Pre viac informácií kontaktujte:emily.li@wecistanche.com

KLIKNITE SEM PRE ČASŤ 1

Cistanche deserticola má mnoho účinkov, kliknite sem a dozviete sa viac

Akteozid neovplyvňuje osteoblastogenézu v bunkách kostnej drene

Role ofakteozidna osteoblastickú diferenciáciu bola ďalej skúmaná pomocou buniek kostnej drene. Ako je znázornené na obr. 10A, liečba DAG zvýšila počet buniek zafarbených alizarínovou červenou a toto sa nezmenilo o 10 mMakteozidpredúprava. Množstvo prítomného farbiva naznačuje, že sa spojilakteozida ošetrenie DAG nezmenilo mineralizáciu (obr. 10B). Podobne DAG-indukované zvýšenie obsahu intracelulárneho vápnika (obr. 10C) a hladín mRNA (obr. 10D) markerov špecifických pre kosti, ako sú Runx2, osterix, BSP a OC, nebolo ovplyvnené predošetrenímakteozid.

Diskusia

Remodelácia kosti je prísne regulovaná rovnováhou medzi tvorbou kosti osteoblastmi a resorpciou kosti osteoklastmi. Predĺžená a nadmerná kostná resorpcia spôsobuje nerovnováhu kostného obratu, čo vedie k ochoreniam resorpcie kostí. Na preskúmanie účinkov akteozidu na osteoklastogenézu sme použili dva makrofágy, primárne kultivované BMM a bunky RAW264.7. Tieto bunky boli stimulované RANKL, aby sa diferencovali na osteoklasty v prítomnosti a neprítomnostiakteozid. Ukázali sme to prvýkrátakteozidinhibuje diferenciáciu a tvorbu osteoklastov. Samotný akteozid v skúmaných koncentráciách nespôsobil zníženie životaschopnosti primárne kultivovaných makrofágov v oboch podmienkach rastu a diferenciácie.akteozidliečba tiež znížila resorpčnú aktivitu zrelých osteoklastov. Tieto výsledky tomu nasvedčujúakteozidpotláča tvorbu osteoklastov z makrofágov a aktivitu resorpcie osteoklastov. Výsledky z nášho kultivačného systému, ktorý nezahŕňal osteoblasty alebo stromálne bunky, tiež naznačujú, že akteozid zabraňuje tvorbe osteoklastov priamym pôsobením na prekurzory osteoklastov. RANKL aktivuje MAPK vrátane p38, ERK a JNK. Tieto tri kinázy sa podieľajú na včasnej osteoklastickej diferenciácii, a preto ich inhibícia farmakologicky alebo s dominantne negatívnou transfekciou JNK potláča RANKL-indukovanú osteoklastogenézu [29]. Naše výsledky odhalili, že predbežné ošetrenie akteozidmi inhibovalo všetky tieto kinázy, čo naznačuje nešpecifickú down-reguláciu MAPK. Tento výsledok sa čiastočne líšil od predchádzajúcej správy, že EGCG, hlavná protizápalová zlúčenina v zelenom čaji, špecificky zoslabil aktiváciu JNK bez ovplyvnenia alebo aktivácie p38 v BMM stimulovaných RANKL [7]. Paeonol, protizápalová zlúčenina odvodená z čínskej byliny, tiež inhibuje fosforyláciu ERK a p38, ale nie nevyžiadanú fosforyláciu v bunkách RAW264.7 stimulovaných RANKL[30]. Na rozdiel od toho silibinín, nový inhibítor v kostiach, zoslabil radmi indukovanú aktiváciu p38, ERK a JNK [31]. Tieto zistenia naznačujú, že účinky antiresorpčných zlúčenín na aktiváciu MAPK prostredníctvom RANKL závisia od zlúčeniny, hoci všetky tri MAPK sa podieľajú na včasnej osteoklastogenéze. Vzhľadom na pozorovanie, žeakteozidoslabené hladiny p-JNK v BMM stimulovaných RANKL, dokonca aj pri 1 mm, sa blokáda JNK skôr ako p38 MAPK alebo ERK javila ako špecifickejšia udalosť vakteozid-sprostredkovaná antiosteoklastogenéza v bunkách. Hociakteozidpri rovnakej koncentrácii neznížil počet osteoklastov v BMM, došlo k výraznému zníženiu tvorby jamiek oakteozidliečbe. Zistili sme tiež, že predbežná liečba SP600125, farmakologickým inhibítorom špecifickým pre JNK, dramaticky zabránila tvorbe osteoklastov (údaje nie sú uvedené). Súhrnne tieto zistenia naznačujú, že signalizácia sprostredkovaná JNK úzko súvisí sakteozidsprostredkovaná supresia osteoklastogenézy stimulovaná RANKL. NF-kB signalizácia reguluje bunkové udalosti, vrátane apoptózy, progresie bunkového cyklu, bunkovej adhézie, produkcie cytokínov a prežitia v makrofágoch [32]. Signalizácia NF-kB je tiež potrebná na vývoj osteoklastov, čo bolo preukázané objavením sa osteopetrózy u myší s knockoutom NF-kB [33,34]. Preto sa navrhuje, aby inhibícia NF-kB bola účinným cieľom pre antiresorpčné činidlá na zníženie aktivity osteoklastov a liečbu osteoporózy. Posttranslačná modifikácia proteínov podrodiny NF-kB je rozhodujúca pri modulácii aktivity NF-kB. Najmä fosforylácia p65 podjednotky a IkB kinázy je rozhodujúca pre NF-kB na vyvolanie osteoklastogenézy [7]. Naše súčasné zistenia ukázali, že stimulácia RANKL zvýšila DNA väzbovú aktivitu NF-kB a fosforyláciu podjednotky p65 a Ikea v bunkách BMM aj RAW264.7. Predúprava sakteozidinhibovali tieto RANKL-indukované zvýšenia, čo viedlo k down-regulovanej aktivite NF-kB. V dôsledku toho tieto výsledky naznačujú, že okrem MAPK je hlavným cieľom signalizácie NF-kBakteozidpri inhibícii diferenciácie a tvorby osteoklastov z makrofágov stimulovaných RANKL. Okrem signalizácie NF-kB hrá dráha c-Fos/c-Jun/NFATc1 kľúčovú úlohu vo vývoji osteoklastov, takže nedostatok ktoréhokoľvek z týchto proteínov môže zastaviť osteoklastogenézu. V tejto štúdii sme zistili, že akteozid zabraňuje expresii c-Fos a NFATc1 indukovanej RANKL na úrovni mRNA a proteínu.upstream kinázy c-Jun, ktorá je potrebná na expresiu NFATc1 a osteoklastogenézu ako odpoveď na RANKL [29]. Blokovanie JNK/c-Jun dráhy inhibítorom JNK znížilo tvorbu osteoklastov indukovanú RANKL a expresiu c-Fos a NFATc1 [7]. Naše výsledky a predchádzajúce zistenia naznačujú, že inhibícia signalizácie sprostredkovanej JNK akteozidom je úzko spojená s prevenciou c-Fos a NFATc1 sprostredkovaných RANKL.

expresiou, ktorá potláča diferenciáciu osteoklastov v makrofágoch. Rozdiely v účinkoch akteozidu na BMM a bunky RAW264.7 sú aspoň čiastočne spôsobené rozdielmi v citlivosti na inhibíciu JNK. TNF-a môže indukovať osteoklastogenézu nezávisle od signalizácie RANKL-RANK [37]. IL-1 je účinným mediátorom patologickej deštrukcie kostí vyvolanej nedostatkom estrogénu alebo zápalom[7]. Narušenie signalizácie IL-1 receptora typu I alebo IL{8}} môže zvrátiť úbytok kostnej hmoty vyvolaný ovariektómiou [38] alebo reumatoidnou artritídou [39]. Táto štúdia preukázala schopnosťakteozidna zníženie produkcie zápalových cytokínov, ako sú TNF-a, IL-1b a IL-6 v makrofágoch. Predpokladá sa, že akteozid inhibuje produkciu zápalových cytokínov potlačením signalizácie p38 kinázy a ERK, pretože na lipopolysacharidmi indukovanú produkciu týchto cytokínov v makrofágoch je potrebná aktivácia ERK1/2, p38 MAPK alebo oboch [40,41]. Luteolín, zápalová zlúčenina, tiež potláča produkciu zápalových mediátorov inhibíciou aktivácie p38 MAPK [42]. V tejto štúdii sme tiež zistili, že akteozid zmiernil stratu kostnej hmoty u myší po ovariektómii, čo dokazuje obnovená maximálna sila zlomeniny v strednej časti pravej stehennej kosti a vymiznutie osteoporotických kortikálnych kostí. Ústneakteozidpodávanie znížilo ovariektómiou indukované zvýšenie hladín sérového IL-1b a IL-6, ale nie ALP. Zvýšené hladiny vápnika, TRAP a OC v sére v OVX boli tiež inhibované perorálnou liečbou akteozidom, čo naznačuje, žeakteozidtlmí zmenu biomarkerov špecifických pre tvorbu kostí, ako aj resorpciu. Keďže osteoporóza je charakterizovaná zníženou hustotou hmoty a zhoršenou mikroarchitektúrou trabekulárnej kosti, OVX-indukovaný úbytok trabekulárnej kosti a zmena morfometrických parametrov boli významne inhibované perorálnymakteozidadministratívy. Tieto zistenia tomu nasvedčujúakteozidsa môže použiť ako antiresorpčné činidlo na liečbu osteoporózy zvrátením nevyváženej aktivácie osteoklastov. Osteoblasty sú však primárnym faktorom zodpovedným za tvorbu novej kosti. Na zvýšenie tvorby kosti je teda potrebné činidlo schopné zvýšiť proliferáciu alebo diferenciáciu osteoblastov [30]. Na rozdiel od toho sme zistili, že akteozid neovplyvnil diferenciáciu alebo mineralizáciu osteoblastov v bunkách kostnej drene ošetrených DAG. Celkovo naše výsledky naznačujú, že akteozid má antiresorpčný účinok, ale priamo neovplyvňuje tvorbu kostí. Na objasnenie toho, či akteozid prospieva osteoblastogenéze alebo nie, sú potrebné podrobnejšie experimenty analyzujúce parametre špecifické pre kosti in vivo a in vitro. Táto štúdia zdôrazňuje inhibičný účinok akteozidu na diferenciáciu osteoklastov a kostnú resorpciu potlačením MAPK a niekoľkých transkripčných faktorov, ako sú NF-kB, c-Fos a NFATc1. Údaje naznačujú dva možné mechanizmy, ktorými má akteozid tieto výhody. Jedna z možností je takáakteozid

inhibuje osteoklastogenézu vďaka svojmu antioxidačnému potenciálu. Početné štúdie ukázali, že produkcia ROS sprostredkovaná receptormi môže slúžiť ako downstream signalizačný mediátor (43–45). Niekoľko kináz a transkripčných faktorov je citlivých na bunkový redoxný stav, ktorý ovplyvňuje rôzne bunkové deje. RANKL stimuluje produkciu ROS, ktorá sprostredkúva RANKL-indukované bunkové odpovede na diferenciáciu osteoklastov [24]. Predbežná liečba antioxidantmi, ako je N-acetylcysteín a glutatión, zabránila tvorbe ROS sprostredkovanej RANKL, čo naznačuje, že antioxidanty znižujú stratu kostnej hmoty znížením reprodukcie indukovanej RANKL [24]. V súlade s týmito zisteniami táto štúdia odhaľuje, že akteozid zoslabuje intracelulárne ROS produkované v BMM počas diferenciácie osteoklastov spôsobom závislým od dávky. Toto pozorovanie naznačuje, že inhibícia osteoklastogenézy je aspoň čiastočne spôsobená antioxidačným potenciálomakteozid. Navrhujeme tiež, že akteozid by mohol znižovať prílev Ca2 plus, čím by potláčal osteoklastogenézu. Nedávno bolo hlásené, že akteozid inhibuje alergie typu I prostredníctvom down-regulácie/NFAT a JNK signalizácie v bazofilných bunkách [46]. Receptor citlivý na vápnik úzko súvisí s reguláciou osteoklastogenézy [47]. Tento vzťah naznačuje, že je zapojený vápnikový kanálakteozid-indukovaná inhibícia diferenciácie a tvorby osteoklastov.

Na preskúmanie presných mechanizmov sú však potrebné ďalšie štúdieakteozidpôsobí ako antiresorpčné činidlo prostredníctvom modulácie Ca2 plus homeostázy. Na záver naše súčasné zistenia ukazujú, žeakteozidinhibuje RANKL-indukovanú diferenciáciu osteoklastov od BMM a RAW264.7 makrofágov a potláča kostnú resorpciu zrelými osteoklastmi.akteozidtiež zabraňuje RANKL-indukovanej aktivácii troch dobre známych MAPK a transkripčných faktorov, ako sú NF-kB, c-Fos a NFATc1, ako aj produkcii zápalových cytokínov, ako sú TNF-a, IL-1b, a IL-6.

Okrem toho orálne podávanieakteozidzmierňuje osteoporózu vyvolanú ovariektómiou, hoci neovplyvňuje osteoblastogenézu z buniek kostnej drene. Súhrnne tieto zistenia naznačujú, že strana CTE má prospešné úlohy pri znižovaní tvorby a aktivity osteoklastov ako silného antiresorpčného činidla.

podporujúce informácie

Obrázok S1 Chemická štruktúra akteozidu. (TIF)

Obrázok S2 Akteozid zabraňuje tvorbe jamiek indukovanej RANKL v BMM.

A BMM boli vopred ošetrené uvedenými dávkami akteozidu počas 2 hodín v kosťou potiahnutých 24-jamkových platniach a stimulované 50 ng/ml M-CSF a 10{{15} } ng/ml RANKL počas 7 dní. Tvorba jamiek bola pozorovaná pod optickou mikroskopiou. B, BMM sa kultivovali s M-CSF a RANKL v prítomnosti rôznych koncentrácií akteozidov (0–20 mM) a o 7 dní neskôr sa resorbovaná plocha kvantifikovala z 3 nezávislých experimentov a vyjadrila sa ako percento kontroly (n=4 na experiment). *p,0.05, **p,0.01 a ***p,0,001 vs. bunky kultivované s M-CSF a poradie. (TIF) Obrázok S3 Akteozid tlmí produkciu zápalových cytokínov v RANKL-stimulovaných RAW264.7 bunkách. Bunky boli vopred ošetrené zvyšujúcimi sa koncentráciami (0–10 mM) akteozidu počas 2 hodín, po čom nasledovala stimulácia 100 ng / ml RANKL počas 48 hodín. Hladiny TNF-a, IL-1b a IL-6 boli stanovené pomocou súprav ELISA. ***p,0,001 vs. bunky bez RANKL a akteozidu. #p,0,05 a ##p,0,01 vs. bunky stimulované len RANKL.

Referencie

1. Rho J, Takami M, Choi Y (2004) Osteoimunológia: interakcie imunitného a kostného systému. Molekuly a bunky 17: 1–9.

2. Del Fattore A, Capannolo M, Rucci N (2010) Kosť a kostná dreň: ten istý orgán. Archives of Biochemistry Biophysics 503: 28–34.

3. Rachner TD, Khosla S, Hofbauer LC (2011) Osteoporóza: teraz a budúcnosť. Lancet 377: 1276–1287.

4. Sturge J, Caley MP, Waxman J (2011) Kostné metastázy pri rakovine prostaty: vznikajúce terapeutické stratégie. Nature Reviews Clinical Oncology 8: 357–368.

5. Goltzman D (2002) Objavy, drogy a poruchy kostry. Nature Reviews Drug Discovery 1: 784–796.

6. Rodan GA, Martin TJ (2002) Terapeutické prístupy k ochoreniam kostí. Science 289: 1508–1514.

7. Lee JH, Jin H, Shim HE, Kim HN, Ha H a kol. (2010) Epigalokatechín-3- galát inhibuje osteoklastogenézu znížením expresie c-Fos a potlačením signálu jadrového faktora-kappaB. Molecular Pharmacology 77: 17–25.

8. Kim HN, Lee JH, Jin WJ, Ko S, Jung K, a kol. (2012) MS-275, inhibítor benzamidovej históndeacetylázy, zabraňuje osteoklastogenéze znížením expresie c-Fos a potláča stratu kostnej hmoty u myší. European Journal of Pharmacology 691: 69–76.

9. Kim T, Ha H, Shim KS, Cho WK, Ma JY (2013) Anti-osteoporotický účinok Yijung-tang v modeli potkanov s ovariektómiou sprostredkovaný inhibíciou diferenciácie osteoklastov. Journal of Ethnopharmacology 146: 83–89.

10. Nakanishi A, Litsuka N, Tsukamoto J (2013) Rybí olej potláča kostnú resorpciu inhibíciou osteoklastogenézy prostredníctvom zníženej expresie M-CSF, PU.1, MITF a RANK u potkanov po ovariektómii. Molecular Medicine Reports 7: 1896–1903.

11. Bar-Shavit Z (2007) Osteoklast: viacjadrová osteoimunitná bunka, ktorá má hematopoetický pôvod a resorbuje kosť. Journal of Cellular Biochemistry 102: 1130–1139.

12. Takahashi N, Maeda K, Ishihara A, Uehara S, Kobayashi Y (2011) Regulačný mechanizmus osteoklastogenézy signálmi RANKL a Wnt. Frontiers in Bioscience 16: 21–30.

13. Jules J, Zhang P, Ashley JW, Wei S, Shi Z a kol. (2012) Molekulárny základ požiadavky receptorového aktivátora signalizácie jadrového faktora-kB pre interleukínom 1- sprostredkovanú osteoklastogenézu. The Journal of Biological Chemistry 287: 15728 – 15738.

14. Li C, Yang Z, Li Z,Ma Y, Zhang L, a kol. (2011) Kyselina maslínová potláča osteoklastogenézu a zabraňuje strate kostnej hmoty vyvolanej ovariektómiou reguláciou signálnych dráh NF-kB a MAPK sprostredkovaných RANKL. Journal of Bone and Mineral Research 26: 644–656.

15. Tomoda M, Miyamoto H, Shimizu N (1994) Štrukturálne vlastnosti a antikomplementárna aktivita rehmannanu SA, polysacharidu z koreňaRehmannia glutinosa. Chemical and Pharmaceutical Bulletin (Tokio) 42: 1666 – 1668.

16. Kim H, Lee E, Lee S, Shin T, Kim Y a kol. (1998) Effect ofRehmannia glutinosa na alergickú reakciu okamžitého typu. International Journal of Immunopharmacology 20: 231–240.

17. Schapoval EE, Vargas MR, Chaves CG, Bridi R, Zuanazzi JA, et al. (1998) Protizápalové a antinociceptívne aktivity extraktov a izolovaných zlúčenín zStachytarpheta cayennensis. Journal of Ethnopharmacology 60: 53–59.

18. Xiong Q, Hase K, Tezuka Y, Tani T, Namba T a kol. (1998) Hepatoprotektívna aktivita fenyletanoidov z Cistanche deserticola.Planta Medica 64: 120–125.

19. Chun JC, Kim JC, Hwang IT, Kim SE (2002) Akteozid z r.Rehmannia glutinosaničí aktivitu parakvátuCucumis sativus. Biochémia a fyziológia pesticídov 72: 153–159.

20. Kim SS, Son YO, Chun JC, Kim SE, Chung GH, a kol. (2005) Antioxidačná vlastnosť aktívnej zložky purifikovanej z listov paraquat-tolerantnejRehmannia glutinosa. Redoxná správa 10: 311–318.

21. Son YO, Lee SA, Kim SS, Jang YS, Chun JC, et al. (2011) Akteozid inhibuje melanogenézu v bunkách B16F10 prostredníctvom aktivácie ERK a down-regulácie tyrozinázy. The Journal of Pharmacy and Pharmacology 63: 1309–1319.

22. Yu JY, Lee SY, Son YO, Shi X, Park SS a kol. (2012) Nepretržitá prítomnosť H₂O₂indukuje mitochondriálne sprostredkovanú inhibíciu rastu nezávislú od MAPK a kaspázy a cytotoxicitu v ľudských gingiválnych fibroblastoch. Toxicology In Vitro 26: 561–570.

23. Lu J, Yu JY, Lim SS, Son YO, Kim DH a kol. (2013) Bunkové mechanizmy cytotoxických účinkov metabolitov zearalenónu a-zearalenónu a b-zearalenónu na makrofágy RAW264.7. Toxicology In Vitro 27: 1007–1017.

24. Ha H, Kwak HB, Lee SW, Jin HM, Kim HM a kol. (2004) Reaktívne formy kyslíka sprostredkúvajú signalizáciu RANK v osteoklastoch. Experimental Cell Research 301: 119–127.

25. Cho ES, Kim MK, Son YO, Lee KS, Park SM a kol. (2012) Účinky rosiglitazónu na osteoblastickú diferenciáciu, tvorbu osteoklastov a kostnú resorpciu. Molecules and Cells 33: 173–181.

26. Syn YO, Jang YS, Heo JS, Chung WT, Choi KC a kol. (2009) Faktor indukujúci apoptózu hrá rozhodujúcu úlohu pri pyknotickej bunkovej smrti nezávislej od kaspázy v bunkách vystavených peroxidu vodíka. Apoptosis 14: 796-808.

27. Kook SH, Jeon YM, Park S, Lee JC (2013) Parodontálne fibroblasty modulujú proliferáciu a osteogénnu diferenciáciu embryonálnych kmeňových buniek prostredníctvom produkcie fibroblastových rastových faktorov. Journal of Periodontology In Press

28. Qi W, Yan YB, Lei W, Wu ZX, Zhang Y a kol. (2012) Prevencia osteoporózy z nepoužívania u potkanovCordyceps Sinensisextrakt. Osteoporosis International 23: 2347–2357.

29. Ikeda F, Nishimura R, Matsubara T, Tanaka S, Inoue J a kol. (2004) Kritické úlohy signalizácie c-Jun v regulácii rodiny NFAT a RANKL-regulovaná diferenciácia osteoklastov. The Journal of Clinical Investigation 114: 475–484.

30. Tsai HY, Lin HY, Fong YC, Wu JB, Chen YF a kol. (2008) Paeonol inhibuje RANKL-indukovanú osteoklastogenézu inhibíciou ERK, p38 a NF-kappaB dráhy. European Journal of Pharmacology 588: 124–133.

31. Kim JH, Kim K, Jin HM, Song I, Youn BU a kol. (2009) Silibinín inhibuje diferenciáciu osteoblastov sprostredkovanú členmi rodiny TNF. Molekuly a bunky 28: 201–207.

32. Napetschnig J, Wu H (2013) Molekulárny základ NF-kB signalizácie. Annual Review of Biophysics 42: 443–468.

33. Franzoso G, Carlson L, Xing L, Poljak L, Shores EW a kol. (1997) Požiadavka na NF-kappaB pri vývoji osteoklastov a B-buniek. Gény a vývoj 11: 3482–3496.

34. Iotsova V, Caamano J, Loy J, Yang Y, Lewin A a kol. (1997) Osteopetróza u myší bez NF-kappaB1 a NF-kappaB2. Nature Medicine 3: 1285–1289.

35. Teitelbaum SL (2004) RANKING c-Jun vo vývoji osteoklastov. The Journal of Clinical Investigation 114: 463–465.

36. Takayanagi H (2005) Mechanistický pohľad na diferenciáciu osteoklastov v osteoimunológii. Journal of Molecular Medicine (Berl) 83: 170–179.

37. Cho ES, Lee KS, Son YO, Jang YS, Lee SY, et al. (2010) Kompresívna mechanická sila zvyšuje osteoklastogenézu makrofágmi kostnej drene prostredníctvom aktivácie signalizácie sprostredkovanej c-Fms. Journal of Cellular Biochemistry 111: 1260–1269.

38. Lorenzo JA, Naprta A, Rao Y, Alander C, Glaccum M, et al. (1998) Myši, ktorým chýba interleukínový-1 receptor typu I, nestrácajú kostnú hmotu po ovariektómii. Endokrinológia 139: 3022–3025.

39. Abramson SB, Amin A (2002) Blokovanie účinkov IL-1 pri reumatoidnej artritíde chráni kosť a chrupavku. Reumatológia (Oxford) 41: 972–980.

40. Hwang JM, Yu JY, Jang YO, Kim BT, Hwang KJ a kol. (2010) Zlúčenina fenetylmočoviny fenolovej kyseliny inhibuje lipopolysacharidmi indukovanú produkciu oxidu dusnatého a prozápalových cytokínov v bunkovej kultúre. International Immunopharmacology 10: 526–532.

41. Fang M, Lee SY, Park SM, Choi KC, Lee YJ a kol. (2011) Protizápalový potenciálPhaseolus calcaratus Roxburgh, orientálny liek, na makrofágoch RAW 264.7 stimulovaných LPS. The Journal of Pharmacy and Pharmacology 63: 120–128.

42. Lee JW, Ahn JY, Hasegawa S, Cha BY, Yonezawa T, a kol. (2009) Inhibičný účinok luteolínu na diferenciáciu a funkciu osteoklastov. Cytotechnology 61: 125–134.

43. Cosentino-Gomes D, Rocco-Machado N, Meyer-Fernandes JR (2012) Bunková signalizácia prostredníctvom oxidácie a aktivácie proteínkinázy C. International of Journal Molecular Sciences 13: 10697–10721.

44. Lee JC, Son YO, Pratheeshkumar P, Shi X (2012) Oxidačný stres a karcinogenéza kovov. Free Radical Biology and Medicine 53: 742–757.

45. Nguyen Ngoc TD, Son YO, Lim SS, Shi X, Kim JG a kol. (2012) Fluorid sodný indukuje apoptózu v myších embryonálnych kmeňových bunkách prostredníctvom ROS-dependentných a kaspázových a JNK-sprostredkovaných dráh. Toxicology and Applied Pharmacology 259: 329–337.

46. ​​Motojima H, Villareal MO, Iijima R, Han J, Isoda H (2013) Akteozid inhibuje alergiu typu I prostredníctvom down-regulácie signálnych dráh Ca/NFAT a JNK MAPK v bazofilných bunkách. Journal of Natural Medicines In Press

47. Caudrillier A, Hurtel-Lemaire AS, Wattel A, Cournarie F, Godin C, a kol. (2010) Stroncium ranelát znižuje aktivátor receptora nukleárneho faktora-kB ligandom indukovanej osteoklastickej diferenciácie in vitro: zapojenie receptora citlivého na vápnik. Molecular Pharmacology 78: 569-576.