Optimalizácia procesu odfarbenia a antioxidačnej aktivity extraktu z polysacharidu Cistache Deserticola pomocou metodológie povrchu odozvy

Abstrakt:

 

Cieľ:Optimalizovať proces dekolorizácie polysacharidov Cistanche Deserticola a preskúmanie ich antioxidačnej aktivity.

Skúmali sa metódy využívajúce aktívne uhlie ako dekolorizačné činidlo, účinky 4 faktorov vrátane aktívneho dávkovania uhlia, odfarbenej teploty, odfarbenia a pH na mieru dekolorizácie a rýchlosti zhodnocovania polysacharidu. Na základe experimentov s jedným faktorom sa proces dekolorizácie extraktu z polysacharidu Cistache Deserticola optimalizoval pomocou metodiky povrchovej odozvy. Použitím metódy hodnotenia antioxidantov in vitro, schopnosť vychytávania voľných radikálov 1, 1- difenyl -2- picrylhydrazín (DPPH), celková redukčná schopnosť, schopnosť hydroxylového vychytávania a 2,2'-azino Bola stanovená bis (3- etylbenzothiazol - 6- sulfónová kyselina) Diamonium Salt (ABTS) Katión voľného radikálu polysacharidov z Cistache Deserticola. Výsledky Optimálne podmienky odfarbenia procesu pre extrakt polysacharidov z Cistache Deserticola boli nasledujúce: aktívna dávka uhlíka 20%, teplota dekolorizácie 37 stupňov, odfarbovacia doba 49 minút, pH 5,03. Za týchto optimálnych podmienok bola miera dekoizácie a miera zhodnocovania polysacharidu 62,66% a 96,16%. Po dekolorizácii sa významne zvýšili schopnosti vychytávajúceho radikálneho radikálu DPPH a hydroxylového radikálu, zatiaľ čo schopnosti vychytávajúceho radikálneho radikálu ABTS sa významne znížili. Záver Proces dekolorizácie sa ľahko ovláda, s dobrými odfarbovacími účinkami a rýchlosťou zotavenia polysacharidu. Má dôležitú hodnotu aplikácie a poskytuje základ pre neskorší výskum a vývoj polysacharidu Cistache Deserticola.

Kľúčové slová: Cistanche Deserticolapolysacharid; odfarbenie; Metodika povrchu odozvy; antioxidačná aktivita

CistancheÚčinky púšte

 

1.2.3 Meranie rýchlosti zotavenia polysacharidu

Príprava štandardnej krivky:
Bola použitá metóda kyseliny fenol-aulfúrovej. Približne 0. 0 5 0 0 g glukózového štandardu (sušené na konštantnú hmotnosť pri 105 stupňoch) sa presne odvážilo a zriedené na 50 ml zväzkovú banku na prípravu zásobného roztoku. Potom sa presne zmerala 1,0 ml zásobného roztoku a zriedila sa na 10 ml v objemovej banke, aby sa získal štandardný roztok 0,1 mg/ml. Štandardné roztoky 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 a 100 μl glukózy sa presne merali do 1,5 ml odstreďovacích trubíc. Do každej trubice sa pridala destilovaná voda, aby sa vytvoril celkový objem 100 ul. Ako prázdny kontrolný roztok sa použil ďalšia 1,5 ml centrifugačná trubica obsahujúca 100 ul destilovanú vodu. Do každej trubice sa pridá 100 ul 5% roztoku fenolu, dôkladne premiešal a potom sa rýchlo pridalo 500 ul koncentrovanej kyseliny sírovej. Rúrky boli vírivé 3 minúty a nechali sa stáť 35 minút. Potom sa 200 μl reakčného roztoku prenieslo na {96- doštičku a absorbancia sa merala pri 490 nm pomocou automatickej čítačky mikroplatov. Štandardná krivka sa vyniesla s absorbanciou (Y) ako vertikálna os a koncentrácia glukózy (x, ug/ml) ako horizontálna os. Získaná štandardná krivka bola:

Y = 5.507X – 0.01,
r² = 0.992.

Meranie obsahu polysacharidu:
Alikvot 100 ul zriedenéhoPúšť cistancheExtrakt z polysacharidu sa presne meral do 1,5 ml centrifugačnej trubice. Hodnota absorbancie bola stanovená pomocou vyššie opísanej metódy a koncentrácia polysacharidu sa vypočítala pomocou štandardnej krivky.

Meranie rýchlosti zotavenia polysacharidu:
Hmotnosť polysacharidov vPúšť cistancheExtrakt pred a po dekolorizácii sa meral pomocou vyššie uvedenej metódy. Rýchlosť zotavenia polysacharidu bola vypočítaná pomocou rovnice (2):

Miera zotavenia polysacharidu (%)
= (maftermbefore) × 100%\ vľavo (\ frac {m _ \ text {po}} {m {_ \ text {pred}} \ vpravo) \ Times 100 \%(mbefore mafter) × 100%
Kde:

MBEFOREM _ \ text {pred} mbefore a mafterm _ \ text {po} mafter sú masyPúšť cistanchepolysacharidy pred a po dekolorizácii (G).

 

 

1.2.4 Experimentálny návrh s jedným faktorom

Účinky štyroch faktorov aktivovaných dávkovaním uhlíka, teploty odfarbenia, odfarbenia a pH-On rýchlosťou odfarbenia a rýchlosti zhodnocovania polysachariduPúšť cistancheSkúmal sa extrakt z polysacharidu.

Účinok dávkovania aktívneho uhlia:
Fixná odfarbovacia doba po 30 minútach, odfarbovacia teplota pri 50 stupňoch a pH pri 5,03 (nameraná hodnota vzorky). Študoval sa vplyv aktívneho dávkovania uhlíka na rýchlosť odfarbenia a rýchlosť zotavenia polysacharidu.

Vplyv teploty odfarbenia:
Fixovaná dávka aktívneho uhlia pri 20% (M: M), odfarbovacia doba po 30 minútach a pH pri 5,03. Študoval sa vplyv teploty odfarbenia na rýchlosť odfarbenia a rýchlosť zhodnocovania polysacharidu.

Účinok odfarbenia:
Fixovaná dávka aktívneho uhlia pri 20%, odfarbovacia teplota pri 50 stupňoch a pH pri 5,03. Študoval sa vplyv času odfarbenia na mieru odfarbenia a rýchlosť zotavenia polysacharidu.

Účinok pH:
Fixovaná dávka aktívneho uhlia pri 20% (M: M), odfarbovacia teplota pri 50 stupňoch a čas odfarbenia po 30 minútach. Študoval sa vplyv pH na mieru odfarbenia a rýchlosť zotavenia polysacharidu.

 

1.2.5 Experimentálny návrh na optimalizáciu povrchu odozvy

Na základe optimálneho rozsahu podmienok identifikovaného v experimentoch s jedným faktorom sa použila experimentálna metóda navrhovania boxu-behnkenPúšť cistancheextrakt z polysacharidu. Ako indexy hodnotenia sa použila miera odfarbenia a rýchlosť zotavenia polysacharidu. Konštrukčné parametre sú uvedené v tabuľke 1.

1.2.6 Stanovenie antioxidačnej aktivityPúšť cistanchePolysacharidy

(1) StanoveniePúšť cistancheRadikálne vychytávanie DPPH Radicals

Na základe metódy Kan Jintao et al. [21] s miernymi modifikáciami, 0. 5 ml 1. 0 mg/ml polysacharidový vodný roztok sa zmiešal s 2,4 ml 0. (1, {{1 0}} diphenyl -2- picrylhydrazín) a 1,1 ml destilovanej vody. Zmes sa nechala reagovať v tme pri 37 stupňoch počas 30 minút. Absorbancia reakčného roztoku sa merala pri 517 nm a rýchlosť vychytávania radikálov DPPH 1,0 mg/ml polysacharidov pred a po odfarbení sa vypočítala pomocou rovnice (3):

Miera vychytávania radikálov DPPH (%)

{{0}} [1- (a1 - A2) a 0] × 100%{{{}}} \ vľavo [{1 - \ frac {} {{{{{{°} {} {} {} {}} {} {} {} {} {} {} {} {} { 100 \%= [1 - A0 (a1 −a2)] × 100%

Kde:

A1A _1 A1 je absorbancia skúmavky na vzorku,

A2A _2 A2 je absorbancia, keď bezvodý etanol nahrádza roztok DPPH,

A {{0}} a _0 A0 je absorbancia, keď destilovaná voda nahrádza vzorku.

 

(2) Stanovenie celkovej redukčnej silyPúšť cistanchePolysacharidy

S odkazom na metódu Lu Xue et al. [22], 1. 0 mg/ml polysacharidy pred a po odfarbení boli pripravené. Pracovný roztok 5 ul a 180 μl FRAP (antioxidačný výkon redukujúceho na ión) sa pridali do platne 96-, dôkladne premiešané a nechali sa reagovať pri 37 stupňoch po dobu 5 minút. Absorbancia sa merala pri 593 nm a celkový redukčný výkon polysacharidov bol vyjadrený z hľadiska koncentrácie štandardného roztoku FESO4.

(3) Stanovenie schopnosti vychytávania hydroxylových radikálovPúšť cistanchePolysacharidy

Podľa metódy opísanej v literatúre [23] a pokynoch súpravy hydroxylových radikálových vychytávajúcich sa súpravy 1. Destilovaná voda sa použila na nahradenie peroxidu vodíka pre absorbanciu kontrolnej skupiny (Acontrola _ \ text {Control} acontrol) a na nahradenie vzorky pre absorbanciu skupiny (Ablanka {4}} {slepo}}} {slepá voda). Hodnoty absorbancie sa merali pri 550 nm a rýchlosť čistiaceho prostriedku hydroxylového radikálu sa vypočítala pomocou rovnice (4):

Miera čistiaceho prostriedku hydroxylového radikálu (%)

= [(Acontrol -asample) (acontrol -Ablank)] × 100%= \ vľavo [\ frac {(a {_ \ text {control} - a {}}}}} A _ \ text {blank})} \ right] \ krát 100 \%= [(Acontrol −ablank) (Acontrol −asample)] × 100%

Kde:

Asamplea _ \ text {vzor} asample je absorbancia skupiny vzoriek,

Acontrola _ \ text {control} acontrol je absorbancia kontrolnej skupiny,

Ablanka _ \ text {blank} Ablank je absorbancia slepej skupiny.

 

(4) Stanovenie schopnosti radikálneho vychytávania katiónov AbtsPúšť cistanchePolysacharidy

Podľa metódy opísanej v literatúre [24] a pokynov súpravy ABTS katiónového radikálneho vychytávania súpravy 1. Vzorka 10 ul sa zmiešala s 20 ul pracovného roztoku činidla štyri a 170 μl pracovného roztoku ABT, dôkladne premiešaná a nechá sa reagovať v tme pri teplote miestnosti počas 6 minút. Deionizovaná voda sa použila ako prázdna kontrola. Absorbancia sa merala pri 405 nm a rýchlosť vychytávania radikálov ABTS sa vypočítala pomocou rovnice (5):

ABTS Radikálna miera vychytávania radikálov (%)

= [(bblank - bblank) bblank] × 100%= \ vľavo [\ frac {(b {{_ \ text {blank} - b {{}}}}}}}}}}} {b {{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{6 100 \%= [bblank (bblank −bsample)] × 100%

Kde:

Bblankb _ \ text {blank} bblank je absorbancia reakcie medzi destilovanou vodou a roztokom ABTS,

BSampleB _ \ text {vzor} bsample je absorbancia reakcie medzi vzorkou a roztokom ABTS.

 

1.3 spracovanie údajov

Softvér SIGMAPLOT 12.5 sa použil na vykreslenie a na analýzu údajov sa použil softvér na dizajn 8. 0. 6.