Prečo sa Herba Cistanches môže použiť na liečbu syndrómu zlyhania obličiek?

Metabolické profilovanie odhaľuje terapeutické účinky Herba Cistanches na zvieracom modeli hydrokortizónom indukovaného „syndrómu nedostatočnosti obličiek“

Kontakt: emily.li@wecistanche.com

Yunping Qiu, Minjun Chen, Mingming Su, Guoxiang Xie, Xin Li, Mingmei Zhou, Aihua Zhao, Jian Jiang & Wei Jia

Abstraktné

Pozadie

Herba Cistanches(Roucongrong) je účinný pri liečbe Shenxu Zheng ('syndróm obličkovej nedostatočnosti'). Mechanizmy a systémové metabolické reakcie na bylinný zásah sú však nejasné.

Metódy

Pomocou metabolického profilovania na báze GC-MS sme skúmali metabolické reakcie naHerba Cistancheszásah do potkanieho modelu hydrokortizónom indukovanej 'syndróm obličkovej nedostatočnosti'.

Výsledky

Metabolické profily potkanov po injekcii hydrokortizónu sa líšili od metabolického stavu pred podaním dávky v rôznych časových bodoch v rozmedzí od 1. do 10. dňa, zatiaľ čo metabolické profily potkanov liečených hydrokortizónom aj vodným extraktomHerba Cistanchessa vrátil do stavu pred podaním dávky na 10. deň.

Záver

Zásah zHerba Cistanchesspôsobili systémové zotavenie z hydrokortizónom indukovanej metabolickej poruchy u potkanov. Táto štúdia tiež ukazuje, že metabolické profilovanie je užitočné pri štúdiu terapeutických mechanizmov rastlinných liekov.

Pozadie

Prostredníctvom modulácie biochemických reakcií, kontrolných mechanizmov a enzýmových aktivít mnohé lieky alebo chemikálie spôsobujú kolísanie metabolitov prítomných v jednotlivých bunkách, tkanivách alebo telesných tekutinách [1]. Metabolické profilovanie, tj sondovanie metabolitov s nízkou molekulovou hmotnosťou (MW < 1000="" da)="" pomocou="" pokročilého="" analytického="" prístroja="" spojeného="" s="" multivariantnou="" štatistikou,="" môže="" ukázať="" systémové="" reakcie="" živých="" systémov="" na="" xenobiotiká.="" je="" tiež="" technicky="" možné="" katalogizovať="" všetky="" multifaktoriálne="" dedičné="" a="" environmentálne="" ovplyvnené="" metabolické="" profily="" organizmu,="" vrátane="" fyziopatologických="" dôsledkov="" toxínov="" a/alebo="" chorôb="" vyvolaných="" porúch="" alebo="" nerovnováh="" v="" metabolickej="" regulačnej="" sieti="" na="" systémovej="" úrovni.="" doteraz="" sa="" metabolické="" profilovanie="" zaviedlo="" pri="" skríningu,="" diagnostike,="" prognóze="" chorôb="" [2–4]="" a="" hodnotení="" bezpečnosti="" určitých="" liekov="" a="" chemikálií="">

Nukleárna magnetická rezonancia (NMR) [12] a hmotnostná spektrometria (MS) [13], aplikované samostatne alebo v kombinácii, sa použili na profilovanie a charakterizáciu metabolických následkov porúch vyvolaných toxínmi a/alebo chorobami. NMR, ktorá nevyžaduje zdĺhavé predbežné spracovanie vzorky, je rýchly a jednoduchý spôsob na získanie vnútorných informácií z komplexných a neporušených biologických vzoriek. Na druhej strane, široké uplatnenie delenej SM v metabolickom profilovaní je spôsobené jej vysokou citlivosťou a dostupnosťou [14, 15]. Metabolické profilovanie založené na GC-MS sa používa najmä pri objavovaní mechanizmov liečiv a herbicídov in vivo, biomarkerov chorôb [16] a účinkov zmenenej génovej expresie na metabolizmus a pri monitorovaní výkonnosti organizmov v biotechnologických aplikáciách [17–20]. .

Herba Cistanches(Roucongrong), bežná čínska tonizujúca bylina, ktorá rastie v púšti, vykazuje výrazné aktivity na zlepšenie pamäti [21] a/alebo sexuálnej potencie [22], zachytávanie voľných radikálov, proti starnutiu [23–26] a neuroprotekciu [27 28]. Po stáročia,Herba Cistanchessa účinne používa pri liečbe Shenxu Zheng ('syndróm obličkovej nedostatočnosti“) [29]. NedávnoHerba Cistanchespreukázalo sa, že má zlepšené poruchy obličiek vyvolané hydrokortizónom [30]; jeho metabolické dôsledky však nie sú jasné. Naša predchádzajúca štúdia [31] zistila, že metabolické profily potkanov vystavených hydrokortizónu vo vysokej dávke (tj zvierací model pre 'syndróm obličkovej nedostatočnosti') [32] preukázali jedinečný biochemický vzorec endogénnych metabolitov v moči. Tieto výsledky nás inšpirovali k štúdiu mechanizmov konzistentných biochemických zmien po modifikácii hydrokortizónu pomocou metabolického profilovania založeného na GC-MS, aby sme zistili, či Herba Cistanches môže zvrátiť alebo pôsobiť proti aberantným metabolickým účinkom hydrokortizónu.

Cistanche môže zlepšiť funkciu obličiek

Metódy

Materiály a nástroj

Herba Cistanchesbol zakúpený od Shanghai Leiyunshang Pharmaceutical Co Ltd (Čína) a identifikovaný ako Cistanche deserticola YC Ma Dr. Mengyue Wangom (Laboratórium farmakognostiky, Farmaceutická fakulta, Shanghai Jiao Tong University) podľa štandardného protokolu [33]. Hydrokortizónový roztok na injekciu (0,5 percent) bol zakúpený od Shanghai Xinyi Pharmaceutical Co (Čína). Derivatizačnými činidlami boli N-metyl-N-trimetylsilyltrifluóracetamid (MSTFA) (Sigma-Aldrich Inc, USA) a trimetyljódsilán (TMSI) (Sigma-Aldrich Inc, USA) zmiešané v pomere 1000:1. Všetky činidlá použité v experimente boli analytickej kvality. Ultračistá voda sa pripravila pomocou čistiaceho systému Millipore (18,2 MΩ, USA). Metabolické klietky boli zakúpené od Suzhou Fengshi Laboratory Animal Experiment Co Ltd (Čína).

Príprava extraktu Herba Cistanches

Päťsto gramov nahrubo rozomletého rastlinného materiálu sa refluxovalo s 2 1 ultračistej vody počas 2 hodín. Po filtrácii sa extrakt odparil na približne jednu desatinu pôvodného objemu na rotačnej odparke Buchi a zriedil sa na objem 250 ml v odmernej banke ultračistou vodou. Konečná koncentrácia surHerba Cistanchesextrakt bol 2 g/ml.

Dávkovanie a odber vzoriek

Manipulácia so všetkými zvieratami v tejto štúdii bola v súlade s národnými smernicami a bola vykonaná v Centre pre laboratórne zvieratá, Šanghajská univerzita tradičnej čínskej medicíny, Šanghaj, Čína. Celkovo 19 deväťtýždňových samcov potkanov Wistar bolo zakúpených od Shanghai Laboratory Animal Co Ltd (Čína). Všetky zvieratá boli držané v bariérovom systéme s regulovanou teplotou (20 – 22 stupňov) a vlhkosťou (60 ± 10 percent) a v 12-hodinovom cykle tma/svetlo so zapnutými svetlami o 8:00 ráno. Potkanom sa podávala ad libitum potrava a voda. Po dvoch týždňoch aklimatizácie boli zvieratá prenesené do individuálnych metabolických klietok a náhodne rozdelené do troch skupín: (1) liečebná skupina (n=7), do ktorej bol ip injikovaný hydrokortizón (5 percent) v dávke 1,5 mg/100 g telesnej hmotnosti s následným perorálnym podanímHerba Cistanchesextrahovať 10 dní; (2) modelová skupina (n=7), v ktorej bol hydrokortizón (5 percent) injikovaný ip v dávke 1,5 mg/100 g raz denne počas 10 dní; a (3) kontrolná skupina (n=5), v ktorej bolo vehikulum injikované ip v približne 0,6 ml počas 10 dní [31].Herba Cistanchesbola liečenej skupine podaná v dávke 20 g/kg podľa odporúčania Shena a spol. [30]. Dvadsaťštyrihodinové vzorky moču sa odoberali v špecifických časových intervaloch: pred podaním dávky (-24 – 0 h), 1. deň (0 – 24 h), 3. deň, 7. deň a 10. deň. Všetok moč vzorky sa centrifugovali (6383 x g, LG 16-W, Beijing Jingli Centrifuge Co Ltd, Čína) počas 10 minút, aby sa odstránili suspendované zvyšky, a ihneď sa uskladnili pri -80 stupňoch na následnú analýzu GC-MS.

Príprava vzorky a GC-MS

GC-MS bola vykonaná podľa našej predchádzajúcej štúdie s malými úpravami [31]. V stručnosti, každý 0,5 μl alikvot trimetylsilylového (TMS) derivatizovaného analytu sa vstrekol do kapilárnej kolóny z taveného oxidu kremičitého (vnútorný priemer 17 m × 22 0 μm, hrúbka filmu 0,11 μm; HP Ultra{ {9}}, Agilent J&W Scientific, USA). GC-MS sa uskutočnila na plynovej chromatografii PerkinElmer s pomlčkou a hmotnostnom spektrometri TurboMass-Auto system XL (PerkinElmer Inc, USA).

Spracovanie údajov a viacrozmerná analýza

Údaje GC-MS boli konvertované do formátu NetCDF prostredníctvom DataBridge (PerkinElmer Inc, USA). Vlastné skripty boli spustené v MATLAB 7.0 (The MathWorks Inc, USA) na vykonanie korekcie základnej línie, dekonvolúcie a zarovnania píkov, vylúčenia interného štandardu a normalizácie na celkový súčet chromatogramu. Výsledná 3-rozmerná matica zahŕňajúca ľubovoľný index píku (párový retenčný čas-m/z), vzorky (pozorovania) a normalizované plochy píkov (premenné) sa importovala do softvéru SIMCA-P 11.0 balík (Umetrics, Švédsko) pre viacrozmernú analýzu.

Stredové centrovanie sa uskutočnilo po stĺpcoch, aby sa odstránili posuny. Všetky merané metabolity boli ošetrené na rovnakej úrovni s automatickým škálovaním (škálované na jednotkový rozptyl) pred multivariantnou analýzou. Analýza hlavných komponentov (PCA) sa vykonala pomocou softvéru SIMCA-P 11.0 na odhalenie všeobecného zoskupovania, zoskupovania a trendov medzi subjektmi bez predchádzajúcich znalostí. Prvá hlavná zložka (PC1) predstavuje najväčší rozptyl v údajoch. Druhá hlavná zložka (PC2) je ortogonálna k PC1 a predstavuje maximálnu mieru rozptylu nevysvetlenú pomocou PC1. Zvyšné hlavné komponenty boli skonštruované rovnakým spôsobom. Medzitým sa použili stredné trajektórie skóre PCA na poskytnutie dynamickej indikácie pre nástup, progresiu a / alebo zotavenie syndrómu v priebehu času. Korelačné koeficienty z čiastočných najmenších štvorcov – diskriminačná analýza (PLS-DA) sa použili na hodnotenie dôležitosti každej premennej na ďalšie zachytenie odlišne exprimovaných metabolitov zodpovedných za oddelenie medzi skupinami. PLS-DA je odvodený od metódy čiastočných najmenších štvorcov (PLS), čo je zovšeobecnená viacnásobná regresná metóda zaoberajúca sa viacerými kolineárnymi prediktormi a premennými odozvy [34]. PLS-DA sa uskutočnilo pomocou softvéru SIMCA-P 11.{16}} [35]. Vykonalo sa typické 7-okrúhle krížové overenie. Jedna sedmina vzoriek bola vylúčená z modelu v každom kole, aby sa model overil. Tento postup sa opakoval opakovaným spôsobom na krížovú validáciu, kým nebola každá vzorka raz vylúčená.

Herba Cistanches sa môže použiť na liečbu syndrómu nedostatku obličiek

Univariačná analýza

Diferenciálne exprimované metabolity identifikované z multivariačnej analýzy boli tiež overené v softvéri MATLAB 7.0 (The MathWorks Inc, USA) neparametrickým Kruskal-Wallisovým testom s hladinou významnosti P < 0,05 .

Výsledky a diskusia

Interpretácia GC-MS spektier

Typické GC-MS chromatogramy celkového iónového prúdu (TIC) potkanieho moču na 10. deň z liečenej skupiny, modelovej skupiny a kontrolnej skupiny sú znázornené na obrázku 1. Použitie nášho optimalizovaného protokolu GC-MS analýzy v spojení s vrcholom založeným na softvéri dekonvolučný postup, celkovo 117 jednotlivých metabolitov bolo konzistentne detegovaných v najmenej 90 percentách vzoriek moču. Identifikácia požadovaných píkov zlúčenín sa uskutočnila porovnaním hmotnostného spektrálneho fragmentu s referenčnými knižnicami NIST (National Institute of Standards and Technology), knižnicami Wiley a referenčnými štandardmi. Podarilo sa nám overiť 23 zo 117 metabolitov (20 percent), z ktorých väčšinu tvorili aminokyseliny, polyamíny, mastné kyseliny, puríny a hormóny nadobličiek, ktoré sa podieľajú najmä na energetickom metabolizme, metabolizme lipidov a metabolizme aminokyselín.

Obrázok 1 Typické GC-MS chromatogramy celkového iónového prúdu (TIC) moču na 10. deň od liečenej skupiny (A), modelovej skupiny (B) a kontrolnej skupiny (C).

Časovo závislé zmeny vo vzorkách moču

Stredné trajektórie skóre PCA odvodené z modelovej skupiny a liečenej skupiny sú znázornené na obrázku 2. Prechodný posun v grafe trajektórie odhalil dynamický pokrok 'syndróm obličkovej nedostatočnostiindukovaný hydrokortizónom samotným alebo v kombinácii sHerba Cistanchesliečbe. V modelovej skupine sa metabolické vzorce v deň 1 a deň 3 líšili od vzorcov v deň 7 a deň 10, čo naznačuje, že metabolická regulačná sieť v deň 1 a deň 3 mohla prejsť prechodným obdobím s vysokými výkyvmi a že narušená sieť mohla byť obnovená na 7. a 10. deň, čo nakoniec viedlo k stabilnému vzoru blízkemu stavu pred podaním dávky. Analogicky skutočnosť, že metabolický vzor v deň 1 a deň 3 sa zjavne líšil od vzoru pred podaním dávky v liečenej skupine, indikovala dominantnýsyndróm obličkovej nedostatočnosti' štát. V tomto období boli účinky hydrokortizónu pravdepodobne dominantné nad účinkamiHerba Cistanchesextrakt. Tieto zistenia boli v súlade so všeobecným pozorovaním, že potkany z oboch skupín vykazovali menšiu aktivitu v deň 1 a deň 3. Je zaujímavé, že metabolické vzorce v deň 7 a deň 10 sa postupne a významne približovali stavu pred podaním dávky, čo naznačuje, žeHerba Cistanchesmali určité protichodné alebo terapeutické účinky na potkany vystavené hydrokortizónu. Tieto výsledky podporujú klinické zistenia, žeHerba Cistanchesje účinný pri liečbe „syndróm obličkovej nedostatočnosti'. Vo všeobecnosti obe trajektórie poskytujú vizuálny, celkový a dynamický obraz nástupu, progresie a zotavenia 'syndróm obličkovej nedostatočnosti'.

Obrázok 2 Priemerná trajektória skóre PC1 vs. PC2 pre vzorky moču z modelovej skupiny (-●-) a liečenej skupiny (--●--). Každá bodka označuje priemerné skóre v rôznych časových bodoch, tj pred dávkou, 1., 3., 7. a 10. deň. Chybový stĺpec predstavuje štandardnú odchýlku pre každý časový bod získaný prvou hlavnou zložkou.

Porovnávacia metabolická analýza vzoriek moču

Aby sme lepšie pochopili metabolické účinky hydrokortizónu, porovnali sme metabolické profily získané z kontrolných, modelových a liečebných skupín. Všeobecné zoskupenie troch skupín možno ľahko pozorovať v rôznych časových bodoch, tj pred dávkou, v deň 3 a deň 10 (obrázok 3). Zatiaľ čo v profiloch moču pred podaním dávky nie je tendencia k separácii, metabolické profily sa odchýlili od profilov kontrolnej skupiny v deň 3 po expozícii hydrokortizónu. Metabolická porucha hydrokortizónom sa objavila v modelovej aj liečebnej skupine. Avšak po 7-dňovej liečbe sHerba Cistanchesmetabolické profily liečenej skupiny sa opäť stali porovnateľnými s profilmi kontrolnej skupiny, čo naznačuje, žeHerba Cistanchesúčinne obnovil narušený metabolizmus.

Obrázok 3 Porovnanie metabolických profilov z kontrolnej skupiny (čierny kosoštvorec), modelovej skupiny (červený kosoštvorec) a liečenej skupiny (modrý kosoštvorec) v rôznych časových bodoch: pred dávkou (A), 3. deň (B) a 10. deň (C). Každá bodka v grafe skóre PCA predstavuje údaje získané od potkana.

Diferenciálna identifikácia metabolických profilov

Krížovo validovaný PLS-DA model sa použil na identifikáciu kľúčových metabolitov v rôznych metabolických profiloch pre ľahšiu diferenciáciu medzi kontrolnou skupinou potkanov a modelovou skupinou (tj hydrokortizónom indukovanými) potkanmi s alebo bezHerba Cistanchesošetrenie v deň 3 (tabuľka 1). Stanovili sa násobok zmien relatívnej koncentrácie každého kľúčového metabolitu medzi skupinami a vytvorila sa zodpovedajúca vizualizácia zmien medzi skupinami pred podaním dávky, v deň 3 a deň 1 0 (obrázok 4). Ako je znázornené na obrázku 4 a tabuľke 1, zatiaľ čo väčšina endogénnych metabolitov sa významne zvýšila alebo znížila v modelovej skupine, tie v liečenej skupine prešli prechodným obdobím, ako bolo pozorované v deň 1 a deň 3, a postupne sa priblížili ku kontrolnej (normálnej) hladine . Napríklad v porovnaní s miernou variáciou (1,1 – 1,5-násobok) metabolitov v liečenej skupine na 10. deň boli pozorované výrazne zvýšené hladiny (1,7 – 3,0-krát) močového tyrozínu, tyramínu, dopamínu a noradrenalínu v modelovej skupiny počas celého experimentu. Naša predchádzajúca štúdia ukázala, že zvýšený metabolizmus katecholamínov indukovaný glukokortikoidmi viedol k nadmernej spotrebe imunitných funkcií, čo viedlo k tzv.syndróm obličkovej nedostatočnosti' [31]. Herba Cistanches, tonizujúca bylina, ktorá zlepšuje imunitný systém [36], môže pôsobiť proti niektorým účinkom hydrokortizónu.Herba Cistanchesmôže byť tiež schopný obnoviť normálnu metabolickú regulačnú sieť. Na vymedzenie účinkovHerba Cistanches(a jeho zložky) v 'syndróm obličkovej nedostatočnosti'.

Tabuľka 1 Zoznam metabolitov zahrnutých do metabolického profilovania tejto štúdie

Od: Metabolické profilovanie odhaľuje terapeutické účinkyHerba Cistanchesna zvieracom modeli hydrokortizónom indukovanej 'syndróm obličkovej nedostatočnosti'

Poznámka: Korelačné koeficienty (corr coefs) všetkých zlúčenín boli vypočítané z krížovo overeného modelu PLS-DA (Q2Ycum=0.899, uspokojivý model využívajúci dve zložky) v deň 3 medzi kontrolnou skupinou a modelovou skupinou s alebo bezHerba Cistanchesliečbe. Okrem toho boli násobné zmeny testované neparametrickým Kruskal-Wallisovým testom. Kw (P) označuje hodnoty P testu. H=kontrolná skupina, M=modelová skupina, D=liečebná skupina. Napríklad H/M/0 predstavuje relatívne násobok zmien (model ku kontrole) v stave pred podaním dávky.

Obrázok 4 Násobné zmeny kľúčových metabolitov. Červená farba označuje relatívne zvýšené koncentrácie (násobné zmeny > 1,5), zatiaľ čo zelená farba označuje relatívne znížené koncentrácie (násobné zmeny < -1,5).="" záhybové="" zmeny="" v="" rozsahu="" od="" -1,5="" do="" 1,5="" sa="" považujú="" za="" fyziologické="" variácie.="" násobná="" zmena="" (m/h,="" d/h)="" je="" pomer="" koncentrácie="" modelovej="" skupiny="" alebo="" liečenej="" skupiny="" ku="" kontrolnej="">

Záver

Súčasná štúdia metabolického profilovania pomocou GC-MS to ukázalaHerba Cistanchesspôsobilo systémové zotavenie z hydrokortizónom indukovanej metabolickej poruchy u potkanov, zvieracieho modelu pre 'syndróm obličkovej nedostatočnosti'. Táto štúdia tiež ukazuje, že metabolické profilovanie je užitočnou metódou na štúdium terapeutických účinkov rastlinných liekov.

Skratky

MS: hmotnostná spektrometria

GC-MS: plynová chromatografia-hmotnostná spektrometria

NMR: nukleárna magnetická rezonancia

PCA: analýza hlavných komponentov

PLS-DA: čiastočné najmenšie štvorce – diskriminačná analýza

Referencie

1. Nicholson JK, Lindon JC, Holmes E: 'Metabonomika': Pochopenie metabolických reakcií živých systémov na patofyziologické stimuly prostredníctvom viacrozmernej štatistickej analýzy biologických NMR spektroskopických údajov. Xenobiotica. 1999, 29 (11): 1181-1189. 10.1080/004982599238047.

2. Brindle JT, Antti H, Holmes E, Tranter G, Nicholson JK, Bethell HWL, Clarke S, Schofield PM, McKilligin E, Mosedale DE, Grainger DJ: Rýchla a neinvazívna diagnostika prítomnosti a závažnosti koronárnej choroby srdca pomocou 1H -Metabonomika založená na NMR. Nat Med. 2002, 8 (12): 1439-1444. 10,1038/nm802.

3. Constantinou MA, Papakonstantinou E, Benaki D, Spraul M, Shulpis K, Koupparis MA, Mikros E: Aplikácia nukleárnej magnetickej rezonančnej spektroskopie kombinovaná s analýzou hlavných komponentov pri zisťovaní vrodených porúch metabolizmu pomocou krvných škvŕn: Metabonomický prístup. Anal Chim Acta. 2004, 511 (2): 303-312. 10.1016/j.aca.2004.02.012.

4. Beckonert O, Monnerjahn J, Bonk U, Leibfritz D: Vizualizácia metabolických zmien v tkanive rakoviny prsníka pomocou 1H-NMR spektroskopie a samoorganizujúcich sa máp. NMR Biomed. 2003, 16 (1): 1-11. 10,1002/nbm.797.

5. Mortishire-Smith RJ, Skiles GL, Lawrence JW, Spence S, Nicholls AW, Johnson BA, Nicholson JK: Použitie metabonomiky na identifikáciu narušeného metabolizmu mastných kyselín ako mechanizmu toxicity vyvolanej liekmi. Chem Res Toxicol. 2004, 17 (2): 165-173. 10.1021/tx034123j.

6. Waters NJ, Holmes E, Williams A, Waterfield CJ, Duncan Farrant R, Nicholson JK: NMR a štúdie rozpoznávania vzorov o časovo závislých metabolických účinkoch -naftylizotiokyanátu na pečeň, moč a plazmu u potkanov: integračný metabonomický prístup. Chem Res Toxicol. 2001, 14 (10): 1401-1412. 10.1021/tx010067f.

7. Coen M, Lenz EM, Nicholson JK, Wilson ID, Pognan F, Lindon JC: Integrovaný metabonomický výskum toxicity acetaminofénu u myši pomocou NMR spektroskopie. Chem Res Toxicol. 2003, 16 (3): 295-303. 10.1021/tx0256127.

8. Small-Howard A, Turner H: Expozícia materiálom získaným z tabaku indukuje nadprodukciu secernovaných proteináz v žírnych bunkách. Toxicol Appl Pharmacol. 2005, 204 (2): 152-163. 10.1016/j.taap.2004.09.003.

9. Waters NJ, Waterfield CJ, Farrant RD, Holmes E, Nicholson JK: Metabonomická dekonvolúcia embedded toxicity: Aplikácia na hepato- a nefrotoxicitu tioacetamidu. Chem Res Toxicol. 2005, 18 (4): 639-654. 10.1021/tx049869b.

10. Robertson DG: Metabonomika v toxikológii: Prehľad. Toxicol Sci. 2005, 85 (2): 809-822. 10.1093/toxický/kfi102.

11. Robertson DG, Bulera SJ: Vysokovýkonná toxikológia: Praktické úvahy. Curr Opin Drug Discovery Dev. 2000, 3 (1): 42-47.

12. Nicholson JK, Connelly J, Lindon JC, Holmes E: Metabonomika: Platforma pre štúdium toxicity liekov a funkcie génov. Nat Rev Drug Discov. 2002, 1 (2): 153-161. 10.1038/nrd728.

13. Taylor J, King RD, Altmann T, Fiehn O: Aplikácia metabolomiky na rozlišovanie genotypov rastlín pomocou štatistiky a strojového učenia. Bioinformatika. 2002, 18 (SUPPL 2): S241-S248.

14. Wilson ID, Nicholson JK, Castro-Perez J, Granger JH, Johnson KA, Smith BW, Plumb RS: Vysokovýkonná kvapalinová chromatografia s vysokým rozlíšením spojená s hmotnostnou spektrometriou oa-TOF ako nástroj na diferenciálne profilovanie metabolických dráh v funkčné genomické štúdie. J Proteome Res. 2005, 4 (2): 591-598. 10.1021/pr049769r.

15. Jonsson P, Gullberg J, Nordstrom A, Kusano M, Kowalczyk M, Sjostrom M, Moritz T: Stratégia identifikácie rozdielov vo veľkých sériách metabolomických vzoriek analyzovaných pomocou GC/MS. Anal Chem. 2004, 76 (6): 1738-1745. 10.1021/ac0352427.

16. Ohdoi C, Nyhan WL, Kuhara T: Chemická diagnostika Lesch-Nyhanovho syndrómu pomocou detekcie plynovou chromatografiou a hmotnostnou spektrometriou. J Chromatogr, B: Anal Technol Biomed Life Sci. 2003, 792 (1): 123-130. 10.1016/S1570-0232(03)00277-0.

17. Fiehn O, Kopka J, Dormann P, Altmann T, Trethewey RN, Willmitzer L: Metabolite profiling for plant function genomics. Nat Biotechnol. 2000, 18 (11): 1157-1161. 10.1038/81137.

18. Lafaye A, Junot C, Pereira Y, Daniel G, Tabet JC, Ezan E, Labarre J: Kombinované analýzy profilovania proteómov a metabolitov odhaľujú prekvapivé poznatky o metabolizme síry v kvasinkách. J Biol Chem. 2005, 280 (26): 24723-24730. 10.1074/jbc.M502285200.

19. Schauer N, Steinhauser D, Strelkov S, Schomburg D, Allison G, Moritz T, Lundgren K, Roessner-Tunali U, Forbes MG, Willmitzer L, Fernie AR, Kopka J: Knižnice GC-MS na rýchlu identifikáciu metabolitov v zložitých biologických vzorkách. FEBS Lett. 2005, 579 (6): 1332-1337. 10.1016/j.febslet.2005.01.029.

20. Willse A, Belcher AM, Preti G, Wahl JH, Thresher M, Yang P, Yamazaki K, Beauchamp GK: Identifikácia hlavných telesných pachov regulovaných komplexom histokompatibility štatistickou analýzou experimentu porovnávacej plynovej chromatografie/hmotnostnej spektrometrie. Anal Chem. 2005, 77 (8): 2348-2361. 10.1021/ac048711t.

21. Wang XW, Wang XF, Wu LY: Zlepšenie pamäti myší na fenyletanoidové glykozidy Cistanche deserticola. Rep Chin Pharm. 2002, 19: 41-42.

22. Xie JH, Wu CF: Účinok etanolového extraktu z Cistanche deserticola na obsah monoamínových neurotransmiterov v mozgu potkanov. Zhongcaoyao. 1993, 24: 417-419.

23. Li LL, Wang XW, Wang XF: Antilipidová peroxidácia a antiradiačný účinok glykozidov vherba Cistanches.Chin J Chin Mater Med. 1997, 22 (6): 364-367.

24. Shahat AA, Nazif NM, Abousetta LM, Ibrahim NA, Cos P, Van Miert S, Pieters L, Vlietinck AJ: Fytochemický výskum a antioxidačná aktivita Duranta repens. Phytother Res. 2005, 19 (12): 1071-1073. 10.1002/ptr.1766.

25. Gao J, Igarashi K, Nukina M: Tri nové fenyletanoidové glykozidy z Caryopteris incana a ich antioxidačná aktivita. Chem Pharm Bull. 2000, 48 (7): 1075-1078.

26. Kyriakopoulou I, Magiatis P, Skaltsounis AL, Aligiannis N, Harvala C: Samiosid, nový fenyletanoidový glykozid s vychytávaním voľných radikálov a antimikrobiálnymi aktivitami z Phlomis samia. J Nat Prod. 2001, 64 (8): 1095-1097. 10.1021/np010128 plus .

27. Deng M, Zhao JY, Ju XD, Tu PF, Jiang Y, Li ZB: Ochranný účinok tubulozidu B na apoptózu v neurónových bunkách indukovanú TNF alfa. Acta Pharmacol Sin. 2004, 25: 1276-1284.

28. Geng XC, Song LW, Pu XP, Tu PF: Neuroprotektívne účinky fenyletanoidových glykozidov z Cistanches salsa proti 1-metyl-4-fenyl-1, 2, 3, 6- tetrahydropyridín (MPTP) indukoval dopamínergnú toxicitu u myší C57. Biol Pharm Bull. 2004, 27: 797-801. 10,1248/bpb.27,797.

29. He W, Shu X, Zong G, Shi M, Xiong Y, Chen M: Posilnenie obličiek a jang podporujúce pôsobenie cistanche deserticola YC Ma pred a po príprave. Zhongguo Zhong Yao Zazhi. 1996, 21 (9): 534-537. 575

30. Shen LZ, Zhong XY, Wang SX: Účinok Cistanche deserticola na normálne a deficitné potkany Shen-yang. Zhongyao Yaoli Yu Linchuang. 2001, 17 (1): 17-18.

31. Chen M, Zhao L, Jia W: Metabonomická štúdia biochemických profilov zvieracieho modelu vyvolaného hydrokortizónom. J Proteome Res. 2005, 4 (6): 2391-2396. 10.1021/pr050158o.

32. Chen Q, Yi NY: Zvieracie modely a lieky na deficit Yin a Yang. Experimentálna metodológia farmakologického výskumu v tradičnej čínskej medicíne. Upravil: Chen Q. 1993, Peking: People's Health Publishing House, 982-984.

33. Národný liekopisný výbor: liekopis Čínskej ľudovej republiky. 2005, Peking: Press of Chemical Industry, 1: 90-

34. Analýza viacrozmerných a megavariantných údajov Časť I: Základné princípy a aplikácie, druhé prepracované a rozšírené vydanie. [http://www.umetrics.com/default.asp/pagename/training_literatúra/c/5]

35. SIMCA-P a SIMCA-P plus 11 Užívateľská príručka. [http://www.umetrics.com/default.asp/pagename/downloads{4}}userguide/c/3]

36. Chin HL, Su YC: Štúdia o farmakologických účinkoch Cistanche deserticola Ma. Zhongguo Zhong Yao Zazhi. 1993, 19: 143-146.

Od: Čínska medicína, zväzok 3, číslo článku: 3 (2008)