Deplécia makrofágov znižuje patológiu ochorenia pri glomerulonefritíde sprostredkovanej imunitným komplexom závislou od faktora H Ⅱ

3. Výsledky

Vyvolali sme CSS u myší opakovanou imunizáciou apoferritínom z konskej sleziny. Zvieratá vytvárajú aktívnu antiapoferitín IgG humorálnu imunituodpoveď a depozit IgG v glomeruloch. Naše predchádzajúce štúdie ukázali, že existuje zvýšené Mϕinfiltrácia do obličiekv tomto nastavení.

3.1. Expresia makrofágového génu je zvýšená v obličkách ICGN závislých od FH. Na vyhodnotenie prítomnosti Mϕ v obličkách ICGN závislých od FH sa uskutočnila qRT-PCR s makrofágovými markermi M2, CD204 (Mϕ scavenger receptor 1) a CD206 (Mϕ manózový receptor 1) [21–24]. Expresia oboch génov v obličkách bola významne zvýšená po liečbe apoferritínom u myší FHKO (obrázok 1), čo naznačujezvýšená prítomnosť makrofágov v obličkách.

KLIKNITE SEM A ZÍSKAJTE PRÍRODNÝ BIO EXTRAKT CISTANCHE S 25 % ECHINAKOZIDU A 9 % AKTEOZIDU PRE FUNKCIU OBLIČIEK

Podporná služba Wecistanche - Najväčší vývozca cistanche v Číne:

E-mail:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel:+86 15292862950

Nakupujte pre ďalšie špecifikácie Podrobnosti:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

3.2. Zmeny v priebehu liečby chlóronátom pri infiltrácii obličkových makrofágov u myší FHKO liečených apoferritínom. Aby sme určili účinnú metódu zníženia Mϕs v ICGN závislom od FH, vyčerpali sme Mϕs u fh-/- myší

Obrázok 3: Doplnkové údaje. Uvádzajú sa profily prietokovej cytometrie F4/80+ monocytov z kontrolných myší a myší liečených klodronátom. Bunky F4/ 80+ sú významne znížené a dosahujú menej ako 10 % pri liečbe klodronátom. Každý časový bod n=6.

3.4. Deplécia makrofágov znižuje glomerulárnu

Patológia pri ICGN sprostredkovanom FH. Na konci experimentu boli vyhodnotené depozity imunitného komplexu v obličkách a histopatologické znaky ICGN. Imunofluorescenčné farbenie pre C3 a IgG odhalilo, že deplécia Mϕ nemodulovala imunitné komplexy v tomto nastavení. Reprezentatívne imunofluorescenčné farbenie a histopatológia sú znázornené na obrázku 5. Primárnym histopatologickým znakom bola difúzna hypercelularita glomerulárnych chumáčov u fh-/- myší s CSS bola významne znížená pri deplécii Mϕs.

3.5. Makrofágy modulujú cytokíny v ICGN závislom od FH.

Raz Mϕsinfiltrovať obličkua sú vystavené zápalovým stimulom, uvoľňujú cytokíny. Pomocou testu ELISA sme hodnotili plazmatické cirkulujúce hladiny TNF a IL-6 a obličkový mCSF u myší FHKO liečených fyziologickým roztokom, apoferritínom alebo apoferritínom a klodronátom. Hladiny cirkulujúceho IL-6 boli veľmi nízke u myší divokého typu a zvýšili sa u myší FHKO a znížili sa u myší FHKO liečených klodronátom (obrázok 6). Tri cytokíny, TNF , IL-6 a mCSF boli významne zvýšené u myší liečených apoferritínom v porovnaní s kontrolami liečenými fyziologickým roztokom. Deplécia Mϕ klodronátom významne obmedzila nárast cytokínov v tomto prostredí

3.6. Makrofágy modulujú profibrotické

Molekuly a laminín v ICGN závislom od FH. Razobličky rozvíjať ochorenie, majú tendenciu fibrotizovať. Mϕs sa podieľajú na fibrotickom procese nadmernou produkciou profibrotických molekúl. PCR v reálnom čase odhalila 75 % zvýšenie expresie mRNA transformujúceho rastového faktora-beta1 (TGFbeta1), 100 % zvýšenie expresie metaloproteinázy-9 (MMP9) a 230 % zvýšenie laminínovej mRNA. V súlade s expresiou mRNA je expresia laminínového proteínu významne zvýšená u fh-/- myší s CSS, ktorá bola znížená v neprítomnosti Mϕs (obrázok 7).

4. Diskusia

Naše nedávne štúdie ukázali, že v neprítomnosti FH sa myši vyvíjajú difúzneproliferatívna glomerulonefritída(GN) s F4/80+ Mϕs okolo miest IC [10]. Okrem toho naše štúdie ukazujú, že Cd11b−/− fh−/− myši majú exacerbované znaky glomerulonefritídy [26]. Vzhľadom na to, že prítomnosť zvýšených zápalových makrofágov M1 a ich trvalá aktivácia by mohla spôsobiť patológiu tkaniva a ich repolarizácia na protizápalový fenotyp by pomohla pri riešení patológie ochorenia, súčasná štúdia sa uskutočnila s cieľom ďalej pochopiť úlohu Mϕs vo fh. -/- myši s ICGN. Zvýšená prítomnosť Mϕs v obličkách a vyriešenie patológie ochorenia depléciou makrofágov počas ICGN sprostredkovaného FH demonštrujú kritickú úlohu Mϕs v tomto prostredí, a preto by v tomto prostredí mohli slúžiť ako dôležité terapeutické ciele.

Obrázok 5: Deplécia Mϕs znižuje glomerulárnu patológiu pri ICGN závislom od FH. Uvádzajú sa reprezentatívne obrázky glomerulov z myší liečených fyziologickým roztokom (a), liečených apoferritínom (b) a myší s deficitom FH liečených apoferitínom + klodronátom. V (A) sú rezy zafarbené C3 (zelená) a IgG (červená), zatiaľ čo (B) ukazuje rezy zafarbené PAS. Depozity IgG, ktoré sa zvýšili liečbou apoferritínom, zostali nezmenené, zatiaľ čo glomeruly vyzerali bližšie k normálu pri deplécii makrofágov.

Neprítomnosť FH vedie k zvýšenej produkcii C5a. C5a sa viaže na C5aR1 signalizujúci Mos do obličiek, kde sa pridávajú k zápalovému prostrediu. Okrem toho naše štúdie tiež ukázali, že v tomto prostredí nadmernej tvorby C5a sa zdá, že inaktivácia C5a obmedzuje ochorenie [10]. Aktivácia Mos spôsobuje ich polarizáciu, ale zostávajú v stave kontinua [27]. Naše výsledky v tejto štúdii ukazujú, že glomerulárne ochorenie v CSS bolo znížené u fh-/- myší, u ktorých boli Mϕs depléované v porovnaní s fh-/- myšami bez deplécie makrofágov. Eliminácia ICGN zmierňujúceho Mϕs u fh-/- myší teda znižuje patológiu ochorenia. Mϕs sú však potrebné aj pre proces opravy, a keďže Mϕ menia stavy z pro- na protizápalové stavy a naopak, našou budúcou snahou bude pochopiť, či by zmena krajiny Mϕs bez ich vyčerpania mohla zmeniť patológiu choroby.

Mϕs hrajú dôležitú úlohu pri iniciácii a udržiavaní fibrózy a podieľajú sa aj na supresii, riešení a zvrátení fibrózy [28]. Naše výsledky ukazujú zvýšenú expresiu CD204+ a CD206+ Mϕ markerov, čo naznačuje ich zvýšenú prítomnosť v tomto prostredí. Keďže tieto Mϕ sú hlavným zdrojom profibrotických molekúl, naše výsledky ukazujúce zvýšenie TGF -1, ako aj MMP9 naznačujú, že tieto Mϕ by mohli priamo aj nepriamo prispievať k fibrotickým procesom v ICGN sprostredkovanom FH prostredníctvom rôznych mechanizmov ( 1,3,8,44). TGF -1 môže zmeniť fibrózu reguláciou cytokínov. Okrem toho TGF -1 moduluje biosyntézu a expresiu C3 a faktora B v monocytoch [29] a zmena komplementu v imunitných bunkách a obličkových bunkách môže uľahčiť tkanivovú fibrózu [30]. Je však potrebné dešifrovať presné interakcie medzi makrofágmi a komplementom, zúčastnené mechanizmy, ich úlohy a kompartmentalizáciu tkaniva [31]. Naše štúdie ukázali zníženú expresiu laminínu u myší s depléciou Mϕs v porovnaní s myšami s dostatkom Mϕ. Aby sme lepšie pochopili, ako FH reguluje fibrotický proces, musíme identifikovať špecifické podskupiny Mϕ, ktoré sú prítomné v ICGN sprostredkovanom FH, a objasniť príspevky každej populácie podskupiny. Tieto štúdie sú dôležité, pretože doplnkové terapeutiká sa stali klinickou realitou. Inhibítory boli a naďalej sa vyvíjajú proti rôznym cieľom v kaskáde komplementu, ktoré budú blokovať následné kroky v aktivačnej dráhe (cestách). V súčasnosti je jedným z klinicky používaných inhibítorov komplementu anti-C5 protilátka Eculizumab [32]. Preto identifikácia patogénnych zložiek komplementu v chorobe a ich doplnenie s reguláciou populácie Mϕs nie je triviálny bod.

Obrázok 7: Depozícia laminínu vObličky s nedostatkom FHs ICGN sa zníži o vyčerpanie Mϕs. (a) qRT-PCR pre TGFB, MMP9 a laminín zobličkovej mRNAizolované z myší po 5 týždňoch fyziologického roztoku a apoferitínu a 3 týždňoch klodronátu. Výraz je normalizovaný na GAPDH (n=6/skupina). ( b ) Reprezentatívne IF fotomikrografie na farbenie laminínu v obličkách rovnakých skupín myší. ∗P < 0:01.

V súhrne sme tu študovali úlohu Mϕs v modeli ICGN závislom od FH. Výsledky môžu byť tiež aplikované v nastaveniach neregulovanej aktivácie komplementu s imunitnými komplexmi, ako sú tie, ktoré sú pozorované pri rôznych ochoreniach vrátane lupusovej nefritídy, IgA nefropatie a membránovej nefropatie. Ukazujeme dôležitosť regulácie komplementu pomocou FH a stavu Mϕs pri ochorení. Farmakologické zacielenie kaskády komplementu a stav Mϕs v GN sprostredkovanom IC má teda potenciálny klinický význam.

Referencie

[1] T. Mijovič, A. Zeitouni a I. Colmegna,"Autoimunitná senzorineurálna strata sluchu: otologicko-reumatologické rozhranie," Reumatológia, zv. 52, č. 5, str. 780–789, 2013. [2] M. Abongwa, KE Baber, RJ Martin a AP Robertson,"cholinomimetický morantel ako blokátor otvoreného kanála Ascaris suum ACR-16 nAChR," Neuroveda bezstavovcov, zv. 16, č. 4, 2016.

[3] AS De Vriese, S. Sethi, J. Van Praet, KA Nath a FC Fer venza,"Ochorenie obličiek spôsobené dysreguláciou alternatívnej dráhy komplementu: etiologický prístup," Časopis Americkej nefrologickej spoločnosti, zv. 26, č. 12, str. 2917– 2929, 2015. [4] RJ Quigg,"Komplementárne a autoimunitné glomerulárne ochorenia," Aktuálne smery v autoimunite, zv. 7, str. 165– 180, 2003. 

[5] MC Carroll,"komplementový systém v regulácii adaptívnej imunity," Imunológia prírody, zv. 5, č. 10, str. 981– 986, 2004. [6] MV Carroll a RB Sim,"Doplnok v zdraví a chorobe," Pokročilé recenzie podávania liekov, zv. 63, č. 12, str. 965–975, 2011. 

[7] M. Noris a G. Remuzzi,"Prehľad aktivácie a regulácie komplementu," Semináre z nefrológie, zv. 33, č. 6, str. 479–492, 2013. 

[8] VP Ferreira, AP Herbert, C. Cortes a kol.,"Väzba faktora H na komplex fyziologických polyaniónov a C3b na bunkách je narušená pri atypickom hemolyticko-uremickom syndróme," Journal of Immunology, zv. 182, č. 11, str. 7009–7018, 2009.

[9] JJ Alexander, MC Pickering, M. Haas, I. Osawe a RJ Quigg,"Komplementový faktor h obmedzuje ukladanie imunitných komplexov a zabraňuje vflamácia a zjazvenie v glomerulách myší s chronickou sérovou chorobou," Časopis Americkej nefrologickej spoločnosti, zv. 16, č. 1, str. 52–57, 2005.

[10] JJ Alexander, L. Chaves, A. Chang a RJ Quigg,"Receptor C5a má kľúčovú úlohu pri glomerulonefritíde imunitného komplexu vo faktore komplementu H-defistaré myši," Kidney International, zv. 82, č. 9, str. 961–968, 2012. 

[11] CV Jakubzick, GJ Randolph a PM Henson,"Monocyt differentiačné a antigén prezentujúce funkcie," Recenzie prírody. Imunológia, zv. 17, č. 6, str. 349–362, 2017. 

[12] Q. Cao, Y. Wang a DC Harris,"Heterogenita makrofágov, fenotypy a úlohy v obličkáchfibrosis," Kidney International. Doplnok, zv. 4, č. 1, str. 16–19, 2014.

[13] Q. Cao, Y. Wang, XM Wang a kol.,"Renálne F4/80+ CD11c+ mononukleárne fagocyty vykazujú fenotypové a funkčné charakteristiky makrofágov v zdraví a pri adriamycínovej nefropatii," Časopis Americkej nefrologickej spoločnosti, zv. 26, č. 2, str. 349–363, 2015.