Morfologické analýzy expresie nefrínu pri progresívnej glomerulonefropatii

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Abstrakt:

V tejto štúdii sme sa zamerali na nefrín, jednu z kľúčových molekúl v štrbinovej membráne podocytov, pretože hoci existujú správy o jeho expresii u ľudí a potkanov, ich prítomnosť v bežných kosmáčoch nebola hlásená. Skúmali sme expresiu nefrínu a zmeny v glomeruloch v závislosti od vývoja spontánnej progresívnej glomerulonefropatie u bežných kosmáčov. Hodnotilo sa devätnásť kosmáčov obyčajných vo veku od dvoch do desiatich rokov. Oblička bola skúmaná mikroskopicky s hematoxylínom a eozínom a imunohistochemickým farbením na nefrín. Lézie boli klasifikované do troch stupňov podľa systému klasifikácie renálnych lézií uvedeného skôr. Plocha pozitívna na nefrín sa merala morfometrickou analýzou a vypočítal sa pomer pozitívnych na nefrín. Expresia nefrínu sa pozorovala pozdĺž glomerulárnej kapilárnej slučky v kontinuálnom lineárnom vzore v stupňoch renálnych lézií 0 až 2 a buď v nespojitom lineárnom alebo hrubom granulovanom vzore v 3. stupni. Expresia nefrínu mala tendenciu významne klesať v závislosti od stupňa renálnych lézií . Predpokladá sa, že zmena expresie nefrínu hrá dôležitú úlohu v progresii renálnych lézií.

Kľúčové slová:nefrínu, kosmáč,glomerulonefropatia, obličky, patológia

výhody púštnej cistancheaRastlina Cistancheje dobré preobličky

Úvod

Je známe, že spontánna progresívna glomerulonefropatia u kosmáčov obyčajných (Callithrix jacchus) sa často vyskytuje od veku dvoch rokov, pričom závažnosť lézie progreduje s vekom. Predtým sme hlásili primárne a progresívne lézie nefropatie u bežných kosmáčov1. Primárne glomerulárne zmeny raného štádia nefropatie sú charakterizované odstránením procesov na nohách podocytov a čiastočným zhrubnutím glomerulárnej bazálnej membrány, o ktorých sa predpokladá, že spôsobujú únik proteínu z glomerulov, a možno ich pozorovať ultramikroskopiou, ale nie svetelnou mikroskopiou1–3. Okrem toho imunoglobulín hrá dôležitú úlohu v progresii nefropatie1, 2. IgM sa ukladá na mezangium v ​​ranom štádiu glomerulonefropatie a po prvom uložení IgM sa oblasť depozitu rozširuje na celý glomerulus a IgA a IgG sú uložené s progresiou2. Hyalínové odliatky naznačujúce únik proteínu z glomerulov možno pozorovať svetelnou mikroskopiou s progresiou glomerulonefropatie4. Proteinúria zhoršuje progresiu tubulointersticiálnych lézií u bežných kosmáčov4, ako u ľudí5, 6, a v nedávnej štúdii glomerulov môže byť proteinúria vyvolaná poruchami štrbinovej bránice, čím sa spájajú susedné výbežky chodidiel (pedicely) podocytov. Štrbinová membrána je medzibunkový spojovací komplex prítomný medzi susednými výbežkami chodidla a boli identifikované niektoré molekuly súvisiace s jej tvorbou3. Predpokladalo sa, že zníženie expresie týchto molekúl alebo dysfunkcia štrbinovej bránice súvisí s progresiou proteinúrie3. Nefrín, jedna z kľúčových molekúl exprimovaných v štrbinovej diafragme podocytov, je glykoproteín pozostávajúci z 1241 aminokyselín a je dobre známym biomarkerom používaným na monitorovanie poruchy štrbinových bránic7–10. Molekuly súvisiace so štrbinovými bránicami neboli študované pri nefropatii kosmáčov obyčajných, hoci je známe, že sa u nich vyskytuje zmena procesov na nohách podocytov a progresia proteinúrie. Okrem toho existujú správy o expresii nefrínu u ľudí a potkanov7–12, ale nie u kosmáčov. Preto sme pomocou imunohistochemických analýz skúmali expresiu nefrínu v glomeruloch a zmeny v expresii nefrínu v závislosti od progresie lézie.

cistanche tcm

Materiály a metódy

Zvieratá

Táto štúdia bola schválená Inštitucionálnym výborom pre starostlivosť o zvieratá a ich používanie Centrálnej inštitúcie pre pokusné zvieratá (CIEA; Kawasaki, Japonsko) a bola vykonaná v prísnom súlade s predpismi CIEA pre experimentovanie na zvieratách na základe pokynov pre správne správanie Pokusy na zvieratách (Science Council of Japan, 2006). Hodnotilo sa 19 kosmáčov obyčajných (11 samcov a 8 samíc) od CLEA Japan Inc. (Tokio, Japonsko). Ich vek sa v čase pitvy pohyboval od 2 do 10 rokov. Zvieratá boli umiestnené v klietkach v miestnosti pre zvieratá udržiavanej pri teplote 26 ± 3 stupne a vlhkosti 55 ± 20 percent. Boli kŕmené LCMS-1M (CLEA Japan Inc., Tokio, Japonsko) a vodou z vodovodu. Zvieratá boli humánne usmrtené v anestézii pentobarbitalom sodným kvôli rôznym príčinám umierania (ako je syntexia, zakrivenie bedrových stavcov, dislokácia mandibulárneho kĺbu atď.). Analýza moču sa neuskutočnila, pretože nebolo možné odobrať vzorky moču.

Histopatológia

Theobličkyboli perfundované fyziologickým roztokom, nasledovali 4 percentá paraformaldehydu a potom fixované v 10 percentnom neutrálnom pufrovanom formalíne na mikroskopické vyšetrenie. Vzorky boli zaliate do parafínu, narezané na hrúbku 5 μm a zafarbené hematoxylínom a eozínom (HE). Lézie boli klasifikované ako glomerulárne, tubulárne a intersticiálne lézie na základe publikovaných kritérií1. Stupne nefropatie boli rozdelené do štyroch skupín: stupeň 1 (3 muži a 1 žena), stupeň 2 (3 muži a 5 žien), stupeň 3 (1 muž a 3 ženy) a stupeň 4 (3 muži) (tabuľka 1).

Pre imunohistochémiu monoklonálna protilátka proti extracelulárnej doméne ľudského pôvodunefrínu(1:1,000, Nephring{{0}}, Santa Cruz Biotechnology, Inc., Dallas, TX, USA) sa použila ako primárna protilátka. Rezy 5-μm boli zbavené parafínu, rehydratované, ošetrené 3-percentným peroxidom vodíka pri izbovej teplote počas 5 minút a potom zahrievané v autokláve pri 121 stupňoch počas 20 minút v roztoku na získanie cieľa (pH 6,0, Dako, Glostrup, Dánsko). Po ochladení boli rezy inkubované s primárnou protilátkou pri 4 stupňoch cez noc. Peroxidázou konjugovaný anti-myší a anti-králičí IgG polymér (Histofine Simple Stain Rat MAX-PO (MULTI), Nichirei Bioscience Inc., Tokio, Japonsko) sa použil ako sekundárna protilátka pre metódu založenú na polyméroch13. Rezy sa inkubovali so sekundárnou polymérnou protilátkou pri teplote miestnosti počas 30 minút a reagujúce produkty sa vizualizovali použitím 3,3'-diaminobenzidínu ako chromogénu. Kontrafarbenie sa uskutočnilo hematoxylínom. Pre negatívnu kontrolu bola vynechaná primárna protilátka.

Morfologická analýza

Na morfologickú analýzu sa glomeruly s glomerulárnym hilom predložili na vyšetrenie a na každom sklíčku sa zachytilo 16 až 28 glomerulov (tabuľka 1) pomocou skenera celých sklíčok (Aperio AT2, Leica Microsystems Inc., Buffalo Grove, IL, USA) a zodpovedajúci softvér na prezeranie patologických diapozitívov (Aperio ImageScope, Leica Microsystems Inc.) pri rovnakom rozlíšení a veľkosti obrazu.Nephrin-Pozitívne a celé glomerulárne oblasti sa vypočítali pomocou softvéru na analýzu obrazu (Image-Pro V10, Mediacybenetics Inc., Rockville MD, USA) nakreslením oblasti záujmu okolo glomerulu, podľa predchádzajúcej správy14. Celá glomerulárna oblasť bola definovaná ako oblasť, ktorú možno odlíšiť od bieleho pozadia. Farebné prahy pre výpočetnefrínu-pozitívne oblasti boli určené podľa každého stavu farbenia. Prahové hodnoty pre červenú, zelenú a modrú boli 37–67, 31–77 a 32–88. Nefrín-pozitívny pomer sa vypočítal vydelením meranínefrínu- pozitívna oblasť nad oblasťou glomerulov. Štatistická analýza sa uskutočnila pomocou testu Jonckheere (úroveň významnosti: 5 percent, jednostranný test), aby sa vyhodnotil trend medzi stupňom nefropatie a expresiounefrínu.

costanche

Výsledky

Patologické skóre a stupne jednotlivých renálnych lézií sú uvedené v tabuľke 1. Rovnako ako v našej prvej správe1, stupeň lézie mal tendenciu rásť s vekom a nebol žiadny zjavný rozdiel medzi pohlaviami. Výsledky imunohistochemického farbenianefrínusú znázornené na obr. 1 anefrínu- pozitívny pomer je znázornený na obr. 2 a v tabuľke 1. Medzi skóre a stupňami v tabuľke 1 sa na porovnanie so skóre použil stupeň renálnej lézie, odvodený z celkového skóre každej renálnej lézie, a skóre hyalínového odliatku.nefrínu-pozitívny pomer (obr. 2 a 3). Jednotlivé prípady v tabuľke 1 sú uvedené vo vzostupnom poradí podľa stupňa renálnej lézie. Expresia nefrínu bola pozorovaná spolu s glomerulárnou kapilárnou slučkou v kontinuálnom lineárnom vzore v stupňoch 0 až 2 (obr. 1A–C) a v nespojitom lineárnom alebo hrubo zrnitom vzore v stupňoch 3 (obr. 1D). V negatívnej kontrolnej vzorke nebola žiadna pozitívna reakcianefrínubol pozorovaný na akomkoľvek mieste.

Porovnanienefrínu- pozitívny pomer ku stupňu renálnej lézie je znázornený na obr. 2. V prípadoch renálnej lézie stupňa 0 je priemerná ± štandardná odchýlka (SD)nefrínu-pozitívny pomer bol 5,66 ± 1,18 percenta a maximálna, minimálna a stredná hodnota boli 6,84 percenta, 4,27 percenta a 5,76 percenta. V prípadoch 1. stupňa bol priemer ± SD 3,99 ± 1,61 percenta a maximálne, minimálne a stredné hodnoty boli 5,69 percenta, 1,19 percenta a 4,35 percenta. V prípadoch 2. stupňa bol priemer ± SD 3,82 ± 2,25 percenta a maximálne, minimálne a stredné hodnoty boli 6,71 percenta, 1,58 percenta a 3,49 percenta. V prípadoch 3. stupňa bol priemer ± SD 2,52 ± 1.{44}}2 percentá a maximálna, minimálna a stredná hodnota boli 3,67 percenta , 2,17 percenta a 2,17 percenta . Súhrnne boli individuálne rozdiely v expresii nefrínu malé v prípadoch stupňa 0, ale veľké v prípadoch stupňa 1 alebo vyššie a nízka pozitívna expresia bola zistená sporadicky.Nephrinexpresia mala tendenciu klesať v závislosti od stupňa renálnych lézií (obr. 2). Bol signifikantne nižší trend medzi stupňom renálnej lézie anefrínu-kladný pomer podľa Jonckheereho testu (p=0.0166). Skóre hyalínovej sadry v porovnaní so stupňom renálnej lézie je znázornené na obr. 3. V prípadoch so skóre hyalínovej sadry 0 bol priemerný pomer ± SD pozitívneho pomeru nefrínu 5,40 ± 1,32 percenta, v prípadoch skóre 1 to bolo 4,10 ± 1,70 percenta a v 2 prípadoch to bolo 3,37 ± 1,98 percenta. Podľa Jonckheereho testu bol medzi skóre hyalínového odliatku a pozitívnym pomerom nefrínu výrazne nižší trend (p=0.0654).

Diskusia

Pokles nefrínu koreloval s progresiou renálnych lézií počas rozvoja glomerulonefropatie kosmáčov. Anti-nefrínová protilátka použitá v tejto štúdii rozpoznávala extracelulárnu doménu na N-koncovej strane. Táto extracelulárna doména interaguje s molekulami NEPH1 a ​​vytvára štruktúru podobnú zipsu v štrbinovej membráne15. Lokalizácia nefrínu v normálnych glomeruloch je pozdĺž glomerulárnej kapilárnej slučky a vzor farbenia je lineárny vzor kontinuálnych jemných granúl u potkanov aj ľudí11, 12, 16–18. Farbenie vykonané v tejto štúdii je vhodné; čo je potvrdené pozorovaním, že steny kapilár v kontakte s mezangiálnou oblasťou neboli zafarbené, zatiaľ čo steny v kontakte s podocytmi áno. Za abnormálnych podmienok, ako je nefrotický syndróm u ľudí alebo puromycínová aminonukleozidová nefróza u potkanov, je vzor farbenia nefrínom v glomerulách diskontinuálny a hrubo zrnitý a intenzita imunohistochemického farbenia je slabšia ako v normálnych glomerulách11, 16, 17. V tejto štúdii vzor expresie nefrínu v stupňoch 0 až 2 bol normálny; vzor farbenia v 3. stupňoch bol však porovnateľný so vzorom abnormálnych stavov. V predchádzajúcom výskume expresie glomerulárneho nefrínu u potkanov Crl: CD (SD) s ochorením s minimálnou zmenou bola expresia nefrínu neporušená, hoci procesy na nohách podocytov ukázali vymazanie pod elektrónovou mikroskopiou bez zjavných morfologických zmien pozorovaných pri svetelnej mikroskopii18. Pri bežnom renálnom ochorení potkanov, chronickej progresívnej nefropatii (CPN), sa preukázalo, že albuminúria sprevádzaná skorým štádiom CPN môže viesť k menšiemu počtu zmien v glomerulárnej permeabilite v dôsledku zlyhania reabsorbcie albumínu z proximálnych tubulov19. U ľudí sa uskutočnilo niekoľko výskumov o znížení expresie nefrínu pri malých zmenách10 alebo pri iných ochoreniach obličiek14, 16. Na druhej strane existuje správa o intaktnej expresii nefrínu pri nefróze s minimálnymi zmenami20. O prítomnosti alebo neprítomnosti zmeny v expresii nefrínu pri nefrotickom ochorení s minimálnou zmenou sa stále diskutuje. V skutočnosti bolo ťažké potvrdiť zvýšenie alebo zníženie protilátkovej reakcie nefrínu vizuálnym pozorovaním pri nefropatii kosmáčov, ale pomocou obrazovej analýzy bolo možné zistiť zmenu v celej obličke. Náš výskum naznačuje, že abnormalita štrbinových bránok glomerulu sa môže podieľať na progresii nefropatie u bežných kosmáčov v dôsledku poklesu nefrínu. Transformácia pozitívneho sfarbenia nefrínu z lineárneho na granulovaný vzor bola zaznamenaná na potkanom zvieracom modeli nefrotického ochorenia počas vývoja lézie11, 16, 21. Súvislosť medzi abnormalitami štrbinovej membrány a proteinúriou často boli hlásené22, 23; preto sa špekulovalo, že proteinúria môže byť spôsobená dysfunkciou štrbinovej bránice. V našej štúdii o nefropatii kosmáčov mohlo dôjsť k progresii permeability glomerulárneho proteínu v dôsledku dysfunkcie štrbinovej bránice, pretože morfologické znaky hyalínových odliatkov boli pozorované iba v prípadoch bez tubulointersticiálnych zmien. V tejto štúdii nebol pozorovaný žiadny štatisticky významný rozdiel medzi skóre morfologických zmien hyalínových odliatkov a poklesom expresie nefrínu. Expresia nefrínu má však tendenciu klesať v závislosti od skóre hyalínového odliatku, ktoré je indikátorom úniku proteínu z glomerulu.

V našom predchádzajúcom výskume bolo pozorované vymazanie výbežkov chodidiel v ranom štádiu nefropatie kosmáčov a oblasť postihnutého výbežku chodidla sa rozšírila v závislosti od stupňa renálnej lézie1. Tabuľka 2 ukazuje vzťah medzi mierou redukcie nefrínu v tejto štúdii a nálezmi z elektrónovej mikroskopie pre každý stupeň renálnej lézie z predchádzajúcej štúdie. Predpokladá sa, že vymazanie je spôsobené rozpadom aktínového cytoskeletu procesov chodidiel24. Nefrín je defosforylovaný, keď je vytvorená štrbinová membrána, a viaže sa na aktín prostredníctvom CD2AP a podocínu25, 26. Keď je štrbinová membrána poranená, molekuly nefrínu sa zhlukujú, čo indukuje fosforyláciu nefrínu, polymerizáciu aktínu a vyhladenie procesov chodidiel26. Fosforylácia nefrínu tiež nastáva rýchlo po indukcii vymazania chodidiel v modeli protamín sulfátu u myší27. Nefrín je glomerulárny adhézny proteín spojený s dozrievaním, diferenciáciou, tvorbou procesov a signalizáciou podocytov24. Náš výskum ukázal, že existuje korelácia medzi znížením expresie nefrínu, ako bolo stanovené imunohistochémiou, a progresiou stupňa renálnej lézie, čo naznačuje rozšírenie vyhladzovania procesov na nohách podocytov. Nie je však jasné, či abnormality v proteínovom komplexe štrbinovej bránice spôsobujú poškodenie procesov chodidiel podocytov alebo či poškodenie podocytov spôsobuje zmeny v štrbinových brániciach a redukciu nefrínu. Keďže nefrín je tiež zapojený do diferenciácie podocytov, predpokladá sa, že tento vzťah bude ďalej objasnený údajmi o regenerácii a diferenciácii podocytov.

Na záver naše výsledky poskytujú informácie onefrínuexpresia pri progresívnej glomerulonefropatii u kosmáčov obyčajných. Morfologická analýza odhalila nižší trendnefrínuexpresie v podocytoch pri progresívnej glomerulonefropatii kosmáčov obyčajných a ich zmenenefrínuPredpokladá sa, že expresia hrá dôležitú úlohu v progresii renálnych lézií.

Zverejnenie možných konfliktov záujmov:

Autori vyhlasujú, že nie sú v konflikte záujmov.

Poďakovanie:

Autori by sa chceli poďakovať pánovi Takayoshi Itovi za vynikajúcu technickú pomoc, ktorú poskytli. Autori tiež ďakujú pani Kanae Tamatsukuri a pánovi Jamesovi Haradovi za jazykovú úpravu rukopisu.

sistanch

Referencie
1. Yamada N, Sato J, Kanno T, Wako Y a Tsuchitani M. Morfologická štúdia progresívnej glomerulonefropatie u kosmáčov obyčajných (Callithrix jacchus). Toxicol Pathol. 41: 1106-1115. 2013.
2. Yamada N, Hashimoto N, Kamiie J, Doi T, Sato J, Inoue T, Shirota K a Tsuchitani M. Vzťah medzi depozíciou imunoglobulínu a skorými léziami progresívnej glomerulonefropatie u mladých kosmáčov obyčajných. Vet Pathol. 55: 173-176. 2018.
3. Cara-Fuentes G, Clapp WL, Johnson RJ a Garin EH. Patogenéza proteinúrie pri idiopatickej chorobe s minimálnymi zmenami: molekulárne mechanizmy. Pediatr Nephrol. 31: 2179-2189. 2016.
4. Isobe K, Adachi K, Hayashi S, Ito T, Miyoshi A, Kato A a Suzuki M. Spontánne glomerulárne a tubulointersticiálne lézie u kosmáčov obyčajných (Callithrix jacchus). Vet Pathol. 49: 839-845. 2012.
5. Eddy AA. Proteinúria a intersticiálne poškodenie. Transplantácia nefrolového číselníka. 19: 277-281. 2004.
6. Hingorani S, Gooley T, Pao E, Sandmaier B a McDonald G. Močové cytokíny po HCT: dôkaz renálneho zápalu v patogenéze proteinúrie aobličkychoroba. Transplantácia kostnej drene. 49: 403-409. 2014.
7. Kestilä M, Lenkkeri U, Männikkö M, Lamerdin J, McCready P, Putaala H, Ruotsalainen V, Morita T, Nissinen M, Herva R, Kashtan CE, Peltonen L, Holmberg C, Olsen
A a Tryggvason K. Pozične klonovaný gén pre nový glomerulárny proteín--nefrín{1}} je mutovaný pri vrodenom nefrotickom syndróme. Mol Cell. 1: 575-582. 1998.
8. Langham RG, Kelly DJ, Cox AJ, Thomson NM, Holthöfer H, Zaoui P, Pinel N, Cordonnier DJ a Gilbert RE. Proteinúria a expresia proteínu diafragmy štrbiny podocytov, nefrínu, pri diabetickej nefropatii: účinky inhibície enzýmu konvertujúceho angiotenzín. Diabetológia. 45: 572-1576. 2002.
9. Waleský GI a Saleem MA. Molekula nefrínového podpisu glomerulárneho podocytu? J Pathol. 220: 328-337. 2010.
10. van de Lest NA, Zandbergen M, IJpelaar DHT, Wolterbeek R, Bruijn JA, Bajema IM a Scharpfenecker M. Strata nefrínu sa môže použiť na predpovedanie remisie a dlhodobého renálneho výsledku u pacientov s ochorením s minimálnymi zmenami.ObličkyInt Rep. 3: 168–177. 2017.
11. Kawachi H, Koike H, Kurihara H, Yaoita E, Orikasa M, Shia MA, Sakai T, Yamamoto T, Salant DJ a Shimizu F. Klonovanie potkanieho nefrínu: expresia vo vývoji glomerulov a v proteinurických stavoch.ObličkyInt. 57: 1949–1961. 2000.
12. Luimula P, Ahola H, Wang SX, Solin ML, Aaltonen P, Tikkanen I, Kerjaschki D a Holthöfer H. Nephrin pri experimentálnom glomerulárnom ochorení.ObličkyInt. 58: 1461–1468. 2000.
13. Janardhan KS, Jensen H, Clayton NP a Herbert RA. Imunohistochémia vo vyšetrovacej a toxikologickej patológii. Toxicol Pathol. 46: 488-510. 2018.
14. Koop K, Eikmans M, Baelde HJ, Kawachi H, De Heer E, Paul LC a Bruijn JA. Expresia molekúl spojených s podocytmi u získaného človekaobličkychoroby. J Am Soc Nephrol. 14: 2063–2071. 2003.
15. Gerke P, Huber TB, Sellin L, Benzing T a Walz G. Homodimerizácia a heterodimerizácia glomerulárnych podocytových proteínov nefrínu a NEPH1. J Am Soc Nephrol. 14: 918-926. 2003.
16. Doublier S, Ruotsalainen V, Salvidio G, Lupia E, Biancone L, Conaldi PG, Reponen P, Tryggvason K a Camussi G. Redistribúcia nefrínu na podocytoch je potenciálnym mechanizmom proteinúrie u pacientov s primárne získaným nefrotickým syndrómom. Am J Pathol. 158: 1723–1731. 2001.
17. Kawakami H, Kamiie J, Yasuno K, Kobayashi R, Aihara N a Shirota K. Dynamika absolútneho množstva nefrínu v jedinom podocyte u potkanov s puromycínovou aminonukleozidovou nefrózou vypočítaná pomocou kvantitatívneho prístupu glomerulárnej proteomiky s vybraným režimom monitorovania reakcie. Transplantácia nefrolového číselníka. 27: 1324–1330. 2012.
18. Yasuno K, Honda K, Hakamata S, Kai K a Mori K. Choroba s minimálnou zmenouobličkyu mladého potkana Sprague Dawley. J Toxicol Pathol. 31: 55-59. 2018.
19. Obert LA a Frazier KS. Zapojenie intrarenálneho renín-angiotenzínového systému do patogenézy chronickej progresívnej nefropatie - preklenutie informačnej priepasti medzi disciplínami. Toxicol Pathol. 47: 799-816. 2019.
20. Patrakka J, Ruotsalainen V, Ketola I, Holmberg C, Heikinheimo M, Tryggvason K a Jalanko H. Expresia nefrínu v pediatriiobličkychoroby. J Am Soc Nephrol. 12: 289-296. 2001.
21. Saran AM, Yuan H, Takeuchi E, McLaughlin M a Salant DJ. Komplement sprostredkuje redistribúciu nefrínu a disociáciu aktínu pri experimentálnej membránovej nefropatii.ObličkyInt. 64: 2072–2078. 2003.
22. Gagliardini E, Benigni A, Tomasoni S, Abbate M, Kalluri R a Remuzzi G. Cielená downregulácia extracelulárneho nefrínu pri ľudskej IgA nefropatii. Am J Nephrol. 23: 277-286. 2003.
23. Wakamatsu A, Fukusumi Y, Hasegawa E, Tomita M, Watanabe T, Narita I a Kawachi H. Úloha kalcineurínu (CN) vobličkyglomerulárny podocyt: CN inhibítor zlepšil proteinúriu inhibíciou redistribúcie CN v štrbinovej bránici. Physiol Rep. 4: e12679. 2016.
24. Garg P. Prehľad biológie podocytov. Am J Nephrol. 47 (dodatok 1): 3.–13. 2018.
25. Ichimura K, Kurihara H a Sakai T. Organizácia aktínových vlákien procesov chodidiel v podocytoch potkanov. J Histochem Cytochem. 51: 1589-1600. 2003.
26. Ronco P. Proteinúria: je to všetko v chodidle? J Clin Invest. 117: 2079–2082. 2007.
27. Verma R, Kovari I, Soofi A, Nihalani D, Patrie K a Holzman LB. Zapojenie ektodomény nefrínu vedie k aktivácii kinázy Src, fosforylácii nefrínu, náboru Nck a polymerizácii aktínu. J Clin Invest. 116: 1346–1359. 2006.