Izolácia a identifikácia fenyletanolových glykozidov z Cistanche Deserticola

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

Úvod

Cistanche deserticolazhromaždený v čínskom liekopise je suchá dužinatá stonkaCistanche deserticola, rastlina Orobanchaceae, ktorá je bežne používaným liekom na tonizáciu obličiek v tradičnej čínskej medicíne. Existuje mnoho odrôd Cistanche deserticola a existuje veľa výskumných správ o Cistanche salsa aCistanche tubulosav literatúre, ale existuje len málo štúdií o odrodách zozbieraných v liekopise. Luo Shangfeng a ďalší získali manitol, 8-kyselinu epigastrickú a aminokyselinu z Cistanche deserticola. Na ďalší vývoj a štúdium Cistanche, Katedra farmácie, Xinjiang Medical College extrahovala a separovala jeho vo vode rozpustné zložky – fenyletanolové glykozidy. Výsledky ukázali, že boli oddelené a identifikované štyri zložkyechinakozidkastanosid A,akteozida 2'-acetylakteozid. Vyššie uvedené zložky majú farmakologické účinky, ako je podpora funkcie obličiek aproti starnutiu.

Experimentálna časť

Experimentálne liečivé materiály boli zakúpené od spoločnosti Urumqi medical materials Company a vyrobené v okrese Jinghe. Odrody identifikoval Li Jiazheng, vedecký pracovník Inštitútu etnickej medicíny Xinjiang. Model makroporéznej živice bol AB-B, čo je chemický produkt univerzity Nankai. Silikagél použitý vo vrstve stĺpca bol produktom námornej chemickej továrne Qingdao, Stephan-dex LH-20 bol produktom farmaceutickej továrne Shanghai Changzheng. Model UV spektrofotometra bol Shimadzu UV-360. Infračervený spektrofotometer bol Shimadzu IR-440. Modelmi prístrojov H-NMR a C-NMR boli Bruker MSL-300 (300 megacyklov)

1. Extrakcia a separácia

Extrahovaná Cistanche deserticola10 kg trikrát refluxovaním etanolu, extrakt sa spojí a zahustí na pastu pri zníženom tlaku, pridá sa malé množstvo vody na suspenziu, odmasťuje sa etylacetátom, extrahuje sa n-butanolom, extrakt sa spojí, zahustí sa do sucha za zníženého tlaku pridajte malé množstvo vody na rozpustenie, postupne zbierajte a koncentrujte metanolovú časť cez kolónu s makroporéznou živicou a polyamidovú kolónu (premyte najprv vodou a potom metanolom). Celkové množstvo fenyletanolových glykozidov sa získa z vrstvy silikagélu. Pri gradientovej elúcii CHCl3-MeOH (10:3 až 10:5) sa zachytilo celkom 78 prúdov (asi 300 ml na prúd), z ktorých 16-23 boli surové zlúčeniny IV (2,1 g), 28-42 boli surové zlúčeniny III (5,4 g), 48-61 boli surové zlúčeniny II (3,2 g), 65-78 boli surové zlúčeniny I (5,1 g). Vyššie uvedené zložky sa čistili stĺpcovou chromatografiou na silikagéli (elučné podmienky boli rovnaké ako vyššie) a potom sa purifikovali na dextránovom gélovom stĺpci LH-20. Eluujte zmesou CH3OH:H20 (1:1) a zozbierajte metanolovú časť, aby ste získali monomérne zlúčeniny IV (1,3 g), III (3,5 g), II (1,8 g) a I (3,5 g).

2. Identifikácia

Zlúčenina I: svetložltý amorfný prášok, reakcia FeCl3 a - Naftolový test pozitívny, chromatografia na tenkej vrstve silikagélu Rf hodnota 0,3 (CHCl3:MeOH:H2O=6:4:1 expanzia, 20 percentná detekcia rozprašovaním H2S04), UV X (MeOH/nm): 244, 292, 333. IR (KBr/MAX): cm-1: 3360, 1690, 1625, 1598, 1518. H-NMR (Metanol- d1) 5: 1,08 (3H, D, J=6Hz, CH3), 2,79 (2H, t, J=7Hz, Ar-CH2-CH2-) , 4,29, 4,39 (1H, D, J=8 Hz, dva koncové protóny glukózy), 5,18 (1H, D, J=1Hz, ramnosylové koncové protóny), 6,28 (1H, J{{50} }}Hz, Ar-CH=CH-), 6.{55}},1 (6H, aryl H), 7,59 (1H, D, J=16Hz, Ar-CH{ {63}}CH-) C-NMR údaje sú uvedené v tabuľke 1. Vyššie uvedené chemické reakcie a spektrálne údaje sú v súlade so správouechinakozidv literatúre. Preto je zlúčenina I identifikovaná ako echinakozid.

Zlúčenina II: svetložltý amorfný prášok, reakcia FeCl3 a - Naftolový test bol pozitívny a chromatografia na tenkej vrstve silikagélu Rf 0.35 (podmienky vývoja a detekcie boli rovnaké ako vyššie). Jeho UV a IR spektrá boli veľmi podobné týmechinakozidale H-NMR sa objavil 5 3,84 (3H, s) signál, C-NMR sa objavil 5 56,5 signál, čo naznačuje, že štruktúra obsahuje 1 metoxy. UV A (MeOH/nm): 246, 29 0, 333. IR (KBr/MAX) cm-1: 3350, 1655, 1620, 1596, 1508. H-NMR (metanol-dl) 5: 1,08 (3H, d, J=6Hz, metylová skupina v ramnóze), 2.{25}} (2H, t, J= 7Hz, Ar-CH2- CH2-), 3,84 (3H, s, OCH3), 4,28, 4,39 (1H, d, J=8 Hz, dva protóny koncových skupín glukózy), 5,18 (1H, s, protóny koncových skupín ramnóza), 6,27 (1H, d, J=16Hz, Ar-CH=CH-), 6{52}},1 (6H, aryl H), 7,60 (1H, d , J=16Hz, Ar-CH=CH-). Pozri tabuľku 1 pre C-NMR údaje, vyššie uvedené spektrálne údaje sú v súlade s literárnou hodnotou kastanosidu A. Preto bola zlúčenina II identifikovaná ako kastanosid AZlúčenina III: svetložltý amorfný prášok, tenkovrstvová chromatografia na silikagéli Rf hodnota je 0,40 (vývoj a podmienky detekcie sú rovnaké ako vyššie). Jeho UV a IR spektrá sú tiež podobné spektrám echinakozidu. V H-NMR je o jeden koncový protón glukózy menej a v C-NMR o jeden signál glukózy menej, čo naznačuje, že ide o disacharid. UV X (MeOH/nm): 247, 292, 334. IR (KBr/MAX): 3350, 1690, 1625, 1600, 1515. H-NMR (metanol-dl) 5: 1,10 (3H, d, J{{ 83}}Hz, metyl ramnózy), 2,79 (2H, t, J=7Hz, Ar-CH2-CH2-), 4,38 (1H, d, J{{94} }Hz, glukózový koncový protón), 5,19 (1H, d, J=1Hz, ramnózový koncový protón), 6,28 (1H, d, J=16Hz, Ar-CH=CH -), 6.{107}},1 (6H, aryl H), 7,59 (1H, d, J=16Hz, Ar-CH=CH-). Údaje C-NMR sú uvedené v tabuľke 1. Vyššie uvedené spektrálne údaje sú v súlade s hodnotami uvedenými v literatúreakteozid, takže zlúčenina LII je určenáakteozid.

Zlúčenina IV: svetložltý amorfný prášok. Hodnota Rf chromatografie na tenkej vrstve silikagélu je 0,42 (podmienky vývoja a detekcie sú rovnaké ako vyššie). Jeho spektrálne údaje sú veľmi podobnéakteozid. V infračervenom spektre je ešte jeden absorpčný pík 1735 cm-1 a H-NMR ukázalo signály z acetylovej matrice 51,98 (3H.S) a C-NMR ukázalo signály z uhlíkových a metylových skupín 5171,5 a 20,9. Podľa zákona vytesňovania glukozylácie sa acetylácia nachádza na 2' hydroxylovej skupine cukru. X (MeOH/nm): 247, 292, 333. IR (KBr/MAX): 3430, 1725, 1700, 1630, 1605, 1525. H-NMR (metanol-dl) 5: 1,08 (3H, d, J{ {27}}Hz, metyl ramnózy), 1,98 (3H, s. OAc), 2,70 (2H, t, J=7Hz, Ar-CH2-CH2-), 4,50 (1H, d=8Hz, glukózový koncový protón), 5,19 (1H, d, ramnózový koncový protón), 6,28 (1H, d, J=16Hz, Ar-CH=CH -), 6.5-7,1 (6H, aryl H), 7,60 (1H, d, J=16Hz, Ar-CH=CH-). Údaje C-NMR sú uvedené v tabuľke 1. Vyššie uvedené spektrálne údaje sú v súlade s literárnou hodnotou 2'-acetylakteozidu, takže sa potvrdilo, že zlúčenina IV je 2'-acetylakteozid.