Extrakt z Herba Cistanche zlepšuje stav mitochondriálneho glutatiónu a dýchanie v srdciach potkanov s možnou indukciou odpájania proteínov

Ada Hoi-Ling Siu a Kam Ming Ko

Citovať tento článok: Ada Hoi-Ling Siu & Kam Ming Ko (2010) Extrakt Herba Cistanche zlepšuje stav mitochondriálneho glutatiónu a dýchanie v srdciach potkanov s možnou indukciou odpájania proteínov, Pharmaceutical Biology, 48:5, 512-517, DOI: 10.3109/13880200903190985

Odkaz na tento článok: https://doi.org/10.3109/13880200903190985

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com

Abstraktné

HerbaCistanche, čínska bylina získaná z celej rastlinyCistanchedeserticolaUkázalo sa, že YC Ma (Orobanchaceae) zvyšuje mitochondriálnu tvorbu ATP a chráni pred ischémiou/reperfúziou myokardu (I/R) ex vivo u potkanov. Aby sme definovali úlohu mitochondrií v kardioprotektívnom pôsobení Herba Cistanche, skúmali sme účinok HerbaCistancheliečba na stav mitochondriálneho glutatiónu a funkčné parametre v srdciach potkanov. Ošetrenie metanolovým extraktom z HerbaCistanchezlepšený stav mitochondriálneho glutatiónu, znížený obsah mitochondriálneho Ca2 plus a zvýšený potenciál mitochondriálnej membrány. Okrem toho sa v mitochondriách izolovaných z Herba pozorovalo zvýšenie dýchania v 4. stave, čo svedčí o neviazanom dýchaní.Cistanche-liečené potkanie srdcia. Zlepšenie stavu mitochondriálneho glutatiónu a funkčnej schopnosti, ako aj predpokladaná indukcia uncoupling proteínov, môže súvisieť s kardioprotekciou, ktorú poskytuje HerbaCistancheošetrenie chrániace pred I/R poranením.

Cistanchemá veľa zdravotných výhod

Kľúčové slová:HerbaCistanche; mitochondrie; glutatión; vápnik; membránový potenciál; mitochondriálne dýchanie; odpojenie

Úvod

Reperfúzia predtým ischemického myokardu spôsobuje sériu mitochondriálnych zmien, vrátane zvýšenej produkcie reaktívnych foriem kyslíka (ROS), Ca2 plus preťaženia a poklesu produkcie adenozíntrifosfátu (ATP), čo všetko môže viesť k nekróze a/alebo apoptóze- sprostredkovaná bunková smrť (Redegeld a kol., 1992; Lemasters a kol., 1998). Keďže mitochondrie hrajú kľúčovú úlohu pri určovaní osudu kardiomyocytov po ischémii/reperfúzii (I/R), ochrana pred I/R poškodením myokardu by sa preto mala zamerať na zachovanie mitochondriálnej štrukturálnej a funkčnej integrity. Udržiavanie mitochondriálneho energetického metabolizmu po I/R výzve je obzvlášť dôležité, pretože kontraktilná funkcia srdca je takmer úplne závislá od ATP generovaného mitochondriami. Kardiomyocyty, ktoré sú živé, ale nezmršťujú sa, sú veľmi málo užitočné.

Herba Cistanche, celá sušená rastlina Cistanche deserticola YC Ma (Orobanchaceae), je parazitická rastlina rastúca najmä v púštnych oblastiach severnej a severovýchodnej Číny. Herba Cistanche, v čínskej medicíne klasifikovaná ako bylina „povzbudzujúca jang“, sa predpisuje pri nedostatku obličiek, ženskej sterilite a zápche spôsobenej suchosťou čriev u senilných pacientov (Chen, 1998). Predchádzajúce štúdie v našom laboratóriu ukázali, že metanolový extrakt z Herba Cistanche zvyšuje kapacitu tvorby myokardu ATP (Leung & Ko, 2008) a chráni pred I/R poranením myokardu u potkanov (Leung, 2006). Zatiaľ čo stimulácia kapacity generovania ATP bola paralelná so zvýšením mitochondriálneho transportu elektrónov (Leung & Ko, 2008), kardioprotekcia proti poškodeniu I/R poskytovaná liečbou Herba Cistanche bola spojená so znížením deplécie myokardu ATP (Leung, 2006). V tejto štúdii, aby sme definovali úlohu mitochondrií v kardioprotektívnom pôsobení Herba Cistanche, sme skúmali účinok liečby Herba Cistanche na stav mitochondriálneho glutatiónu, obsah Ca2 plus, membránový potenciál a rýchlosť dýchania v srdciach potkanov.

cistanchevýhody deserticoly

Materiály a metódy

Rastlinný materiál

Herba Cistanche bola zakúpená od miestneho (v Hongkongu) predajcu byliniek (Lee Hoong Kee). Bylina bola overená dodávateľom a exemplár poukážky (HKUST00301) bol uložený na Katedre biochémie Hong Kongskej univerzity vedy a techniky (HKUST). Extrakcia byliny metanolom sa uskutočnila na základe predchádzajúcich štúdií, ktoré naznačujú, že takýto extrakt zvýšil mitochondriálnu tvorbu ATP a chránil pred poškodením I/R v srdciach potkanov (Leung, 2006; Leung & Ko, 2008). Stručne povedané, Herba Cistanche (400 g) sa narezal na malé kúsky a extrahoval sa zahrievaním pod spätným chladičom v 300 ml metanolu pri 60 stupňoch počas 2 hodín, ako už bolo opísané (Leung & Ko, 2008). Postup sa opakoval dvakrát. Spojený extrakt sa vysušil odparením rozpúšťadla za zníženého tlaku; výťažok bol 42 % (hmotn./hmotn.) vzhľadom na množstvo surovej byliny. Extrakt sa skladoval pri 4 stupňoch až do použitia. Aj keď sa čínske bylinky tradične extrahujú vodou na orálnu konzumáciu, v našej skoršej štúdii sa použil metanol na uľahčenie spracovania a skladovania vzoriek (Yim & Ko, 2002) a zistili sme, že extrakcia metanolom je vo všetkých ohľadoch uspokojivá.

Starostlivosť o zvieratá a liečba drogami

Dospelé samice potkanov Sprague-Dawley (vo veku 8–10 týždňov; 2{{10}}0–230 g) boli umiestnené v miestnosti s regulovanou vlhkosťou s 12-hodinovou tmou/svetlom cyklu pri približne 22 stupňoch a povolené jedlo a voda ad libitum. Zvieratá boli náhodne rozdelené do rôznych skupín, pričom v každej skupine bolo päť zvierat. Potkany dostávali extrakt Herba Cistanche intragastricky (0,2 g/ml vo vode) v dávke 0,5 g/kg alebo 1,0 g/kg počas 3 po sebe nasledujúcich dní. Kontrolné (neliečené) zvieratá dostávali iba vodu. Dvadsaťštyri hodín po poslednej dávke sa od anestetizovaných zvierat získalo srdcové ventrikulárne tkanivo na biochemickú analýzu. Všetky experimentálne protokoly boli schválené Výborom pre výskumnú prax, HKUST.

Príprava mitochondriálnych frakcií

Rozdrvené srdcové ventrikulárne tkanivá (~{0}},6 g) sa homogenizovali v 10--násobnom (w/v) prebytku ľadovo studeného sacharózového tlmivého roztoku [0,32 M sacharóza, 1 mM kyselina etyléndiamíntetraoctová (EDTA), 50 mM Tris/HCl; pH 7,4] s použitím homogenizátora z teflónového skla, pri 4000 ot./min., s 25–30 zdvihmi. Mitochondriálne pelety sa pripravili z tkanivových homogenátov centrifugáciou pri 800 x g pri 4 stupňoch počas 30 minút a čistota sa stanovila meraním relatívnych špecifických aktivít sukcinátdehydrogenázy a laktátdehydrogenázy v supernatante a pelete, ako už bolo opísané (Evans, 1992). Mitochondriálne pelety sa suspendovali v 1 ml homogenizačného pufra.

Meranie hladín mitochondriálne redukovaného glutatiónu a oxidovaného glutatiónu

Hladiny mitochondriálne redukovaného glutatiónu (GSH) boli stanovené enzymaticky pomocou 5,59-ditiobis(2- nitrobenzoovej kyseliny) (DTNB) a glutatiónreduktázy (GR), v protokole upravenom podľa Griffitha (198{17} }). Alikvóta (210 µl) mitochondriálnej frakcie sa zmiešala s 90 µL 10 percenta (obj.) 5-kyseliny sulfosalicylovej (SSA) a zmes sa centrifugovala pri 600 x g počas 10 minút. Na meranie hladín oxidovaného glutatiónu (GSSG) sa 100 ul množstvá supernatantov SSA zmiešali s 10 ul 20 percent (w/v) 2-vinylpyridínu a 10 ul 60 percent (v/v) trietanolamínu v mikrocentrifugačných skúmavkách. Každá skúmavka sa nechala stáť pri teplote miestnosti aspoň 1 hodinu. Reakčná zmes obsahujúca 0,63 mM DTNB a 0,053 mM NADPH (redukovaný nikotínamid adenín dinukleotid fosfát) vo fosfátovom pufri (0,1 M, s 5 mM Na2EDTA; pH 7,5) sa predinkubovala pri 30 stupňoch počas 2 minút. Alikvót (30 ul) buď supernatantu vzorky SSA (celkový glutatión) alebo vzorky GSSG sa pridal do jamky 96-jamkovej mikrotitračnej platne a 180 ul predhriatej reakčnej zmesi obsahujúcej 0,525 U Potom bol pridaný /mL GR. Zmeny absorbancie pri 412 nm boli monitorované spektrofotometricky počas 5 minút. Koncentrácie GSH a GSSG boli odhadnuté z kalibračných kriviek s použitím GSH a GSSG [rozpustených v 3 percentách (w/v) SSA] ako štandardov a vyjadrené ako nmol/mg proteínu. Hladiny GSH sa odhadli odpočítaním dvojnásobného množstva GSSG od celkového množstva GSH.

Meranie mitochondriálneho obsahu Ca2 plus

Mitochondriálny obsah Ca2 plus sa meral pomocou fluorescenčnej sondy citlivej na Ca2 plus, Fluo-5N AM ester (Molecular Probes, Eugene, OR) s použitím Victor2 Multi-Label Counter (model 1420; PerkinElmer, Turku, Fínsko), ako je opísané v Menze et al. (2005). Ca2 plus disociačné konštanty (hodnoty Kd) boli stanovené pomocou kalibračnej súpravy Ca2 plus platnej v koncentračnom rozsahu 1–1000 uM; odhadované hodnoty Kd boli 90–100 µM s vysokou spoľahlivosťou podľa údajov výrobcu súpravy. Alikvotná časť (25 ul) mitochondriálnej frakcie (0,5 mg proteínu/ml konečná koncentrácia) sa zmiešala s 25 ul inkubačného pufra {100 mM KCI a 30 mM MOPS [3-(N-morfolino)propánsulfónová kyselina]; pH 7,2} v 96-jamkovej čiernej mikrotitračnej doštičke. Zmes sa inkubovala pri 25 stupňoch počas 15 minút; Potom sa pridalo 25 ul digitonínu (50 ug/ml) a 25 ul Fluo-5N AM esteru (1 uM v 0,005 percentách (w/v) Pluronic F-127). Uľahčením membránovej permeácie sprostredkoval digitonín mitochondriálny vstup fluorescenčného farbiva. Zistili sme, že hladiny Fluo-5N v mitochondriálnych prípravkoch zo srdca potkanov sa v prítomnosti digitonínu 20-násobne zvýšili. Reakčné zmesi sa inkubovali pri 25 stupňoch počas 30 minút a hodnoty fluorescencie sa merali pri excitačnej vlnovej dĺžke 488 nm a emisnej vlnovej dĺžke 532 nm. Mitochondriálny obsah Ca2 plus bol odhadnutý pomocou kalibračnej krivky a vyjadrený ako umol/mg proteínu.

Meranie mitochondriálneho membránového potenciálu

Membránový potenciál (ΔΨm) bol hodnotený metódou modifikovanou z metódy Bonavita et al. (2003), s použitím fluorescenčného farbiva, lipofilnej katiónovej sondy 5,596,69-tetrachlór-1,193,39-tetraetylbenzimidazolylkarbocyanínjodidu bežne nazývaného JC-1. Alikvóty (50 ul) mitochondriálnych frakcií (upravené na 1 mg proteínu/ml) sa inkubovali pri 37 stupňoch s 50 ul roztoku substrátu (obsahujúceho 6 mM pyruvát a 6 mM malát), 25 ul vopred upraveného roztoku adenozíndifosfátu (ADP) (30 mM), a 25 ul 3 uM JC-1 v tme. Hodnoty ΔΨm sa získali meraním fluorescencie pri 535 nm (FL1) oproti 580 nm (FL2) s použitím Victor2 Multi-Label Counter. JC-1 tvorí agregáty v mitochondriách, čo vedie k vysokým hodnotám fluorescencie FL2 a naznačuje normálny mitochondriálny potenciál. Strata ΔΨm vedie k zníženiu fluorescencie FL2 (JC-1 agregáty v menšom rozsahu) a sprievodnému zvýšeniu fluorescencie FL1 (z JC-1 monomérov). Údaje boli vyjadrené ako pomery hodnôt fluorescencie FL1/FL2. Na validáciu testu sa použil karbonylkyanid m-chlórfenylhydrazón (CCCP), ΔΨm-kolapsujúce činidlo.

Meranie mitochondriálneho dýchania

Mitochondriálna rýchlosť dýchania bola meraná pri 37 stupňoch pomocou prístroja Hansatech Oxygraph-Plus vybaveného kyslíkovou elektródou Clarkovho typu (Sarasota, FL, USA). Mitochondriálne frakcie (0,6 mg proteínu/ml) sa suspendovali v dýchacom pufri obsahujúcom 125 mM KCI, 2 0 mM MOPS, 10 mM Tris, 0,5 mM kyseliny etylénglykoltetraoctovej (EGTA) a 2 mM KH2P04; pH 7,2. Po inkubácii pri 37 stupňoch počas 2 minút každá vzorka dostala 50 ul substrátového roztoku (5 mM pyruvát a 5 mM malát). Rýchlosti dýchania sa merali v prítomnosti (stav 3) 1 mM ADP a po fosforylácii všetkého ADP na ATP (stav 4). Pomer frekvencií dýchania v stave 3:stav 4 je index kontroly dýchania, ktorý indikuje tesnosť spojenia medzi dýchaním a fosforyláciou (Javadov a kol., 2005; Kuwabara a kol., 1997). Pred pridaním roztoku substrátu sa merala rýchlosť dýchania v stave 1 až do začiatku dýchania v stave 2 a rýchlosť dýchania v stave 2 sa odhadovala pred pridaním ADP.

Štatistická analýza

Dáta boli analyzované jednosmernou analýzou rozptylu (ANOVA) pre viacnásobné skupinové porovnania. Hodnoty najmenej významného rozdielu (LSD) sa použili na identifikáciu významných rozdielov medzi týmito dvoma skupinami, keď hodnoty p boli <>

Cistanchemáliečivýhodnotu

Výsledky

Ako je znázornené na obrázkoch 1 a 2, ošetrenie metanolovým extraktom z Herba Cistanche (0,5 alebo 1.0g/kg/deň × 3) významne zvýšilo stav mitochondriálneho glutatiónu v srdciach potkanov. preukázané zvýšením hladín GSH v závislosti od dávky (11–30 percent) a znížením hladín GSSG (31 percent).

Liečba Herba Cistanche v závislosti od dávky znížila mitochondriálne hladiny Ca2 plus v srdciach potkanov v porovnaní s kontrolami; supresia bola 41 percent pri dávke 10 g/kg (obrázok 3).

Liečba Herba Cistanche zvýšila mitochondriálne ΔΨm, čo dokazuje pokles (14–16 percent) pomeru FL1/FL2. CCCP (100 uM) spôsobil kolaps ΔΨm, ako je indikované zvýšením pomeru FL1/FL2 (obrázok 4).

Liečba Herba Cistanche zlepšila mitochondriálne dýchanie, čo dokazuje výrazne vyššia miera dýchania v stave 3 (84 percent) u testovaných zvierat v porovnaní s kontrolami (tabuľka 1). Úrovne dýchania v 2. a 4. stave sa zvýšili o 47 a 80 percent, ale stimulácia dýchania v 4. stave bola úplne potlačená 1 mM guanozín{9}}'-difosfátom, inhibítorom odpájacieho proteínu 2/3. Liečba Herba Cistanche neovplyvnila index kontroly dýchania, ako sa odhaduje pomerom frekvencie dýchania v stave 3/stave 4.

Cistanchemáneuroprotektívnevlastnosti

Diskusia

Mitochondrie izolované zo sŕdc potkanov liečených Herba Cistanche vykazovali zvýšený glutatiónový stav, čo naznačovali zvýšené hladiny GSH a znížené hladiny GSSG. Udržiavanie redoxného stavu mitochondriálneho glutatiónu je rozhodujúce pre kardioprotekciu proti I/R poraneniu (Chiu & Ko, 2003). Cytosolický obsah Ca2 plus sa zvyšuje počas ischémie myokardu prostredníctvom vychytávania vnútornou membránou Ca2 plus uniporter (Ataka a kol., 1992; Grover a kol., 1990), čo vedie k mitochondriálnej akumulácii Ca2 plus. Naše výsledky naznačujú, že liečba extraktmi Herba Cistanche zvýšila redoxný stav mitochondriálneho glutatiónu a znížila mitochondriálnu hladinu Ca2 plus, čo môže poskytnúť ochranu pred I/R poranením myokardu (Leung, 2006). Neschopnosť liečby Herba Cistanche pri vyššej dávke 1,0 g/kg ďalej znižovať hladiny GSSG a Ca2 plus môže súvisieť s existenciou samoobmedzujúceho regulačného mechanizmu ovplyvňujúceho redoxný potenciál glutatiónu a stav vápnika v mitochondriách.

Mitochondrie generujú elektrochemický protónový gradient cez vnútornú membránu transportom elektrónov. Tento gradient využíva ATP syntáza na fosforyláciu ADP na ATP. Znížený potenciál mitochondriálnej membrány, ako pri hypoxii/reoxygenácii po poškodení kultivovaných kardiomyocytov (Chiu et al., 2008), vedie k zníženiu tvorby ATP. Liečba Herba Cistanche, ktorá môže zvýšiť potenciál mitochondriálnej membrány myokardu, pravdepodobne zvyšuje tvorbu ATP, najmä počas postischemickej reperfúzie. Existencia samoobmedzujúceho regulačného mechanizmu môže opäť vysvetliť, prečo účinky liečby Herba Cistanche na potenciál mitochondriálnej membrány nie sú závislé od dávky.

Liečba Herba Cistanche výrazne zvýšila rýchlosť dýchania v stave 3 v mitochondriách srdca potkanov, ako bolo hodnotené spotrebou kyslíka. Toto zistenie je v súlade s výsledkami získanými z in vitro a situ meraní kapacity mitochondriálnej tvorby ATP (Leung & Ko, 2008). Je zaujímavé, že aj keď liečba Herba Cistanche znížila hladinu myokardiálneho ATP v rovnovážnom stave (údaje nie sú uvedené), liečba zvýšila tvorbu mitochondriálneho ATP. Zapojenie neviazaného dýchania môže vysvetliť tieto rozdielne pozorovania. Neviazaná oxidačná fosforylácia nastáva, keď sa protóny presúvajú cez vnútornú mitochondriálnu membránu späť do mitochondriálnej matrice, čím sa rozptýli membránový potenciál vytvorený reťazcom transportu elektrónov. Výsledkom je zníženie protónovej hybnej sily, ktorá poháňa tvorbu ATP (Garvey, 2003). V dôsledku toho je koncentrácia Ca2 plus a produkcia ROS v mitochondriách dramaticky oslabená (Teshima et al., 2003). Tento návrh je v súlade s výsledkami tejto štúdie, ktorá ukázala zníženie mitochondriálnych hladín Ca2 plus v srdciach liečených Herba Cistanche. Čo sa týka neviazaného dýchania, syntéza uncoupling proteínov (UCPs) môže byť indukovaná liečbou Herba Cistanche. Je známe, že UCP odpájajú oxidačnú fosforyláciu a expresiu UCP1 v srdciach transgénnych myší chránia pred poškodením myokardu vyvolaným I/R (Hoerter et al., 2004). Odpájací účinok UCP bol inhibovaný purínovými nukleotidovými difosfátmi a trifosfátmi (ako sú ADP, ATP, guanozíndifosfát (GDP) a GTP) (Echtay et al., 2002). V tejto štúdii sa mitochondriálne parametre, ako je membránový potenciál a rýchlosť dýchania, merali v prítomnosti ADP (ako substrátu); odpájací účinok UCP bol preto inhibovaný. Keď sa však merala rýchlosť dýchania mitochondriálneho stavu 4 v neprítomnosti ADP, táto rýchlosť bola vyššia v mitochondriách pripravených zo sŕdc ošetrených Herba Cistanche ako v srdciach neliečených kontrol. Rýchlosť dýchania 4. stavu odráža spotrebu kyslíka mitochondriami, keď protóny unikajú späť do mitochondriálnej matrice prostredníctvom mechanizmu, ktorý nezahŕňa F1F0 -ATPázu (Garvey, 2003). Možné zapojenie UCP do zvýšenia dýchania v stave 4 vyvolanom Herba Cistanche je podporené zistením, že toto zvýšenie bolo potlačené HDP (Bento et al., 2007).

Záverom možno povedať, že liečba Herba Cistanche môže zlepšiť stav mitochondriálneho glutatiónu, znížiť mitochondriálnu hladinu Ca2 plus a zvýšiť potenciál mitochondriálnej membrány a rýchlosť dýchania v srdciach potkanov. Zlepšenie stavu a funkčnej schopnosti mitochondriálneho glutatiónu a predpokladaná indukcia UCP môže súvisieť s kardioprotekciou, ktorú poskytuje liečba Herba Cistanche po I/R poranení.

Cistanchemôže zvýšiťmitochondriálnedýchanie sadzba

Vyhlásenie o záujme

Autori neuvádzajú žiadny konflikt záujmov. Za obsah a písanie príspevku zodpovedajú autori.

Referencie

Ataka K, Chen D, Levitsky S, Jimenez E, Feinberg H (1992): Vplyv starnutia na intracelulárny Ca2 plus, pHi a kontraktilitu počas ischémie a reperfúzie. Náklad 86 II371–II376.

Bento LM, Fagian MM, Vercesi AE, Gontijo JA (2007): Účinky systémovej metabolickej acidózy vyvolanej NH4 Cl na mitochondriálnu väzbu obličiek a transport vápnika u potkanov.

Transplantácia nefrolových čísel 22: 2817–2823. Bonavita F, Stefanelli C, Giordano E, Columbaro M, Facchini A, Bonafe F, Caldarera CM, Guarnieri C (2003): Srdcové myoblasty H9c2 podliehajú apoptóze v modeli ischémie pozostávajúcej zo sérovej deprivácie a hypoxie: inhibícia PMA. FEBS Lett 536: 85–91.

Chen P (1998): Tonikum byliny. Pokročilá séria TCM. Peking, Science Press, s. 233–320.

Chiu PY, Ko KM (2003): Časovo závislé zlepšenie stavu mitochondriálneho glutatiónu a kapacity generovania ATP liečbou schizmdrinom B znižuje náchylnosť sŕdc potkanov na ischemicko-reperfúzne poškodenie.

Biofaktory 19: 43–51. Chiu PY, Luk KF, Leung HY, Ng KM, Ko KM (2008): Stereoizoméry Schizandrinu B chránia pred hypoxiou/reoxygenáciou indukovanou apoptózou a inhibujú súvisiace zmeny v prechode mitochondriálnej permeability indukovanej Ca2 plus a potenciálu mitochondriálnej membrány v kardiomyocytoch H9c2. Life Sci 82: 1092–1101.

Echtay KS, Roussel D, St Pierre J, Jekabsons MB, Cadenas S, Stuart JA, Harper JA, Roebuck SJ, Morrison A, Pickering S, Clapham JC, Brand MD (2002): Superoxid aktivuje mitochondriálne odpájacie proteíny. Príroda 415: 96–99.

Evans WH (1992): Izolácia a charakterizácia membrán a bunkových organel. In: Rickwood D, ed., Preparative Centrifugation. Praktický prístup. New York, Oxford University Press, s. 233–270.

Garvey WT (2003): Úloha odpájacieho proteínu 3 v ľudskej fyziológii. J Clin Invest 111: 438-441. Griffith OW (1980): Stanovenie glutatiónu a glutatióndisulfidu pomocou glutatiónreduktázy a 2-vinylpyridínu.

Anal Biochem 106: 207-212. Grover GJ, Dzwonczyk S, Sleph PG (1990): Ruténiová červeň zlepšuje postischemickú kontraktilnú funkciu v izolovaných srdciach potkanov. J Cardiovasc Pharmacol 16: 783-789.

Hoerter J, Gonzalez-Barroso MD, Couplan E, Mateo P, Gelly C, Cassard-Doulcier AM, Diolez P, Bouillaud F (2004): Mitochondriálny uncoupling protein 1 exprimovaný v srdci transgénnych myší chráni pred ischemicko-reperfúznym poškodením. Náklad 110: 528–533.

Javadov S, Huang C, Kirshenbaum L, Karmazyn M (2005): Inhibícia NHE-1 zlepšuje zhoršený prechod mitochondriálnej permeability a respiračnú funkciu počas postinfarktovej remodelácie u potkanov. J Mol Cell Cardiol 38: 135-143.

Kuwabara M, Takenaka H, ​​Maruyama H, Onitsuka T, Hamada M (1997): Vplyv predĺženej hypotermickej ischémie a reperfúzie na spotrebu kyslíka a celkovú mechanickú energiu v myokarde potkanov: účasť mitochondriálnej oxidačnej fosforylácie. Transplantácia 64: 577–583.

Lemasters JJ, Nieminen AL, Qian T, Trost LC, Elmore SP, Nishimura Y, Crowe RA, Cascio WE, Bradham CA, Brenner DA, Herman B (1998): Prechod mitochondriálnej permeability pri bunkovej smrti: bežný mechanizmus pri nekróze, apoptóza a autofágia. Biochim Biophys Acta 1366: 177–196.

Leung HY (2006): Účinok Herba Cistanche na mitochondriálnu tvorbu ATP: farmakologický základ "Yang-invigoration". MPhil Thesis, Hong Kong University of Science and Technology, s. 67–69.

Leung HY, Ko KM (2008): Extrakt z Herba Cistanche zvyšuje mitochondriálnu tvorbu ATP v srdciach potkanov a bunkách H9C2. Pharma Biol 46: 418-424.

Menze MA, Hutchinson K, Laborde SM, Hand SC (2005): Prechod mitochondriálnej permeability u kôrovcov Artemia franciscana: absencia pórov regulovaných vápnikom vzhľadom na hlboké ukladanie vápnika. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol 289: R68–R76.

Redegeld FA, Moison RM, Koster AS, Noordhoek J (1992): Deplécia ATP, ale nie GSH ovplyvňuje životaschopnosť potkaních hepatocytov. Eur J Pharmacol 228: 229-236.

Teshima Y, Akao M, Jones SP, Marban E (2003): Nadmerná expresia uncoupling proteínu-2 inhibuje dráhu mitochondriálnej smrti v kardiomyocytoch. Circ Res 93: 192–200.

Yim TK, Ko KM (2002): Antioxidačné a imunomodulačné aktivity čínskych tonizačných bylín. Pharm Biol 40: 329-335.