Experimentálna štúdia ochranného účinku predbežnej liečby glykozidmi Cistanche na ischemicko-reperfúzne poškodenie obličiek

pre viac informácií:{0}}

Zhu Jun, Zhao Ximin

(Chirurgické oddelenie, okresná nemocnica integrovanej tradičnej čínskej a západnej medicíny Baoshan, Šanghaj 201900)

【Abstrakt】Cieľ Vytvoriť resuscitačný model hemoragického šoku u potkanov a pozorovať ochranný účinokCistanchecelkové glykozidy (CTG) na renálne ischemicko-reperfúzne poškodenie. Metódy SD potkany boli náhodne rozdelené do 3 skupín: skupina s falošnou operáciou, experimentálna skupina (skupina s šokovou resuscitáciou), skupina liečená CTG, 10 potkanov v každej skupine. Experimentálna skupina a skupina liečená CTG vytvorili modely renálnej ischémie a reperfúzie. Potkanom v liečenej skupine sa intraperitoneálne injikovalo CTG 400 mg/kg a experimentálnej skupine a skupine so simulovanou operáciou sa injikoval fyziologický roztok. Obsah myokardu v krvi, obsah močovinového dusíka a cystatín C každej skupiny sa detegoval na stanovenie funkcie obličiek, na zistenie rýchlosti apoptózy obličkových buniek sa použila analýza prietokovou cytometriou; enzým-linked immunoassay (ELISA) sa použil na detekciu X-chromozómovej väzby u potkanovobličkytkanivová expresia X-viazaného inhibítora proteínu apoptózy (XIAP). Výsledky Porovnaním skupiny CTG s experimentálnou skupinou sa výrazne znížil Cr, BUN a cystatín C v krvi (P<0.01), renal="" cell="" apoptosis="" was="" reduced=""><0.05), ctg="" can="" significantly="" increase="" the="" expression="" of="" xiap=""><0.05). conclusion="" the="" total="" glycosides="" of="">cistanchemajú ochranný účinok na renálne ischemicko-reperfúzne poškodenie u potkanov, čo môže súvisieť s podporou expresie XIAP.

[Kľúčové slová] obličky; ischemicko-reperfúzne poškodenie; celkové glykozidy cistanche; inhibítor proteínu apoptózy spojený s chromozómom; apoptóza; potkan

[Klasifikačné číslo čínskej knižnice] R692 [Kód na označovanie dokumentu] A [Číslo článku] 1008 -0392 (2015) 02-0037 -04

Kliknutím zobrazíte Cistanche EXTRAKTNÝ PRÁŠOK na obličky

Ischemicko-reperfúzne (I/R) poškodenie je bežným patofyziologickým javom poškodenia obličiek v procese hemoragického šoku, ťažkej traumy,obličkytransplantácie aobličkyoperácia nádoru. Štúdie ukázali, že apoptóza je dôležitou súčasťou poškodenia funkcie obličiek spôsobeného poranením I/R (1). X-viazaný inhibítor proteínu apoptózy (XIAP) je jedným z najsilnejších doteraz nájdených endogénnych inhibítorov apoptózy (2). Existuje len málo štúdií o antiapopotickom účinku XIAP v obličkovom tkanive po poranení I/R.Cistanchecelkové glykozidy (CTG) je zlúčenina celkových glykozidov fenyletanoidov extrahovaná zCistanchektorý má rôzne biologické funkcie. Existuje len málo štúdií o jeho renálnej ochrane po I/R poranení. . Táto štúdia vytvorila model resuscitácie hemoragického šoku u potkanov a vytvorila model systémového I/R poranenia na preskúmanie ochranného účinku celkových glykozidov mäsovej hernie naobličkyz I/R poranenia a preskúmať jeho možný mechanizmus.

1 Materiály a metódy

1.1 Zvieratá a zoskupovanie

Experimentálne centrum Šanghajskej univerzity tradičnej čínskej medicíny poskytuje 30 čistých a zdravých samcov potkanov s hmotnosťou (320 ± 30) g. Náhodne rozdelené do 3 skupín: skupina simulovanej operácie, experimentálna skupina (skupina šokovej resuscitácie), skupina CTG, každá s 10 potkanmi.

1.2 Hlavné činidlá a prístroje

Celkové glykozidy lepkavej ryže (číslo šarže: 20081516) boli zakúpené od Zhejiang Hangzhou Xinghui Tianli Pharmaceutical Co., Ltd.; pentobarbital sodný, Hoechst 33258 a propionyljodid boli zakúpené od Sigma, USA; Protein Assay Kit (XIAP) a ELISA Kit boli zakúpené od Shanghai Kemin Biotechnology Co., Ltd.; čítačka mikrodoštičiek bola zakúpená od Thermo Company, USA; multiparametrový fyziologický detektor bol zakúpený od Nihon Kohden Company, Japonsko; prietokový cytometer BDFACSAria bol zakúpený od Becton, USA - Dickinson Company; 24G trokar bol zakúpený od Shandong Jierui Medical Devices Company.

1.3 Experimentálna metóda

1.3.1 Príprava zvieracieho modelu SD potkany boli nalačno 12 hodín pred experimentom a anestetizované intraperitoneálnou injekciou pentobarbitalu sodného (50 mg/kg).

Potkana sa zafixovala v polohe na chrbte, urobil sa 3 cm rez v ľavom podbrušku, oddelila sa femorálna artéria, zaviedol sa 24G trokar a pripojil sa viacparametrový fyziologický detektor. Priemerný krvný tlak potkana sa meral ako (113 ± 15) mmHg, 20 ml injekčná striekačka heparín. Krvný tlak sa znížil na 40 mmHg (1 mmHg=0. 133 kPa) pomocou trojcestného chemického zariadenia. Šok bol považovaný za spustený a krvný tlak bol udržiavaný počas 90 minút. Objem krvi bol (13 ± 3) ml a potom autológna krv v injekčnej striekačke Pomalá reinfúzia trvá asi 30 minút a krvný tlak sa vráti na viac ako 90 percent základnej hodnoty a resuscitácia sa považuje za úspešnú (3) . Trokar sa vytiahol, stehenná tepna sa podviazala a rez sa zašil. Keď sa potkany prebudili, vrátili sa do klietky na pozorovanie a mohli voľne jesť a piť. 24 hodín po resuscitácii bola použitá intraperitoneálna injekcia pentobarbitalu sodného (50 mg/kg) na anestéziu, laparotómiu, 5 ml krvi bolo odobraných z dolnej dutej žily, potkany boli okamžite usmrtené a bola im odobratá ľavá a pravá oblička. použitie.

1.3.2 Metódy medikácie Skupine liečenej CTG bolo podané CTG 2 hodiny pred prekrvením potkanov a injikované do brušnej dutiny v dávke 400 mg/kg. Experimentálnej skupine boli intraperitoneálne podané 3 ml normálneho fyziologického roztoku 2 hodiny pred odberom krvi; skupina s falošnou operáciou podstúpila iba anestéziu, laparotómiu a oddelenie femorálnej artérie, umiestnenie trokaru a sutúru rezu, ale bez krvácania alebo resuscitácie. Zvyšok bol rovnaký ako v experimentálnej skupine.

1. 4 detekčné ukazovatele a metódy

1.4.1 Stanovenie obsahu BUN, Cr a cystatínu C v krvi Cystatín C je endogénny marker zmien rýchlosti glomerulárnej filtrácie. Pri poruche funkcie obličiek sa zníži rýchlosť glomerulárnej filtrácie, koncentrácia cystatínu C v krvi sa môže 10-krát zvýšiť a diagnostická presnosť cystatínu C je výrazne lepšia ako pri intoxikácii svalov v sére. Obsah krvi BUN, Cr a cystatín C boli predložené laboratóriu našej nemocnice na stanovenie.

1.4.2 Stanovenie rýchlosti apoptózy buniek Na detekciu rýchlosti apoptózy obličkových buniek sa použila prietoková cytometria. Vezmite obličku a nasekajte ju čepeľou, pridajte trochu PBS a preneste ju do skúmavky. Pridajte 0,3 percenta trypsínu na strávenie vo vodnom kúpeli 37 P, inkubujte 20 min, keď sa obsah v skúmavke zakalí, pridajte 2-krát PBS, aby ste zastavili trávenie, prefiltrujte pomocou nylonovú sieťku s veľkosťou ôk 30}0, nečistoty zlikvidujte a odstred'ujte v nízkoteplotnej odstredivke. Polomer centrifúgy 8 cm, 12, 000 ot./min., centrifugujte 5 minút, odstráňte supernatant, upravte koncentráciu buniek na 1 ~ 1,5 x 106/ml, odoberte 0,4 ml vyššie uvedenej bunkovej suspenzie a pridajte 1,2 ml Hoechst 33258 (10 pil/ml), tmavý 37 t: inkubovať vo vodnom kúpeli, skúmavku uzavrieť, po 5 minútach opláchnuť PBS, polomer centrifúgy 8 cm, 12 000 ot./min., 5 min centrifugovať , zlikvidujte supernatant, znova opláchnite rovnakým spôsobom. Pridajte 0,4 ml PI, farbeného počas 5 minút, a zistite percento normálnych, nekrotických a apoptotických buniek v obličkách. Podľa afinity dvoch farbív rôznych typov buniek je známe, že iba bunky sfarbené PI sú mŕtve bunky, iba bunky Hoechst 33258 sú apoptotické bunky a ani jedna z nich nie je zafarbená ako normálne živé bunky.

1.4.3 Enzyme-linked immunoassay (ELISA) na detekciu expresie XIAP v tkanivách obličiek potkanov Vezmite každú skupinu obličiek a ošetrite čerstvé tkanivá obličiek tkanivovým lyzátom. Centrifugujte v nízkoteplotnej centrifúge pri 12 000 ot./min. počas 5 minút. Vezmite supernatant a postupujte podľa pokynov súpravy XIAP ELISA Kit. Shanghai Jiaotong University Fenghe Technology Co., Ltd. je zodpovedná za testovanie.

1.5 Štatistické spracovanie

Experimentálne údaje každej skupiny sú reprezentované pôdou Yuan a SPSS 17. Na štatistickú analýzu sa používa softvér 0. P<0.05 indicates="" that="" the="" difference="" is="" statistically="">

Cistanche môže zlepšiť sexuálne funkcie

2 výsledky

Hodnoty indexov funkcie obličiek Cr, BUN a cystatinu C boli štatisticky významné (F<0.01); the="" experimental="" group="" was="" significantly="" higher="" than="" the="" sham="" operation="" group="" (p=""><0.01), indicating="" that="" the="" rat="" the="" kidney="" i/r="" model="" was="" successfully="" prepared;="" compared="" with="" the="" experimental="" group,="" the="" values="" of="" cr,="" bun="" and="" cystatin="" c="" in="" the="" ctg="" group="" were="" significantly="" reduced=""><0.01). renal="" cell="" apoptosis="" rate:="" in="" the="" sham-operated="" group,="" only="" a="" few="" cells="" in="" the="" kidney="" tissue="" experienced="" apoptosis.="" apoptotic="" cells="" accounted="" for="" 0.42%="" ±="" 0.08%,="" and="" the="" experimental="" group="" had="" a="" significant="" increase="" in="" apoptosis,="" accounting="" for="" 18.="" 22%="" ±="" 5.="" 32%="" (p=""><0.01). compared="" with="" the="" experimental="" group,="" the="" ctg="" group="" showed="" apoptosis="" the="" number="" decreased="" to="" 12.71%="" ±="" 3.81%="">< 0.01).="" the="" effect="" of="" ctg="" on="" the="" expression="" of="" xiap="" in="" i/r="" injured="" renal="" tissue:="" the="" sham="" operation="" group="" only="" had="" weak="" xiap="" expression,="" while="" the="" experimental="" group="" xiap="" expression="" increased="" significantly,="">< 0.01).="" compared="" with="" the="" experimental="" group,="" the="" ctg="" group="" can="" significantly="" increase="" the="" expression="" of="" xiap="" (f=""><0.05), see="" table="">

Tabuľka 1 Indexy funkcie obličiek Cr, BUN a hodnoty cystatinu-C potkanov v každej skupine Tab. 1 Indexy funkcie obličiek v troch skupinách

V porovnaní so skupinou falošných operácií, *P<0.01; compared="" with="" the="" experimental="" group,=""><0.05><>

Mechanizmus ischemicko-reperfúzneho poškodenia obličiek je veľmi komplikovaný. Ide o patologický proces, ktorý sa vyskytuje mnohými spôsobmi pod pôsobením rôznych faktorov, ako je preťaženie vápnikovými iónmi, poškodenie peroxidáciou lipidov, bunková apoptóza a nekróza, medzi ktorými je apoptóza buniek závislá od kaspázy jednou z hlavných foriem renálnych tubulárnych epitelových buniek. poškodenie vyvolané I/R poškodením obličiek (4). Inhibítor rodiny apoptózových proteínov (IAP) je jediným endogénnym inhibítorom kaspázy, ktorý sa doteraz nachádza v cicavčích bunkách a ktorý môže účinne zabrániť výskytu bunkovej apoptózy. XIAP je členom s najsilnejším inhibičným účinkom na kaspázu v rodine IAP. Môže inhibovať apoptózu buniek spôsobenú rôznymi patologickými stimulmi a má ochranný účinok na poškodené orgány (5).

V súčasnosti je väčšina metód na vytvorenie zvieracích modelov I/R poškodenia obličiek odstránenie jednej obličky a upnutie druhej strany obličkového pediklu alebo renálnej artérie ⑹ na simuláciu stavu transplantácie obličky. Táto štúdia využíva model hemoragického šoku/resuscitácie, ktorý je bližšie k patofyziologickému procesu systémovej ischémie-reperfúzie, ktorý sa vyskytuje pri klinickom traumatickom šoku. V tomto experimente boli hladiny BUN, Cr a cystatínu C v krvi SD potkanov. Významné zlepšenie, vážne zhoršená funkcia obličiek, je ideálnym zvieracím modelom na štúdium I/R poškodenia obličiek.

CTG je dôležitou liečivou zložkou mäsovej pasty tradičnej čínskej medicíny. Baklažánová pasta, ktorá je svojou povahou teplá, sladká a slaná, sa vracia do meridiánu obličiek a hrubého čreva a pôvodne bola obsiahnutá v Shennongovej Materia Medica. "Ben Sutra": Päť hlavných prác a sedem zranení, vyživuje stred, vyživuje päť vnútorných orgánov, posilňuje jin, vyživuje esenciu a čchi;Cistanchesa v mojej krajine používa už dvetisíc rokov. V minulosti je na 1. mieste v prípravkoch na zvýšenie sily a na 2. mieste vo výživných prípravkoch po ženšene. Štúdie to ukázaliCistanchemôcťzlepšiť sexuálne funkcie, regulujú neuroendokrinné, azlepšiť imunitnú funkciu. , Antioxidanty, podporujú látkovú výmenu, chránia ischemický myokard a ďalšie funkcie. Ako hlavná liečivá zložka mäsového rodinného pyré má CTG mnoho funkcií. Výskum na modeloch cerebrálnej ischémie a reperfúzie zistil, že CTG môže znížiť excitačné aminokyseliny v mozgovom tkanive po ischemickej reperfúzii a chrániť mozgové tkanivo SD potkanov (7). CTG má anantioxidačný účinokna tkanivá myší a má určitý ochranný účinok na akútnu cerebrálnu hypoxiu u myší a poškodenie srdcového svalu u myší (9). CTG môže výrazne zlepšiť neurobehaviorParkinsonovu chorobumodelujú myši a inhibujú pokles počtu dopamínových neurónov v substantia nigra (9). Zvýšením aktivity enzýmov zachytávajúcich voľné radikály, zabránením peroxidácie lipidov, inhibíciou ukladania B-amyloidného peptidu v mozgu a inhibíciou apoptózy mozgových buniek, CTG výrazne zlepšuje učenieAlzheimerova chorobamyši spôsobené B-amyloidným peptidom Pamäťová schopnosť w. Táto štúdia ukázala, že po aplikácii predliečby CTG sa obsah BUN, Cr a cystatínu C v krvi u potkanov výrazne znížil a poškodenie obličiek sa znížilo. CTG zvýšilo apoptózu-inhibujúci proteín XIAP v I/R poranenom obličkovom tkanive a blokovalo bunkovú apoptózu. Výskyt smrti má ochranný vplyv na poškodenie obličiek.