Prekonanie imunitného deficitu pomocou Alloroomingu

Jednoduché zhrnutie:

Skúmali sme, či sa dva blízko príbuzné druhy termitov líšia v závislosti od sociálnej alebo individuálnej imunity proti dvom druhom patogénnych húb, ktoré boli všetky zozbierané z rovnakého miesta. Naše výsledky naznačujú, že vzájomná starostlivosť (allogrooming) je vysoko účinná pri obmedzovaní smrteľných infekcií do tej miery, že môže kompenzovať relatívne slabú individuálnu imunitnú obranu. Po stretnutí s patogénmi termity používajú alternatívnu stratégiu na sociálne dištancovanie a obmedzenie šírenia nákazlivých chorôb a namiesto toho sa spoja, aby sa navzájom očistili. Rozdiely v intenzite tejto behaviorálnej reakcie naznačujú nuansovanú reakciu na úroveň ohrozenia.

výhody doplnku cistanche-zvýšenie imunity

Abstrakt:

Allogrooming sa javí ako nevyhnutný u mnohých spoločenských zvierat na ochranu pred rutinným vystavením parazitom. U sociálneho hmyzu sa zdá, že je rozhodujúce odstrániť patogénne propagule z kutikuly skôr, ako môžu začať infekčný cyklus. V prípade podzemných termitov to zahŕňa spóry húb, ktoré sa bežne vyskytujú v pôde, ako napríklad Metarhizium conidia, ktoré môžu rýchlo vyklíčiť a preniknúť do kutikuly. Skúmali sme, či existuje rozdiel v spoliehaní sa na sociálnu a vrodenú imunitu u dvoch blízko príbuzných podzemných termitov na ochranu pred smrteľnými infekciami dvoma lokálne sa vyskytujúcimi druhmi Metarhizium. Naše výsledky naznačujú, že relatívne slabá vrodená imunita u jedného druhu termitov je kompenzovaná trvalejším agroomingom. To zahŕňa vylepšenú alogoming v reakcii na koncentrácie konídií, ktoré odrážajú rutinnejšiu kontamináciu kutikuly, ako aj na silnú kutikulárnu kontamináciu, ktorá vyvoláva sieťovú núdzovú reakciu.

Kľúčové slová:

sociálna imunita; vrodená imunita; entomopatogény; alarmové správanie; konečná stanica

cistanche tubulosa - zlepšenie imunitného systému

Kliknite sem pre zobrazenie produktov Cistanche Enhance Immunity

【Požiadať o viac】 E-mail:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

1. Úvod

Sociálne obranné mechanizmy môžu byť vysoko účinné v boji proti náchylnosti na nákazlivú chorobu napriek tomu, že sociabilita podporuje jej šírenie [1,2]. U termitov a mravcov sa zdá, že vývoj účinných sociálnych mechanizmov imunitnej obrany zmiernil selektívny tlak na jednotlivé vrodené imunitné mechanizmy [3–6]. Po stretnutí s patogénmi bude hrozba ochorenia u sociálneho hmyzu závisieť od účinnosti vrodenej prednej línie obrany, ktorá zahŕňa fyzické bariéry proti infekcii. Mnohé plesňové patogény produkujú nepohlavné spóry (konídie), ktoré môžu priamo preniknúť do kutikuly hmyzu. Sociálna imunitná obrana, ktorá pomáha chrániť kutikulu, vrátane alogomingu a vylučovaných antimykotík, sa javí ako obzvlášť dôležitá u termitov na obranu proti Metarhizium spp [7–9]. Konídie Metarhizium sú všadeprítomné v pôde, ktorou sa mnoho termitov pohybuje pri hľadaní potravy a dosahujú koncentrácie, ktoré predstavujú stálu hrozbu infekcie [10]. Termity, ktoré si hľadajú potravu, ako sú druhy rodu Reticulitermes, sa pohybujú v pôde, aby rozšírili rozsah svojich kolónií a získali prístup k viacerým miestam kŕmenia, ktorými sú zvyčajne zdroje dreva spočívajúce na povrchu pôdy [11]. Podzemné siete ich kolónií môžu presahovať desiatky metrov, obsahovať viac ako stotisíc jedincov a dosahovať hustoty viac ako sto kolónií na hektár [12]. Vyvinuli sa z predka s kolóniami obmedzenými na jeden kus dreva [13,14]. Tento prechod by mal za následok zvýšený počet stretnutí s predátormi, patogénmi a konkurentmi a zhodoval by sa s vývojom oddanej kasty skutočných robotníkov, ktorá sa zvyčajne zrieka priamej reprodukcie. Zlepšená hygiena bola pravdepodobne rozhodujúca pre tento prechod a následnú radiáciu a súčasný ekologický úspech termitov, ktorých príspevok k rozkladu dreva môže prevýšiť mikrobiálny rozklad [15,16] a ktorí sa zdajú byť pripravení rýchlo expandovať po celom svete so stúpajúcimi teplotami [17]. . Počas prechodu na hľadanie potravy sa uvoľnenie selektívneho tlaku na vrodené imunitné gény zhodovalo s jeho zosilnením na dva gény, ktoré produkujú secernované antifungálne proteíny [6]. Zdá sa, že tieto proteíny sú nevyhnutné na odstránenie konídií húb pomocou alogomingu. Kontrastný selektívny tlak na zložky individuálnych vrodených a sociálnych obranných mechanizmov v minulosti naznačuje, že naďalej existuje adaptívny kompromis v spoliehaní sa termitov na individuálnu vrodenú a sociálnu imunitu pri ochrane pred hubovými chorobami. Toto je podporené pozorovaním, že expresia vrodeného imunitného génu je v skupinách nižšia ako u jedincov pracovníkov Reticulitermes, ktorí boli vystavení konídiám Metarhizium [18]. Allorooming znižuje potrebu aktivácie vnútorného imunitného systému. V tejto štúdii sme skúmali rozdiely v sociálnej a vrodenej imunite u dvoch druhov podzemných termitov oproti dvom miestnym druhom Metarhizium, ktoré sa prirodzene stretávajú. Druhy Metarhizium boli izolované z pôdy pod alebo vedľa kmeňov, v ktorých boli zhromaždené termity. Dva druhy termitov, Reticulitermes virginicus a Reticulitermes flavipes, boli zozbierané z rovnakého miesta v Marylande. Hoci sa zdajú byť agonistické, často sa nachádzajú pri hľadaní potravy vedľa seba alebo dokonca príležitostne v rovnakom denníku. Interšpecifická agresia medzi pracovníkmi často vedie k smrteľným zraneniam v testoch agonizmu Petriho misky [19]. Antifungálna aktivita kutikulárnych výplachov robotníc R. virginicus sa už predtým ukázala ako účinnejšia pri inaktivácii konídií Metarhizium ako výplachy robotníc R. flavipes [20]. To naznačuje, že hoci sú tieto dva termity blízko príbuzné a stretávajú sa s rovnakými patogénmi, môžu sa líšiť v závislosti od individuálnej vrodenej alebo sociálnej imunity. Použili sme porovnávací prístup, aby sme zistili, či existuje rozdiel medzi spoliehaním sa na sociálnu a vrodenú imunitu a jej integráciou a či medzi nimi existuje potenciálny kompromis. Posilnená sociálna imunita môže byť spojená s menej účinnými vrodenými imunitnými mechanizmami, ktoré môžu zahŕňať potenciu vylučovaných antimykotík a naopak. Slabšia individuálna imunita môže byť kompenzovaná efektívnejšou sociálnou imunitou. Skúmalo sa prežitie termitích robotníc v neskorom instare v skupinách po dvanástich, pároch alebo jednotlivcoch potom, čo boli napadnutí hubami z Metarhizium robertsii alebo Metarhizium brunneum. Skupiny 12 pracovníkov boli krátkodobo vystavené vysokej dávke huby. Táto potenciálne smrteľná koncentrácia spôsobuje podobné behaviorálne reakcie, aké sa pozorujú, keď termity narazia na sporulujúce mŕtvoly, v niektorých prípadoch vyvolávajú podstatné zvýšenie poplachovej reakcie, ktorá vedie k rýchlym pozdĺžnym oscilačným pohybom, LOM [21–23]. Frekvencia LOM v prvých 12 minútach po vystavení termitov konídiám rôznych kmeňov a druhov Metarhizium pozitívne koreluje s frekvenciou záchvatov alogomingu. LOM, ktoré sa dajú ľahšie merať ako alogrooming, možno preto použiť ako nepriamu mieru alogomingových úrovní. Zdá sa, že detekcia huby je oneskorená, kým nie sú povrchy termitov kontaminované konídiami, čo naznačuje, že rozpoznávacie receptory spojené s ústnymi časťami sú rozhodujúce pre nástup zvýšeného poplachu a alogroomingu. Páry a jednotlivci boli vystavení nízkej dávke huby, ktorá s väčšou pravdepodobnosťou odráža úrovne expozície, s ktorou sa termity stretávajú, keď stavajú galérie cez pôdu, na rozdiel od priamych stretnutí so sporulujúcimi mŕtvolami. Na rozdiel od jednotlivých termitov sú páry termitov pri tejto dávke počas 10 dní takmer úplne odolné voči smrteľným infekciám. Aby sa oddelila sociálna a vrodená imunita pri tejto nízkej dávke, páry termitov sa oddelili v rôznych časových bodoch krátko po napadnutí hubovými konídiami a prežitie týchto párov sa porovnalo s jednotlivcami, ktorí nemali žiadne príležitosti na sociálne interakcie po napadnutí hubami. Allogrooming a LOM boli pozorované pred časovými bodmi separácie párov termitov. Okrem toho sa testovala antifungálna aktivita surových extraktov celých termitov, aby sa ďalej vyhodnotili rozdiely vo vrodenej imunite medzi dvoma druhmi termitov v reakcii na dva druhy húb.

Výhody cistanche tubulosa-posilnenie imunitného systému

2. Metódy

2.1. Študovať organizmy

Termity R. flavipes a R. virginicus a huby M. brunneum a M. Roberts boli zozbierané zo sekundárneho porastu listnatých lesov v okrese Baltimore (Pleasant Hills a Monkton), Maryland. Druhy termitov boli identifikované pomocou intra- a interšpecifických testov agonizmu [19] a mitochondriálnych rRNA sekvencií [4]. Druhy Metarhizium boli izolované zo vzoriek pôdy v blízkosti miest zberu termitov (<30 cm) using a baiting technique with Tenebrio molitor larvae [24]. The conidia and mycelia of two clonal lines of the species were used for DNA purification with a QIAGEN DNeasy Blood and Tissue kit. The 50 regions of translation elongation factor 1-alpha were PCR-amplified using PCR primers EF1T and EF2T [25]. These regions were Sanger-sequenced (Psomagen, Rockville, MD) for species identification. Foraging groups of R. flavipes and R. virginicus (>1000) a drevo, ktorým sa kŕmili, sa zbierali a skladovali v plastových nádobách v tmavých, vlhkých podmienkach pri 25 ◦C. Termity patriace k rovnakému druhu boli zozbierané z lokalít, ktoré boli od seba vzdialené najmenej 60 m, čo zvyčajne postačuje na zabezpečenie toho, že zbierky pochádzajú z rôznych kolónií [12]. Tieto oddelené zbierky sa ďalej označujú ako kolónie. Termity boli odobraté v lete 2018 a 2019 pre experimenty s 12 skupinami, ako aj in vitro experimenty so surovými extraktmi termitov a v rokoch 2021 a 2022 pre experimenty s pármi a jednotlivcami. Termity boli použité v príslušných experimentoch do 4 mesiacov od odberu. Pracovníci boli jemne odstraňovaní z drevených kúskov a udržiavaní v skupinách Petriho misiek s priemerom 12 55 mm vystlaných navlhčeným filtračným papierom (Whatman 1) počas 24 hodín pri okolitom svetle pred použitím na naše experimenty. To im umožnilo aklimatizovať sa na svetlo a vyčistiť ich kutikulárne povrchy od čiastočiek pred vystavením hubám. Nezahrnuli sme vojakov, pretože neupravujú hniezdnych kamarátov, predstavujú 1–2 % kolónie a nevyskytujú sa trvalo v skupinách hľadajúcich potravu.

2.2. Prežitie a poplachová reakcia pre skupiny dvanástich

Skupiny 12 pracovníkov R. flavipes alebo R. virginicus boli vystavené vysokej dávke 10 6 konídií ml-1 0.05 % Tween 80 (MilliporeSigma , Burlington, MA, USA) alebo 0,05 % Tween 80 pre kontroly. Tween 80 bol zahrnutý, aby pomohol rozbiť zhluky konídií pri príprave suspenzií. Deň pred týmito ošetreniami bolo všetkých 12 termitov označených malou bodkou farebnej smaltovanej farby na dorzálnej strane ich brucha, aby ich bolo možné individuálne identifikovať. Allogrooming odstránil farbu z niekoľkých jedincov, ale tieto jedince bolo možné stále individuálne identifikovať v čase smrti prieskumom osôb, ktoré prežili, a prirodzenými individuálnymi variáciami pracovníkov, ako je stupeň tmavého sfarbenia brucha. Termity použité pre každý replikát 12 napadnutých termitov a kontroly boli z rôznych kolónií. Pre R. flavipes aj R. virginicus sa použilo päť kolónií (n=480 robotníkov). Experimenty s kolóniami M. Roberts sa opakovali po troch mesiacoch, aby sa otestovala konzistentnosť v prežívaní. Celkovo bolo 60 replikátov 12 alebo 11 termitov (n=709). V 11 replikátoch termit uhynul pred vystavením plesniam, čo sa zdalo byť spôsobené manipuláciou pri označovaní farbou. Termity boli vystavené konídiám pripraveným z klonálnej kultúry buď M. Roberts alebo M. brunneum. Pracovníci sa pridali do 1,5 ml skúmaviek obsahujúcich 500 ul zriedených konídií alebo 0,05 % Tween 80 pre kontroly s malým plastovým lievikom a jemne sa miešali počas 10 s, aby sa zabezpečilo úplné ponorenie. Pracovníci sa potom uložili na filtračný papier, aby absorbovali prebytočnú tekutinu, preniesli sa na Petriho misky s priemerom 55 mm vystlané navlhčeným filtračným papierom (Whatman 1) a video sa zaznamenávalo 12 minút. Úmrtnosť sa monitorovala denne počas dvoch týždňov. Mŕtve jedince boli odstránené, povrchovo sterilizované 70% etanolom a umiestnené na vlhký filtračný papier v Petriho miskách (55 mm) udržiavaných pri 24 ◦C a 100% vlhkosti na potvrdenie infekcie Metarhizium (rast zeleného muscardínu po 3–4 dňoch). Celkový počet LOM pozorovaných vo videách počas 12 minút bol hodnotený pre každého termita. LOM trvali medzi 2–7 s a museli sa zastaviť a potom pokračovať, aby boli hodnotené ako samostatné udalosti [23].

2.3. Prežitie a alokácia pre páry a jednotlivcov

Prežitie párov termitov sa porovnávalo s jednotlivcami po vystavení nízkej dávke (104 konídií ml-1 ) konídií, ktorá nespôsobila nadmernú mortalitu a pravdepodobne odrážala koncentrácie, s ktorými sa termity stretávajú pri pohybe pôdou [10]. . Páry a jednotlivci sa porovnávali na meranie prežitia poskytovaného sociálnymi obrannými mechanizmami. Skupiny 12 pracovníkov boli spočiatku napadnuté hubami alebo bez nich, ako je opísané vyššie, okrem toho, že suspenzie konídií s približne 107 konídiami ml-1 sa pripravili v 0, 1% Tween 80 a pred zriedením sterilnou vodou na 104 konídií ml-1 sa dôkladne premiešali. Tween 80 nebol zahrnutý do riedení, pretože suspenzie jednotlivých konídií mohli byť udržiavané v nízkych koncentráciách a pretože povrchovo aktívna látka môže interferovať s adhéziou konídií ku kutikule. Tieto jedince neboli označené farbou. Ihneď po ošetrení a predtým, ako mali termity možnosť vzájomnej interakcie, boli rozdelené do párov alebo samostatných jedincov v jamkách 24-jamkových plastových doštičiek na kultiváciu buniek (CELLTREAT Scientific, Pepperell, MA). Každá jamka bola vyložená navlhčeným filtračným papierom (Whatman 1). Pre každú kombináciu termit/huba (n=4) sa štyri páry termitov rozdelili do jednotlivých párov po 15 minútach, 2 hodinách, 5,5 hodinách, 8 hodinách a 27 hodinách (n=160) a pre každú kombinácia termit/huba 12 termitov, ktoré nikdy nemali možnosť vzájomnej interakcie, sa rozdelilo do jedincov ošetrených hubami alebo kontrolných jedincov (n=96). Tieto jednotlivé termity boli tiež rozdelené do 24-jamkových doštičiek vystlaných filtračným papierom. Úmrtnosť termitov sa následne monitorovala počas desiatich dní a mŕtve jedince sa odstránili na potvrdenie infekcie Metarhizium. Jedna kolónia bola použitá pre obe R. flavipes ošetrené M. robertsii alebo M. brunneum a R. virginicus ošetrené M. robertsii alebo M. brunneum (n=256). Šesť neošetrených párov bolo tiež udržiavaných v 24-jamkových platniach počas 10 dní pre každý druh. Samostatný experiment s rovnakými kolóniami sa zameral na zaznamenávanie agroroomingu pred separačnými časmi párov po 15 minútach, 2 hodinách, 5,5 hodinách, 8 hodinách a 27 hodinách. Šesť rôznych párov každého druhu termitov sa ošetrilo každou hubou alebo vodou ako kontrola a 15 minút pred časovými bodmi oddelenia (n=180) bolo hodnotené rozdelením. Udalosti spojené s alogroomingom sa hodnotili, keď kontakt z úst na telo medzi dvoma termitmi zahŕňal pohyb ústnych častí (palpov), a zaznamenávalo sa trvanie každého neprerušeného udalosti prideľovania. Allogrooming bol hodnotený jediným pozorovateľom, ktorý bol slepý voči liečbe termitov. LOM boli tiež skórované, ale boli zanedbateľné a neboli použité v analýze. Vlastná starostlivosť nebola pozorovaná.

Výhody cistanche tubulosa-posilnenie imunitného systému

2.4. Antifungálna aktivita in vitro

Dvanásť robotníkov z 5 kolónií R. flavipes alebo R. virginicus sa imobilizovalo za studena v 1,5 ml skúmavkách Eppendorf a do každej skúmavky sa pridalo 12 0 ul studenej sterilnej vody. Robotnice z oboch druhov použité v tejto štúdii boli približne rovnako veľké (dĺžka 4–5 mm). Termity boli homogenizované plastovým tĺčikom a extrakt bol centrifugovaný pri 16,000 g počas 2 minút. Supernatant bol filtračne sterilizovaný pomocou 0,22 um Ultrafree filtrov (MilliporeSigma, Burlington, MA, USA). Desať ul filtrátu sa inkubovalo 24 hodín s desiatimi ul obsahujúcimi 100 konídií M. robertsii alebo M. brunneum a 20 ul 100 ug ml-1 ampicilínu, aby sa ďalej zabránilo bakteriálnej kontaminácii. Kontroly obsahovali 10 ul sterilnej vody namiesto surového extraktu. Dve replikáty pre každú inkubovanú zmes sa naniesli na zemiakový dextrózový agar (PDA) doplnený 50 ug ml-1 ampicilínu (60 mm Petriho misky) a inkubovali sa pri teplote miestnosti v tme počas 4–5 dní. Antifungálna aktivita sa merala porovnaním jednotiek tvoriacich kolónie (CFU) pri ošetrení surovým extraktom s kontrolami.

2.5. Štatistiky

Kaplan-Meierove odhady priemerných časov prežitia sa použili na párové porovnanie prežitia. Rizikové pomery úmrtia (HRs) boli vypočítané pomocou Coxovej regresnej analýzy. Použili sme Coxovu regresiu na skúmanie rozdielov v úmrtnosti medzi jednotlivcami vykazujúcimi LOM alebo nevykazujúcimi LOM pri kontrole iných kategorických premenných (plesňové ošetrenie alebo kontrola, druhy húb, druhy termitov, kolónia pôvodu). LOM boli kategorizované ako neprítomné alebo prítomné u jednotlivcov z dôvodu frekvencie odľahlých hodnôt a nedostatku normality. Pri analýze prežitia s pármi termitov a jednotlivcami bola HR založená na porovnaní medzi pármi ošetrenými konídiami (oddelenými v rôznych časových bodoch) a jednotlivcami ošetrenými konídiami. Tieto HR teda poskytujú mieru prežitia, ktorú poskytujú sociálne mechanizmy obrany, pričom kontrolujú jednotlivé mechanizmy obrany. Vzťah medzi časom stráveným ako pár a zmenou HR sa meral pomocou Pearsonových korelácií. Distribúcia LOM medzi rôzne liečby sa porovnala s Kruskal-Wallisovým testom s Bonferroniho korekciami pre viacnásobné testovanie pre párové porovnania. Priemerná CFU alebo trvanie udalostí alogomingu sa porovnávali s testom ANOVA s Bonferroniho korekciami pre párové porovnania. Na štatistické testy sme použili IBM SPSS Statistics (verzia 28).

3. Výsledky

3.1. Prežitie a alarm napadnutých skupín dvanástich

The Cox regression model of survivorship that included categorical variables for fungal treatment, LOMs, termite species, fungi species, and a colony of origin was significant (Chi-square = 246.29, df = 12, p < 0.001). Challenged termites were 9.28 times more likely to die than untreated termites (Wald = 143.05, p < 0.001) while controlling for the other variables. Termites that displayed LOMs (n = 422) were 1.52 times more likely to survive (Wald = 8.30, p = 0.004) than individuals that did not display LOMs (n = 286). R. virginicus workers were 2.08 times more likely to die than R. flavipes workers (Wald = 6.31, p = 0.012). Fungal species did not contribute significantly to the model (Wald = 0.841, p = 0.359). The colony of origin contributed significantly to the model (Wald = 50.16, p < 0.001), which is consistent with previously reported colony variation in Reticulitermes resistance to Metarhizium infections [24]. Survivorship did not differ between the same colony when the experiment was repeated 3 months later with workers that were exposed to M. Roberts (Breslow pairwise comparison, Chi-square = 0.342, p = 0.559). Most deaths in the challenged termites were attributable to Metarhizium infection (>90% potvrdenie). V prípade napadnutých termitov s M. Roberts bolo pozorovaných 129 úmrtí u 237 jedincov a priemerný čas prežitia pre R. virginicus (9,10 dní) bol výrazne nižší ako pre R. flavipes (10). 98 dní)(Breslow=10.05, df=1, p=0.002) (obrázok 1). U termitov napadnutých M. brunneum bolo pozorovaných 79 úmrtí medzi 120 jedincami a priemerný čas prežitia pre R. flavipes (9,70 dňa) bol nižší ako pre R. virginicus (10,68 dňa), ale nie významne (Breslow=2 0,74, df=1, p=0,098). Distribúcia LOM (obrázok 2) medzi hubovými a kontrolnými ošetreniami bola významne odlišná (Kruskal–Wallis=176,897, df=5, p < 0,001). Frekvencia LOM sa významne nelíšila medzi ošetreniami M. brunneum a ich príslušnými kontrolami pre R. flavipes (upravené p=0,097) a R. virginicus (upravené p=1.000 ). Frekvencia LOM však bola významne vyššia pri liečbe M. Robertsom v porovnaní s ich príslušnými kontrolami pre R. flavipes (upravené p < 0,001) a R. virginicus (upravené p < 0,001) (obrázok 2). Pri liečbe M. Robertsom bola frekvencia LOM R. flavipes významne vyššia ako LOM R. virginicus (upravené p < 0,001). V prípade liečby M. brunneum sa však frekvencia LOM R. flavipes významne nelíšila od LOM R. virginicus (upravené p=1.000). Na rozdiel od M. brunneum skupiny 12 termitov napadnutých konídiami M. Roberts viedli k významnej behaviorálnej reakcii.

3.2. Prežitie napadnutých párov a singletonov

Prežitie párov termitov oddelených v rôznych časoch krátko po expozícii patogénom sa porovnalo s prežitím napadnutých jedincov s rizikovými pomermi smrti (HRs). HR 1 zodpovedá rovnakému prežívaniu v oddelených pároch a jednotlivcoch počas desiatich dní. Hodnoty menšie ako jedna naznačujú, že v oddelených pároch je v porovnaní s jednotlivcami znížená úmrtnosť. Korelácia medzi časom stráveným v páre a znížením HR bola významná len pre R. flavipes liečené buď M. Roberts (r=−0,978, p=0). {7}}04) alebo M. brunneum (r=−0.983, p=0.003), a nie pre R. virginicus liečený M. Roberts (r=−0,643, p=0,242) alebo M. brunneum (r=−0,812, p=0,095). To sa odráža aj v hodnotách R2 z lineárnych regresií znázornených na obrázku 3 (čas bol logaritmicky transformovaný na výpočet Pearsonových korelácií a hodnôt R2). Nebolo pozorované žiadne úmrtie u neošetrených párov (6 párov pre každý druh termitov) a jedno úmrtie u 16 ošetrených párov (4 páry pre každú kombináciu termit/huba), ktoré neboli nikdy oddelené počas 10 dní.

Obrázok 1. Prežitie pre skupiny 12. Rf zodpovedá R. flavipes, Rv R. virginicus, Mr M. robertsii a Mb M. brunneum. Významné rozdiely v prežívaní pre párové porovnania boli založené na Breslowových testoch (všeobecné Wilcoxonove testy). * Významný rozdiel medzi ošetreniami, NS žiadny významný rozdiel medzi ošetreniami (s< 0.025 Bonferroni adjusted α). The distribution of LOMs (Figure 2) among fungal and control treatments was significantly different (Kruskal–Wallis = 176.897, df = 5, p < 0.001). The frequency of LOMs was not significantly different between M. brunneum treatments and their respective controls for R. flavipes (adjusted p = 0.097) and R. virginicus (adjusted p = 1.000). However, the frequency of LOMs was significantly greater for M. robertsii treatments compared to their respective controls for R. flavipes (adjusted p < 0.001) and R. virginicus (adjusted p < 0.001) (Figure 2). For the M. robertsii treatment, the frequency of R. flavipes LOMs was significantly greater than R. virginicus LOMs (adjusted p < 0.001). However, for the M. brunneum treatment, the frequency of R. flavipes LOMs was not significantly different from R. virginicus LOMs (adjusted p = 1.000). In contrast to M. brunneum, groups of 12 termites challenged with M. robertsii conidia resulted in a significant behavioral response. 

Obrázok 1. Prežitie pre skupiny 12. Rf zodpovedá R. flavipes, Rv R. virginicus, Mr M. robertsii a Mb M. brunneum. Významné rozdiely v prežívaní pre párové porovnania boli založené na Breslowových testoch (všeobecné Wilcoxonove testy). * Významný rozdiel medzi ošetreniami, NS žiadny významný rozdiel medzi ošetreniami (s< 0.025 Bonferroni adjusted α). For the survivorship of pathogen-challenged single termites (Figure 4), 47 deaths were observed among 48 individuals, and the mean survival time for R. flavipes (4.21 days) was significantly lower than for R. virginicus (6.17 days)(Breslow, chi-square = 33.927, df = 1, p < 0.001). This relationship held for both species of fungi: For M. robertsii exposure, the mean survival time for R. flavipes (4.25 days) was significantly lower than for R. virginicus (5.83 days) (chi-square = 16.133, df = 1, p < 0.001); For M. brunneum exposure, the mean survival time for R. flavipes (4.17 days) was significantly lower than for R. virginicus (6.50 days) (chi-square = 20.994, df = 1, p < 0.001). 3.3. Antifungal Activity of Crude Extracts The two species of fungi were analyzed separately (the viability of conidia on PDA differs between the two species). For M. robertsii, mean colony-forming units (CFUs) among fungal and control treatments were significantly different (F = 18.08, df = 2, p < 0.001) (Figure 5a). Crude extracts of R. virginicus but not R. flavipes workers showed significant antifungal activity against M. robertsii compared to the control (adjusted p < 0.001 and p = 1.000, respectively). The antifungal activity of R. virginicus extracts against M. robertsii was significantly greater than the antifungal activity of R. flavipes extracts against M. robertsii (adjusted p < 0.001). For M. brunneum, mean CFUs (Figure 5b) among fungal and control treatments were significantly different (F = 27.26, df = 2, p < 0.001). Crude extracts of R. virginicus but not R. flavipes showed significant antifungal activity against M. brunneum compared to the control (adjusted p < 0.001 and p = 0.072, respectively). The antifungal activity of R. virginicus extracts against M. brunneum was significantly greater than the antifungal activity of R. flavipes against M. brunneum (adjusted p < 0.001).

3.3. Antifungálna aktivita surových extraktov

Dva druhy húb sa analyzovali oddelene (životaschopnosť konídií na PDA sa medzi týmito dvoma druhmi líši). Pre M. robertsii sa priemerné jednotky tvoriace kolónie (CFU) medzi hubovými a kontrolnými ošetreniami výrazne líšili (F=18.08, df=2, p < 0 .001) (Obrázok 5a). Surové extrakty z R. virginicus, ale nie z robotníc R. flavipes, vykazovali významnú antifungálnu aktivitu proti M. robertsii v porovnaní s kontrolou (upravené p < 0.001 a p=1.{{{{101} 10}}). Antifungálna aktivita extraktov R. virginicus proti M. robertsii bola významne vyššia ako antifungálna aktivita extraktov R. flavipes proti M. robertsii (upravené p < 0,001). Pre M. brunneum boli priemerné CFU (obrázok 5b) medzi hubovou a kontrolnou liečbou významne odlišné (F=27,26, df=2, p < 0,001). Surové extrakty R. virginicus, ale nie R. flavipes, vykazovali významnú antifungálnu aktivitu proti M. brunneum v porovnaní s kontrolou (upravené p < 0,001 a p=0,072, v tomto poradí). Antifungálna aktivita extraktov R. virginicus proti M. brunneum bola významne vyššia ako antifungálna aktivita R. flavipes proti M. brunneum (upravené p < 0,001).

Obrázok 2. Alarmová reakcia na napadnutie plesňou. Boxplots predstavujú distribúciu LOM (LOM skórovali u 709 jedincov označených farbou). Škatuľky zodpovedajú vzdialenosti medzi horným a dolným kvartilom od mediánu (IQR). Fúzy zodpovedajú 1,5 × IQR. Kruhy a hviezdičky zobrazujú odľahlé hodnoty nad 1,5 × IQR alebo 3 × IQR. Rôzne písmená označujú významné rozdiely medzi distribúciou pre hubové a kontrolné ošetrenia (upravené Bonferroni). Rf zodpovedá R. flavipes, Rv R. virginicus, Mr M. robertsii a Mb M. brunneum.

3.4. Allogrooming medzi vyzvanými pármi

Frekvencia záchvatov alogomingu sa výrazne znížila s hubovými výzvami (priemer výzvy {{0}},55, priemer kontroly=8,80, t=−4,461, p < {{20}}.001). Priemerné trvanie alogroomingu sa však významne zvýšilo s hubovými infekciami (priemer výzvy=19,01 s, priemer kontroly=5,62 s, t=4,876, p < 0,001). Trvanie záchvatov alogomingu pre každú interakciu medzi pármi termitov sa významne líšilo medzi ošetreniami a kontrolami (F=7,166, df=5, p < 0,001) (obrázok 6). Trvanie alogomingu na udalosť bolo významne zvýšené u párov R. flavipes liečených M. robertsii (upravené p < 0,001) alebo M. brunneum (upravené p=0 0,037) v porovnaní s kontrolami, ale nie u liečených párov R. virginicus s M. robertsii (upravené p=1.000) alebo M. brunneum (upravené p=1.000) vzhľadom na kontroly.

Obrázok 3. Prežitie dvoch termitov oproti jednému sa porovnalo s mierou rizika smrti (n=80 párov, 96 jedincov). Rf zodpovedá R. flavipes, Rv R. virginicus, Mr M. robertsii a Mb M. brunneum. Čas sa log transformoval na výpočet hodnôt R2.

Obrázok 4. Prežitie jednotlivých termitov po napadnutí hubou (n=96). Rf zodpovedá R. flavipes, Rv R. virginicus, Mr M. robertsii a Mb M. brunneum. Podrobnosti o štatistických rozdieloch medzi liečbami nájdete v texte. Významné rozdiely v prežívaní pre párové porovnania boli založené na Breslowových testoch (všeobecné Wilcoxonove testy). * Významný rozdiel medzi ošetreniami (p < 0,025 Bonferroniho upravené ).

Obrázok 5. Antifungálna aktivita surového extraktu proti M. robertsii (a) a M. brunneum (b). Hodnoty nad stĺpcami predstavujú priemerné CFU (± SD) a rôzne písmená označujú významné rozdiely (upravené Bonferroni). Rf zodpovedá R. flavipes a Rv R. virginicus. Analýza použila dva replikáty z 5 kolónií z každého druhu termitov, 6 replikátov pre kontrolu Rf a 2 replikáty pre kontrolu Rv.

Obrázok 6. Trvanie prideľovania na interakciu (n=161 udalostí prideľovania). Hodnoty nad stĺpcami predstavujú priemerné trvanie alogroomingových interakcií (±SD) a odlišné kombinácie písmen označujú významné rozdiely (upravené Bonferroni). Rf zodpovedá R. flavipes, Rv R. virginicus, Mr M. robertsii a Mb M. brunneum.

4. Diskusia

R. flavipes sa vo väčšej miere ako R. virginicus spolieha na sociálne mechanizmy obrany proti miestnym hubovým patogénom. U robotníkov R. flavipes vystavených ktorýmkoľvek druhom Metarhizium existovala silná negatívna korelácia medzi časom stráveným spolu dvoma termitmi a pravdepodobnosťou ich úmrtia v porovnaní s napadnutými jednotlivými termitmi. Pomer rizika úmrtia v porovnaní s napadnutými jednotlivými termitmi sa znížil na polovicu za približne dve hodiny (obrázok 3). Skoré sociálne interakcie sa preto zdajú byť rozhodujúce pre prežitie, keď pracovníci R. flavipes narazia na nízke koncentrácie konídií Metarhizium. Naproti tomu robotnice R. virginicus vykazovali slabú koreláciu medzi časom stráveným spolu dvoma termitmi a pravdepodobnosťou ich úmrtia. Na rozdiel od R. virginicus, robotnícke páry R. flavipes tiež významne predĺžili trvanie záchvatov alogomingu po napadnutí hubou (obrázok 6). K tomuto nárastu pravdepodobne viedla detekcia konídií na kutikule hniezdneho partnera. Zdá sa, že účinnejšie odstránenie konídií z kutikulárnych povrchov predĺžením trvania záchvatov alogomingu je zodpovedné za lepšiu sociálnu imunitu R. flavipes. Naše výsledky tiež naznačujú, že R. virginicus sa vo väčšej miere ako R. flavipes spolieha na jednotlivé vrodené mechanizmy obrany proti lokálnym hubovým patogénom. Úmrtnosť jednotlivých robotníc R. flavipes vystavených ktorýmkoľvek druhom Metarhizium bola významne vyššia ako úmrtnosť robotníc R. virginicus (obrázok 4). Antifungálna aktivita kutikulárnych výplachov robotnice R. virginicus proti konídiám Metarhizium sa už predtým ukázala ako výrazne silnejšia ako aktivita robotníc R. flavipes [20]. Antifungálna aktivita surových extraktov celých termitov bola tiež silnejšia v R. virginicus ako v R. flavipes (obrázok 5). Tieto extrakty zahŕňajú zlúčeniny z črevných symbiontov, ktoré spolu s termitími antifungálnymi zlúčeninami môžu tiež prispieť k eliminácii požitých konídií [26]. Rozdiely v rizikových pomeroch úmrtia a ich slabá korelácia s časmi odlúčenia u pracovníkov R. virginicus sú v súlade s väčšou závislosťou od mechanizmov vrodenej imunitnej obrany, ktoré sa medzi jednotlivcami líšia, a nie mechanizmov sociálnej imunity. R. flavipes tiež preukázal väčšiu závislosť od sociálnej imunity, keď boli skupiny 12 pracovníkov krátkodobo vystavené vysokým koncentráciám konídií M. robertsii. Bezprostredne po expozícii konídiám M. robertsii oba druhy termitov vykazovali zvýšené LOM. Táto poplachová aktivita bola významne vyššia u R. flavipes ako u R. virginicus (obrázok 2) a odolnosť voči smrteľným infekciám bola tiež významne vyššia u R. flavipes ako u R. virginicus (obrázok 1). Naproti tomu bola zvýšená, ale slabá poplachová odpoveď na konídie M. brunneum. V súlade s týmto výsledkom sa už predtým ukázalo, že zvýšený alarm u R. flavipes v reakcii na konídiá rôznych kmeňov a druhov Metarhizium koreluje so zvýšeným alogomingom a prežitím [23]. Pracovníci R. flavipes môžu mať nižší prah ako pracovníci R. virginicus, pokiaľ ide o rozpoznanie kutikulárnej kontaminácie konídiami M. robertsii a kolektívnu a účinnú reakciu na ňu. M. robertsii, ktorý je najrozšírenejším druhom Metarhizium na našom pracovisku [24], môže predstavovať hrozbu pre R. flavipes, ktorá si vyžaduje silnú sociálnu imunitnú odpoveď, pretože tento termit má proti nemu relatívne slabú vrodenú imunitnú obranu. Účinnosť antifungálnych zlúčenín spojených so sekréciou slinných žliaz je pravdepodobne podstatná pre individuálnu obranyschopnosť pozorovanú v tejto štúdii [20]. Tieto zlúčeniny sú prítomné na povrchu pracovníkov pred napadnutím hubami, pretože sú exprimované konštitutívne a sú neustále šírené bazálnymi úrovňami alogomingu, ktorý preto integruje individuálnu a sociálnu obranu. Tento gestalt pravdepodobne zahŕňa malý antifungálny peptid termicín podobný defenzínu, ktorý sa vylučuje do slinnej žľazy a je kriticky dôležitý pre obranu proti fatálnym infekciám spôsobeným Metarhíziom [27]. Štúdia R. flavipes a R. virginicus z rovnakého zberného miesta v Marylande použitá v tejto štúdii odhalila, že termicíny nedávno čelili selektívnemu prepadu, ktorý viedol k zníženiu nukleotidového polymorfizmu, a toto zníženie bolo väčšie u R. flavipes ako u R. virginicus [28].

cistanche tubulosa - zlepšenie imunitného systému

Zásah mohol byť a možno aj naďalej bude závažnejší pre R. flavipes, pretože R. virginicus má účinnejšie vrodené imunitné mechanizmy, ktoré znížili jeho závislosť na termicínoch pri obrane proti nedávnej plesňovej epidémii. Alternatívne, adaptívne obmedzenia evolúcie termitov (nedostatok genetických variácií) mohli nechať R. flavipes so slabšími zbraňami tvárou v tvár novej plesňovej epidémii. Obmedzenie adaptívnej zmeny v termicínoch pod silným selektívnym tlakom je evidentné aj u austrálskeho Nasutitermesa [29]. Zdá sa, že stochastický proces duplikácie génov uvoľnil toto obmedzenie v rôznych nasute líniách, čo viedlo k opakovanému vývoju dvoch termicínov s rôznymi molekulárnymi nábojmi. To mohlo mať prospech proti antifungálnej obrane, pretože dva terminály s rôznymi vlastnosťami náboja obmedzujú príležitosti na vývoj rezistencie húb voči nim. Termity vykazujúce alarm (LOM) po vystavení vysokej dávke konídií mali menšiu pravdepodobnosť úmrtia počas dvoch týždňov ako jedinci, ktorí nevykazovali žiadny alarm. LOM pozitívne korelujú s agregáciou robotníkov R. flavipes a prideľovaním alokácie [23], čo naznačuje, že jedinci, ktorí v tejto štúdii vykazovali poplach, si vyžiadali viac starostlivosti od hniezdičov. LOM sú zriedkavo hlásené vo výskume skúmajúcom infekcie Metarhizium u termitov a boli vylúčené z toho, že zohrávajú úlohu pri signalizácii expozície patogénom [30]. Môžu však chýbať, pretože sa nevyskytujú u izolovaných jedincov, nie sú v podstate vyvolané určitými kmeňmi a druhmi Metarhizium, trvajú približne 3 minúty po stimulácii, kým eskalujú, a ustupujú približne po 30 minútach [22,23]. Naše výsledky naznačujú, že LOM oznamujú núdzové upozornenie po vystavení vysokej dávke konídií, ktoré sa detegujú pri alogroomingu. LOM však nie sú potrebné na proaktívnu behaviorálnu reakciu, pretože trvanie alogomingu sa zvýšilo po expozícii nízkej dávke, keď boli LOM zanedbateľné.

5. Závery

Zdá sa, že LOM sú súčasťou núdzovej reakcie na silnú kutikulárnu kontamináciu, ktorá využíva sieťovú komunikáciu na rýchlu eskaláciu odstránenia a zničenia väčšiny konídií predtým, ako majú šancu pevne sa uchytiť a vyklíčiť, čo trvá približne 12 hodín [31]. Táto núdzová reakcia bude pravdepodobne energeticky nákladná. Zvýšená sociálna imunita u R. flavipes v reakcii na M. robertsii môže byť adaptívnym kompromisom, ktorý R. virginicus nemusí robiť v rovnakej miere, pretože má účinnejšie vrodené imunitné mechanizmy. Zdá sa, že alogrooming kompenzuje slabé vrodené imunitné mechanizmy, keď čelíme nízkym úrovniam vystavenia patogénom, ktorým musia pracovníci zháňajúci potravu bežne odolávať.

Referencie

1. Cremer, S.; Ťahať, CD; Fuerst, MA Sociálna imunita: Vznik a vývoj ochrany pred chorobami na úrovni kolónií. Annu. Entomol. 2018, 63, 105–123. [CrossRef] [PubMed] 2. Cremer, S.; Armitage, SA; Schmid-Hempel, P. Sociálna imunita. Curr. Biol. 2007, 17, R693 – R702. [CrossRef] [PubMed]

3. Evans, JD; Aronstein, K.; Chen, YP; Hetru, C.; Imler, JL; Jiang, H.; Kanost, M.; Thompson, GJ; Zou, Z.; Hultmark, D. Imunitné dráhy a obranné mechanizmy u včiel medonosných Apis mellifera. Insect Mol. Biol. 2006, 15, 645–656. [CrossRef] [PubMed]

4. Harpur, BA; Zayed, A. Zrýchlený vývoj proteínov vrodenej imunity u sociálneho hmyzu: Adaptívny vývoj alebo uvoľnené obmedzenie? Mol. Biol. Evol. 2013, 30, 1665–1674. [CrossRef] [PubMed]

5. On, S.; Sieksmeyer, T.; Che, Y.; Mora, MAE; Štíblík, P.; Banasiak, R.; Harrison, MC; Šobotník, J.; Wang, Z.; Johnston, PR; a kol. Dôkazy o zníženej diverzite a aktivite imunitných génov počas evolúcie termitov. Proc. R. Soc. Ser. B 2021, 288, 20203168. [CrossRef]

6. Bulmer, MS; Stefano, AM Eusociálnosť termitov a kontrastný selektívny tlak na sociálnu a vrodenú imunitu. Správaj sa. Ecol. Sociobiol. 2022, 76, 1–12. [CrossRef]

7. Yanagawa, A.; Shimizu, S. Odolnosť termitov, Coptotermes formosanus Shiraki voči Metarhizium anisopliae v dôsledku starostlivosti. BioControl 2007, 52, 75–85. [CrossRef]

8. Rosengaus, RB; Traniello, JF; Bulmer, MS Ekológia, správanie a vývoj odolnosti termitov voči chorobám. In Biológia termitov: Moderná syntéza; Bignell, DE, Roisin, Y., Lo, N., Eds.; Springer: Londýn, Spojené kráľovstvo, 2011; s. 165–192.

9. Žukovskaja, M.; Yanagawa, A.; Forschler, BT Groomingové správanie ako mechanizmus obrany proti hmyzu. Hmyz 2013, 4, 609–630. [CrossRef]

10. Milner, RJ Selekcia a charakterizácia kmeňov Metarhizium anisopliae na kontrolu pôdneho hmyzu v Austrálii. In Biologická kontrola kobyliek a kobyliek; Lomer, CJ, Prior, C., Eds.; CAB International: Wallingford, Spojené kráľovstvo, 1991; s. 200–207.

11. Traniello, JF; Leuthold, RH Správanie a ekológia hľadania potravy u termitov. In Termity: evolúcia, socialita, symbiózy, ekológia; Abe, T., Bignell, DE, Higashi, M., Higashi, T., Abe, Y., Eds.; Springer: Dordrecht, Holandsko, 2000; s. 141–168.

12. Vargo, E.; Husseneder, C. Biológia podzemných termitov: Postrehy z molekulárnych štúdií Reticulitermes a Coptotermes. Annu. Entomol. 2009, 54, 379-403. [CrossRef]

13. Abe, T. Evolúcia životných typov u termitov. In Evolúcia a koadaptácia v biotických spoločenstvách; Kowana, S., Connell, JH, Hidaka, T., Eds.; University of Tokyo Press: Tokio, Japonsko, 1987; s. 128–148.

14. Shellman-Reeve, JS Spektrum eusociality termitov. In Evolúcia sociálneho správania u hmyzu a pavúkovcov; Choe, JC, Crespi, BJ, Eds.; Cambridge University Press: Cambridge, Spojené kráľovstvo, 1997; s. 52–93.

15. Griffiths, HM; Eggleton, P.; Hemming-Schroeder, N.; Swinfield, T.; Woon, JS; Allison, SD; Coomes, DA; Ashton, LA; Parr, CL Tok uhlíka a dynamika lesa: Zvýšený rozklad mŕtveho dreva v medzier medzi korunami stromov tropického dažďového pralesa. Glob. Chang. Biol. 2001, 27, 1601–1613. [CrossRef]

16. Guo, C.; Tuo, B.; Ci, H.; Yan, ER; Cornelissen, JH Dynamická spätná väzba medzi funkčnými znakmi stromov, populáciami termitov a obratom mŕtveho dreva. J. Ecol. 2021, 109, 578–1590. [CrossRef]

17. Zanne, AE; Flores-Moreno, H.; Powell, JR; Cornwell, WK; Dalling, JW; Austin, AT; Classen, AT; Eggleton, P.; Okada, KI; Parr, CL; a kol. Citlivosť termitov na teplotu ovplyvňuje globálnu rýchlosť rozkladu dreva. Veda 2022, 377, 1440–1444. [CrossRef] [PubMed]

18. Liu, L.; Wang, W.; Liu, Y.; Sun, P.; Lei, C.; Huang, Q. Vplyv alogomingového správania na individuálnu vrodenú imunitu u podzemného termita Reticulitermes chinensis (Isoptera: Rhinotermitidae). J. Insect Sci. 2019, 19, 6. [CrossRef] [PubMed]

19. Polizzi, JM; Forschler, BT Vnútrošpecifický a medzidruhový agonizmus u Reticulitermes flavipes (Kollar) a R. virginicus (Banks) a účinky veľkosti arény a skupiny v laboratórnych testoch. Insectes Sociaux 1998, 45, 43–49. [CrossRef]

20. Hamilton, C.; Lay, F.; Bulmer, profylaktické sekréty podzemných termitov MS a vonkajšia protiplesňová ochrana. J. Insect Physiol. 2011, 57, 1259–1266. [CrossRef]

21. Rosengaus, RB; Jordan, C.; Lefebvre, ML; Traniello, JFA Patogénne poplachové správanie termitov: Nová forma komunikácie u sociálneho hmyzu. Sci. Nat. 1999, 86, 544–548. [CrossRef]

22. Myles, TG Alarm, agregácia a obrana Reticulitermes flavipes ako odpoveď na prirodzene sa vyskytujúci izolát Metarhizium anisopliae. Sociobiológia 2002, 40, 243–256.

23. Bulmer, MS; Franco, BA; Fields, EG Podzemný sociálny alarm termitov a hygienické reakcie na hubové patogény. Hmyz 2019, 10, 240. [CrossRef]

24. Denier, D.; Bulmer, MS Variácia v citlivosti podzemných termitov na smrteľné infekcie lokálnymi pôdnymi izolátmi Metarhizium. Insectes Sociaux 2015, 62, 219–226. [CrossRef]

25. Bischoff, JF; Rehner, SA; Humber, RA Multilokusová fylogenéza línie Metarhizium anisopliae. Mycologia 2018, 101, 512–530. [CrossRef]

26. Rosengaus, RB; Schultheis, KF; Yalonetskaya, A.; Bulmer, MS; DuComb, WS; Benson, RW; Thottam, JP; Godoy-Carter, V. Symbiont-odvodené -1, 3-glukanázy v spoločenskom hmyze: Mutualizmus za hranicou výživy. Predné. Microbiol. 2014, 5, 607. [CrossRef] [PubMed]

27. Hamilton, C.; Bulmer, MS Molekulárna antifungálna obrana u podzemných termitov: RNA interferencia odhaľuje in vivo úlohy konca a GNBP proti prirodzene sa vyskytujúcemu patogénu. Dev. Comp. Immunol. 2012, 36, 372–377. [CrossRef] [PubMed]

28. Bulmer, MS; Lay, F.; Hamilton, C. Adaptívny vývoj v podzemných termitových antifungálnych peptidoch. Insect Mol. Biol. 2010, 19, 669–674. [CrossRef] [PubMed]

29. Bulmer, MS; Crozier, RH Duplikácia a diverzifikácia výberu medzi termitovými antifungálnymi peptidmi. Mol. Biol. Evol. 2004, 21, 2256–2264. [CrossRef]

30. Moran, MN; Aguero, CM; Eyer, PA; Vargo, EL Záchranná stratégia v termite: Pracovníci vystavení plesňovým patogénom sú reintegrovaní do kolónie. Predné. Ecol. Evol. 2022, 10, 840223. [CrossRef]

31. Davis, ON; Meconcelli, S.; Radek, R.; McMahon, DP termity formujú svoju kolektívnu behaviorálnu reakciu na základe štádia infekcie. Sci. Rep. 2018, 8, 14433. [CrossRef]