Funkčná odozva pamäťových T buniek od pacientov s COVID{0}}

pre viac informácií:{0}}

Ece Tavukcuoglua,, Utku Horzum1 a,, Ahmet Cagkan Inkaya1 , Serhat Unal ,bb Gunes Esendaglia, *

Oddelenie základnej onkológie, Hacettepe University Cancer Institute, Ankara, Turecko

b Klinika infekčných chorôb, Lekárska fakulta, Hacettepe University, Ankara, Turecko

Kľúčové slová: SARS-CoV-2 CentralPamäťT bunky, efektorPamäťT bunky, Spike S1 glykoproteín Pomocné T bunky dendritických buniek Cytotoxické T lymfocyty

ABSTRAKT: PrítomnosťPamäťT bunky u pacientov s COVID-19 boli uznané, avšak ich funkčná účinnosťPamäťreakcie sú rozhodujúce pre ochranu. V tejto štúdii naivná, efektorová, efektorová pamäť a centrálnaPamäťCD4 plus a CD8 plus T bunky získané od tých, ktorí prežili COVID-19, boli opätovne vystavené autológnym DC odvodeným od monocytov, ktoré boli nabité vrcholovým glykoproteínom S1 SARS-CoV{6}}. Kapacita šírenia, CD25, 4-1BB a PD-1

expresia a sekrécia IFN-, IL-6, granzýmu, granulyzínu a FasL sa zvýšila v efektore CD4 plus a CD8 plusPamäťa centrálnyPamäťT bunky. Hoci sú na heterogénnych úrovniach,PamäťT bunky od jednotlivcov s anamnézou COVID{0}} majú funkčné kapacity na opätovné oživenie antivírusovej imunity proti SARS-CoV-2.

Kliknite naCistanche deserticola ma na zlepšenie pamäte

1. Úvod

Napriek novým údajom o koronavírusovom ochorení za rok 2019 (COVID-19), imunitnú odpoveď na koronavírus 2 (SARS-CoV-2) je potrebné lepšie definovať. Sila a trvanie humorálnych a bunkových odpovedí proti SARS-CoV-2 sú spojené s neutralizujúcimi protilátkami aPamäťT bunky [1,2]. Hlavne vrcholový glykoproteín-S1 má významnú imunodominanciu, pretože neutralizačné protilátky blokujú jeho pripojenie na angiotenzín-konvertujúci enzým 2 (ACE2) a bránia vstupu vírusu [3]. Okrem toho približne 50 percent pacientov vykazovalo S1-špecifické odpovede T-buniek [4,5].

Heterogenita pozorovaná medzi prípadmi COVID{0}} má však mätúci účinok. Zatiaľ čo u väčšiny pacientov sa vyvinie antivírusová imunita, ani jedinci v rekonvalescencii nemusia byť chránení pred reinfekciou, čo je potenciálne spôsobené nedostatočnou veľkosťou a/alebo stabilitou produkcie T buniek a protilátok [6–8]. Je zaujímavé, že pri závažných infekciách SARS-CoV-2 je interakcia medzi CD4 plus pomocnými T (Th) bunkami a B bunkami oslabená v zárodočnom centre, čo potenciálne tlmí dlhovekosť protilátkových odpovedí [9]. Spolu s Th aktivitami je robustnosť CD8 plus cytotoxických T buniek tiež kľúčová pre úspešnú antivírusovú imunitu [10]. Predtým prítomnosť CD4 plus alebo CD8 plusPamäťT bunky boli hlásené v COVID{0}}, napriek tomu je potrebné dôkladne sa zaoberať funkčnými kapacitami týchto buniek [11–13]. V tejto štúdii funkčná odozva naivných, efektorových, centrálnychPamäťa efektorové pamäťové CD4 plus alebo CD8 plus T bunky, ktoré boli získané od pacientov s COVID-19 v anamnéze, proti dendritickým bunkám odvodeným od monocytov (DC) nesúcich SARS-CoV-2 S1 antigén.

2. Materiál a metódy

2.1. Pacienti a odber vzoriek

V dvoch rôznych časových bodoch boli čerstvo odobraté vzorky periférnej krvi od pacientov zotavených z COVID{0}} (tabuľka 1) a mononukleárne bunky periférnej krvi boli oddelené gradientom hustoty Ficoll s hustotou 1,077 g/ml (Sigma-Aldrich). Všetky protokoly boli schválené miestnymi etickými komisiami a Ministerstvom zdravotníctva Tureckej republiky. od pacientov bol získaný informovaný súhlas. Do štúdie boli zaradení pacienti s pozitívnym testom RT-PCR a/alebo séropozitivitou. Klinické symptómy boli kategorizované ako mierne (nehospitalizovaní pacienti), stredné (pacienti so stredne ťažkým zápalom pľúc) a závažné (pacienti, ktorí mali ťažký zápal pľúc a boli hospitalizovaní dlhšie ako 5 dní). Vzorky krvi od zdravých darcov [n=10 (6 žien, 4 muži), stredný vek 33 (min 28 – max 55)] bez anamnézy SARS-CoV-2 a séropozitivity sa použili ako kontroly.

2.2. Založenie spoločných kultúr DC a T buniek odvodených od monocytov

DC boli generované z monocytov (CD14 MACS, Miltenyi) podľa predtým publikovaného protokolu [14]. Antigénová záťaž rekombinantným proteínom S1 (S1; 10 µg/ml, Abcam) alebo antigénom HIV Gag (10 µg/ml, TUBITAK Marmara Research Center) [15] alebo tetanovým toxoidom (TT; 10 µg/ml, Turk Ilac ) bola súčasne iniciovaná dozrievaním DC derivovaných z monocytov s LPS (1 ug/ml, Sigma-Aldrich). Zrelé DC odvodené od monocytov generované v neprítomnosti a

špecifický antigén sa použili ako kontroly. Na konci 7-dňovej inkubácie boli DC odvodené od monocytov charakterizované ako populácia CD11bhiCD14loCD1a plus CD83 plus.

Od toho istého pacienta COVID{0}}, autológny naivný T (TN), terminálne diferencovaný efektor T (TEMRA), centrálnaPamäťT (TCM) a efektorPamäťT (TEM) bunky boli purifikované (väčšie alebo rovné 96 percentám) pomocou FACS (FACSAria II; Becton Dickinson) ako CD3-nedotknuté, CD19- a CD56- negatívne lymfocyty podľa na rozdielnu expresiu markerov CD45RA, CD45RO a CCR7 (obr. 1A).

DC odvodené z monocytov (5x104) sa spoločne kultivovali s purifikovanými podtypmi T buniek (10)5 počas 96 hodín v jamke platne s okrúhlym dnom 96-jamky obsahujúcej 200 ul média RPMI 1640 doplneného 10 percentami FBS , 1 percento penicilínu/streptomycínu (Biological Industries), 5 ng/ml IL-2 (Bio-

Legenda). Pred spoločnou kultiváciou boli subtypy T buniek označené 5 uM CFSE (BioLegend). Ako pozitívna kontrola bola do kokultúr pridaná anti-CD3 protilátka (HIT3a, 25 ng/ml; BioLegend). Experimentálne usporiadanie je zhrnuté na obr. 1A.

2.3. Imunofenotypizácia a funkčné testy prietokovou cytometriou

Imunofenotypizácia sa uskutočnila s monoklonálnymi protilátkami proti ľudskému CD4 (OKT4), -CD8 (RPA-T8), -CD56 (MEM-188), -CD19 (SJ25C1), -CD45RA (HI100), -CD45RO (UCHL1 ), -CCR7 (G043H7), -CD25 (M-A251), -CD38 (HIT2), -4-1BB (4B4-1), -PD-1 (NAT105), -CD14 (M5E2), -CD11b (ICRF44) (BioLegend); -CDla (REA736), -CD83 (REA714) (Miltenyi). Hodnoty strednej intenzity fluorescencie (MFI) boli stanovené na CD4 plus a CD8 plus T bunkách a podľa CFSE riedenia.

Zmena v MFI sa vypočítala porovnaním údajov zo spoločných kultúr s DC naplnenými antigénom a kontrolnými DC.

Percento T buniek s CFSE zriedením bolo hodnotené na proliferáciu. Antigén-špecifická proliferačná kapacita T buniek sa vypočítala ako zmena v proliferácii, pričom ako normalizátory sa použili údaje z kokultúr s kontrolnými DC odvodenými od monocytov. Zozbierané supernatanty sa použili v multiplexnej ELISA (LEGEND-plex, BioLegend). Všetky prietokové cytometrické analýzy sa uskutočnili na triediči FACSAria II.

2.4. Štatistická analýza

Výsledky sú prezentované ako medián ± SEM. Na štatistické analýzy bol použitý Kruskal-Wallisov test a Bonferroniho korekcia. Hodnota AP<0.05 was="" considered="" statistically="">

3. Výsledky

Po inkubácii s S{{0}}DC bolo identifikované malé percento proliferujúcich T buniek (rozsah percent, CD4 plus, TN {{10}}.49–6.8, TEMRA 3,29–7,7, TCM 0,38–20,2, TEM 0,2–16,7; rozsah percent , CD8 plus , TN 0,64–5,6, TEMRA 2,16–10,3, TCM 0,8–15, TEM 1,6 – 19,4). CD4 plus aj CD8 plus TCM a TEM bunky vykazovali značne zvýšenú frekvenciu proliferácie ako populácie naivných alebo efektorových T buniek (obr. 1B). Bunky CD4 plus TCM a bunky CD8 plus TEM vykazovali najvyššiu proliferatívnu aktivitu. CD4 plusPamäťProliferáciu T buniek možno vyvolať u ~ 90 percent pacientov s COVID{1}}, avšak CD8 plusPamäťProliferácia T buniek bola dokázaná len u ~60 percent pacientov (obr. 1B). DC odvodené od monocytov boli tiež naplnené irelevantným vírusovým antigénom, HIV Gag; očakáva sa, že v T bunkách od tých, ktorí prežili COVID-19, nebola získaná žiadna významná odpoveď (obr. 1C). Podobne T bunky od zdravých jedincov nereagovali na S1-DC. Na druhej strane DC odvodené od monocytov prezentujúce antigén TT slúžili ako pozitívna kontrola pre T bunkyPamäťodozvy (obr. 1C). Okrem toho, povrchová expresia určitých markerov súvisiacich s aktiváciou, najmä CD25, PD-1 a 4-1BB, bola významne zvýšená na S1-responzívnych T bunkách (obr. 1D). Bunky TEM stimulované S1-DC vylučovali najvyššie hladiny IFN- a IL-6, ktoré z veľkej časti produkujú CD4 plus T bunky typu 1 a CD8 plus cytotoxické T bunky. Markery cytotoxickej odpovede, granzým A, granulyzín, Fas ligand (FasL), a najmä granzým B, boli tiež zvýšené v kokultúrach obsahujúcich TEM bunky od pacientov s COVID{15}} (obr. 1E). Supernatanty spoločnej kultúry, z ktorých sa merali rozpustné faktory, obsahovali mediátory vylučované T bunkami a DC; teda, ako sa uvádza v literatúre, DC môžu produkovať aj mierne množstvá cytokínov, ako sú TNF-, IL-6, IL-4 a IFN- [16,17]. V niektorých prípadoch nepamäťové T bunky reagovali na S1-DC, upregulovali expresiu CD38 a 4-1BB a sekréciu IL-4 a TNF- (obr. 1) . Heterogenita bola tiež zaznamenaná medzi študovanými parametrami T buniek a časom odberu krvi po zotavení, závažnosťou klinických symptómov alebo hladinou anti-S1 protilátok (údaje nie sú uvedené).

4. Diskusia

U pacientov, ktorí prežili COVID-19, si cirkulujúce S1-špecifické TEM a TCM bunky zachovali funkčnú schopnosť reagovať a vykazovali rozšírené efektorové kapacity, ako je aktivácia, proliferácia a sekrécia imunitných mediátorov. Aj keď proliferatívna odozva vPamäťCD8 plus T bunky neboli také účinné ako CD4 plusPamäťT bunky, naše údaje naznačujú, že tieto bunky môžu rýchlo prejsť do efektorového stavu, keď sú vystavené antigénu SARS-CoV-2 S1. TEM bunky sú kritickými vrátnikmi, pretože majú tendenciu lokalizovať sa v tkanivách náchylných na inváziu patogénnym mikroorganizmom, zatiaľ čo bunky TCM sa rekrutujú do sekundárnych lymfoidných orgánov na urýchlenie imunitných reakcií inaugurovaných DC prezentujúcimi antigén [18]. Hoci v našej štúdii pokrývali obmedzený počet prípadov COVID{5}}, väčšina pacientov mala bunky TEM a TCM, ktoré funkčne reagovali na proteín S1, pokiaľ ide o aspoň jeden testovaný parameter. Tieto predbežné zistenia môžu naznačovať pravdepodobný rozdiel medzi funkčnou kompetenciou T buniek a závažnosťou COVID-19. Predchádzajúca štúdia uvádzala vyššiu frekvenciu S1-špecifických T buniek ako T buniek špecifických pre N a M proteíny [8]. V súlade s tým je potrebné lepšie objasniť funkčnú citlivosť T buniek na iné antigény SARS-CoV{11}}. Nedávno publikovaná hlavná práca preukázala prítomnosť dlhodobéhoPamäťv T bunkách od pacientov s COVID{0}} [19,20]. Použitím odlišného experimentálneho prístupu, v ktorom boli DC odvodené z autológnych monocytov použité ako uskutočniteľný prvok na testovanie odozvy T buniek, naša štúdia potvrdila funkciu a charakter T buniek už spomenutých u jedincov s anamnézou COVID-19. Zhromažďovanie dôkazov o imunite vytvorenej u ľudí, ktorí prežili COVID-19, by umožnilo lepšie pochopiť patogenézu ochorenia, terapeutické prístupy a vývoj vakcín.

Obr. 1. Hodnotenie funkčných reakcií v T bunkách od tých, ktorí prežili COVID-19. A) Je znázornený grafický náčrt experimentálneho nastavenia. Dendritické bunky odvodené od monocytov boli vytvorené z jedincov s COVID-19 históriou a naplnené SARS-CoV-2 Spike Glycoprotein-S1 (S1-DC); potom autológny naivný T (TN), terminálne diferencovaný efektor T (TEMRA), centrálnyPamäťT (TCM) a efektorPamäťT (TEM) bunky boli purifikované a kokultivované s týmito DC. Proliferácia T buniek, expresia aktivačných markerov a sekrécia cytokínov sa merali po 96 hodinách inkubácie. B) Zmena v proliferácii CD4 plus a CD8 plus T buniek bola vynesená pre každého pacienta v porovnaní so zmenou získanou s kontrolnými kokultiváciami s DC odvodenými od monocytov bez špecifického zaťaženia antigénom. Reprezentatívne histogramy prietokovej cytometrie sú uvedené na pravej strane. Spoločné kultúry stimulované anti-CD3 monoklonálnou protilátkou slúžili ako technická pozitívna kontrola proliferácie T buniek. C) Proliferačná odpoveď TCM a TEM buniek odvodená od pacienta proti S{{1{{20}}}}DC bola porovnaná s odpoveďami získanými s HIV Gag alebo s antigénom tetanového toxoidu (TT). -nabité DC. Ako kontroly sa použili aj T bunky a S1-DC získané od zdravých jedincov (S1(hd)). D) Zmeny v hladinách aktivačných markerov CD4 plus a CD8 plus T buniek boli ukázané v porovnaní so zmenami získanými s kontrolnými kokultúrami s DC odvodenými od monocytov bez špecifického zaťaženia antigénom. E) Hodnotilo sa množstvo cytokínov spojených s T bunkami vylučovaných do supernatantov spoločnej kultúry. (*p < 0,05,="" **p=""><>

vyhlásenie o autorskom príspevku CRediT

Ece Tavukcuoglu: Vyšetrovanie, vizualizácia, formálna analýza, písanie - recenzia a úprava. Utku Horzum: Vyšetrovanie, Vizualizácia, Formálna analýza, Písanie - recenzia a úprava. Ahmet Cagkan Inkaya: Konceptualizácia, zdroje. Serhat Unal: Konceptualizácia, zdroje. Gunes Esendagli: Konceptualizácia, písanie - recenzia a úprava, supervízia.

Vyhlásenie o konkurenčnom záujme

Autori vyhlasujú, že nemajú žiadne známe konkurenčné finančné záujmy alebo osobné vzťahy, ktoré by mohli ovplyvniť prácu uvádzanú v tomto článku.

Referencie

[1] A. Mazzoni, L. Maggi, M. Capone, M. Spinicci, L. Salvati, MG Colao, A. Vanni, ST Kiros, J. Mencarini, L. Zammarchi, E. Mantengoli, L. Menicacci, E Caldini, S. Romagnani, F. Liotta, A. Morettini, GM Rossolini, A. Bartoloni, L. Cosmi, F. Annunziato, Bunkami sprostredkované a humorálne adaptívne imunitné odpovede na SARS-CoV-2 sú nižšie asymptomatickí ako symptomatickí pacienti s COVID{4}}, Eur. J. Immunol. 50 (2020) 2013–2024.

[2] Y. Tan, F. Liu, X. Xu, Y. Ling, W. Huang, Z. Zhu, M. Guo, Y. Lin, Z. Fu, D. Liang, T. Zhang, J. Fan, M. Xu, H. Lu, S. Chen, Trvanlivosť neutralizačných protilátok a odozva T-buniek po infekcii SARS-CoV-2, Front. Med. 14 (2020) 746–751.

[3] C. Conte, F. Sogni, P. Affanni, L. Veronesi, A. Argentiero, S. Esposito, Vakcíny proti koronavírusom: Stav techniky, Vakcíny (Bazilej) 8 (2020).

[4] CK Li, H. Wu, H. Yan, S. Ma, L. Wang, M. Zhang, X. Tang, NJ Temperton, RA Weiss, JM Brenchley, DC Douek, J. Mongkolsapaya, BH Tran, CL Lin, GR Screaton, JL Hou, AJ McMichael, XN Xu, reakcie T buniek na celý koronavírus SARS u ľudí, J. Immunol. 181 (2008) 5490–5500.

[5] M. Koblischke, MT Traugott, I. Medits, FS Spitzer, A. Zoufaly, L. Weseslindtner, C. Simonitsch, T. Seitz, W. Hoepler, E. Puchhammer-Stockl, SW Aberle, M. Fodinger, A. Bergthaler, M. Kundi, FX Heinz, K. Stiasny, JH Aberle, Dynamika CD4 T bunkových a protilátkových odpovedí v COVID-19 pacienti s rôznou závažnosťou ochorenia, Front. Med. (Lausanne) 7 (2020), 592629.

[6] GA Poľsko, IG Ovsyannikova, RB Kennedy, SARS-CoV-2 imunita: prehľad a aplikácie pre kandidátov na vakcínu fázy 3, Lancet 396 (2020) 1595–1606.

[7] R. Zhou, KK To, YC Wong, L. Liu, B. Zhou, X. Li, H. Huang, Y. Mo, TY Luk, TT Lau, P. Yeung, WM Chan, AK Wu, KC Lung, OT Tsang, WS Leung, IF Hung, KY Yuen, Z. Chen, Akútna infekcia SARS-CoV-2 zhoršuje reakcie dendritických buniek a T buniek, Imunita 53 (2020) 864–877 e{ {7}}.

[8] A. Grifoni, D. Weiskopf, SI Ramirez, J. Mateus, JM Dan, CR Moderbacher, SARawlings, A. Sutherland, L. Premkumar, RS Jadi, D. Marrama, AM de Silva, A. Frazier, AF Carlin, JA Greenbaum, B. Peters, F. Krammer, DM Smith, S. Crotty, A. Sette, Ciele odpovedí T buniek na SARS-CoV-2 Coronavirus u ľudí s COVID-19 chorobou a Unexposeed Individuals, Cell, 181 (2020) 1489-1501 e1415.

[9] PF Canete, CG Vinuesa, COVID-19 spôsobuje, že B bunky zabúdajú, ale T bunky si pamätajú, Bunka 183 (2020) 13–15.

[10] I. Schulien, J. Kemming, V. Oberhardt, K. Wild, LM Seidel, S. Killmer, F. Sagar, MS Daul, A. Lago, H. Decker, B. Luxenburger, D. Binder, O Bettinger, S. Sogukpinar, M. Rieg, D. Panning, M. Huzly, G. Schwemmle, CF Kochs, A. Waller, D. Nieters, F. Duerschmied, HE Emmerich, AR Mei, S. Schulz, DA Llewellyn -Lacey, T. Price, B. Boettler, R. Bengsch, M. Thimme, C.-H. Hofmann, Charakterizácia už existujúcich a indukovaných SARS-CoV-2-špecifických CD8(plus) T buniek, Nat. Med. 27 (2021) 78–85.

[11] I. Odák, J. Barros-Martins, B. Bosnjak, K. Stahl, S. David, O. Wiesner, M. Busch, M.

M. Hoeper, I. Pink, T. Welte, M. Cornberg, M. Stoll, L. Goudeva, R. Blasczyk, A. Ganser, I. Prinz, R. Forster, C. Koenecke, ČR Schultze-Florey, Reappearance efektorových T buniek súvisí s uzdravením z COVID-19, EBioMedicine 57 (2020), 102885.

[12] AE Oja, A. Šariš, CA Ghandour, NAM Kragten, BM Hogema, EJ Nossent, LMA Heunks, S. Cuvalay, E. Slot, F. Linty, FH Swaneveld, H. Vrielink, G. Vidarsson, T. Rispens, E. van der Schoot, RAW van Lier, A. Ten Brinke, P. Hombrink, Divergentné SARS-CoV-2-špecifické reakcie T- a B-buniek u ťažkých, ale nie miernych pacientov s COVID-19 , Eur. J. Immunol. 50 (2020) 1998–2012.

[13] B. Kratzer, D. Trapin, P. Ettel, U. Kormoczi, A. Rottal, F. Tuppy, M. Feichter, P. Gattinger, K. Borochová, Y. Dorofeeva, I. Tulaeva, M. Weber, K. Grabmeier- Pfistershammer, PA Tauber, M. Gerdov, B. Muhl, T. Perkmann, I. Fae, S. Wenda, H. Fuhrer , R. Henning, R. Valenta, WF Pickl, Imunologický odtlačok COVID-19 na populáciách ľudských leukocytov v periférnej krvi, Alergia (2020).

[14] AM Bruger, C. Vanhaver, K. Bruderek, G. Amodio, E. Tavukcuoglu, G. Esendagli, S. Gregori, S. Brandau, P. van der Bruggen, Protokol na hodnotenie supresie proliferácie T-buniek ľudským MDSC, Metódy Enzymol. 632 (2020) 155–192.

[15] SA Younes, B. Yassine-Diab, AR Dumont, MR Boulassel, Z. Grossman, JP Routy, RP Sekaly, HIV-1 virémia zabraňuje vzniku interleukínu 2- produkujúceho HIV-špecifickéPamäťCD4 plus T bunky vybavené proliferačnou kapacitou, J. Exp. Med. 198 (2003) 1909–1922.

[16] DM Frucht, T. Fukao, C. Bogdan, H. Schindler, JJ O'Shea, S. Koyasu, Produkcia IFN-gama bunkami prezentujúcimi antigén: vznikajúce mechanizmy, Trends Immunol. 22 (2001) 556-560.

[17] EO Gubernatorova, EA Gorshkova, OA Namakanova, RV Zvartsev, J. Hidalgo, MS Drutskaya, AV Tumanov, SA Nedospasov, Neredundantné funkcie IL-6 produkovaného makrofágmi a dendritickými bunkami pri alergickom zápale dýchacích ciest, Predné. Immunol. 9 (2018) 2718.

[18] YD Mahnke, TM Brodie, F. Sallusto, M. Roederer, E. Lugli, Kto je kto z diferenciácie T-buniek: človekPamäťPodskupiny T-buniek, Eur. J. Immunol. 43 (2013) 2797–2809.

[19] JM Dan, J. Mateus, Y. Kato, KM Hastie, ED Yu, CE Faliti, A. Grifoni, SI Ramirez, S. Haupt, A. Frazier, C. Nakao, V. Rayaprolu, SA Rawlings, B Peters, F. Krammer, V. Simon, EO Saphire, DM Smith, D. Weiskopf, A. Sette, S. Crotty, ImmunologicalPamäťna SARS-CoV-2 hodnotené až 8 mesiacov po infekcii, Science 371 (2021).

[20] LB Rodda, J. Netland, L. Shehata, KB Pruner, PA Morawski, CD Thouvenel, KK Takehara, J. Eggenberger, EA Hemann, HR Waterman, ML Fahning, Y. Chen, M. Hale, J. Rathe, C. Stokes, S. Wrenn, B. Fiala, L. Carter, JA Hamerman, NP King, M. Gale, Jr., DJ Campbell, DJ Rawlings, M. Pepper, Functional SARS-CoV{ {2}}špecifická imunitaPamäťpretrváva aj po miernom COVID-19, Cell, 184 (2021) 169-183 e117.