Pozadie.Akútnapoškodenie obličiek(AKI) je častou komplikáciou dekompenzovanej cirhózy so zvýšenou mortalitou. Tradičné biomarkery, ako je sérový kreatinín, nie sú citlivé na detekciu poškodenia bez funkčnej zmeny. Predpokladáme, že močové exozómy potenciálne nesú markery, ktoré odlišujú typpoškodenie obličieku pacientov s cirhózou.

Metódy.Toto je prospektívna, jednocentrová a observačná štúdia dospelých pacientov s cirhózou. Skupiny pacientov zahŕňali zdravé normálne kontroly, kompenzovanú cirhózu s normálomfunkcie obličiek, dekompenzovaná cirhóza s normálfunkcie obličieka dekompenzovaná cirhóza s AKI. Údaje boli extrahované z elektronického zdravotného záznamu vrátane etiológie ochorenia pečene, skóre MELD, histórie dekompenzácie, skóre Child-Turcotte-Pugh, histórie AKI a expozície liekom. Vzorky moču boli odobraté v čase súhlasu. Analyzoval sa obsah exozómového proteínu v moči a proteomické údaje sa overili imunoblotovaním. Štatistická analýza zahŕňala čiastočnú diskriminačnú analýzu najmenších štvorcov spojenú s premenlivou dôležitosťou pri identifikácii projekcie.

Výsledky.Bolo zaradených osemnásť jedincov s cirhózou a šesť zdravých kontrolných jedincov bolo extrahovaných z nášho biorepozitára. Izolovali sa exozómy moču a identifikovalo sa 1572 proteínov. Maltáza-glukoamyláza bola najrozlišujúcejším proteínom potvrdeným westernovým prenosom.

Závery. Pacienti s cirhózou a AKI majú zvýšenú reguláciu renálnej disacharidázy kefového lemu, MGAM, v exozómoch moču, čo môže odlišovať typpoškodenie obličiekpri cirhóze; avšak klinický význam si to vyžaduje ďalšie overenie.

Pre viac informácií kontaktujte:joanna.jia@wecistanche.com

Akútne poškodenie obličiekbyť liečenýcistanche

1. Úvod

Akútnapoškodenie obličiek(AKI) sa vyskytuje približne u 20 percent hospitalizovaných pacientov s cirhózou [1, 2]. AKI u hospitalizovaných pacientov s cirhózou je často progresívny, závažný a nezávislý negatívny prediktor mortality [3]. *Najčastejšou príčinou AKI pri cirhóze je hemodynamika, ktorá predstavuje 70 percent prípadov. Akútna tubulárna nekróza (ATN) predstavuje 30 percent prípadov a postrenálne príčiny sú zriedkavé a predstavujú menej ako 1 percento prípadov. Hepatorenálny syndróm (HRS) je hemodynamický bez identifikovateľného stavupoškodenie obličiekalebo ochorenia a vyskytuje sa približne u 20 percent pacientov s cirhózou [4, 5].

Sérový kreatinín (Scr) je najpoužívanejším biomarkerom na hodnoteniefunkcie obličieka identifikovaťpoškodenie obličiek. SCR však nie je optimálna u pacientov s cirhózou pre Hindawi Critical Care Research and Practice Volume 2019, z mnohých dôvodov vrátane zníženej produkcie pečene, chradnutia svalov so zníženými zásobami, zvýšeného objemu distribúcie a bielkovinovo-kalorickej podvýživy. Priemerné hodnoty Scr sú u pacientov s cirhózou v porovnaní s bežnou populáciou nižšie, čo vedie k oneskorenej diagnóze AKI na základe súčasnej definície AKI [6]. Okrem toho je Scr biomarkeromfunkcie obličieka nie je citlivým markerom poranenia. Objavili sa nové biomarkery poškodenia obličiek, ktoré zlepšujú detekciu AKI a pomáhajú pri diferenciácii etiológie AKI.Poškodenie obličiekbiomarkery vrátanepoškodenie obličiekmolekula-1 (KIM{1}}), neutrofilný lipokalín spojený s gelatinázou (NGAL), interleukín-18, pečeňový proteín viažuci mastné kyseliny (L-FABP), proteín viažuci rastový faktor podobný inzulínu -7 (IGFBP-7) ​​a tkanivový inhibítor metaloproteinázy-2 (TIMP-2) môžu byť zvýšené pred zvýšením detekcie zvyšujúcej Scrpoškodenie obličiekbez funkčnej zmeny [7]. Štúdie preukázali, že tieto biomarkery môžu diferencovať etiológiu AKI [8, 9]. Zlepšené biomarkery na detekciu a diferenciáciu AKI predstavujú dôležité nesplnené klinické potreby u pacientov s cirhózou.

Exozómy sú nanovezikuly, ktoré sa uvoľňujú zo živých buniek ako mechanizmus medzibunkovej komunikácie [10]. *Zistilo sa, že obsah proteínov v exozómoch sa výrazne mení za patologických alebo stresových podmienok [11–13]. Voblička,exozómy sa dostávajú do moču zo všetkých typov buniek [14, 15] a exozómy v moči možno potenciálne považovať za biochemický podpis subjektu. Keďže exozómy v moči nie sú rutinne testované, môžu poskytnúť ďalšie nerozpoznané informácie o proteínových biomarkeroch AKI u pacientov s cirhózou.

Cieľom tejto štúdie bolo zhodnotiť proteomiku močového exozómu u pacientov s cirhózou a AKI v porovnaní so zdravými jedincami. Predpokladali sme, že obsah exozómového proteínu v moči sa líši u pacientov s kompenzovanou alebo dekompenzovanou cirhózou s AKI v porovnaní s normálnymi zdravými kontrolnými subjektmi. Ďalej sme predpokladali, že rozdielny obsah exozomálnych proteínov v moči by ponúkol pohľad na mechanizmypoškodenie obličiekpri cirhóze.

2. Materiály a metódy

Toto je prospektívna, jednocentrová a observačná štúdia dospelých pacientov s cirhózou. Všetci pacienti do štúdie boli prijatí zo zdravotného systému UC San Diego medzi 1. júlom 2013 a 1. júnom 2014 a poskytli informovaný súhlas. Pacienti boli vhodní na zaradenie, ak mali diagnózu cirhózy a boli schopní poskytnúť vzorku moču. Cirhóza bola stanovená biopsiou pečene, zobrazením prierezu alebo klinicky (prostredníctvom identifikácie dekompenzačnej udalosti, ako ju určil hepatológ). Údaje boli extrahované z elektronických zdravotných záznamov vrátane demografie, antropometrie, vitálnych funkcií, komorbidných zdravotných problémov, etiológie cirhózy, komplikácií cirhózy (ascites, varixy, hepatálna encefalopatia a hepatocelulárny karcinóm), anamnézy AKI alebochronické ochorenie obličieka vystavenie účinkom liekov do 30 dní od registrácie. Do tejto štúdie boli vhodní len pacienti s kompletnými klinickými údajmi a laboratórnymi testami do 30 dní od zaradenia. Pacienti boli rozdelení do skupín nasledovne:

(1) Skupina 0: normálne zdravé kontroly

(2) Skupina 1: kompenzovaná cirhóza (Child-Turcotte-Pugh trieda A, MELD 10) bez anamnézy AKI a normálnafunkcie obličiek

(3) Skupina 2: dekompenzovaná cirhóza (Child-Turcotte-Pugh trieda B alebo C) bez anamnézy AKI a normálnafunkcie obličiek

(4) Skupina 3: dekompenzovaná cirhóza (Child-Turcotte-Pugh trieda B alebo C) a AKI

Normálnefunkcie obličiekbola definovaná ako odhadovaná GFR > 60 ml/min/1,73 m2 (vzorec MDRD), žiadna albuminúria a žiadna anamnéza AKI. AKI bola definovaná podľa kritérií AKIN: zvýšenie Scr o 0,3 mg/dl za 48 hodín alebo 50-percentné zvýšenie Scr oproti východiskovej hodnote [16]. Pacienti s AKI boli prijatí počas príjmu a konzultácií z lôžkovej hepatologickej služby, ak mali vzorky krvi a moču získané počas epizódy AKI. Štvrtá skupina zdravých kontrol bola extrahovaná zo zdravého normálneho biorepozitára v UCSD O'Brien Center for AKI Research na UC San Diego School of Medicine. *táto práca bola schválená Inštitucionálnou revíznou radou Kalifornskej univerzity v San Diegu.

2.1. Odber vzoriek moču a spracovanie na izoláciu exozómov.

Moč sa centrifugoval pri 3000 x g počas 30 minút. pH supernatantu sa upravilo na 7, rozdelilo sa na alikvóty a zmrazilo sa pri teplote -80 °C. Exozómy sa pripravili použitím zrážania indukovaného polyetylénglykolom (PEG-) [17]. *e Vzorky moču so zmesou PEG sa udržiavali pri teplote miestnosti počas 2 hodín a odstredili sa pri 10 000 x g počas 30 minút. *e peleta bola resuspendovaná v 10 mM Tris s 1 mM EDTA-Na soli. *tento krok sa dvakrát opakoval, aby sa odstránili nečistoty. Jednorozmerná SDS PAGE exozómových proteínov sa uskutočnila pred trypsinizáciou v géli, aby sa zabránilo zámene [18].

2.2. Proteomická analýza.

Gél bol narezaný na 1 mm x 1 mm a odfarbený 3-krát s použitím 100 µl 100 mM hydrogénuhličitanu amónneho počas 15 minút, potom 100 µl acetonitrilu (ACN) počas 15 minút [19 ]. *Supernatant bol lyofilizovaný a výsledná peleta bola redukovaná 200 ul 100 mM hydrogénuhličitanu amónneho-10 mM DTT a inkubovaná pri 56 stupňoch počas 30 minút. Po odstránení kvapaliny sa kúsky gélu pridali do 200 ul 100 mM hydrogénuhličitanu amónneho-55 mM jódacetamidu. *i bol inkubovaný pri teplote miestnosti počas 20 minút v tme. *e supernatant bol odstránený a premývaný 100 mM hydrogénuhličitanom amónnym počas 15 minút. *en sa pridalo 100 ul ACN na dehydratáciu kúskov gélu a roztok sa lyofilizoval. Potom sa pridal ľadovo chladný trypsín (0,01 ug/ul) v 50 mM roztoku hydrogénuhličitanu amónneho, aby sa zakryli kúsky gélu pre proces štiepenia a nechal sa stáť na ľade počas 30 minút. Po dokončení rehydratácie sa pridal čerstvý 50 mM hydrogénuhličitan amónny, aby sa nahradil nadbytok. trypsínom a nechala sa cez noc pri 37 stupňoch. Extrakcia peptidov sa uskutočnila dvakrát pridaním 50 ul 0,2 % kyseliny mravčej a 5 % ACN a vortexovalo sa 30 minút pri teplote miestnosti. Po odstránení supernatantu sa ku vzorke pridalo 50 ul 50 % ACN-0.2 % kyseliny mravčej a opäť sa vírilo 30 minút pri teplote miestnosti. *je supernatant bol odstránený a spojený s predchádzajúcim supernatantom z prvej extrakcie. Vzorky boli analyzované pomocou Eksigent nano-LC-Ultra® 2D so systémom cHiPLC-nano flex (Eksigent, AB SCIEX Dublin, CA, USA) v režime pasca-elute v kombinácii s tandemovou hmotnostnou spektroskopiou pomocou hmotnostného spektrometra QExactive (Thermo Fisher Scientific, San Jose´, CA, USA) s elektrosprejovou ionizáciou [17].

2.3. Správa údajov.

Pri analýze bol použitý vyhľadávací nástroj SEQUEST (softvér Thermo Scientific Proteome Discoverer, verzia 1.4). *e proteínová databáza pre tryptické peptidové sekvencie pre Homo sapiens z Národného centra pre biotechnologické informácie (NCBI) bola použitá na porovnanie našich experimentálnych MS/MS spektier. Na identifikáciu peptidových sekvencií a príbuzných proteínov sme použili skôr publikované kritériá [17]. Na posúdenie štatistickej významnosti sa použili oddelené vyhľadávanie cieľov a návnad a výpočet klasickej miery falošných objavov na základe skóre (FDR). Nakoniec sme filtrovali výstupné údaje SEQUEST, aby sme priradili konečné skóre proteínom. Minimálne hodnoty korelačného skóre (Xcorr) 1,5, 2.0, 2,25 a 2,5 boli zvolené pre jedno-, dvoj-, troj- a štvorpólovo nabité ióny. Na zaručenie vysokej prísnosti sa použili predtým publikované parametre [20] a pomer falošne pozitívnych peptidov bol nižší ako 3 percentá.

2.4. Štatistická analýza.

Na výpočet relatívneho množstva polypeptidov sa použil normalizovaný spektrálny abundančný faktor (NSAF) [21]. Log transformácia a škálovanie počtu peptidov sa uskutočnili pred štatistickou analýzou. Webový portál MetaboAnalyst 2.0 bol použitý na vykonanie Studentovho t-testu, čiastočnej diskriminačnej analýzy najmenších štvorcov (PLS-DA) a premennej dôležitosti v projekcii (VIP) s a priori p < 0.="" 05="" [22].="" *e="" pomer="" jednotlivého="" proteínu="" k="" celkovej="" koncentrácii="" bol="" hodnotený="" pomocou="" párového="" studentovho="" t-testu="" pre="" každú="" skupinu.="" na="" identifikáciu="" diskriminačných="" proteínov="" sa="" použili="" pls-da="" a="" vip="" [23].="" vybrali="" sme="" proteíny="" s="" mierou="" falošného="" objavenia="" (fdr)="" menšou="" alebo="" rovnou="" 10="" percentám="" na="" overenie="" pomocou="" western="">

2.5. Western Imunoblotting a kvantifikácia.

Protilátka proti MGAM bola zakúpená od Proteintech Group, Inc., (Chicago, IL, USA) a bola použitá na rozlíšenie 100 ug proteínu z močových exozómov každého subjektu. Po separácii boli proteíny prenesené na nitrocelulózový papier, blokované, inkubované s primárnou protilátkou cez noc pred premytím fyziologickým roztokom pufrovaným Tris, inkubované počas 1 hodiny s konjugátom HRP-sekundárna protilátka a vizualizované vývojom, ako je opísané v predchádzajúcich publikáciách z nášho laboratória [ 24, 25]. Na kvantifikáciu pásov westernového imunoblotu [24] sa použil softvér ImageJ (NIH) a vyniesol sa do grafu (GraphPad Prism, San Diego, CA, USA).

3. Výsledky

3.1. Klinické charakteristiky cirhózy a zdravých kontrolných subjektov.

Šesť pacientov v každej skupine s kompletnými klinickými údajmi bolo analyzovaných a porovnaných so šiestimi zdravými kontrolami. Demografia a etiológia ochorenia pečene sú zhrnuté v tabuľke 1. Ako sa predpokladalo podľa dizajnu štúdie, skóre Child Turcotte-Pugh a MELD sa medzi skupinami pacientov významne líšili.

3.2. Proteomické analýzy exozómov moču od pacientov s cirhózou a zdravých kontrol.

Celkovo bolo vo všetkých 4 skupinách identifikovaných 1572 jedinečných proteínov. Bolo tam 360 proteínov, ktoré boli spoločné pre všetky skupiny. Našli sme 83 jedinečných exozomálnych proteínov pre skupinu 0 (kontroly), 250 pre skupinu 1, 84 pre skupinu 2 a 212 pre skupinu 3 (obrázok 1). Ďalej sme vykonali multivariačné PLS-DA na proteínoch, ktoré ukázali jasné oddelenie medzi zdravou kontrolnou skupinou a rôznymi podskupinami pacientov s cirhózou, ako je znázornené na obrázku 2. Kompenzované a dekompenzované cirhotické subjekty bezpoškodenie obličiek(skupiny 1 a 2) vykazovali značné prekrytie, zatiaľ čo cirhotické subjekty s AKI (skupina 3) vykazovali jasné oddelenie od ostatných cirhotických subjektov a zdravých kontrolných subjektov. Samostatná ANOVA proteínov medzi štyrmi skupinami ukázala, že 126 proteínov bolo významne zmenených (p < 0="" 0,05),="" z="" ktorých="" 13="" dosiahlo="" hranicu="" miery="" falošného="" objavenia=""><10% (table="" 2).="" maltase-glucoamylase="" (mgam)="" was="" the="" top="" discriminant="" protein="" with="" a="" vip="" score="" of="" 4.35="" for="" the="" entire="" study="">

3.3. Proteín maltáza-glukoamyláza je zvýšený v dekompenzovaných cirhóznych exozómoch moču.

Proteomické údaje ukázali vyššiu koncentráciu MGAM v exozómoch moču pacientov s dekompenzovanou cirhózou, s a bezpoškodenie obličiek(skupiny 2 a 3). Toto bol jediný najviac rozlišujúci proteín spomedzi všetkých štyroch skupín s VIP skóre 4,35 (obrázok 3). Potvrdzujúci western blot týchto exozómov preukázal detekovateľný proteín iba u pacientov s cirhózoupoškodenie obličiek(skupina 3) (obrázok 4).

4. Diskusia

Vykonali sme proteomickú analýzu obsahu exozómov v moči od pacientov s kompenzovanou cirhózou, dekompenzovanou cirhózou a dekompenzovanou cirhózou s AKI a porovnali sme ich so zdravými kontrolami. Proteomická analýza exozómov moču u pacientov s cirhózou identifikovala niekoľko potenciálne dôležitých biomarkerovpoškodenie obličiek, predovšetkým MGAM, bifunkčný enzým. Najvyššie koncentrácie MGAM sme našli v močových exozómoch pacientov s cirhózou a AKI. Okrem toho sa MGAM zvýšil u pacientov s cirhózou, ale nie v takom rozsahu ako u pacientov s AKI. MGAM chýbal v zdravej kontrolnej skupine, čo zdôraznilo jeho potenciálnu úlohu ako biomarker kritického ochorenia.

Táto štúdia má niekoľko ďalších dôležitých zistení. Po prvé, pokiaľ je nám známe, toto je prvá správa o deskriptívnej analýze obsahu exozómových proteínov v moči u dobre charakterizovaných cirhotických jedincov. Po druhé, toto je prvá štúdia, ktorá uvádza zvýšenú tubulárnu epiteliálnu disacharidázu vcirhotické poškodenie obličiekparadigma. Proteomické údaje o exozómoch moču zo 4 rôznych skupín ukázali, že upregulácia MGAM v skupine AKI s cirhózou je robustná a konzistentná. Maltáza je hlavnou disacharidázou v membránach kefového lemu obličiek [26, 27], ale presná funkcia tohto enzýmu nie je jasne objasnená; predpokladala sa však možná úloha príbuzných disacharidáz, sacharázy-izomaltázy a trehalázy v transporte cukru [28]. U desiatich druhov cicavcov boli disacharidy súvisiace s MGAM nájdené v obličkovej kefke [27]. Farquhar a kolegovia preukázali, že maltáza je prítomná v mikroklkoch proximálneho stočeného tubulu, možno funguje pri reabsorpcii a transporte glukózy; a táto absorpčná kapacita klesá smerom k distálnejším častiam nefrónu [29]. Ukázalo sa, že MGAM je prítomný v exozómoch a mikročasticiach na myšom modeli nealkoholickej steatohepatitídy (NASH) [30], bežnej príčiny cirhózy. Keďže pacienti s cirhózou majú niekoľko základných stavov, ktoré prispievajú k zníženiu Scr, detekcia AKI je problematická. Navyše etiológia poranenia je často neznáma a rozlíšenie medzi hepatorenálnym syndrómom a inými etiológiami AKI je ťažké. Okrem toho je patofyziológia dekompenzovanej cirhózy s AKI nejasná, pretože môže odrážať hemodynamické zmeny alebo zápalové mediátory v prípade akútneho alebo chronického zlyhania pečene [31]. Usúdili sme, že štrukturálne a funkčné zmeny, ktoré cirhóza a portálna hypertenzia prinášajúfunkcie obličieksa líšia v závažnosti podľa závažnosti cirhózy. Tieto rozdiely medzi kompenzovaným a dekompenzovaným ochorením pečene spoškodenie obličiekmožno pochopiť štúdiom následných produktovobličky, ako je moč. Vzhľadom na náklad močového exozómu špecifický pre stav nefrónových buniek sme predpokladali, že analýza exozómov moču obsahuje kľúčové informácie, ktoré sú relevantné pre diferenciáciu AKI pri cirhóze. Táto správa je prvým krokom k overeniu tejto hypotézy.

Tento dizajn štúdie mal niekoľko obmedzení. Po prvé, počet analyzovaných subjektov na skupinu je malý. Väčšia veľkosť vzorky mohla ďalej zvýšiť robustnosť týchto údajov a ďalšie proteíny mohli dosiahnuť prah prijateľnej FDR<10%. however,="" despite="" this="" small="" sample,="" these="" data="" demonstrating="" mgam="" as="" a="" unique="" exosomal="" protein="" in="" cirrhotic="" patients="" with="" aki="" is="" robust.="" second,="" we="" used="" 1d="" gel="" electrophoresis="" to="" resolve="" the="" exosome="" proteins="" prior="" to="" lc/ms-ms="" analysis="" that="" resulted="" in="" the="" identification="" of="" 1572="" proteins="" overall.="" if="" we="" had="" conducted="" direct="" exosome="" protein="" trypsinization="" instead="" of="" following="" this="" method,="" perhaps="" the="" number="" of="" identified="" proteins="" might="" have="" increased.="" in="" our="" experience,="" exosomes="" are="" packaged="" with="" nonfull="" length="" peptides="" from="" proteolytic="" action="" as="" well="" as="" endogenous="" peptides="" and="" may="" have="" con-founded="" the="" analysis.="" by="" following="" the="" gel="" electrophoresis="" method,="" we="" ensured="" that="" we="" only="" compared="" full-length="" protein="" differences="" between="">

V súhrne sme proteomickými metódami charakterizovali rozdiely v exozómových proteínoch moču u zdravých kontrol a u kompenzovaných a dekompenzovaných jedincov s cirhózou s a bez AKI. Práca skupiny Knepper ukazuje, že mnohé dôležité renálne proteíny (napr. akvaporíny, polycystíny a podocín) sa uvoľňujú v exozóme moču [32, 33]. Naša súčasná správa pridáva MGAM do tejto skupiny funkčne dôležitých obličkových proteínov identifikovaných v exozómoch moču. Naše zistenia naznačujú, že MGAM môže odlíšiť poškodenie proximálnych tubulov od iných typov AKI u pacientov s cirhózou. Klinický význam upregulácie MGAM u pacientov s cirhózou s AKI je však potrebné stanoviť v budúcich štúdiách.

Dostupnosť údajov

Klinické a proteomické údaje použité na podporu zistení tejto štúdie sú obmedzené inštitucionálnou revíznou radou UCSD s cieľom chrániť súkromie pacientov.*e údaje sú dostupné od Dr. Lindy Awdishu (lawdishu@ucsd.edu) pre výskumníkov, ktorí spĺňajú kritériá prístupu k dôverným údajom.

Konflikt záujmov

Autori vyhlasujú, že nie sú v konflikte záujmov.

Poďakovanie

Výskum podporovaný prostredníctvom grantu NIH NIDDK UAB/UCSD O'Brien Center DK0793337.

Autor

Linda Awdishu,^1,2 Shirley Tsunoda,¹ Michelle Pearlman,³ Chanthel Kokoy-Modragon,²Majid Ghassemian,⁴Robert K. Naviaux,⁵Heather M. Patton,³Ravindra L. Mehta,²Bhavya Vijay,⁶a satish P.Ramachandra Rao ^2,6,7

1UC San Diego Skaggs School of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences, San Diego, USA

2Biomarkers Laboratory, O'Brien Center forAkútne poškodenie obličiekVýskum, Nefrológia-Hypertenzia, UC San Diego, Department of Medicine, San Diego, USA

3UC San Diego, Department of Medicine, Division of Gastroenterology, San Diego, USA

4UC San Diego, Katedra chémie a biochémie, Zariadenie biomolekulovej a proteomickej spektrometrie, San Diego, USA

5UC San Diego, Department of Medicine, Pediatrics and Patology, San Diego, USA

6I-AIM Biomarkers Laboratory, Re University of Trans-Disciplinary Health Sciences and Technology (TDU), Bangalore, India

7UC San Diego, Department of Medicine, Division of Infectious Diseases, San Diego, USA

Korešpondenciu treba adresovať Satishovi P. Ramachandrovi Raovi; Prijaté 30. októbra 2018; Revidované 31. decembra 2018; Prijaté 19. februára 2019; Publikované 16. apríla 2019 Akademický redaktor: Antonio Artigas

Copyright © 2019 Linda Awdishu a kol. Toto je článok s otvoreným prístupom distribuovaný pod,ktorý umožňuje neobmedzené používanie, distribúciu a reprodukciu na akomkoľvek médiu za predpokladu, že pôvodné dielo je riadne citované.

Referencie

[1] F. Fabrizi a P. Messa, "Výzvy pri liečbe zlyhania obličiek pred transplantáciou pečene,"Kliniky v Pečeň Choroba, zv. 21, č. 2, s. 303–319, 2017.

[2] P. Tandon, MT James, JG Abraldes, CJ Karvellas, F. Ye a N. Pannu, „Význam nových definícií pre výskyt a prognózu akútnychpoškodenie obličieku hospitalizovaných pacientov s cirhózou: retrospektívna populačná kohortová štúdia,“PLoS One, zv. 11, č. 8, ID článku e0160394, 2016.

[3] JM Belcher, G. Garcia-Tsao, AJ Sanyal a kol., "Asociácia AKI s mortalitou a komplikáciami u hospitalizovaných pacientov s cirhózou,"Hepatológia, zv. 57, č. 2, s. 753–762, 2013.

[4] G. Garcia-Tsao, CR Parikh a A. Viola, "Akútne poškodenie obličiekpri cirhóze,"Hepatológia, zv. 48, č. 6, s. 2064–2077, 2008.

[5] R. Moreau a D. Lebrec, "Akútne zlyhanie obličiek u pacientov s cirhózou: perspektívy vo veku MELD,"Hepatológia, zv. 37, č. 2, s. 233–243, 2003.

[6] F. Wong, JG O'Leary, KR Reddy a kol., "Nová konsenzuálna definíciaakútne poškodenie obličiekpresne predpovedá 30-dennú úmrtnosť u pacientov s cirhózou s infekciou,“Gastro-enterológia, zv. 145, č. 6, s. 1280.e1–1288.e1, 2013.

[7] PT Murray, RL Mehta, A. Shaw a kol., "Potenciálne využitie biomarkerov vakútne poškodenie obličiek: správa a súhrn odporúčaní z 10. konsenzuálnej konferencie iniciatívy kvality akútnej dialýzy,“ObličkyInternational, zv. 85, č. 3, s. 513–521, 2014.

[8] WK Han, V. Bailly, R. Abichandani, R. Thadhani a JV Bonventre,“Poranenie obličiekmolekula-1 (KIM{1}}): nový biomarker poškodenia ľudského obličkového proximálneho tubulu,“Obličky International, zv. 62, č. 1, s. 237–244, 2002.

[9] SG Coca, GN Nadkarni, AX Garg a kol., "Prvý pooperačný močový systémpoškodenie obličiekbiomarkery a spojenie s trvaním AKI v kohorte TRIBE-AKI,“PLoS One, zv. 11, č. 8, ID článku e0161098, 2016.

[10] C. Looze, D. Yui, L. Leung a kol., „Proteomické profilovanie exozómov ľudskej plazmy identifikuje PPARc ako proteín súvisiaci s exozómami,"Biochemické a biofyzikálne výskumné komunikácie, zv. 378, č. 3, s. 433–438, 2009.

[11] J. Conde-Vancells, E. Rodriguez-Suarez, N. Embade a kol., "Charakterizácia a komplexné profilovanie proteómov exozómov vylučovaných hepatocytmi."Journal of Proteome Research, zv. 7, č. 12, s. 5157–5166, 2008.

[12] GI Lancaster a MA Febbraio, "Obchodovanie s HSP70 závislé od exozómov,"Journal of Biological Chemistry, zv. 280, č. 24, s. 23349–23355, 2005.

[13] GI Lancaster a MA Febbraio, "Mechanizmy stresom indukovaného bunkového uvoľňovania HSP72: dôsledky pre zvýšenie extracelulárneho HSP72 vyvolané cvičením,"Cvičebná imunológiaPreskúmanie, zv. 11, s. 46–52, 2005.

[14] JPJJ Hegmans, PJ Gerber a BN Lambrecht, "Exosomes", v r.Funkčná proteomika, zv. 484, s. 97–109, Humana Press, New York City, NY, USA, 2008.

[15] R. Zhan, X. Leng, X. Liu a kol., "Proteín tepelného šoku 70 je vylučovaný z endotelových buniek neklasickou cestou zahŕňajúcou exozómy."Biochemické a biofyzikálne výskumné komunikácie, zv. 387, č. 2, s. 229–233, 2009.

[16] RL Mehta, JA Kellum, SV Shah a kol., "Akútne poškodenie obličieksieť: správa o iniciatíve na zlepšenie výsledkov pri akútnom poškodení obličiek,“Kritické Starostlivosť, zv. 11, č. 2, str. R31, 2007.

[17] SP Ramachandra Rao, MA Matthias, C. Kokoy-Mon-dragonet al., "Proteomická analýza exozómov moču odhaľuje reakciu obličkových tubulov na leptospirálnu kolonizáciu u experimentálne infikovaných potkanov."PLoS zanedbané tropické choroby, zv. 9, č. 3, článok e0003640, 2015.

[18] HC Christianson, KJ Svensson, TH van Kuppevelt, J.-P. Li a M. Belting: „Exozómy rakovinových buniek závisia od proteoglykánov heparansulfátu na povrchu bunky, pokiaľ ide o ich internalizáciu

a funkčnú činnosť,“Zborník z a Národný akadémie vied, zv. 110, č. 43, s. 17380–17385, 2013.

[19] A. Shevchenko, M. Wilm, O. Vorm a M. Mann, "Hmotnostné spektrometrické sekvenovanie proteínov z polyakrylamidových gélov zafarbených striebrom,"Analytická chémia, zv. 68, č. 5, s. 850–858, 1996.

[20] F. Brambilla, F. Lavatelli, D. Di Silvestre a kol., "Profil proteínového brokovnicového profilu ľudského tukového tkaniva a jeho zmeny vo vzťahu k systémovým amyloidózam,"Journal of Proteome Research, zv. 12, č. 12, s. 5642–5655, 2013.

[21] AC Paoletti, TJ Parmely, C. Tomomori-Sato a kol., "Kvantitatívna proteomická analýza odlišných komplexov cicavcov mediátorov s použitím normalizovaných faktorov spektrálnej hojnosti,"Zborník Národnej akadémie vied, zv. 103, č. 50, s. 18928–18933, 2006.

[22] J. Xia, R. Mandal, IV Sinelnikov, D. Broadhurst a

DS Wishart, "MetaboAnalyst 2.{1}}komplexný server pre analýzu metabolomických údajov,"Výskum nukleových kyselín, zv. 40, č. W1, s. W127 – W133, 2012.

[23] J. Xia, N. Psychogios, N. Young a DS Wishart, "MetaboAnalyst: webový server pre analýzu a interpretáciu metabolomických údajov,"Výskum nukleových kyselín, zv. 37, č. S2, s. W652 – W660, 2009.

[24] SPR Rao, R. Wassell, MA Shaw a K. Sharma, "Profilovanie subproteómov ľudských mezangiálnych buniek odhaľuje úlohu kalmodulínu pri vychytávaní glukózy."American JournalzFyziológia-obličkové Fyziológia, zv. 292, č. 4, s. F1182 – F1189, 2007.

[25] SP Ramachandra Rao, Y. Zhu, T. Ravasi a kol., "Pirfenidón je renoprotektívny vdiabetické ochorenie obličiek"Journal of the American Society of Nephrology, roč. 20, č. 8, s. 1765–1775, 2009.

[26] U. Reiss a B. Sacktor, "Obličkymembránová maltáza kefového lemu: čistenie a vlastnosti, Archives of Biochemistry and Biophysics, zväzok 209, č. 2, s. 342–348, 1981.

[27] B. Sacktor, „Trehaláza a transport glukózy u cicavcovobličkya črevo," Proceedings of the National Academy of Sciences, vol. 60, no. 3, pp. 1007-1014, 1968.

[28] SJ Berger a B. Sacktor, "Izolácia a biochemická charakterizácia kefových lemov z králikovobličky," Journal of Cell Biology, zv. 47, č. 3, s. 637–645, 1970.

[29] D. Kerjaschki, L. Noronha-Blob, B. Sacktor a

MG Farquhar, "Mikrodomény s výrazným zložením glykoproteínu vobličkykefkový okraj proximálneho tubulu,"Journal of Cell Biology, zv. 98, č. 4, s. 1505–1513, 1984.

[30] D. Povero, A. Eguchi, H. Li a kol., "Cirkulujúce extracelulárne vezikuly so špecifickým proteómom a pečeňovými mikroRNA sú potenciálne biomarkery poškodenia pečene pri experimentálnom stukovatení pečene."PLoS One, zv. 9, č. 12, ID článku e113651, 2014.

[31] R. Hernaez, E. Sola`, R. Moreau a P. Gine`s, "Akútne pri chronickom zlyhaní pečene: aktualizácia,"Gut, zv. 66, č. 3, s. 541–553, 2017.

[32] T. Pisitkun, R.-F. Shen a MA Knepper, "Identifikácia a proteomické profilovanie exozómov v ľudskom moči,"Zborník Národnej akadémie vied, zv. 101, č. 36, s. 13368–13373, 2004.

[33] PA Gonzales, T. Pisitkun, JD Hoffert a kol., „Veľká proteomika a fosfoproteomika urinárnych exozómov,“Denník z a americký Spoločnosť z Nefrológia, zv. 20, č. 2, s. 363–379, 2009.