ČASŤ 1: Fenyletanolglykozidový lipozóm inhibuje aktiváciu HSC indukovanú PDGF prostredníctvom regulácie signálnej dráhy FAK/PI3K/Akt

Shi-Lei Zhang 1, Long Ma 1, Jun Zhao 2, Shu-Ping You 1, Xiao-Ting Ma 1, Xiao-Yan Ye a Tao Liu 1,*

1 Katedra toxikológie, School of Public Health, Xinjiang Medical University, Xinjiang Ujgurská autonómna oblasť, Xinyi Road č. 393, Urumqi 830011, Čína

2 Kľúčové laboratórium pre ujgurskú medicínu, Inštitút Materia Medica v Xinjiang, Ujgurská autonómna oblasť Sin-ťiang, okres Tianshan, Xinhua South Road č. 140, Urumqi 830004, Čína

Pre viac informácií kontaktujte:Joanna.jia@wecistanche.com

Cistanche deserticola má mnoho účinkov, kliknite sem a dozviete sa viac

Abstrakt: Cistanche tubulosaje tradičný čínsky bylinný liek, ktorý je široko používaný na reguláciu imunity afenyletanoidové glykozidy(CPhG) patria medzi primárne zložky zodpovedné za túto činnosť. Aplikácia CPhG je však negatívne ovplyvnená ich zlou absorpciou a nízkou perorálnou utilizáciou. Cielené dodávanie liečiv je dôležitým smerom rozvoja farmácie. Predchádzajúce štúdie ukázali, že CPhG by mohli blokovať vedenie signálnych dráh v TGF-p1/smad a inhibovať aktiváciu pečeňových hviezdicových buniek (HSC). Cieľom tejto štúdie bolo vyhodnotiť účinok lipozómov CPhG proti fibróze pečene inhibíciou aktivácie HSC, podporou apoptózy, blokovaním bunkového cyklu, potlačením vedenia signálnych dráh v fokálnej adhéznej kináze (FAK)/fosfatidylinozitol-3- kináza (PI3K)/proteínkináza B(Akt), a stanovenie ich in vitro hepatoprotektívnej aktivity. Štúdie uvoľňovania in vitro preukázali, že lipozómy CPhG majú účinok predĺženého uvoľňovania v porovnaní s liečivými CPhG. Proliferácia HSC bola inhibovaná po ošetrení CPhG lipozómami (29,45, 14,72, 7,36 ug/ml), s hodnotami IC50 42,54 Rg/ml v MTT teste. Rôzne koncentrácie CPhG lipozómov by mohli inhibovať proliferáciu HSC, podporovať apoptózu a blokovať bunkový cyklus. Metóda MTT ukázala zjavnú inhibíciu proliferácie HSC po liečbe lipozómom CPhG a rekombinantným rastovým faktorom-BB (rrPDGF-BB) získaným z potkaních krvných doštičiek. Hladiny kolagénu-1, inhibítora metalopeptidázy 1 (TIMP-1), aktínu hladkého svalstva (a-SMA) a fosforylovaného PI3K/Akt boli znížené a matricová metaloproteináza-1 (MMP{ {23}}) bol upregulovaný predbežným ošetrením rôznymi koncentráciami CPhG lipozómov. Okrem toho 29,45 Rg/ml CPhG lipozómov by mohlo znížiť expresiu proteínu FAK a fosforylovaného proteínu PI3K a Akt downstream od FAK nadmernou expresiou génu FAK. Tento experiment naznačuje, že lipozómy CPhG môžu inhibovať aktiváciu HSC inhibíciou FAK a potom znížením expresie fosforylovaného Akt / PI3K, čím poskytujú nový pohľad na aplikáciu CPhG na fibrózu pečene.

Kľúčové slová: fenyletanoidové glykozidylipozóm; pečeňové hviezdicové bunky; šírenie; apoptóza; bunkový cyklus; FAK/PI3K/Akt,

faktory, ako je TGF-p1, alkohol, toxíny a steatóza, môžu viesť k aktivácii HSC. PDGF môže tiež viesť k aktivácii HSC [4]. V súčasnosti terapeutické stratégie zamerané na HSC na prevenciu fibrózy pečene zahŕňajú inhibíciu aktivácie, proliferácie a bunkového cyklu HSC, ako aj stimuláciu apoptózy HSC [5].

Cistanche tubulosa(čeľaď Orobanchaceae), parazitická rastlina, sa hojne pestuje v južnom regióne Xinjiang v Číne.C. tubulosapreukázalo sa, že má rôzne aktivity, vrátane zvýšenia imunity organizmu, zlepšenia odolnosti organizmu, výživy obličiek, liečby impotencie a zvýšenia inteligencie;

1. Úvod

má tiež antioxidačné vlastnosti a vlastnosti proti starnutiu [6]. Táto rastlina obsahuje fenyletanoidné glykozidy (CPhG), iridoidy a polysacharidy, z ktorých CPhG sú niektoré z hlavných aktívnych bioaktívnych druhov [7]. V predchádzajúcej štúdii sme zistili, že CPhG môžu blokovať vedenie signálnych dráh v TGF-p1/smad, inhibovať aktiváciu HSC a pôsobiť preventívne na pečeňovú fibrózu u potkanov indukovanú hovädzím sérovým albumínom [7,8]. Avšak CPhG majú dobrú rozpustnosť vo vode a slabú rozpustnosť v lipidoch a sú ovplyvnené vonkajšími faktormi, ako je kyslosť a rozkladné enzýmy, ktoré znižujú stabilitu a účinnosť CPhG [9]. Po intragastrickom podaní sú CPhG nestabilné v gastrointestinálnom trakte potkanov a ľahko môže dôjsť k hydrolýze glykozidových väzieb. Perorálna biologická dostupnosť potkanov bola iba 0,83 percenta, takže je ťažké určiť jej terapeutickú úlohu [10]. Preto musíme nájsť bezpečné, účinné, trvalé a cielené antifibrotické liečivo pre HSC, aby sme zlepšili ich terapeutickú účinnosť. Systémy na dodávanie liečiv nanočastíc poskytujú alternatívnu stratégiu na prekonanie týchto nedostatkov kvôli ich výhodám, vrátane vysokej kapacity liečiva a dlhého krvného obehu [11]. Majú silnú afinitu k pečeni a môžu priamo dodávať lieky do buniek prostredníctvom endocytózy a fúzie. Nemodifikované lipozómy sú distribuované hlavne v tkanivách alebo orgánoch vyvinutých retikuloendotelovým systémom (RES) a majú funkciu pasívneho zacielenia na pečeň [12]. Preto boli lipozómy CPhG pripravené membránovou disperziou a sekundárnou enkapsuláciou, aby sa dosiahol antifibrózny účinok. V tejto štúdii sme sa zamerali na skúmanie účinkov lipozómov CPhG na proliferáciu HSC, apoptózu a bunkový cyklus, ako aj na jeho mechanizmy.

2. Výsledky

2.1. Fyzikálne vlastnosti CPhG lipozómu

Fyzikálne vlastnosti takto pripravených lipozómov CPhG boli nasledujúce: Veľkosť častíc bola (216,7 ± 3,47) nm, potenciál Zeta bol (-55,6 ± 1,3) mV. Ako je znázornené na obrázku 1, častice boli okrúhle, potiahnuté rovnomernou hrúbkou na povrchu a distribúcia veľkosti častíc bola rovnomerná. Plnenie liečiva a účinnosť enkapsulácie CPhG lipozómov boli (3,71 ± 0,32) percent a (38,46 ± 7,85) percent.

2.2. Uvoľnenie in vitro z CPhG lipozómov a CPhG

Odhadovaná kumulatívna rýchlosť uvoľňovania bola vypočítaná a vynesená ako funkcia času pre CPhG lipozómy a CPhG (obrázok 2). V tejto štúdii; rýchlosť uvoľňovania CPhG po 12 hodinách bola normalizovaná na 100 percent, zatiaľ čo rýchlosť uvoľňovania CPhG lipozómov bola blízka 100 percentám po 24 hodinách a rýchlosť uvoľňovania CPhG sa časom zvyšovala. Údaje sa analyzovali pomocou rôznych modelov prispôsobenia pre mechanizmy riadeného uvoľňovania, vrátane rovníc nultého rádu, prvého rádu a Higuchiho rovníc. Preložené rovnice a korelačné koeficienty pre tri modely uvoľňovania sú uvedené v tabuľke 1.

Najlepším modelom pre CPhG a lipozómy CPhG sú Higuchiho rovnice a rovnice prvého poriadku. Štúdia uvoľňovania CPhG lipozómov in vitro nepreukázala žiadny nárazový efekt. Na výpočet parametrov rozpúšťania T50 (rozpúšťanie 50 percent) sa vybrala najvhodnejšia distribučná funkcia. Výsledky ukazujú, že priemerný retenčný čas CPhG lipozómov je dlhší ako retenčný čas CPhG a T50 CPhG lipozómov je 9,39 h. V porovnaní s 1,69 h pre CPhG lipozómy CPhG vykazujú zjavný účinok s predĺženým uvoľňovaním (tabuľka 2).

Najprv sme skúmali cytotoxické účinky lipozómov CPhG na HSC pomocou testu MTT in vitro. HSC boli vystavené rôznym koncentráciám CPhG lipozómov v rozsahu od 0 do 117,79 µg/ml počas 24 hodín. Lipozómy CPhG znižovali životaschopnosť HSC v závislosti od dávky a ich hodnota IC50 bola 42,535 (napr./ml. Účinok lipozómov CPhG (29,45, 14,72 a 7,36 ug/ml) na bunky pri 24. 48 a 72 h je znázornené na obrázku 3. Po ošetrení lipozómami CPhG bola proliferácia HSC významne inhibovaná v rôznych časových bodoch (obrázok 3).

Uvoľňovanie laktátdehydrogenázy (LDH) HSC sa detegovalo po 24 hodinách liečby rôznymi koncentráciami lipozómu CPhG. Výsledky sú uvedené v tabuľke 3. HSC ošetrené CPhG lipozómami nemali žiadny významný vplyv na uvoľňovanie LDH.

2.4. Lipozómy CPhG indukujú apoptózu HSC a zastavujú bunkový cyklus

HSC boli vystavené CPhG lipozómom (29,45, 14,72, 7,36 µg/ml) počas 24 hodín a vykonalo sa dvojité farbenie anexín-V-FITC/PE na detekciu apoptózy prietokovou cytometriou, ako je znázornené na obrázku 4a. Celková apoptóza buniek sa štatisticky zvýšila v porovnaní s kontrolnou skupinou (p < 0,05).="" po="" 24="" hodinách="" liečby="" na="" hsc="" pre="" každú="" dávkovú="" skupinu="" mohli="" lipozómy="" cphg="" (29,="" 45="" ug="" ml)="" indukovať="" neskorú="" apoptózu="" hsc="" a="" percento="" neskorých="" apoptotických="" buniek="" bolo="" vyššie="" ako="" percento="" skorých="" apoptotických="" buniek.="" podiel="" skorých="" apoptotických="" buniek="" bol="" oveľa="" vyšší="" ako="" neskorých="" apoptotických="" buniek="" v="" skupinách="" ošetrených="" lipozómom="" cphg="" (14,72="" a="" 7,36="" |^g/ml).="" tieto="" výsledky="" jasne="" ukazujú,="" že="" lipozómy="" cphg="" indukujú="" apoptózu="" hepatocytov,="" najmä="" v="" neskorých="" štádiách="" hsc.="" okrem="" toho="" sa="" celková="" apoptóza="" zvýšila="" s="" dávkou="" cphg="" lipozómov.="" tieto="" výsledky="" naznačujú,="" že="" lipozómy="" cphg="" môžu="" inhibovať="" aktiváciu="" hsc="" a="" pečeňovú="" fibrózu="" indukciou="" apoptózy="">

Na stanovenie účinku CPhG lipozómov na bunkový cyklus HSC boli HSC ošetrené CPhG lipozómami v koncentráciách 29,45, 14,72 a 7,36 µ/ml počas 24 hodín a analyzované prietokovou cytometriou (obrázok 4b). Výsledky ukázali, že podiel buniek vo fáze G0/G1 sa výrazne zvýšil (p < {{10}},05),="" zatiaľ="" čo="" percento="" buniek="" vo="" fáze="" s="" bolo="" významne="" zvýšené="" znížená="" (p="">< 0,05).="" okrem="" toho="" bol="" podiel="" buniek="" vo="" fáze="" g2/m="" významne="" znížený="" v="" porovnaní="" s="" kontrolnou="" skupinou=""><0.05). taken="" together,="" these="" results="" exhibit="" the="" cell="" cycle="" modulatory="" activity="" of="" the="" cphg="" liposomes="" in="" hscs,="" which="" may="" relate="" to="" their="" anti-proliferative="" and="" apoptosis-inducing="">

2.5. Štúdia o mechanizme(och) účinku lipozómov C PhG in vitro

2.5.1. Lipozómy CPhG inhibujú proliferáciu HSC stimuláciou rrPDGF-BB

Na ďalšie skúmanie účinkov CPhG lipozómov na proliferáciu stimulovanú rrPDGF-BB HSC sa uskutočnil test MTT na meranie životaschopnosti HSC, ktoré boli ošetrené vopred nastavenými koncentráciami CPhG lipozómov počas 24, 48 a 72 hodín ( Obrázok 5).

Po 24 hodinách liečby s HSC stimulovanými rrPDGF-BB a 29,45, 14,721 a 7,36 µ/ml CPhG lipozómov bola miera prežitia buniek v každej dávkovej skupine 67,5 percenta, 75,3 percenta a 89,2 percenta. Po 48 hodinách bola miera prežitia v bunkách 49,2 percenta, 58,6 percenta a 73,5 percenta.
každej dávkovej skupiny. Po 72 hodinách liečby bola miera prežitia buniek v každej dávkovej skupine 45,3 percenta, 59,2 percenta a 79,2 percenta. Výsledky ukázali, že lipozómy CPhG mali významný inhibičný účinok na HSC stimulované rrPDGF-BB a tento inhibičný účinok sa stal zrejmejším, keď sa dávka zvýšila. Predpokladá sa, že inhibičný účinok lipozómov CPhG na HSC prispieva k antiproliferačnej aktivite CPhGliposomo.

2.5.2. Lipozómy CPhG inhibujú aktiváciu HSC in vitro

HSC v priestore Disse produkujú komponenty ECM, ako je kolagén-1,(s-SMA a kolagén III. Ďalšie faktory, ktoré regulujú vývoj ECM, ako sú MMP a TIMP, sú tiež produkované HSC [5]. Na ďalšie skúmanie mechanizmov indukovaných rrPDGF-BB v HSC sme hodnotili expresiu proteínov súvisiacich s ECM, vrátane kolagénu-1, Cosma, kolagénu III, MMP-1 a TIMP{{8} Obrázok 6a ukazuje, že skupiny lipozómov CPhG (29,45, 14,72, 7.36 4g/ml) by mohli znížiť hladiny expresie mRNA kolagénu-1, a-SMA a TIMP{{18} } a zvýšiť úroveň expresie mRNA MMP-1 viac ako skupina rrPDGF-BB.

Obrázok 6. Účinky CPhG lipozómov na expresiu kolagénu-1, a-SMA, TIMP-1 a MMP-1 v HSC. (a) Expresia mRNA kolagénu-1, a-SMA, TIMP-1 a MMP-1 v HSC (test RT-PCR). (b) Proteínová expresia kolagénu{{10}} a a-SMA. A, kontrolná skupina; B, skupina liečená rrPDGF-BB; C, skupina liečená rrPDGF-BB plus CPhG lipozómom 29,45 g/ml; D, rrPDGF-BB plus CPhG lipozóm 14,72 (_ig/ml liečená skupina; E, rrPDGF-BB plus CPhG lipozóm 7.3 6 卩g/ml liečená skupina d; Údaje sú vyjadrené ako priemer 土 SD .** p < 0,01,="" významne="" odlišné="" v="" porovnaní="" so="" skupinou="" hsc="" aktivovaných="" rrpdgf-bb.="" #="" p="">< 0,05,="" významne="" odlišné="" od="" kontrolnej="" skupiny.="" 6-aktín="" bola="" použitá="" ako="" vnútorná="">

Lipozómy CPhG tiež zvýšili hladiny mRNA MMP-1. Hladiny a-SMA a kolagénu-1 boli vysoko exprimované v rrPDGF-BB-aktivovaných HSC. Naopak, CPhG lipozómy znížili hladiny a-SMA a kolagénu-1 (obrázok 6b). Najmä pri vysokej koncentrácii (29,45 ^g/ml) lipozóm CPhG znížil zvýšenú expresiu kolagénu-1 a a-SMA prostredníctvom rrPDGF-BB.

2.53 Lipozómy CPhG inhibujú signálnu dráhu PI3K/Akt

PI3K/Akt je dôležitá signálna transdukčná dráha sprostredkovaná tyrozínkinázovými receptormi. Signálna dráha PI3K/Akt pôsobí ako senzor v reakcii na extracelulárne stimuly a sprostredkúva bunkové signály, čím hrá rozhodujúcu úlohu v bunkovej apoptóze a proliferácii ovplyvnením aktivity downstream efektorových molekúl [13]. Aby sa overilo, či sa dráha PI3K/Akt zúčastňuje na antiproliferačných účinkoch lipozómov CPhG na HSC, skúmali sa hladiny expresie a fosforylácie PI3K/Akt analýzou Western blot. Výsledky ukázali, že hladiny p-PI3K a p-Akt konzistentne klesali v HSC po 24-hodinovom ošetrení lipozómami CPhG, čo naznačuje, že antiproliferačné účinky lipozómov CPhG proti HSC súvisia s deaktiváciou dráhy PI3K/Akt. , ako je znázornené na obrázku 7.

2.5.4. Liipozómy CPhG môžu down-regulovať expresiu proteínov dráhy PI3K/Akt v HSC plazmidu nadmernej expresie FAK sprostredkovaného rrPDGF-BB

FAK je kritický gén, ktorý reguluje signálnu dráhu PI3K/Akt. Aktivovaný FAK môže fosforylovať PI3K, čo ďalej vedie k fosforylácii Akt. FAK sprostredkováva signálnu transdukciu tyrozín-proteínkinázového receptora, integrínu a iných dráh do buniek, ktoré sú spojnicou a centrom niekoľkých intracelulárnych dráh počas aktivácie HSC. Preto sme špekulovali

že lipozómy CPhG môžu potlačiť aktivitu signálnej dráhy PI3K/Akt zhoršením aktivácie FAK. Následne sme túto hypotézu potvrdili preukázaním nadmernej expresie génu FAK.

(pEX{0}}NC) plus CPhG lipozómová skupina 29,45 Lg/ml sa významne znížila (p < 0,01).

estern blotting so špecifickými primárnymi protilátkami. ** p < 0.01,="" výrazne="" odlišné="" v="" porovnaní="">

stimulácia rrPDGF-BB plus skupina pEX-3-FAK. plus p < 0.05,="" výrazne="" odlišné="" v="" porovnaní="" so="" skupinou="" liečenou="" rrpdgf-bb.="" &="" p="">< 0,01,="" významne="" odlišné="" v="" porovnaní="" so="" stimuláciou="">

plus skupina pEX-3-NC. -aktín bol použitý ako vnútorná kontrola.

cistanche môže proti rakovine

3. Diskusia

Ukázalo sa, že CPhG majú rôzne biologické aktivity, vrátane protizápalovej aktivity [14,15], aktivity proti osteoporóze [16,17], sedatívneho účinku [18•], aktivity proti únave [19], neuroprotektívneho účinku [ 20] a hepatoprotektívna aktivita [21,22]. Yang a kol. zistil, že extrakt zC. tubulosamohli významne oddialiť progresiu experimentálnej chemickej fibrózy pečene inhibíciou syntézy kolagénu a znížením oxidačného stresu [22]. Avšak účinnosť CPhGs as

tepelné ochranné prostriedky sú limitované ich slabou priepustnosťou a nízkou biologickou dostupnosťou [23]. Preto je potrebné rozšíriť aplikáciu CPhG vyvinutím účinného systému podávania na prekonanie týchto neúspechov.

V posledných rokoch výskum liekov aj klinický výskum potvrdili, že použitie nanočastíc ako nosičov liekov môže zlepšiť účinnosť liekov in vivo. Lipozómy sú jedny z najdôležitejších nanočastíc [24].

Lipozómy sa môžu použiť ako nosiče liekov na úspešné dodávanie protizápalových liekov, protirakovinových liekov, antibiotík, antifungálnych liekov a iných rôznych kategórií liekov [25]. Lipozómy môžu tiež zlepšiť stabilitu liečiva, zvýšiť rozpustnosť liečiva a podporiť biokompatibilitu [26]. Na druhej strane štúdie ukázali, že systém dodávania liečiva z pevných nanočastíc (v rozsahu 10-1000 nm) dokáže koncentrovať 80 percent dávky liečiva v pečeni, čo umožňuje liečivu vstúpiť pečeňové bunky [27]. Jing Zhu a kol. zistili, že galanín-lipozómy majú dobré cielené účinky na pečeň [28]. Preto je možné pasívny cielený účinok nanočínskych liekov využiť na liečbu ochorení pečene alebo iných ochorení. Veľkosť častíc CPhG lipozómov pripravených v tejto štúdii, ktoré majú určitý stupeň zacielenia na pečeň, je (216,7 ± 3,47) nm. Správanie sa pri uvoľňovaní liečiva je dôležitou vlastnosťou systémov dodávania nanoliečiv. Pretože CPhG majú dobrú rozpustnosť vo vode, ako uvoľňovacie médium sa používa tlmivý roztok PBS (pH=6.0). Z krivky uvoľňovania je možné vidieť, že pred 2 hodinami bolo percento uvoľnenia CPhG lipozómov menšie ako 40 percent, nenastalo žiadne náhle uvoľnenie a v porovnaní s uvoľňovaním CPhG bol určitý účinok predĺženého uvoľňovania. Z rovnice preloženej krivky uvoľňovania vyplýva, že uvoľňovanie CPhG lipozómov v roztoku fosfátového tlmivého roztoku pri pH=6.0 je v súlade s Higuchiho rovnicou.

cistanchemôcťanti-apoptóza

Pri chronických ochoreniach pečene vedie kontinuálna aktivácia HSC k fibróze pečene [29]. Preto inhibícia aktivácie, proliferácie a bunkového cyklu HSC alebo indukcia apoptózy HSC môže byť novým východiskovým bodom pre cielenú liečbu fibrózy pečene [30-33]. Mnohé štúdie zistili, že apoptóza je kľúčom k zvráteniu hepatálnej fibrózy podporou apoptózy [34]. Rozvoj fibrózy pečene závisí od aktivácie HSC, ktorá môže ponúknuť potenciál inhibovať aktiváciu HSC a indukovať apoptózu na prevenciu alebo liečbu fibrózy pečene [35,36]. LDH je enzým v bunkovom cytosóle, ktorý sa uvoľňuje v kultivačnom médiu pri poškodení bunkovej membrány. Z týchto dôvodov sme vykonali in vitro štúdie o miere životaschopnosti buniek, obsahu LDH v bunkách a apoptóze a bunkovom cykle HSC vystavených CPhG lipozómom. Výsledky ukázali, že lipozómy CPhG silne inhibujú životaschopnosť a proliferáciu HSC a zvyšujú percento apoptotických buniek spôsobom závislým od koncentrácie. Okrem toho výsledky bunkového cyklu naznačujú, že lipozómy CPhG by mohli vyvolať zastavenie bunkového cyklu vo fáze G1. Výsledky ukazujú, že kľúčom pre CPhG lipozómy na prevenciu a liečbu pečeňovej fibrózy je regulácia bunkovej proliferácie, apoptózy a bunkového cyklu. V porovnaní s prázdnou kontrolnou skupinou má obsah LDH medzi každou skupinou postupne stúpajúci trend. Nezistil sa však žiadny významný rozdiel (p > 0,05), čo naznačuje, že hoci aktivita klesá pre HSC ovplyvnené lipozómami CPhG, väčšina bunkových membrán zostáva nedotknutá. Inhibícia proliferácie HSC lipozómami CPhG nie je spôsobená toxicitou liečiv pre bunky.

PDGF je najkritickejším faktorom ovplyvňujúcim proliferáciu HSC. PDGF-receptory (PDGF-Ra a -p) patria do rodiny tyrozínkinázových receptorov. PDGF-AA sa viaže výlučne na PDGF-Ra, zatiaľ čo reťazce PDGF-B sa viažu a dimerizujú s PDGF-Ra aj -p [37]. Po naviazaní ligandu na PDGF-R sa receptory dimerizujú, čo následne vedie k fosforylácii vnútorného tyrozínového zvyšku a k aktivácii niekoľkých downstream signálnych dráh, čo v konečnom dôsledku indukuje proliferáciu a migráciu aktivovaných HSC. Tento proces vedie k nadmernej produkcii a ukladaniu kolagénu a iných ECM, čím sa podporuje rozvoj a progresia fibrózy pečene [38]. Breitkopf a kol. ukázali, že nadmerná expresia PDGF-BB v pečeni vedie k proliferácii HSC a fibróze pečene [39]. V našej štúdii sme použili rrPDGF-BB ako stimulátor na aktiváciu HSC a každá dávkovaná skupina lipozómov CPhG mohla inhibovať proliferáciu HSC a predstavovať zjavný vzťah medzi dávkou a účinkom. Predpokladá sa, že inhibičný účinok lipozómov CPhG na HSC prispieva k antiproliferačnej aktivite lipozómov CPhG.

Aktivácia HSC je spojená s mnohými zmenami vo vzorcoch génovej expresie buniek. Najmä zmeny v génovej expresii kolagénu-1 a a-SMA najviac korelujú s fibróznymi vlastnosťami aktivovaných HSC [40]. MMP sú endopeptidázy závislé od zinku, ktoré hrajú dôležitú úlohu pri degradácii všetkých proteínových zložiek ECM za fyziologických a patologických podmienok. MMP a TIMP sprostredkúvajú syntézu a degradáciu ECM. MMP môžu podporovať degradáciu ECM. Jemná rovnováha medzi MMP a TIMP určuje výskyt fibrózy pečene [29]. V porovnaní so skupinou rrPDGF-BB sa expresia TIMP-1, a-SMA a kolagénu-1 v skupinách lipozómov CPhG významne zvýšila, zatiaľ čo expresia MMP-9 sa znížila. Ošetrenie CPhG lipozómami najmä zvrátilo abnormálne expresie indukované rrPDGF-BB v HSC. Tieto údaje naznačujú, že lipozómy CPhG možno inhibujú tvorbu ECM obnovením rovnováhy medzi MMP a TIMP, čím zvyšujú hladiny MMP-1 a znižujú expresiu TIMP-1, a-SMA a kolagénu-1 a potenciálne podporuje degradáciu extracelulárnej matrice.

FAK je druh fokálneho adhézneho komplexu. PDGF môže tiež aktivovať FAK interakciou s proteínom ECM prostredníctvom integrínu [41]. Fokálny adhézny komplex poskytuje priamy senzor pre integritu extracelulárneho prostredia. Aktivácia FAK vedie k aktivácii PI3K. Ukázalo sa, že PI3K sa podieľa na proliferácii niekoľkých typov buniek [42]. Jeho kľúčová úloha v HSC bola preukázaná použitím PI3K-špecifických inhibítorov LY294002 a wortmannínu na blokovanie PDGF-indukovanej mitogenézy a chemotaxie bez ovplyvnenia autofosforylácie PDGF receptora [43]. PI3K sa rekrutuje do dimerizovaných fosforylovaných PDGF receptorov, ktoré aktivujú proteínkinázu C (PKC), Akt a p70S6 (p70S6K) [44]. Uvádza sa, že dominantne negatívny FAK (Ad-FAKCD) sa použil na blokovanie aktivity FAK a inhibíciu aktivácie PI3K indukovanej proliferáciou PDGF a HSC po liečbe PDGF [45]. Preto sme predpokladali, že dráha FAK/PI3K/Akt je možným cieľom pre lipozómy CPhG.

Naše výsledky ukazujú, že v porovnaní so stimuláciou rrPDGF-BB plus X-3-FAK skupinou boli hladiny proteínovej expresie FAK, fosforylovaného PI3K a fosforylovaného Akt znížené pri stimulácii rrPDGF-BB plus X-3-FAK plus CPhG lipozóm 29,45 Lg/ml skupina. Tieto výsledky ukazujú, že ošetrenie CPhG lipozómom 29,45 Lg/ml by mohlo znížiť expresiu proteínu FAK a fosforylovaných proteínov PI3K a Akt po smere od FAK.

S prehlbovaním výskumu chémie a farmakológie tradičnej čínskej medicíny bolo nájdených a potvrdených stále viac účinných látok tradičnej čínskej medicíny. Paclitaxel, artemisinín a ďalšie lieky sú všeobecne uznávané ako lieky prvej línie na liečbu príbuzných chorôb na celom svete. Zároveň sa však zistilo, že hoci in vitro farmakologický účinok mnohých čínskych medicínskych zložiek je veľmi silný, majú zlú rozpustnosť vo vode, krátky polčas rozpadu, zlú stabilitu, nízku biologickú dostupnosť, toxické vedľajšie účinky a mnohé iné. iné problémy, ktoré vážne obmedzujú ich medicínske a klinické použitie. Systém dodávania nanoliečiv je nový systém podávania liečiv s veľkým potenciálom pre vývoj a je kľúčovým bodom moderného farmaceutického výskumu. Jeho aplikácia pri výskume a vývoji nových foriem tradičnej čínskej medicíny nielen zlepšuje tradičné formy čínskej medicíny, ale do určitej miery zlepšuje aj liečebný účinok tradičnej čínskej medicíny a zvyšuje stabilitu liečiv in vivo. Okrem toho sú nemodifikované lipozómy väčšinou absorbované RES v závislosti od veľkosti ich častíc, povrchových vlastností a ďalších faktorov. Pasívne sa zameriavajú aj na pečeň. Aby sa zlepšila účinnosť cielenia na pečeň bežných lipozómov, koncentrácia cieľového tkaniva sa môže zvýšiť pripojením špecifických ligandov alebo špecifických funkčných skupín.

Preto by sme v budúcom výskume mali prikladať dôležitosť fyzikálnym a chemickým vlastnostiam extrakcie a purifikácie CPhG, ako je rozpustnosť, stabilita, kyslosť a zásaditosť, ako aj štúdiu biofarmaceutiky a farmakokinetiky. Mali by sme vytvoriť jedinečnú teóriu návrhu formulácií, platformu technológie prípravy a metódu hodnotenia kvality pre CPhG a tiež vyvinúť rôzne systémy na nano liečivá pre CPhG, aby sme zabezpečili čo najdôkladnejšie využitie CPhG. Využitie týchto výhod bude smerovaním nášho budúceho výskumu.