Mechanický pohľad na diosmínom indukovanú neuroprotekciu a zlepšenie pamäte v modeli potkanov s intracerebroventrikulárnou kyselinou chinolínovou: vzkriesenie mitochondriálnych funkcií a antioxidantov, časť 3

2. Materiál a metódy

2.1. Experimentálne zvieratá. .je výskum povolený MAAE protokolom č. ASCB/IAEC/14/20/145. Potkany AlbinoWistar (aké pohlavie, 200 g až 250 g, vek 8 až 9 mesiacov) boli držané v polypropylénových kvádrových krytoch typickej veľkosti pri umelých nastaveniach teploty (23 ± 2 stupne), 12:12 hodín tmavých/svetlých sekvencií a vlhkosť (40 ± 10 %) v ústavnej zvernici. Hlodavce boli kŕmené štandardným výživným krmivom (výrobcovia Ashirwad, Pandžáb) a čistenou vodou podľa želania.

Vzťah medzi mužmi a ženami a pamäť vždy priťahovali veľkú pozornosť. Je dobre známe, že mužské hormóny hrajú dôležitú úlohu vo fyzickom vývoji, udržiavaní zdravia a podpore sexuálneho vývoja a sexuálnych funkcií. Nedávne štúdie navyše ukázali, že mužské hormóny úzko súvisia s pamäťou.

Štúdie ukázali, že muži dosahujú lepšie výsledky ako ženy v určitých pamäťových úlohách. Napríklad muži zvyčajne dosahujú lepšie výsledky ako ženy v priestorovej pamäti a dôvodom je vplyv mužských hormónov na hipokampus. Hipokampus je oblasť v mozgu, ktorá spracováva priestorovú pamäť. Mužské hormóny môžu podporovať funkciu hipokampu, čím zlepšujú schopnosť mužskej priestorovej pamäte.

Na pamäť však pozitívne vplývajú aj ženské hormóny. Štúdie zistili, že ženské hormóny môžu podporovať expresiu génov súvisiacich s pamäťou v mozgu a zvyšovať počet a funkciu neurónov v hipokampe, čím zlepšujú pamäť žien. Okrem toho môžu ženské hormóny zmierniť stres, inhibovať smrť neurónových buniek, chrániť mozgové neuróny a ešte viac zlepšiť pamäť žien.

To ukazuje, že mužské aj ženské hormóny majú pozitívny vplyv na zlepšenie pamäti. Muži a ženy majú rôzne pamäťové výkony, každý má svoje výhody a nevýhody, ale to neznamená, že muži majú lepšiu pamäť ako ženy alebo že ženy majú lepšiu pamäť ako muži. Preto by sme nemali používať pohlavie ako meradlo pamäti. Každý by mal venovať plnú hru vo svoj prospech a neustále zlepšovať svoju pamäť.

Napokon, či už muži alebo ženy, mali by sme dbať na svoje fyzické zdravie a duševnú kondíciu a zvoliť si ten správny spôsob zlepšenia pamäti. Napríklad neustále učenie sa novým veciam, vytváranie pravidelných životných návykov a udržiavanie emocionálnej stability môže mať pozitívny vplyv na zlepšenie pamäte. Spolupracujme na neustálom skúmaní a precvičovaní metód na zlepšenie pamäti a vytvorenie lepšej budúcnosti pre nás samých. Je vidieť, že si musíme zlepšiť pamäť. Cistanche dokáže výrazne zlepšiť pamäť, pretože Cistanche je tradičná čínska medicína s mnohými unikátnymi účinkami, jedným z nich je zlepšenie pamäte. Účinnosť Cistanche pochádza z rôznych aktívnych zložiek, ktoré obsahuje, vrátane kyseliny trieslovej, polysacharidov, flavonoidových glykozidov atď. Tieto zložky môžu podporovať zdravie mozgu mnohými spôsobmi.

Kliknite na spoznajte 10 spôsobov, ako zlepšiť pamäť

Všetky postupy na zvieratách sa vykonávajú výlučne podľa pokynov CPCSEA, GOI, New Delhi. Správcovia zvierat a manipulanti so zvieratami boli zaslepení, pokiaľ ide o rôzne terapeutické režimy uľahčené skupinám zvierat. Uskutočnili sa vyšetrovacie pokusy na zvieratách, ktoré nasledovali aspoň jeden štrnásť dní trvania zoznámenia.

Všetky vyšetrenia na zvieratách sa uskutočňovali medzi 0900- a 1600- hodinami hodín denne.2.2. Drogy a chemikálie. Diosmín (DSM: 520-27-4), kyselina chinolínová (QA: 89-00-9) a štandardné analyty boli získané od spoločnosti Merck (India).

Dihydrogenfosforečnan sodný (NaH2PO4), hydroxid sodný (NaOH), hydrogenfosforečnan draselný (K2HPO4), nitrobluetetrazolium (NBT), fenazín metosulfát (5-metylfenazíniummetylsulfát), kyselina etyléndiamíntetraoctová (EDTA), hovädzí sérový albumín (BSA), {{ 5}kyselina [4-(2-hydroxyetyl)piperazín-1-yl]etánsulfónová (HEPES), 1,2-bis[2-[bis(karboxymetyl) amino]etoxy]etán (EGTA), riboflavín, kyanid sodný (NaCN), natriumazid (NaN3), pyrofosforečnan tetrasodný, peroxid vodíka (H2O2), disodná soľ NADH (DPNH), tetrasodná soľ NADPH (redukovaná tetrasodná soľ koenzýmu II), kyselina fosforečná, činidlo Folin a Ciocalteuov fenol (FCR) a kyselina sulfosalicylová (5-SSA) (HiMedia Laboratories, Maharashtra, India); diglycín, ľadová kyselina octová (CH3COOH), Ellmanovo činidlo (3-karboxy-4-nitrofenyldisulfid, DTNB), azabenzén (C5H5N) a laurylsulfát sodný (SLS) (LobaChemie, Mumbai, India); 4,6-dihydroxy-2-merkaptopyrimidín (2-TBA), uhličitan disodný (Na2CO3) a (2-merkaptoetyl)trimetylamóniumjodidacetát (TCI chemicals, India); síran zinočnatý (ZnSO4), Rochellova soľ (L(+)-vínan sodno-draselný), dihydrochlorid 2-(1-naftylamino)etylamínu, sodík dusitý (NaNO2) a p-aminobenzénsulfónamid (SiscoResearch Laboratories, India ); butylalkohol (Fisher Scientific, India).2.3. Intracerebroventrikulárna injekcia kyseliny chinolínovej.

Zvieratá sa podrobili anestézii intraperitoneálnym (ip) podávaním ketamínu (90 mg/kg) a xylazínu (10 mg/kg) koktailu s použitím sterilnej vody na injekciu. .osoba bola položená v polohe na bruchu na teplú vyhrievaciu podušku av držiaku stereotaxického chirurgického nástroja bola umiestnená hlava. Skalp bol narezaný v strednom sagitálnom bode a lebka bola odkrytá stiahnutím kože.

Ktorákoľvek z dvoch bočných komôr bola ľubovoľne vybraná a v lebke bola temenná kosť vyvrtaná (stereotaxické súradnice -0, 8 mm predozadná od bregmy, ± 1,5 mm mediolaterálne od stredozagitálneho stehu a ± 3,6 mm dorzoventrálne od povrchu parietálnej kosti ) na vytvorenie vývrtu [21].

Prvý deň bol roztok kyseliny chinolínovej (QA) čerstvo konštituovaný (240 nmol) v PBS (Na+-K+ [PO4]2- pufrovaný fyziologický roztok, pH 7,4) a bol postupne injikovaný pomocou Hamiltonovej mikrostriekačky pri prietoku 1 µl/minútu do ľavej alebo pravej mozgovej komory potkanov počas 5 až 6 minút s objemom injekcie 5 µl ICV vehikula [22].

Po naočkovaní celého liečiva sa mikroihla neuvoľnila počas 4 až 5 minút, aby sa umožnila difúzia liečiva v cerebrospinálnom moku a zabránilo sa jeho regurgitácii. Ekvivalentný objem (10 ul) PBS-vehikula bol podaný ICV do simulátorov, ktoré boli identicky operované, avšak QA nebola injikovaná.

Po injekciách liečiva sa otvory obnovili pomocou tmelu (fosfát zinočnatý, PYRAX®) a dokončilo sa šitie kože. Aby sa predišlo kontaminácii (množeniu baktérií), Neosporin® bol aplikovaný pro re nata.

Na zabránenie pooperačnej sepse bol podaný Orizolin (Zydus Cadila), dávka 30 mg/kg (ip). Každému potkanovi bolo poskytnuté teplé prostredie (37 ± 0,5 stupňa), aby sa predišlo pooperačnej hypotermii. Každému potkanovi bolo po chirurgickom zákroku po dobu siedmich dní bezplatne poskytnuté polotuhé krmivo (vo vnútri klietky) a voda a boli umiestnené diskrétne v oddelenej klietke (30 x 23 x 14 cm3).

2.4. Experimentálny protokol. DSM bol injikovaný v dávkach 50 a 100 mg/kg na telesnú hmotnosť (bw) potkanom intraperitoneálnou (ip) cestou s použitím 0,5 % dimetylsulfoxidového vehikula v normálnom fyziologickom roztoku (dávkový objem 5 ml/kg) [17].

Zvieratá boli náhodne rozdelené do 5 zhlukov v jednoduchom slepom režime (n � 5): (i) falošné (S), (ii) QA, (iii) QA + DSM50, (iv) QA + DSM100 a (v) QA + DNP. Potkany sa podrobili intracerebroventrikulárnemu podávaniu QA (QA-ICV) alebo simulovanej operácii v prvý deň.

DSM sa podával 21 po sebe nasledujúcich dní denne 120 minút po QA-ICV od prvého dňa. Donepezil (DNP) sa použil ako štandardné liečivo v tejto štúdii a injekčne sa podával (dávka 3 mg/kg, ip) potkanom s injekciou QAICV počas 21 po sebe nasledujúcich dní.

Zvieratám v kontrolných skupinách a kontrolných skupinách QA sa podávalo vehikulum (sterilný 0,5 % dimetylsulfoxid v normálnom fyziologickom roztoku v objeme dávky 5 ml/kg) od 1. do 21. dňa. Celá štúdia sa uskutočnila podľa schémy znázornenej na Obrázok 1.2.5. Pohybová aktivita.

Vo všetkých skupinách potkanov bola priemerná lokomotorická aktivita dokumentovaná pomocou aktofotometra počas 5 minút. Samostatné zviera sa umiestnilo do aktofotometra na 3 minúty aklimatizácie. Potkanom bolo potom podaných 5 minút a výsledky boli uvedené ako počty za 5 minút [11].2.6. Test rotarod.

In rodents, the rotarod test typically evaluates the equilibrium and muscle synchronization facets of sensorimotor functions. .e rats were presented to acquisition trials until their ability to run reached >60 sekúnd pri otáčaní tyče rýchlosťou deviatich otáčok za minútu (ot./min.).

Po akvizičných pokusoch bola samostatná krysa umiestnená na valcový hriadeľ a rýchlosť otáčania bola zosilnená s konštantnou prestávkou 10 sekúnd zo 6 otáčok za minútu (predbežná rýchlosť) na 30 otáčok za minútu (záverečná rýchlosť), s presahom 50 sekúnd. Vo výsledkoch bola uvedená stredná latencia pádu (v sekundách) z otočného valcového hriadeľa.2.7.

Analýza stopy. Princípom vykonávania analýzy stopy u potkanov je hodnotenie abnormalít chôdze.

Čo sa týka stôp, nohy potkanov boli ponorené do štyroch rôznych farebných netoxických potravinárskych farbív a nechali sa bežať po naklonenom chodníku (70 cm × 10 cm × 8 cm). Základňa vzletovej a pristávacej dráhy bola uzavretá celulózovou fóliou bielej farby. Potkany boli motivované k stlmeniu časti do kopca na konci dráhy, aby získali jasné stopy. Každému zvieraťu sa po pokusoch jemne odstránilo farbivo pomocou vlažnej vody. Stopy boli naskenované a "dĺžka kroku" bola zmeraná pomocou štandardného pravítka. Dĺžka kroku bola kvantifikovaná výpočtom vzdialenosti medzi postupnými umiestneniami identickej potkanej labky [11].

2.8. Úloha rozpoznávania nových objektov (NORT). Bol dodržaný štandardný protokol, ktorý uviedli Kumar a Bansal [23].

ORT je nerentabilný a nehostinný exteroceptívny archetyp, ktorý sa používa na hodnotenie rekolektívnej pamäte pracovného typu využívanej prostredníctvom impulzívneho sondovania hlodavcov. Prieskum sa vykonáva v kvádrovej nádobe z otvorenej preglejky na streche (80 cm × 42 cm × 62 cm), umiestnenej v tichej oblasti, osvetlenej 60 W LED, aby sa dosiahol konzistentný jas v nádobe.

Valcovité (biele)-, pyramídové (červené)- a kocky (čierne) (12 cm vysoké) drevené predmety (v identických trojiciach) boli pevné a dostatočne ťažké na to, aby boli pre hlodavce nepohyblivé. NORT sa uskutočnil na 16. deň v 3 štádiách (S): aklimatizácia (S1), akvizícia (S2) a štádium skúmania (retencia) rozpoznávania nového objektu (S3).

Počas S1, tri po sebe idúce dni pred pokusmi sa objavila prázdna základňa dna nádoby (5 minút) potkanmi. Po dokončení S1 bolo jednotlivé zviera zvyknuté na akúkoľvek sadu pevných položiek v štádiu učenia (S2).

Veci podobné dvojčatám boli umiestnené v 2 ľubovoľne zvolených protiľahlých uhloch nádoby (9 cm až 11 cm medzera od bočných hradieb). Samostatne bol hlodavec umiestnený do stredu nádoby oproti dvom pevným predmetom a bolo mu dovolené objaviť dva podobné predmety počas 5 minút. Vedenie ňufáka v blízkosti predmetu na vzdialenosť menšiu alebo rovnajúcu sa 2–3 cm alebo fyzický kontakt s predmetom s papuľou sa považovalo za vyšetrovacie správanie.

Po S2 bol hlodavec umiestnený v domácej klietke zachytenej intertrial reccess (ITR) 60 minút.

Akákoľvek jednotlivá pevná položka ponúkaná v S2 bola vymenená za inú tuhú položku a hlodavce boli opäť prezentované dvojitým položkám, tj replike známej položky a inej položke. Celé amalgamácie a pozície položiek boli zarovnané na zmierniť pravdepodobné predsudky vyvolané záľubou v určitých nastaveniach alebo položkách. Nádoba a pevné predmety boli po každom vyšetrení dôkladne utreté (etylalkohol 15 % a suchá handrička), aby sa obmedzili pachové stopy. Čas strávený objavovaním každej položky v S2 a S3 bol zdokumentovaný pomocou stopiek. .e trvanie skúmania dvoch zhodných položiek v S2 (I1 � Ii1 + Ii2) a trvanie skúmania dvoch odlišných položiek, tj známych a odlišných, v S3 (I2 � Ii3 + Ib) bol zaznamenaný. Rozdiely v trvaní vynaloženom na skúmanie rôznej položky a v trvaní skúmania oboznámenej položky (Ib–Ii3 � DI) odhaľujú uchovanie pamätnej pamäte.

DI (diskriminačný index)/S3 trvanie (dĺžky) skúmania známej aj novej položky (zmenené a doplnené DI) zlepšuje zaujatosť odchýlkami v úplnom vyšetrovaní a označuje záľubu v rôznych položkách na rozdiel od známych {DI � (Ib–Ii3 )/(Ii3 + Ib)}. Rekolektívna pamäť bola hodnotená kvantifikáciou schopnosti hlodavcov vyčleniť známe/novely v S3 a bola uvedená ako DI (upravená pre celkové obdobie vyšetrovania v S3) [24].

2.9. Morrisovo vodné bludisko (MWM). Bol dodržaný štandardný protokol, ako uviedli Kumar a Bansal [25]. MWM posudzuje priestorovú pamäť podľa plaveckých pokusov, pri ktorých hlodavec nájde únikovú cestu na skryté pódium.

Čierna kruhová nádrž (priemer 2 m, výška 0,6 m) mala vodu (25 ± 1 stupeň) naplnenú do hĺbky 0,3 m. Vodná nádrž bola rozdelená v smere hodinových ručičiek na 4 podobné oblasti (R1, R2, R3 a R4) pomocou dvoch nylonových vlákien, pripevnených kolmo na horný obvod nádrže.

Pódium (10,5 cm x 10,5 cm) bolo umiestnené pod vodou (1 cm pod vodou) v oblasti nádrže R4. Miesto pódia pretrvávalo neporušené počas celého obdobia akvizície.

Každý jeden potkan bol podrobený štyrom sériovým akvizičným cyklom (5 minút ITR) každý deň. Hlodavec bol jemne vypustený do vodnej nádrže pri stene nádrže, pričom lokalita sa pri každom pokuse menila od R1-R4, R2-R1, R3-R2 a R{{ 7}} R3 v dňoch 1 až 4, v tomto poradí, a bolo povolených 120 sekúnd na detekciu podvodného pódiu. Hlodavce ďalej odpočívali na pódiu 20 sekúnd.

Neúspech pri detekcii plošiny do 120 sekúnd indikoval manuálne umiestnenie potkanov na plošinu a potom sa im umožnilo 20 sekúnd na plošine. Doba latencie úniku (ELT) je trvanie (s) objavenia skrytého pódia vo vodnej nádrži.

Priestorové učenie bolo označené prvým dňom vs. štvrtým dňom ELT. V teste sondy (5. deň) hlodavce skúmali nádrž 120 sekúnd, ale boli zbavení pódia. Zaznamenal sa priemerný čas strávený v celej nádrži (4 oblasti). Stredné trvanie strávené v R4 (TSTQ: čas strávený v cieľovom kvadrante) sondovaním pre skryté pódium sa považovalo za index referenčnej pamäte. .porovnávacie nastavenie nádrže vo vzťahu k položkám v laboratóriu, ktoré pôsobia ako vizuálne znaky, a pozícia vyšetrovateľa zostala nenarušená [26].

2.10. Odhad biochemických parametrov. Po dokončení behaviorálnych testov sa celý mozog terasov odobral a umiestnil na rozdrvené kocky ľadu, po čom nasledovalo kúpanie v mraziacom sterilizovanom fyziologickom roztoku (izotonický 308 mOsmol/l NaCl), aby sa odstránili zvyšky a krv.

Homogenizácia celého mozgu sa okamžite uskutočnila v mraziacom separačnom pufri (pH 7,4) so ​​zložením 215 mM D-manitol, 20 mM 2-[4-(2-hydroxyetyl kyselina )piperazín-1-yl]etánsulfónová, 1 mM 1,2-bis[2-[bis(karboxymetyl)amino]etoxy]etán, 75 mM sacharóza a 0,1 % BSA. Homogenát sa centrifugoval pri 4 stupňoch s použitím sily 13 000 x g počas 5 minút. Peleta sa odmietla a supernatant sa rozdelil na dve časti a znova sa odstredil (4 stupne) pri sile 13 000 x g počas 5 minút. Surová mitochondriálna peleta sa oddelila a opäť centrifugovala v separačnom pufri s 1,2-bis[2-[bis(karboxymetyl)amino]etoxy]etánom pri 12 500 x g počas 11 minút (4 stupne). Takto získaný polotuhý depozit obsahujúci nekontaminované mitochondrie sa resuspendoval v separačnom pufri (pH 7,4) s obsahom 75 mM sacharózy, 20 mM 2-[4-(2-hydroxyetyl)piperazínu-1- kyselina yl]etánsulfónová a 215 mM D-manitol [27].

Neskôr sa na stanovenie biochemických markerov štandardnými metódami použila mitochondriálna frakcia homogenátu celého mozgu.2.11. Odhad mitochondriálneho komplexu.

2.11.1. NADH: Aktivita ubichinón oxidoreduktázy. Aktivita komplexu I (NADH dehydrogenáza) bola kvantifikovaná (nmol oxidovaného NADH/minúta/mg proteínu) podľa techniky Kinga a Howarda [28]. .eoxidačná tvorba NAD+ z NADH je sprevádzaná redukciou cytochrómu c. Testovacia zmes pozostávala z cytochrómu c (10,5 mM), 6 mM nikotínamidadeníndinukleotidu (DPNH) rozpusteného s použitím 2 mM diglycínového tlmivého roztoku a diglycínového tlmivého roztoku (0,2 M, pH 8,5).

Rozpustná mitochondriálna frakcia bola začlenená do testovanej zmesi na spustenie reakcie. Zmeny optickej hustoty (OD) pri λmax � 550 nm sa sledovali počas 120 sekúnd.

2.11.2. Aktivita sukcinátu: ubichinónoxidoreduktázy Rýchlosť aktivity sukcinátdehydrogenázy (komplex II) sa kvantifikovala (nmol oxidovaného sukcinátu/minútu/mg proteínu) podľa Kingovej techniky [29].

Oxidáciu kyseliny jantárovej spúšťa falošný prijímač elektrónov, kyanoželezitan draselný (K3Fe(CN)6). Testovacia zmes obsahovala kyselinu jantárovú (0,63 M), 1 % BSA, K3Fe(CN)6 (0.036 M) a Na+-K+ [P04] 2- pufor (0,23 M, pH 7,6). Rozpustná mitochondriálna frakcia bola začlenená do testovanej zmesi na spustenie reakcie. .e zmena v OD pri λmax � 420 nm sa sledovala 120 sekúnd.2.12. Stanovenie biomarkerov oxidačného stresu2.12.1. látky reaktívne s kyselinou jobarbiturovou (TBARS).

Na vyhodnotenie TBARS (nmol na mg proteínu) [30] analyzovaná kombinácia (konečné množstvo ∼4 ml) obsahujúca 0.10 ml homogenizovaného mozgu, 1,51 ml 4,{{ 7}}dihydroxy-2-merkaptopyrimidín (0,8 %), 200 ul SLS (8,18 %), 1,49 ml kyseliny ľadovej (21 %, pH 3,51) a 0,71 ml deionizovanej vody sa podrobilo zahrievaniu vo vodnom kúpeli na 96 stupňov. 60 minút.

Pomer 15:1 butylalkohol/azabenzén (5,1 ml) sa doplnil do analytickej zmesi, ktorá sa centrifugovala pri 4,000 x g výkonu (10 minút) a supernatant sa izoloval.

Dvojlúčovým spektrofotometrom UV1700 (Shimadzu, Japonsko) sa stanovil OD chromofor malondialdehydu-4,6-dihydroxy-2-merkaptopyrimidínu pri vlnovej dĺžke (λmax � 532 nm) a ε � 1,56 × 105/M/cm (molárny extinkčný koeficient) sa použil na výpočet 4,6-dihydroxy-2-merkaptopyrimidínových aduktov.

2.12.2. Znížené hladiny glutatiónu (Lc-Glutamyl-L-cysteinyl-glycín) Ellmanov postup [31] bol zavedený na posúdenie obsahu L-glutatiónu (GSH). Testovacia zmes obsahujúca homogenát (1,1 ml) a 1 ml 4 % 2-hydroxy-5-kyseliny sulfobenzoovej (5-SSA) sa odstreďovala (4 stupne) 11 minút pri 2 500 x g výkonu .

Neskôr 2,8 ml Na+-K+[PO4]2- pufra (51,2 mM, pH 7,77) a {{10}},21 ml 3-karboxy{{13 }}nitrofenyldisulfid (0,12 mM, pH 7,89) sa zmiešali s vyššie oddeleným supernatantom (0,12 ml).

Tripeptid (umolGSH na mg proteínu) sa kvantifikoval pomocou dvojlúčového UV1700 spektrofotometra (Amax � 412 nm). použitieε � 1,36 × 104/M/cm.2.12.3.

Aktivita glutatiónperoxidázy. Aktivita glutatiónperoxidázy (GPx) (EC 1.11.1.9) bola hodnotená implementáciou techniky Mohandasa a kol. [32]. .eanalyzovať zmes obsahujúcu 100 µl 10% homogenátu, 100 µl azidu sodného (1,11 mM), 100 µl EDTA (1,13 mM), 40 µl glutatión-disulfidovej reduktázy (GSR, 1 IU/ml) (EC1.8.1.7), 10 ul H202 (0,28 mM), 40 ul Lc-glutamyl-L-cysteinyl-glycínu (1,2 mM), 100 ul koenzýmu II redukovanej tetrasodnej soli (0,22 mM ) a 0,12 M 1,49 ml Na+-K+ [PO4]2-tlmivého roztoku (pH 7,4) v celkovom množstve 2000 ul. Strata tetrasodnej soli redukovanej koenzýmom II pri λmax � 340 nm bola zdokumentovaná pri teplote 25 stupňov. Rýchlosť GPx sa vypočítala ako nmol NADPH oxidovaného/minútu/mg proteínu s použitím e� 6,22 x 103/M/cm.

For more information:1950477648nn@gmail.com