aktivitu a hyaluronidázutyrozináza-inhibičné aktivity RPH.

2. Výsledky a diskusia

2.1. Celková fenolová koncentrácia (TPC) a celkový obsah flavonoidov (TFC)

Štandardom v teste TPC bola kyselina galová v niekoľkých koncentráciách. Vyššia absorbancia indikovala vyššiu TPC. TPC vzoriek RPH sa získalo vložením hodnôt optickej absorbancie vzoriek RPH do kalibračnej krivky kyseliny galovej. Vynesením koncentrácie RPH proti koncentrácii fenolu (obrázok 1a) sa získal priemerný TPC 2.06 ± 0,13 mg GAE/g RPH. TFC 25,96 ± 0,52 ug QE/gRPHs sa získalo podobným postupom (obrázok 1b). Obrázok 1c ďalej uvádza TPC a TFC vzoriek RPH. Odhaľuje, že vzťah medzi TPC a TFC možno vyjadriť ako y=0,0121x plus 0,0659, kde x a y sú TPC a TFC.

TPC RPH zahŕňal koncentrácie fenolových aminokyselín a fenolových zlúčenín peptidov. Interakcia proteín-fenolová zlúčenina vo všeobecnosti zahŕňa kovalentnú a nekovalentnú väzbu. Fenolové zlúčeniny sa uvoľňujú počas enzymatickej hydrolýzy. Špecifické enzýmy môžu byť najschopnejšie zničiť komplexy proteín-polyfenol, čo vedie k uvoľneniu väčšieho počtu fenolových zlúčenín a peptidov s fenolovými skupinami, ako je napríklad tyrozín [22]. Bola zaznamenaná silná korelácia medzi celkovým obsahom polyfenolov v zrnách a ich biologickou aktivitou. O polyfenoloch je dobre známe, že majú silné antioxidačné účinky [23]. Hoci sa terpény [24] alebo seskviterpény [25] v ryži nachádzajú v menšom množstve, môžu tiež prispieť k antioxidačným aktivitám.

2.2. Aktivita antioxidantov

2.2.1. Radical Scavenging Aktivita voľných radikálov DPPH

Obrázok 2 znázorňuje aktivitu zachytávania voľných radikálov DPPH v roztoku RPH. Zistilo sa, že vyššia koncentrácia roztoku vedie k vyššej aktivite. Polovica maximálnej inhibičnej koncentrácie (IC50), čo je koncentrácia extraktu, pre ktorú je možné zachytiť polovicu všetkých voľných radikálov DPPH, bola 42,58 ± 2,1 mg/ml ryžových peptidov.

2.2.2. Čistiaca aktivita voľných radikálov ABTS

Aktivita RPH ABTS zachytávajúca voľné radikály, znázornená na obrázku 3, bola vyššia, keď sa použila väčšia koncentrácia extraktu. IC50 bola 2,11 ± 0,88 mg/ml ryžových peptidov. Tento výsledok ukázal, že RPH mali silnú aktivitu zachytávania voľných radikálov ABTS. Aminokyseliny obsahujúce síru, vrátane Met a Cys, a hydrofóbne aminokyseliny, vrátane Ala, Val, Ile, Leu, Met, Cys, Tyr, Phe, Try a Pro, môžu byť dôležitými faktormi, pokiaľ ide o voľné radikály ABTS. upratovacia činnosť.

V tejto štúdii bola hodnota IC50 aktivity zachytávania voľných radikálov ABTS nižšia ako aktivita zachytávania voľných radikálov DPPH, čo sa zhoduje s výsledkami škrupiny a jadra semien Jatropha curcas L. [28] a semien plodov jujuby a dužiny šupiek [29]. Toto zistenie korešponduje aj so správou o proteínových hydrolyzátoch ryžových otrúb s 43,98–66,25 µmol ekvivalentu Troloxu/g vzorky a 403,28–430,12 µmol ekvivalentu Troloxu/g vzorky pre aktivitu zachytávania voľných radikálov DPPH a aktivitu zachytávania voľných radikálov ABTS [27].

Jedným z možných dôvodov je rozdiel v rozpustnosti medzi voľnými radikálmi DPPH (rozpustný v oleji) a voľnými radikálmi ABTS (rozpustný v oleji/vode) [30,31]. Antioxidačný potenciál proteínových hydrolyzátov ryžových otrúb bol ovplyvnený ich profilom molekulovej hmotnosti, zložením aminokyselín a hydrofóbnosťou [32].

2.2.3. Zníženie kapacity

Výsledky testu redukčnej kapacity pre RPH sú uvedené na obrázku 4. Redukčná kapacita sa zvyšovala s koncentráciou RPH. Redukčná kapacita bola 6,95 ± 1,40 mg VCE/g RPH, čo naznačuje, že RPH sú účinným antioxidantom.

2.2.4. Kapacita absorpcie kyslíkových radikálov (ORAC)

Test ORAC má výhody oproti iným prístupom k určovaniu antioxidačnej aktivity, vrátane použitých reaktantov, ktorými sú peroxyradikály s podobným mechanizmom reakcie a redoxným potenciálom ako fyziologické oxidanty; celkový náboj a protonačný stav, s ktorým saantioxidantyreagujú podobne ako v ľudskom tele [33]. Metóda ORAC má tiež biologický význam pre účinnosť antioxidantov v ľudskom tele. Obrázok 5 znázorňuje výsledky ORAC analýzy RPH a štandardu Trolox v rôznych koncentráciách. ORAC bol odvodený z regresnej rovnice kalibračnej krivky vzťahujúcej sa k čistej AUC ku koncentrácii Troloxu. Výsledky ukázali, že RPH má ORAC 473 umol TE/g RPH.

Antioxidačné peptidy alebo aminokyseliny možno získať enzymatickou hydrolýzou proteínov, čo vedie k vysokej účinnosti proti oxidantom [34]. Chelatácia kovových iónov, inhibícia peroxidácie lipidov a zachytávanie voľných radikálov biologicky aktívnych peptidov sú zodpovedné za ich antioxidačnú aktivitu. Voľné radikály môžu byť uhasené a expresia proteínov a enzýmov znižujúcich oxidačný stres môže byť zvýšená antioxidačnými peptidmi. Antioxidačná účinnosť proteínových hydrolyzátov a peptidov je údajne závislá od sekvencie aminokyselín a veľkosti peptidu, ktoré sú ovplyvnené podmienkami hydrolýzy, zdrojom proteínu a typom proteázy [35]. Podľa Adebiyi et al. [36], najväčšia stráviteľná bielkovina z ryžových otrúb môže byť subtilizínom rozdelená na menšie kúsky, čo vedie k vyššej výťažnosti a obsahu bielkovín. TPC a antioxidačná aktivita hydrolyzátu môžu byť ovplyvnené špecifickosťou enzýmov. Preto môže byť antioxidačná aktivita peptidu ovplyvnená charakteristikami zdroja bielkovín, špecifickosťou enzýmu a úrovňou hydrolýzy [37].

Existuje mnoho správ, ktoré používajú proteázy (ako je Alcalase, komerčný názov asubtilizínu A z druhov Bacillus) na hydrolýzu proteínov získaných z rastlín na získanie antioxidačných peptidov. V tomto ohľade je sójový proteín jedným z najviac uvádzaných proteínov [38]. Okrem toho sa zistila aj hydrolýza proteínu ryžových otrúb Alcalase. Za optimálnych podmienok Alcalasehydrolýza otrúb lepkavej ryže produkovala proteínové hydrolyzáty s hodnotou IC50 0,87 ± 0,02 mg/ml pri zachytávaní voľných radikálov DPPH [39]. V našej štúdii bola hodnota IC50 RPH 42,58 ± 2,1 mg/ml. Hoci hodnota IC50 pri zachytávaní voľných radikálov DPPH v tejto štúdii nebola taká účinná ako pri proteíne z ryžových otrúb, zachytávanie voľných radikálov ABTS (IC50=2.11 mg/ml) bolo účinnejšie ako hydrolyzáty sójového proteínu získané hydrolýzou alcalázy ( IC 50=2,93 mg/ml) [40].

2.3. Hyaluronidázová inhibičná aktivita

Proteolytický enzým, hyaluronidáza, sa nachádza v derme a katalyzuje degradáciu HA v extracelulárnej matrici [41]. Táto štúdia využívala kyselinu trieslovú ako pozitívnu kontrolu na účely porovnania. Obrázok 6 ukazuje, že kyselina trieslová mala vyššiu inhibíciu aktivity hyaluronidázy; IC50 bola 0,14 mg/ml, podobná hodnote, ktorú získali Nishida et al. (0,121 mg/ml; 71,1 mM) [42]. Na rozdiel od toho bola pre roztok RPH vypočítaná IC50 8,91 mg/ml. Tento výsledok roztoku RPH zodpovedal našej predchádzajúcej hodnote IC50, 7,61 mg/ml [43]. Proteíny, polysacharidy a rastlinné a syntetické zlúčeniny patria do rozsahu zlúčenín, v ktorých sú prítomné inhibítory hyaluronidázy. Tieto inhibítory pomáhajú udržiavať rovnováhu medzi syntézou a degradáciou HA [44]. Nízka koncentrácia HA v pokožke má za následok suchosť a vrásky. Preto je inhibícia aktivity hyaluronidázy cestou, pomocou ktorej možno zlepšiť morfológiu kože a oddialiť jej starnutie.

2.4. Inhibičná aktivita tyrozinázy

Proteínové hydrolyzáty z prírodných zdrojov majú potenciál inhibovaťaktivitu tyrozinázy. In-vitro test inhibície tyrozinázy sa zvyčajne používa na vyhodnotenie toho, ako činidlá na bielenie kože priamo ovplyvňujú aktivitu tyrozinázy [45]. Účasťou v kroku obmedzujúcom rýchlosť melaninsyntézy tyrozináza katalyzuje hydroxyláciu L-tyrozínu na L-DOPA a potom jeho oxidáciu na o-dopachinón. Keď je potrebné zabrániť biosyntéze melanínu, môže byť rozhodujúca inhibícia aktivity L-tyrozinázy. Tu,tyrozinázasa použil na meranie RPH antityrozinázovej aktivity. Ako je znázornené na obrázku 7, koncentráciou107,6 mg/ml sa dosiahla 50-percentná inhibícia aktivity tyrozinázy. Kyselina askorbová vykazovala vysokú inhibičnú aktivitu voči tyrozináze (IC50=0.098 mg/ml), ktorá bola podobná 0,102 mg/ml, ktorú uvádza Seo et al. hlásené [46].

Proteínové hydrolyzáty ryžových otrúb vykazovali výrazne vysoké hodnotytyrozináza-inhibičná aktivita [47,48]. Tyrozinázová inhibičná aktivita roztoku RPH môže vyplývať z aminokyselinových profilov peptidov. Schurink a kol. opísal, že účinnýtyrozináza-inhibičné peptidy pozostávajú z arginínových zvyškov a fenylalanínu [49]. Aktivita inhibície tyrozinázy môže byť zlepšená hydrofóbnymi aminokyselinovými zvyškami (napr. alanínom) a produkcia melanínu môže byť narušená alanínom [50]. Okrem toho Zhang a kol. tiež uviedli, že hydrolyzát ryžového proteínu by mohol znížiť obsah melanínu a aktivitu tyrozinázy v modeli buniek indukovaných UVB [51].

cistanche kulturistika

2.5. Aminokyselinové profily a MW RPH

Obsah ryžového proteínu po odstránení škrobu v tejto štúdii bol 23,56 percent hmotnostných a stupeň hydrolýzy vzorky hydrolyzovanej proteázou bol 9,36 percent. Tabuľka 1 podrobne uvádza zloženie aminokyselín v RPH. Vo vzorke každých 100 g obsahovalo 5,18 g aminokyselín. Pokiaľ ide o aminokyselinové zložky, RPH boli bohaté na alanín, leucín, arginín, kyselina glutámová a kyselina asparágová. Každých 100 g vzorky obsahovalo celkovo 1,73 g hydrofóbnych aminokyselín (alanín, valín, leucín, izoleucín, prolín, fenylalanín a cysteín). Tento výsledok bol úplne odlišný od našej predchádzajúcej správy [43] v roztoku amylázy a teplote jeho spracovania na odstránenie škrobu. Obsah hydrofóbnych aminokyselín bol 1,90-krát vyšší ako v našej predchádzajúcej správe. Nižšia teplota spracovania (60 ◦C) v tejto štúdii môže zabrániť denaturácii bielkovín vo veľkých množstvách, takže aktivita aminokyselín môže byť lepšie zachovaná. Okrem toho sa podobný záver získal aj z inej hubovej amylázy a glukoamylázy na cukornatenie škrobu v bielych ryžových otrubách [52].

Výskum zistil, že hydrofóbne aminokyseliny sa podobajúantioxidantyzvýšením rozpustnosti na báze lipidov v proteínových hydrolyzátoch a peptidoch z rôznych proteínových zdrojov, čím sa podporuje interakcia s voľnými radikálmi [38,53]. Niektoré aminokyseliny opísali Chen a kol. [54] byť všeobecneantioxidanty; spomínané kyseliny zahŕňali tryptofán, cysteín, metionín, tyrozín a histidín. V tejto štúdii aromatické aminokyseliny (fenylalanín, tyrozín a tryptofán) obsahovali 0,53 g/100 g RPH. Preto tieto aminokyseliny pochádzajúce z peptidov boli pravdepodobne zodpovedné za antioxidačnú aktivitu RPH.

Okrem toho proteíny, ktoré sú hydrolyzované na kratšie peptidy, majú odlišnú distribúciu molekulovej hmotnosti a niektoré hydrofóbne skupiny poskladané vo vnútri úplných molekúl prirodzeného proteínu sú zvyčajne vystavené vodnej fáze. Súvisí to so štruktúrnym preskupením proteínových molekúl, a teda s funkčnými vlastnosťami proteínu [55,56]. Údaje tricín-SDS-PAGE ukázali, že molekulová hmotnosť RPH bola v rozsahu 5–35 kDa (obrázok 8a).

Obrázok 8b znázorňuje relatívny obsah rôznych MW v RPH. Celkovo bolo 45,24 percent všetkého proteínu v hlavnom páse (MW ≈ 2,4 kDa). Podobné výsledky sa získali s ohľadom na peptid hydrolyzátov proteínových hydrolyzátov ryžových otrúb. Najvyššia antioxidačná aktivita, ktorú dosiahli Thamnarathip et al. [37] bola hodnota pre peptidy s molekulovou hmotnosťou=6–50 kDa. Okrem toho existujú vzťahy medzi funkciou proteínových hydrolyzátov a distribúciou molekulovej hmotnosti a zložením aminokyselín [57]. To vysvetľuje antioxidačnú aktivitu RPH pozorovanú v tejto štúdii.

2.6. Test bunkovej toxicity

Pre budúce aplikácie je potrebná nízka bunková toxicita. Na vyhodnotenie cytotoxicity a biokompatibility RPH sa merala životaschopnosť buniek surových buniek 264.7 v roztoku RPH pomocou metódy MTT. Ako je znázornené na obrázku 9, životaschopnosť buniek bola nad 100 percent, keď boli ošetrené 25–2000 ug/ml RPH počas 24 hodín a 48 hodín. Výsledky naznačujú pozoruhodne nízku cytotoxicitu RPH. Preto môžu byť RPH potenciálne použité ako kozmetické aplikácie s veľmi nízkou cytotoxicitou.

3. Materiály a metódy

3.1. Činidlá

Chlorid železitý, 2,20-azino-bis(3-etylbenzotiazolín-6-sulfónová kyselina) (ABTS), Trolox (6-hydroxy-2,5 ,7,8-tetrametylchróman-2-karboxylová kyselina), l-3,4-dihydroxyfenylalanín (L-DOPA), 1,1-difenyl-2- pikrylhydrazyl (DPPH) a kyselina trichlóroctová boli získané od Alfa Aesar (Tewksbury, MA, USA). 2,20-azobis(2-metylpropionamidín)dihydrochlorid (AAPH), Folin-Ciocalteuovo fenolové činidlo, kyselina galová, kyselina askorbová, hubatyrozinázaa fluoresceín sodný boli získané od Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA). Uhličitan sodný bol získaný od Riedel-de Haën (Seelze, Nemecko). Nakoniec, ferrikyanid draselný, hydrogenfosforečnan sodný a dihydrogenfosforečnan sodný boli získané od Showa Chemical (Tokio, Japonsko).

3.2. Príprava RPH

RPH boli pripravené tak, ako bolo opísané vyššie, s výnimkou toho, že fungálna amyláza bola prijatá na sacharizáciu škrobu v ryžovej múke, čím sa zabránilo poškodeniu aminokyselín spôsobenému hydrolýzou bakteriálnej lamylázy pri vysokých teplotách [43,58]. Sto gramov ryžovej múky bolo namočené v 100}0 ml destilovanej vody obsahujúcej 0,5 percenta hubovej amylázy (Genencor, NY, USA); zmes sa následne zahrievala 24 hodín na 60 ◦C ( pH 4,2), potom sa nechala ochladiť na teplotu miestnosti. Centrifugácia sa uskutočňovala 10 minút pri 1968 x g, aby sa odstránil zostávajúci supernatant. Po pridaní 20-násobku vody a 2 ml 0,1 percentnej hydrolytickejproteázy (Healthmate, Changhua, Taiwan) k nerozpustnej časti bol roztok pretrepaný a inkubovaný počas 4 hodín pri 55 °C. Metóda pH-stat sa použila na udržanie pH roztoku na optimálnej úrovni a potom sa uskutočnilo zahrievanie na 85 °C počas 10 minút na inaktiváciu enzýmu. Zostávajúca nerozpustná frakcia sa odstránila centrifugáciou počas 15 minút pri 3075 x g. Lyofilizácia sa uskutočnila na supernatante, ktorý sa potom pred použitím skladoval pri -20 ◦C.

3.3. Antioxidačné aktivity RPH

3.3.1. Celková fenolová koncentrácia (TPC)

Na zistenie TPC RPH bola použitá Folin-Ciocalteuova metóda [59]. Najprv sa rovnomerne premiešali 200 µl Folin-Ciocalteuovho fenolového činidla (0,3 M) počas5-minútového trepania pri 200 ul roztoku RPH a k tejto zmesi sa pridalo 400 ul deionizovanej (DI) vody a 200 ul 10 percentného (w/v) roztoku uhličitanu sodného. Zmiešaný roztok podstúpil 60 minútovú inkubáciu v tme pri teplote miestnosti. Potom sa centrifugoval 15 minút pri 3000 ot./min. Na meranie sa použilo 100 ul supernatantu. Na určenie TPC (jednotka: mg) ekvivalentu kyseliny galovej (GAE) na gram suchej vzorky RPH (jednotka: mg GAE/g RPH) sa údaje optickej absorbancie vložili do štandardnej krivky predstavujúcej kyselinu galovú. Absorbancia sa získala pri 700 nm s použitím spektrofotometra EpochMicroplate (BioTek, VT, USA).

3.3.2. Celkový obsah flavonoidov (TFC)

TFC sa získal podľa prístupu Wathoniho a kol. s malými úpravami [60]. Najprv sa zmiešalo 500 ul každej vzorky a 2 % (w/v) roztoku chloridu hlinitého. Reakčný roztok sa dôkladne premieša a nechá sa 10 minút a vyhodnotí sa absorbancia pri 415 nm. Výsledok sa uvádza v mikrogramoch ekvivalentu kvercetínu (QE) na gram suchej vzorky RPH (µg QE/g RPH).

cistanche kulturistika

3.3.3. Činnosť DPPH na zachytávanie voľných radikálov

Najprv sa zmiešal 198 uM etanolový roztok DPPH (50 ul) a roztok RPH alebo DI voda (0,5 ul; vzorka a kontrola) a potom sa nechali stáť 30 minút v tme pri teplote miestnosti. Následne sa získala absorbancia roztoku pri 517 nm. Relatívna vychytávacia aktivita sa vypočítala stanovením absorbančného rozdielu medzi vzorkou a kontrolou. Vysoká aktivita zachytávania voľných radikálov DPPH sa prejavila nízkou optickou absorbanciou. Pri hodnotení aktivity zachytávania voľných radikálov DPPH v roztoku RPH bol použitým štandardom vitamín C [61–63].

3.3.4. Čistiaca aktivita voľných radikálov ABTS

Prístup uvádzaný Wu et al. sa použil na vyhodnotenie antioxidačnej aktivity roztoku RPH [64]. Najprv sa 7 mM zásobný roztok ABTS (250 ul) nechal reagovať s 2,45 mM persíranom draselným (250 ul), čím sa získal katión voľných radikálov ABTS (ABTS• plus ), pričom zmes sa uchovávala 16 hodín pri 4 ◦C v tme pred použitím. Po ekvilibrácii v tme pri teplote miestnosti sa použil 0,1 M fosfátom pufrovaný fyziologický roztok (PBS; pH 7,4) na zriedenie roztoku na absorbanciu 0,70 ± 0,02 pri 734 nm. Potom sa do 180 ul zriedeného roztoku ABTS pridalo 20 ul Troloxu (pozitívna kontrola) alebo roztoku RPH (vzorka). Zmes sa potom podrobila 10 minútovej inkubácii pri izbovej teplote. Táto štúdia určila optickú absorbanciu pri 734 nm; nižšia absorbancia zodpovedala vyššej aktivite zachytávania voľných radikálov ABTS. Štandard používaný na hodnotenie aktivity ABTS zachytávania voľných radikálov roztoku RPH bol antioxidant Trolox.

3.3.5. Zníženie kapacity

Na stanovenie celkovej antioxidačnej aktivity roztoku RPH sa použil test antioxidačnej sily redukujúcej železo. Ako uvádza Lin a kol. [29], roztok RPH (200 µL) sa rovnomerne zmiešal s 1 percentom (w/v) K3Fe(CN)6 a 0,2 M PBS pufrom (pH 6,6; 100 ul každý) .Po dobu 20 minút sa na zahrievanie zmesi použil vodný kúpeľ s teplotou 50 °C; po vybratí zmesi z kúpeľa sa zmes rýchlo ochladila počas 3 minút. Následne sa uskutočnilo pridanie 10 % (hmotn./obj.) kyseliny trichlóroctovej (100 ul) a 10-minútové odstreďovanie pri 3000 ot./min. 1 percento (hmotnosť/objem) FeCl3 (100 ul) a DI vodu (400 ul). Fe4[Fe(CN)6]3 sa získal10-minútovou reakciou tejto zmesi v tme. Následne vyššia optická absorbancia (meraná pri 700 nm) indikovala vyššiu redukčnú kapacitu. Štandardný vitamín C sa použil na stanovenie obsahu ekvivalentu vitamínu C (VCE) na gram RPH.

3.3.6. Kapacita absorpcie kyslíkových radikálov (ORAC)

Táto štúdia získala ORAC modifikáciou predtým publikovanej metódy [65]. Po rozpustení vzorky RPH v destilovanej vode sa roztok RPH (50 ul) zmiešal s fluoresceínom (10 uM) v 96-jamkovej mikrotitračnej doštičke. Roztok sa podrobil 15-minútovej inkubácii pri 37 °C, po ktorej nasledovalo pridanie 50 ul AAPH (500 mM). Každých 5 minút a celkovo počas 120 minút sa zaznamenávala fluorescencia (λex a λem=485 a 528 nm). Antioxidačná kapacita RPH bola objavená z kinetiky rozpadu fluorescencie výpočtom plochy pod krivkou (AUC ). Pri výpočte RPH ORAC bol štandard 15–250 µM Trolox. ORAC sa uvádza ako mikromóly ekvivalentu Troloxu (TE) na pergram suchej vzorky RPH (µmol TE/g RPH).

3.4. Hyaluronidázová inhibičná aktivita

Test inhibície hyaluronidázy sa uskutočnil pomocou {{0}}jamkovej mikrodoštičky a predtým opísanej metódy s miernymi úpravami [40]. N-acetylglukózamín sa uvoľnil reakciou hyaluronidázy s HA ​​substrátom. V prítomnosti akéhokoľvek inhibítora sa uvoľňovanie N-acetylglukózamínu znížilo, pričom toto uvoľňovanie sa detegovalo získaním absorbancie 600-nm. HA sa vyzrážala kyslým roztokom albumínu zloženým z 0,1 M acetátového pufra (pH 3,9) a albumínu hovädzieho séra (1 mg/ml). Roztok vzorky a 5 mg/ml hyaluronidázy sa inkubovali 20- min pri 37 °C. K inkubačnej zmesi sa následne pridala HA (1{{20}}0 ul; 5,0 mg/ml v 0,1 M acetátovom pufri). Uskutočnila sa ďalšia inkubácia pri 37 °C počas 40 minút. Na zastavenie enzymatickej reakcie sa pridalo 0,1 ml 0,4 M alkalického roztoku boritanu.

3.5. Inhibičná aktivita tyrozinázy

Táto štúdia hodnotila antityrozinázovú aktivitu RPH s použitím skôr opísaného protokolu s modifikáciami [66]. Roztok enzýmu (135 U/ml) sa pripravil rozpustením tyrozinázy v 20 mM fosfátovom pufri (pH 6,8). Okrem toho sa na prípravu roztoku 1,25 mM L-DOPA použila DI voda. Potom sa 40 ul rôznych koncentrácií roztokov vzoriek RPH zmiešalo so 40 ul roztoku tyrozinázy a 120 ul roztoku L-DOPA. Počas 30 minút sa táto zmes udržiavala pri 37 ◦C v teste inhibície RPHstyrozinázačinnosť. Na získanie absorbancie 475-nm sa použil spektrofotometer (FLUOstar Omega MicroplateReader, BMG Labtech GmbH, Nemecko). Všetky merania sa uskutočnili trikrát. Absorbancia zodpovedajúcej skupiny, keďtyrozinázanebol prítomný bol odpočítaný. Rýchlosť inhibície enzýmu bola stanovená ako

3.6. Charakterizácia RPH

3.6.1. Profily aminokyselín

Táto štúdia objavila zloženie aminokyselín RPH. Najprv sa počas 24 hodín a pri 115 °C použila 4 M kyselina metánsulfónová na hydrolýzu vzoriek vo evakuovaných utesnených skúmavkách. Na derivatizovanú separáciu aminokyselín na kolóne Spherisorb ODS2 s dĺžkou 25 m sa použili dva systémy dodávania rozpúšťadla Waters 51{9}} a analyzátor aminokyselín (L 8900; Hitachi, Tokio, Japonsko). × 64,6 mm. V tejto štúdii sa použili nasledujúce rozpúšťadlá: (a) octan sodný (0,14 M) a trietylamín (850 ul/l; pH 5,6) a (b) 60 % acetonitril, pre ktorý bol gradient 0 % počas 2 minút; 0–42 percent počas 15,5 minúty (konvexná krivka); a 100 percent počas 4 minút. Boli odobraté duplicitné vzorky na meranie profilov aminokyselín pri 254 nm [67,68].

3.6.2. Molekulová hmotnosť (MW) proteínu

V súlade so Schäggerovou metódou [69] a za redukčných podmienok táto štúdia získala distribúciu molekulovej hmotnosti prostredníctvom elektroforézy tricín-dodecylsulfát sodný (SDS)-polyakrylamidgel (PAGE) s miernymi úpravami. Vzorkový pufor (30 g/l SDS, 0,375 MTris-HCl, 0,125 g/l Coomassie Brilliant Blue G-250 a 75 g/ L glycerol; pH 7) sa použil na dispergovanie lyofilizovanej vzorky, pričom sa pred naplnením uskutočnila centrifugácia. Celkom 20 ul 2-merkaptoetanolu sa pridalo k 1 ml tricín-SDS-PAGE vzorky. Vzorka bola zahrievaná na 100 ◦C počas 90 s. Do jamky vzorky sa naplnila každá vzorka a štandardný široký rozsah nezafarbeného proteínu (Bio-Rad Laboratories, Nemecko) pomocou mikrostriekačky. Potom sa uskutočnila elektroforéza - najprv pri konštantnom 30 mV, kým nebola celá vzorka obsiahnutá v stohovacom géli, a potom až do dokončenia pri konštantnom 100 mV. Následne sa na gélové farbenie použil 0,02 percentný roztok Coomassie Brilliant Blue R-250. Absolútne odfarbenie pozadia gélov sa uskutočnilo trepaním gélov v 10 percentnej kyseline octovej cez noc. Nakoniec sa analyzoval gélový obraz na identifikáciu proteínových pásov v dráhach; táto analýza bola vykonaná v ImageJ (USNational Institute of Health, Bethesda, MD, USA). Na získanie kalibračnej krivky, z ktorej sa odhadla MW, sa použili štandardné markery. Stručne povedané, prvým krokom bolo určenie dĺžky migrácie každého pásu (Rf) z hornej časti separačného gélu. Druhým krokom bol výpočet kalibračnej krivky s použitím Rf a log (MW) pre štandardný marker s danou MW. Stanovenie molekulovej hmotnosti sa uskutočnilo s použitím Rf proteínových pásov v RPH.

3.7. Test cytotoxicity

Surové bunky 264.7 sa kultivovali v Dulbeccovom modifikovanom Eaglovom médiu (DMEM) s vysokým obsahom glukózy obsahujúcom 10 percent fetálneho bovinného séra (FBS), 4,5 g/l glukózy, 1 percentný roztok antibiotika (100 jednotiek/ ml penicilínu a 100 ug/ml streptomycínu), 4 mM L-glutamínu a 1,5 g/l hydrogenuhličitanu sodného pri 37 °C a 5 percentách CO2. Bunková toxicita surových buniek 264.7 pre RPH sa merala metódou testu proliferácie 3-(4,{19}}dimetyltiazol-2-yl)-2},5-difenyltetrazóliumbromidu (MTT) . Približne 1 x 104 buniek na jamku bolo nanesených na 96-jamkové platne. Po 24 hodinách boli do buniek pridané rôzne koncentrácie RPH (0–2000 µg/ml). Po 24 a 48 hodinách inkubácie sa pridalo 100 ul roztoku MTT (0,5 mg/ml). Pri kontrole pod mikroskopom boli pozorované modré formazanové kryštály. DMEM sa odstránilo a do každej jamky sa pridalo 100 ul dimetylsulfoxidu (DMSO). Absorbancia sa merala pomocou čítačky mikrotitračných doštičiek. Životaschopnosť buniek (v percentách) sa potom vypočítala ako [A570 (ošetrené bunky) - A570 (pozadie)] / [A570 (neliečené bunky) - A570 (pozadie)] × 100 percent [70].

3.8. Štatistická analýza

Správa pre každú vzorku hydrolyzátu bola priemerná hodnota z troch nezávislých opakovaných experimentov a stanovení. Výsledky vyjadrené ako priemer ± štandardná odchýlka (SD) boli analyzované jednosmernou ANOVA a Duncanovým post hoc testom pomocou štatistického analytického systému (verzia 20.0; SPSS, Armonk, NY, USA). Hodnoty p < 0,05="" boli="" považované="" za="" štatisticky="">

4. Závery

Táto štúdia skúmala funkcie RPH. Experimentálne výsledky odhalili, že RPH obsahovali fenolové zlúčeniny a flavonoidy a vykazovali celý rad antioxidačných aktivít, ako sú aktivity zachytávajúce DPPH a ABTS, redukčnú kapacitu a ORAC. Okrem toho RPH účinne inhibovalityrozinázaa hyaluronidázové aktivity. Proteáza bola kritickým faktorom ovplyvňujúcim MW vzory RPH. Analýza RPH naznačuje ich potenciál na použitie ako prísada do kozmetiky.

cistanche kulturistika

Referencie

1. Ichihashi, M.; Ando, ​​H.; Yoshida, M.; Niki, Y.; Matsui, M. Fotostarnutie kože. Anti-Aging Med. 2009, 6, 46–59. [CrossRef]

2. Kim, J.-S.; Kim, D.; Kim, H.-J.; Jang, A. Ochranný účinok želatínových hydrolyzátov z oslej kože na UVB-indukované fotostarnutie fibroblastov ľudskej kože. Proces. Biochem. 2018, 67, 118–126. [CrossRef]

3. Carocho, M.; Ferreira, IC Prehľad o antioxidantoch, prooxidantoch a súvisiacej kontroverzii: Prírodné a syntetické zlúčeniny, skríningové a analytické metodológie a perspektívy do budúcnosti. Food Chem. Toxicol. 2013, 51, 15–25. [CrossRef]

4. Guo, X.; Zhang, J.; Smieť.; Tian, ​​S. Optimalizácia obmedzenej hydrolýzy proteínov vo zvyškoch ryže a charakterizácia funkčných vlastností produktov. J. Food Proc. Zachovať. 2013, 37, 245–253. [CrossRef]

5. Park, H.-Y.; Lee, K.-W.; Choi, H.-D. Zložky ryžových otrúb: Imunomodulačné a terapeutické aktivity. Funkcia jedla. 2017, 8 935–943. [CrossRef] [PubMed]

6. Zhou, K.; Canning, C.; Sun, S. Účinky ryžových proteínových hydrolyzátov pripravených mikrobiálnymi proteázami a ultrafiltráciou na voľné radikály a oxidáciu lipidov v mäse. LWT 2013, 50, 331–335. [CrossRef]

7. Piu', LD; Tassoni, A.; Serrazanetti, DI; Ferri, M.; Babini, E.; Tagliazucchi, D.; Gianotti, A. Využitie tekutého vedľajšieho produktu škrobového priemyslu na výrobu bioaktívnych peptidov z proteínov hydrolyzovaných ryžou. Food Chem. 2014, 155, 199–206. [CrossRef]

8. Ferri, M.; Graen-Heedfeld, J.; Bretz, K.; Guillon, F.; Michelini, E.; Calabretta, MM; Lamborghini, M.; Gruarin, N.; Roda, A.;Kraft, A.; a kol. Peptidové frakcie získané z vedľajších produktov ryže pomocou procesu šetrného k životnému prostrediu ukazujú bioaktivity súvisiace so zdravím VitroHealth. PLOS ONE 2017, 12, e0170954. [CrossRef]

9. Wen, C.; Zhang, J.; Zhang, H.; Duan, Y.; Ma, H. Antioxidačné peptidy odvodené od rastlinných bielkovín: izolácia, identifikácia, mechanizmus účinku a aplikácia v potravinových systémoch: prehľad. Trends Food Sci. Technol. 2020, 105, 308–322. [CrossRef]

10. Phelan, M.; Aherne, A.; FitzGerald, RJ; O'Brien, NM Bioaktívne peptidy odvodené od kazeínu: Biologické účinky, priemyselné využitie, bezpečnostné aspekty a regulačný stav. Int. Mliekareň J. 2009, 19, 643–654. [CrossRef]

11. Udenigwe, CC; Aluko, RE Food Bioaktívne peptidy odvodené od bielkovín: Výroba, spracovanie a potenciálne prínosy pre zdravie. J.Food Sci. 2012, 77, 11–24. [CrossRef] [PubMed]

12. Fardet, A.; Rock, E. In vitro a in vivo antioxidačný potenciál mlieka, jogurtov, fermentovaných mliek a syrov: Naratívny prehľad dôkazov. Nutr. Res. Rev. 2018, 31, 52–70. [CrossRef]

13. Leach, JB; Kathryn, AB; Charles, WPJ; Christine, ES Fotosieťované hydrogély kyseliny hyalurónovej: Prírodné, biologicky odbúrateľné tkanivové inžinierske lešenia. Biotechnol. Bioeng. 2003, 82, 578-589. [CrossRef]

14. Jegasothy, SM; Zabolotniaia, V.; Bielfeldt, S. Účinnosť novej lokálnej nano-hyalurónovej kyseliny u ľudí. J. Clin. Aesthet.Dermatol. 2014, 7, 27–29.

15. Ndlovu, G.; Fouche, G.; Tselanyane, M.; Cordier, W.; Steenkamp, ​​V. In vitro stanovenie anti-agingového potenciálu štyroch juhoafrických liečivých rastlín. Doplnok BMC. Altern. Med. 2013, 13, 304. [CrossRef]

16. Jiratchayamaetasakul, C.; Ding, Y.; Hwang, O.; Im, S.-T.; Jang, Y.; Myung, S.-W.; Lee, JM; Kim, H.-S.; Ko, S.-C.; Lee, S.-H. In vitro skríning inhibičných a antioxidačných aktivít elastázy, kolagenázy, hyaluronidázy a tyrozinázy 22 extraktov z halofytných rastlín pre nové kozmeceutiká. Ryby. Aquat. Sci. 2020, 23, 1–9. [CrossRef]

17. Kang, M.; Park, S.-H.; Oh, SW; Lee, SE; Yoo, JA; Nho, YH; Lee, S.; Han, BS; Cho, JY; Lee, J. Antimelanogénne účinky rezorcinolu sú sprostredkované potlačením signalizácie cAMP a aktiváciou signalizácie p38 MAPK. Biosci. Biotechnol. Biochem.2018, 82, 1188–1196. [CrossRef]

18. Chatatikun, M.; Yamauchi, T.; Yamasaki, K.; Aiba, S.; Chiabchalard, A. Antimelanogénny účinok listov Croton roxburghii a Crotonsublyratus v bunkách B16F10 stimulovaných -MSH. J. Tradit. Doplniť. Med. 2019, 9, 66–72. [CrossRef] [PubMed]

19. Rizzello, CG; Nionelli, L.; Coda, R.; Gobbetti, M. Syntéza rakovinového preventívneho peptidu lunasínu baktériami kyseliny mliečnej počas fermentácie kvasením. Nutr. Rakovina 2012, 64, 111–120. [CrossRef] [PubMed]

20. Rizzello, CG; Tagliazucchi, D.; Babini, E.; Rutella, GS; Saa, DLT; Gianotti, A. Bioaktívne peptidy z rastlinných potravinových matríc: Trendy výskumu a nové biotechnológie pre syntézu a regeneráciu. J. Funct. Potraviny 2016, 27, 549–569. [CrossRef]

21. Coscueta, ER; Campos, DA; Osório, H.; Nerli, BB; Pintado, M. Enzymatická hydrolýza sójového proteínu: Nástroj na výrobu biofunkčných potravinárskych prísad. Food Chem. X 2019, 1, 100006. [CrossRef]

22. Aydemir, LY; Yemenicioglu, A. Sú fenolické antioxidanty viazané na bielkoviny v strukovinách neviditeľnou súčasťou ľadovca? J. Plant. Biochem.Physiol. 2013, 1, 1–3. [CrossRef]

23. Huang, SH; Ng, LT Kvantifikácia obsahu polyfenolov a bioaktívnych zložiek niektorých komerčných odrôd ryže na Taiwane. J. Food Compos. Anal. 2012, 26, 122–127. [CrossRef]

24. Yoshitomi, K.; Taniguchi, S.; Tanaka, K.; Uji, Y.; Akimitsu, K.; Gomi, K. Ryžová terpénsyntáza 24 (OsTPS24) kóduje monoterpénsyntázu reagujúcu na jasmonát, ktorá produkuje antibakteriálny terpinén proti patogénu ryže. J. Plant. Physiol. 2016, 191,120–126. [CrossRef]

25. Kamolsukyeunyong, W.; Sukhaket, W.; Pitija, K.; Thorngkham, P.; Mahatheeranont, S.; Toojinda, T.; Vanavichit, A. RiceSesquiterpene hrá dôležitú úlohu v antixenóze proti hnedému planthopperovi v ryži. Rastliny 2021, 10, 1049. [CrossRef][PubMed]

26. Liu, Y.; Wang, Z.; Li, H.; Liang, M.; Yang, L. In vitro antioxidačná aktivita ryžového proteínu ovplyvnená alkalickým stupňom a trávením gastrointestinálnych proteáz. J. Sci. Food Agric. 2016, 96, 4940–4950. [CrossRef] [PubMed]

27. Phongthai, S.; D'Amico, S.; Schoenlechner, R.; Homthawornchoo, W.; Rawdkuen, S. Frakcionačné a antioxidačné vlastnosti proteínových hydrolyzátov ryžových otrúb stimulované in vitro gastrointestinálnym trávením. Food Chem. 2018, 240, 156–164. [CrossRef][PubMed]

28. Huang, S.-L.; Wang, W.-H.; Zhong, X.-Y.; Lin, C.-T.; Lin, W.-S.; Chang, M.-Y.; Lin, Y.-S. Antioxidačné vlastnosti Jatropha curcas L. Výťažky zo škrupiny semien a jadier. Appl. Sci. 2020, 10, 3279. [CrossRef]

29. Lin, Y.-S.; Lin, W.-S.; Tung, J.-W.; Cheng, Y.-C.; Chang, M.-Y.; Chen, C.-Y.; Huang, S.-L. Antioxidačné schopnosti semien a dužiny z jujuby. Appl. Sci. 2020, 10, 6007. [CrossRef]

30. Shahi, Z.; Sayyed-Alangi, SZ; Najafian, L. Účinky typu enzýmu a času procesu na stupeň hydrolýzy, elektroforézne pásy a antioxidačné vlastnosti hydrolyzovaných proteínov odvodených z odtučneného Bunium persicum Bioss. tlačenka. Heliyon 2020, 6, e03365. [CrossRef] [PubMed]

31. Xie, H.; Huang, J.; Woo, MW; Hu, J.; Xiong, H.; Zhao, Q. Vplyv deaktivácie enzýmov za studena a za tepla na štrukturálne a funkčné vlastnosti proteínových hydrolyzátov ryže. Food Chem. 2021, 345, 128784. [CrossRef]

32. Rani, S.; Pooja, K.; Pal, GK Prieskum hydrolyzátov a peptidov ryžových proteínov so špeciálnym odkazom na antioxidačný potenciál: Výpočtové odvodené prístupy na stanovenie bioaktivity. Trends Food Sci. Technol. 2018, 80, 61–70. [CrossRef]

33. Bisby, RH; Brooke, R.; Navaratnam, S. Vplyv antioxidačného oxidačného potenciálu v teste absorpčnej kapacity kyslíkových radikálov (ORAC). Food Chem. 2008, 108, 1002-1007. [CrossRef]

34. Eliáš, RJ; Kellerby, SS; Decker, E. Antioxidačná aktivita proteínov a peptidov. Crit. Food Sci. Nutr. 2008, 48, 430–441.[CrossRef] [PubMed]

35. Mine, Y.; Li-Chan, E.; Jiang, B. (Eds.) Bioaktívne proteíny a peptidy ako funkčné potraviny a nutraceutiká; Wiley-Blackwell: Hoboken, NJ, USA, 2010; s. 29–42.

36. Adebiyi, AP; Adebiyi, AO; Yamashita, J.; Ogawa, T.; Muramoto, K. Purifikácia a charakterizácia antioxidačných peptidov získaných z proteínových hydrolyzátov ryžových otrúb. Eur. Food Res. Technol. 2008, 228, 553–563. [CrossRef]

37. Thamnarathip, P.; Jangchud, K.; Nitisinprasert, S.; Vardhanabhuti, B. Identifikácia molekulovej hmotnosti peptidu z hydrolyzátu ryžových otrúb s vysokou antioxidačnou aktivitou. J. Cereal Sci. 2016, 69, 329–335. [CrossRef]

38. Tacias-Pascacio, VG; Morellon-Sterling, R.; Siar, E.-H.; Tavano, O.; Berenguer-Murcia, Á.; Fernandez-Lafuente, R. Použitie Alcalaseinu na produkciu bioaktívnych peptidov: Prehľad. Int. J. Biol. Macromol. 2020, 165, 2143–2196. [CrossRef] [PubMed]

39. Sarringkarin, W.; Laokuldilok, T. Optimalizácia podmienok výroby proteínového hydrolyzátu glutinóznych ryžových otrúb s antioxidačnými vlastnosťami. CMU J. Nat. Sci. 2017, 16, 1–18. [CrossRef]

40. Zhang, Q.; Tong, X.; Qi, B.; Wang, Z.; Li, Y.; Sui, X.; Jiang, L. Zmeny v antioxidačnej aktivite sójového hydrolyzátu hydrolyzovaného Alcalase pri simulovanom gastrointestinálnom trávení a transepiteliálnom transporte. J. Funct. Potraviny 2018, 42, 298–305. [CrossRef]

41. Tu, PTB; Tawata, S. Antioxidačné, anti-aging a anti-melanogénne vlastnosti esenciálnych olejov z dvoch odrôd Alpinia zerumbet. Molekuly 2015, 20, 16723–16740. [CrossRef]

42. Nishida, Y.; Sugahara, S.; Wada, K.; Toyohisa, D.; Tanaka, T.; Ono, M.; Yasuda, S. Inhibičné účinky etylacetátového extraktu z cibúľ Scilla scilloides na aktivity lipoxygenázy a hyaluronidázy. Pharm. Biol. 2014, 52, 1351–1357. [CrossRef]

43. Chen, H.-J.; Dai, F.-J.; Fan, S.-L.; Huang, Y.-C.; Chau, C.-F.; Lin, Y.-S.; Chen, C.-S. Kinetika inhibície hyaluronidázy hydrolyzátom ryžového proteínu (Oryza sativa L.). Appl. Sci. 2020, 10, 9087. [CrossRef]

44. Girish, K.; Kemparaju, K. Magické lepidlo hyaluronan a jeho guma hyaluronidáza: biologický prehľad. Life Sci. 2007, 80,1921–1943. [CrossRef] [PubMed]

45. Zolghadri, S.; Bahrami, A.; Khan, MTH; Munoz-Munoz, J.; Garcia-Molina, F.; Garcia-Canovas, F.; Saboury, AA Komplexný prehľad inhibítorov tyrozinázy. J. Enzym. Inhib. Med. Chem. 2019, 34, 279–309. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Seo, EJ; Hong, ES; Choi, MH; Kim, KS; Lee, SJ Antioxidačné a bieliace účinky extraktov z Rhamnus yoshinoi. KórejskýJ. Food Sci. Technol. 2010, 42, 750–754.

47. Ochiai, A.; Tanaka, S.; Tanaka, T.; Taniguchi, M. Proteín z ryžových otrúb ako silný zdroj antimelanogénnych peptidov s inhibičnou aktivitou tyrozinázy. J. Nat. Prod. 2016, 79, 2545–2551. [CrossRef] [PubMed]

48. Kubglomsong, S.; Theerakulkait, C.; Reed, RL; Yang, L.; Maier, CS; Stevens, JF Izolácia a identifikácia tyrozinázových inhibítorov a peptidov chelatujúcich meď z hydrolyzovaného albumínu získaného z ryže a otrúb. J. Agric. Food Chem. 2018, 66, 8346–8354.[CrossRef]

49. Schurink, M.; van Berkel, WJ; Wichers, H.; Boeriu, CG Nové peptidy s inhibičnou aktivitou tyrozinázy. Peptides 2007, 28,485-495. [CrossRef]

5 0. Ishikawa, M.; Kawase, I.; Ishii, F. Kombinácia aminokyselín znižuje pigmentáciu v bunkách melanómu B16F0. Biol. Pharm.Bull. 2007, 30, 677-681. [CrossRef] [PubMed]

51. Zhang, R.; Wei, Y.; Li, M.; Cai, M.; Gu, R.; Smieť.; Chen, L.; Wang, J. Melanogenéza účinky hydrolyzátu ryžového proteínu a jeho charakteristických peptidov Leu-Leu-Lys, Leu-Pro-Lys a pyroGlu-Lys na bunky epidermálnych melanocytov indukované UVB. FoodFunct. 2020, 11, 8757–8767. [CrossRef]

52. Wang, Y.; Cai, D.; On, M.; Wang, Z.; Qin, P.; Tan, T. Otvorená fermentačná výroba kyseliny l-mliečnej pomocou bielych ryžových otrúb simultánnou scukornatením a fermentáciou. Bioresour. Technol. 2015, 198, 664–672. [CrossRef] [PubMed]

53. Pan, M.; Jiang, TS; Pan, JL Antioxidačné aktivity repkových proteínových hydrolyzátov. Bioproces potravín. Technol. 2009, 4, 1144 – 1152.[CrossRef]

54. Chen, HM; Muramoto, K.; Yamauchi, F.; Nokihara, K. Antioxidačná aktivita navrhnutých peptidov založených na antioxidačnom peptide izolovanom z natrávených proteínov zo sójových bôbov. J. Agric. Food Chem. 1996, 44, 2619-2623. [CrossRef]

55. Liu, Q.; Kong, B.; Xiong, YL; Xia, X. Antioxidačná aktivita a funkčné vlastnosti hydrolyzátu bravčového plazmatického proteínu ovplyvnené stupňom hydrolýzy. Food Chem. 2010, 118, 403–410. [CrossRef]

56. Lemes, A.; Šaľa, L.; Ores, JDC; Braga, ARC; Egea, MB; Fernandes, KF Prehľad najnovších pokrokov v šifrovaných bioaktívnych peptidoch z odpadu bohatého na bielkoviny. Int. J. Mol. Sci. 2016, 17, 950. [CrossRef] [PubMed]

57. Wang, J.-S.; Zhao, M.-M.; Zhao, Q.-Z.; Jiang, Y.-M. Antioxidačné vlastnosti papaínových hydrolyzátov pšeničného lepku v rôznych oxidačných systémoch. Food Chem. 2007, 101, 1658–1663. [CrossRef]

58. Gao, M.-T.; Kaneko, M.; Hirata, M.; Toorisaka, E.; Hano, T. Využitie ryžových otrúb ako zdroja živín na fermentačnú produkciu kyseliny mliečnej. Bioresour. Technol. 2008, 99, 3659–3664. [CrossRef] [PubMed]

59. Huang, WY; Lin, YR; Ho, RF; Liu, HY; Lin, YS Účinky vodných roztokov na extrakciu listov zeleného čaju. Sci. World J. 2013, 2013, 368350. [CrossRef]

60. Wathoni, N.; Shan, CY; Shan, WY; Rostinawati, T.; Indradi, RB; Pratiwi, R.; Muchtaridi, M. Charakterizácia a antioxidačná aktivita pektínu z kôry indonézskeho mangostanu (Garcinia mangostana L.). Heliyon 2019, 5, e02299. [CrossRef]

61. Tsai, C.-C.; Chan, C.-F.; Huang, W.-Y.; Lin, J.-S.; Chan, P.; Liu, H.-Y.; Lin, Y.-S. Aplikácie supernatantu Lactobacillus rhamnosus SpentCulture Supernatant v kozmetických antioxidačných aplikáciách, bielení a zadržiavaní vlhkosti. Molekuly 2013, 18, 14161–14171.[CrossRef]

62. Huang, W.-Y.; Lee, P.-C.; Hsu, J.-C.; Lin, Y.-R.; Chen, H.-J.; Lin, Y.-S. Účinky kvality vody na rozpúšťanie extraktov Yerba Mate. Sci. Svet J. 2014, 2014, 1.–6. [CrossRef] [PubMed]

63. Chan, C.-F.; Wu, C.-T.; Huang, W.-Y.; Lin, W.-S.; Wu, H.-W.; Huang, T.-K.; Chang, M.-Y.; Lin, Y.-S. Antioxidácia a melanogenéza inhibícia rôznych výťažkov z Dendrobium tosaense. Molecules 2018, 23, 1810. [CrossRef] [PubMed]64. Wu, C.-T.; Agrawal, DC; Huang, W.-Y.; Hsu, H.-C.; Yang, S.-J.; Huang, S.-L.; Lin, Y.-S. Analýza funkčnosti použitých extraktov z mletej kávy získaných hydrotermálnou metódou. J. Chem. 2019, 2019, 1.–8. [CrossRef]

65. Dorta, E.; Rodríguez-Rodríguez, EM; Jiménez-Quezada, A.; Fuentes-Lemus, E.; Speisky, H.; Lissi, E.; López-Alarcón, C. Použitie testu Oxygen Radical Absorbance Capacity (ORAC) na predpovedanie kapacity vedľajších produktov manga (Mangifera indica L.) na inhibíciu oxidácie mäsových bielkovín. Food Anal. Metódy 2016, 10, 330–338. [CrossRef]

66. Lin, Y.-S.; Chen, H.-J.; Huang, J.-P.; Lee, P.-C.; Tsai, C.-R.; Hsu, T.-F.; Huang, W.-Y. Kinetika inhibičnej aktivity tyrozinázy pomocou extraktov z listov Vitis vinifera. BioMed Res. Int. 2017, 2017, 5232680. [CrossRef] [PubMed]

67. Bidlingmeyer, BA; Cohen, SA; Tarvin, TL Rýchla analýza aminokyselín s použitím predstĺpcovej derivatizácie. J. Chromatogr. BBiomed. Sci. Appl. 1984, 336, 93-104. [CrossRef]

68. Asai, TT; Oikawa, F.; Yoshikawa, K.; Inoue, N.; Sato, K. Kolagénové peptidy získané z potravy, prolyl-hydroxyprolín (Pro-Hyp) a hydroxyprolyl-glycín (Hyp-Gly) zvyšujú rast primárne kultivovaných fibroblastov kože myší pomocou fetálneho bovinného séra bez hydroxyprolylového peptidu. Int. J. Mol. Sci. 2019, 21, 229. [CrossRef]

69. Schägger, H. Tricine–SDS–PAGE. Nat. Protoc. 2006, 1, 16-22. [CrossRef]

70. Diao, J.; Chi, Z.; Guo, Z.; Zhang, L. Proteínový hydrolyzát z fazule mungovej moduluje imunitnú odpoveď prostredníctvom inlipopolysacharidom stimulovaných RAW 264.7 makrofágov NF-kB. J. Food Sci. 2019, 84, 2652–2657.[CrossRef]