Časť 2: Fenyletanolglykozidový lipozóm inhibuje aktiváciu HSC indukovanú PDGF prostredníctvom regulácie signálnej dráhy FAKPI3KAkt
Mar 06, 2022
Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com
4. Materiály a metódy
4.1. Materiály
CPhGs (fenyletanoidový glykozid z cistanche)boli zakúpené od Hetian Di Chen Medical Biotechnology Co., Ltd. (Xinjiang, Čína). Obsahechinaceabolo viac ako 35 percent a akteozidu bolo viac ako 16 percent . Lecitín bol zakúpený od Shanghai Lanji Technology Co., Ltd. (Shanghai, Čína). 1,2-dipalmitoyl-sn-glycerol-3-fosfocholín (DPPC) a cholesterol dodal Avanti Polar Lipid Inc. (Birmingham, AL, USA). Imortalizovanú hepatickú hviezdicovú bunku potkana poskytla spoločnosť Shanghai Zhongqiaoxinzhou Biotech (Shanghai, Čína). Dulbeccovo modifikované Eaglovo médium (DMEM) bolo zakúpené od Thermo Fisher Scientific, Inc. (Waltham, MA, USA). Fetálne bovinné sérum (FBS) bolo zakúpené od Gibco Life Technologies (Waltham, MA, USA). Penicilín (100 µg/ml) a streptomycín (100 µg/ml) boli produkty Thermo Fisher Scientific, Inc. MTT [3-(4,5-dimetyltiazol-2-yl){ {13}},5-difenyltetrazóliumbromid] (5 mg/ml) bol zakúpený od Sigma (Oakville, ON, Kanada). Aktivita LDH bola hodnotená pomocou testovacej súpravy LDH od Beijing Solar Science & Technology Co., Ltd. (Peking, Čína). FITC Annexin V Apoptosis Detection Kit I a propidium jodid (PI)/RNázový farbiaci pufor boli všetky zakúpené od BD Biosciences (San Diego, CA, USA) a rrPDGF-BB bol poskytnutý R&D Systems (Minneapolis, MN, USA). Činidlo TRIzol bolo zakúpené od Thermo Fisher Scientific, Inc. Súprava RevertAid First Strand cDNA Synthesis bola produktom Thermo Fisher Scientific, Inc. (Vilnius, Litva). TB Green Premix Ex Taq TM II bol zakúpený od Takara (Dalian, Čína). Pyrolýzny roztok Ripa poskytol Thermo Fisher Scientific, Inc. Inhibítor proteázy fenylmetylsulfonylfluorid a zmes širokospektrálnych inhibítorov fosfatázy boli zakúpené od Boster Biological Technology Co., Ltd. (Wuhan, Čína). Proteínové pásy boli vizualizované pomocou Pierce™ ECL Western blotting Substrate, ktorý poskytol Invitrogen (Carlsbad, CA, USA). Kozí anti-králičí IgG značiaci chrenový enzým bol zakúpený od Zhongshan JinQiao Shanghai Co., Ltd. (Shanghai, Čína). Súpravu Super Signal West Femto Trial Kit dodala spoločnosť Thermo Fisher Scientific, Inc. Králičie anti-p-aktín, a-SMA, kolagén-1, FAK, PI3K, fosfo-PI3K, Akt a protilátka fosfo-Akt boli všetky zakúpené od Beijing Bioss Antibodies Biological Co., Ltd. (Peking, Čína). X-3-FAK a X-3-NC boli zakúpené od Shanghai GenePharma Co., Ltd. (Shanghai, Čína). Lipofectamine 2000 poskytla spoločnosť Invitrogen.
4.2. Príprava CPhG lipozómov
Lecitín, DPPC a cholesterol (1:2:2, m/m/m) sa rozpustili v zmesi chloroformu a metanolu (2:1 obj./obj.), rotovali za vzniku filmu pri 49-50 stupňoch, aCPhG(fenyletanoidový glykozid z cistanche)(250 µg/ml). Reaktívny roztok sa kontinuálne otáčal a hydratoval a fosfolipidová membrána sa preniesla do vody za vzniku CPG lipozómov. Proces zapuzdrených lipozómov sa opakoval podľa vyššie uvedených metód. Na získanie jednotného lipozómu sa zapuzdrený lipozóm 5-krát extrudoval s 0,45 µm mikroporéznou membránou a filtroval sa 18-20-krát s 0,22 µm membránou. CPG lipozómy sa skladovali pri 4 stupňoch. Distribúcia veľkosti častíc sa merala laserovým analyzátorom veľkosti častíc, tvar častíc sa pozoroval transmisnou elektrónovou mikroskopiou a náplň liečiva a účinnosť enkapsulácie sa stanovili pomocou HPLC.
4.3. Uvoľnenie in vitro z lipozómu CPG a CPhG(fenyletanoidový glykozid z cistanche)
Profil uvoľňovania in vitro CPG lipozómov aCPhG(fenyletanoidový glykozid z cistanche) sa uskutočnila pomocou dialyzačnej membránovej metódy. Celkom 5 ml každej vzorky sa prenieslo do dialyzačného vaku s 14,000 Da molekulovou hmotnosťou 任 Dialyzačný vak bol ponorený do 20{{10 }} ml tlmivého roztoku PBS (pH=6,0) vibrovalo pri 37 stupňoch. Uvoľňovacie médium (3 ml) sa odobralo a nahradilo izopyknickým roztokom PBS pufra (pH=6,0) v plánovaných časových intervaloch (0,5, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 24 a 48 h). Koncentrácie echinakozidu v CPG lipozómoch aCPhGv uvoľňovacom médiu boli stanovené pomocou
HPLC. Kumulatívne uvoľnenie ( percentá ) CPG lipozómov aCPhG(fenyletanoidový glykozid z cistanche) bol vypočítaný pomocou nasledujúcej rovnice (1):
kde Cn je koncentrácia liečiva v uvoľňovacom médiu v n-tom bode odberu vzoriek, V je objem uvoľneného média a W je celková dávka.
Na lepšie pochopenie charakteristiky uvoľňovania in vitroCPhG(fenyletanoidový glykozid z cistanche) lipozóm aCPhG, boli použité tri rôzne modely, aby vyhovovali získaným údajom o uvoľňovaní: (a) kinetický model nultého rádu, (b) kinetický model prvého rádu a (c) Higuchiho model uvedený v rovniciach (2)-(4) :
kde Mt/Mo je frakcia kurkumínu uvoľnená zo vzorky v čase t a k je konštanta uvoľňovania rôznych modelov. Korelačný koeficient sa vypočíta tak, aby ilustroval mieru prispôsobenia medzi modelom uvoľňovania a údajmi.
4.4. Cytotoxicita
Pre HSC bola hustota 1 x 105 buniek/ml nanesená na 96-jamkové platne a ponechaná rásť cez noc pri 37 stupňoch v 5% CO2 inkubátore. Vitalita buniek bola testovaná na širokej škáleCPhGkoncentrácie lipozómov (117,79, 58,90, 29,45, 14,72, 7,36, 3,68, 1,84, 0,92 a 0,46 µg/ml) na detekciu vitality testovaných buniek a výpočet hodnôt IC50. Potom sa bunky inkubovali pri 37 stupňoch počas 4 hodín s 20 μl MTT (5 mg/ml v roztoku PBS). Purpurový produkt MTT sa rozpustil v 150 ul DMSO a na meranie absorbéra pri 490 nm sa použil Multiskan Spectrum Absorbance Reader (Fisher Scientific, Inc., Waltham, MA, USA). Na výpočet percenta životaschopnosti buniek sa použil nasledujúci vzorec (Rovnica (5)):
4.5. Bunková toxicita CPhG lipozómov na HSC
Bunky sa naočkovali na 6-jamkové platne a toxicita HSC sa merala pomocou súpravy na detekciu LDH. Bunky boli nanesené v hustote 2 x 105 buniek/jamku na 6-jamkové platne pri 37 stupňoch v inkubátore s 5 percentami CO2. Po raste cez noc boli bunky ošetrené sCPhGlipozómy (29,45, 14,72 a 7,36 ng/ml). Súčasne sa udržiavala slepá kontrola (DEME médium). Po 24 hodinách boli bunky zozbierané trypsínom a centrifugáciou. Každá skupina buniek bola podávaná striktne v súlade s pokynmi súpravy. Potom sa vypočítala rýchlosť úniku LDH tekutiny z bunkovej kultúry.
4.6. Analýza apoptózy
Bunky sa kultivovali na 6-jamkových doštičkách s hustotou 2 x 105 buniek/jamku pri 37 stupňoch v inkubátore s 5 percentami CO2. Po raste cez noc boli bunky ošetrené sCPhGlipozómy (29,45, 14,72 a 7,36 ug/ml) a potom sa merala apoptóza HSC pomocou súpravy FITC Annexin V Apoptosis Detection Kit. Koncentrácie boli založené na IC50 stanovenom z testu cytotoxicity. Súčasne sa udržiavala slepá kontrola (DEME médium). Po 24 hodinách sa bunky zhromaždili trypsínom a centrifugáciou a premyli sa PBS a suspendovali sa v 500 ul väzbového pufra. Potom sa bunky zafarbili 5 ul annexinu V-FITC a 5 ul PE. Bunky sa inkubovali pri teplote miestnosti počas 30 minút v tme a apoptotická rýchlosť sa merala pomocou FACSCalibur Cytometer (Becton Dickinson, San Jose, CA, USA).
4.7. Analýza zastavenia bunkového cyklu
HSC (2 x 105 buniek/2 ml/jamka) boli ošetrené počas 24 hodín sCPhGlipozómy pri 29,45, 14,72 a 7,36 ^g/ml v 6-jamkových doštičkách. Súčasne sa udržiavala slepá kontrola (DEME médium). Bunky boli zozbierané a premyté 1 ml PBS a fixované 75 percentným etanolom cez noc pri 4 stupňoch. Bunky sa potom centrifugovali a resuspendovali v 5 00 roztokoch propidium jodidu (PI)/RNázového farbiaceho pufra pri 37 stupňoch počas 30 minút v tme. Nakoniec sa bunky zmerali pomocou FACSCalibur Cytometer (Becton Dickinson). Podiely buniek vo fázach GO/G1, S a G2/M bunkového cyklu sa analyzovali pomocou softvéru FACS Diva (Becton Dickinson).
4.8. ÚčinokCPhG(fenyletanoidový glykozid z cistanche) Lipozóm na PDGF sprostredkovanej FAK a PI3K/Akt signálnej dráhe
4.8.1. Proliferation Assay
HSC línie (1 X 105 buniek/ml) sa umiestnili na 96-jamkové platne a nechali sa rásť cez noc pri 37 stupňoch v 5% CO2 inkubátore. Po 24 hodinách kultivácie buniek boli bunky náhodne rozdelené do nasledujúcich piatich skupín: Slepá kontrola (kultivovaná v DMEM obsahujúcom iba 10 percent FBS), PDGF-BB (kultivovaná v DMEM obsahujúcom 50 ug/l PDGF-BB), aCPhGlipozómová intervencia (stimulovaná médiom obsahujúcim 50 昭/ml PDGF-BB 24 h). Potom boli bunky ošetrené 29,45, 14,72 a 7,36 Rg/ml CPhG lipozómov. Bunky sa kontinuálne kultivovali počas 24 hodín, 48 hodín a 72 hodín v inkubátore pri 37 stupňoch počas 4 hodín s 20 ul MTT (5 mg/ml v roztoku PBS). Purpurový MTT-formazanový produkt sa rozpustil v 150 ul DMSO a odhadol sa meraním absorbancie pri 490 nm v Multiskan Spectrum Absorbance Reader (Thermo Fisher Scientific, Inc.) a vypočítalo sa IC50. Štvornásobné vzorky boli testované pre každú koncentráciu v štyroch nezávislých experimentoch. Nasledovný vzorec (Rovnica (6)) vypočítal percento životaschopnosti buniek:
4.8.2. Kvantitatívna polymerázová reťazová reakcia v reálnom čase (qRT-PCR)
Bunky sa naočkovali do {{0}}jamkových platní s hustotou 1 x 105 buniek/ml. Táto metóda zoskupovania je rovnaká ako predchádzajúca. Po 24 hodinách sa celková RNA extrahovala z kultivovaných buniek pomocou činidla TRIzol. Koncentrácia a čistota RNA sa merali pri 260/280 nm pomocou ultrafialového spektrofotometra podľa štandardného pomeru OD260/OD280 1.8-2,0. Reverzné transkripčné reakcie boli reverzne transkribované z RNA pomocou súpravy RevertAid First Strand cDNA Synthesis. Na meranie génovej expresie sa použil TB Green Premix Ex TaqTM II. qRT-PCR sa uskutočnilo pomocou systému ABI QuantStudio™6 Flex Real-Time PCR (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). Sekvencie primérov boli syntetizované spoločnosťou Sangon Biotech (Shanghai, Čína) (tabuľka 4).
4.8.3. Western Blot analýza
Celkové proteíny extrahované z HSC v rôznych skupinách boli pripravené tak, ako je opísané vyššie. V stručnosti, podobné proteíny boli separované pomocou 10-percentnej sodnej soli dodecylsulfát-polyakrylamidovej gélovej elektroforézy (SDS-PAGE) a potom prenesené na polyvinylidénfluoridové (PVDF) membrány (Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Bádensko-Württembersko, Nemecko). Potom boli PVDF membrány blokované v 3 percentách BSA a inkubované cez noc pri 4 °C s primárnymi protilátkami. Nasledujúci deň sa pridal kozí anti-králičí IgG značený HRP (1:25, 000 riedenie; 1 h). Proteínové pásy boli vizualizované pomocou Pierce™ ECL Western blotting substrátu a zobrazené pomocou FluorChem E Imaging System (Protein Simple, San Francisco, CA, USA), ktoré boli normalizované pomocou -aktínu ako vnútornej kontroly.
4.8.4. Experimenty s nadmernou expresiou FAK
Bunky boli rozdelené do kontrolnej skupiny s normálnym médiom, PDGF-BB stimulačnej skupiny, PDGF-BB stimulačnej plus X-3-FAK skupiny, PDGF-BB stimulačnej plus X-3-NC skupiny, PDGF -BB stimulácia plus X-3-FAK plusCPhGlipozómová skupina a stimulácia rrPDGF-BB plus X-3-NC plusCPhGskupina lipozómov. HSC línie (1 x 105 buniek/ml) sa umiestnili na 6-jamkové platne a nechali sa rásť cez noc pri 37 °C v inkubátore s 5 % CO2. Nasledujúci deň boli pridané bunky PDGF-BB (kultivované v DMEM obsahujúcom 50 ug/l PDGF-BB) a kultivované. Na tretí deň sa pEX-3-FAK a X-3-NC zriedili v médiu bez antibiotík, dobre sa zmiešali s lipofektamínom 2000 a pred pridaním sa nechali stáť pri 37 ◦C 20 minút. do každej jamky buniek pri 37 ◦C. Po inkubácii počas 5 hodín sa médium obsahujúce 10 percent séra nahradilo na 48 hodín a na piaty deň sa médium nahradilo koncentráciou 29,45 ug/ml CPhG lipozómu na 24 hodín. Potom sa každá jamka odobrala na druhý, tretí, piaty a šiesty deň a detegovali sa expresie génových proteínov FAK, PI3K, Akt, p-PI3K a p-Akt.
4.9. Štatistická analýza
Údaje boli vyjadrené ako priemer ± štandardná odchýlka (SD). Na štatistické analýzy bol použitý softvér SPSS 16.{1}} (IBM, New York, NY, USA). Významnosť rozdielu bola vypočítaná jednosmerným testom ANOVA a následne testom LSD. Rovnica rozpúšťania liečiva bola prispôsobená Origin 8.5 (OriginLab, Northampton, MA, USA).
5. Závery
Na záver, naše výsledky to dokazujúCPhG(fenyletanoidový glykozid z cistanche) lipozómy významne inhibujú aktiváciu HSC, výrazne zmierňujú rozvoj fibrózy pečene zvýšením apoptózy a reguláciou bunkového cyklu v HSC. Inhibícia aktivácie signalizačných dráh FAK/PI3K/Akt môže byť základným mechanizmom, ktorým saCPhGlipozómy chránia pred chronickým ochorením pečene spojeným s fibrózou. Tieto zistenia poskytujú nový pohľad na mechanizmy tejto novej liekovej formulácie ako antifibrogénneho kandidáta na budúcu liečbu fibrózy pečene. Základné mechanizmy sú však zložitejšie, ako je tu opísané, a naše výsledky nevylučujú možné zapojenie iných zariadení spôsobenéCPhGlipozómy na liečbu fibrózy pečene.
Príspevky autora:TL, JZ, S.-PY, LM a S.-LZ koncipovali a navrhli experimenty. S.-LZ, S.-PY, TL, JZ, X.-TM a X.-YY analyzovali dáta. Rukopis napísali S.-LZ a JZ. TL, LM a JZ posúdili rukopis. Všetci autori prečítali a schválili konečný rukopis.
Financovanie:Tento výskum bol financovaný Národnou nadáciou pre prírodné vedy v Číne, číslo grantu 81560628.
Poďakovanie:Táto práca bola finančne podporená Národnou nadáciou pre prírodné vedy v Číne (č. 8156140127). Autori by chceli vyjadriť svoje úprimné poďakovanie Jun Zhao a Xin Wang za ich zlepšenie pri písaní tohto článku.
Konflikt záujmov:Autori neuvádzajú žiadne vyhlásenia o záujme.
Referencie
1. Zhang, H.; Sun, D.; Wang, G.; Cui, S.; Field, RA; Li, J.; Zang, Y. Alogliptin zmierňuje fibrózu pečene prostredníctvom potlačenia aktivovaných pečeňových hviezdicových buniek. Biochem. Biophys. Res. komun. 2019 511, 387-393. [CrossRef]
2. Parola, M.; Pinzani, M. Fibróza pečene: Patofyziológia, patogenetické ciele a klinické problémy. Mol. Aspects Med. 2019, 65, 37-55. [CrossRef] [PubMed]
3. Wu, YJ; Wu, YC; Chen, IF; Wu, YL; Chuang, CW; Huang, HH; Kuo, SM Reparatívne účinky astaxantín-hyalurónových nanoagregátov proti fibróze a nekróze pečene indukovanej retrorzínom-CCl(4) Molekuly 2018, 23, 726. [CrossRef] [PubMed]
4. Wang, Y.; Sun, Y.; Zuo, L.; Wang, Y.; Huang, Y. ASICla podporuje aktiváciu pečeňových hviezdicových buniek indukovanú vysokou glukózou a PDGF indukciou autofágie prostredníctvom signálnej dráhy CaMKKp/ERK. Toxicol. Lett. 2019, 300,1-9. [CrossRef] [PubMed]
5. Gupta, G.; Khadem, F.; Uzonna, JE Úloha cytokínov odvodených z pečeňových hviezdicových buniek (HSC) pri zápale pečene a imunite. Cytokín 2018. [CrossRef] [PubMed]
6. Fu, C.; Li, J.; Aspire, A.; Xia, L.; Yang, Y; Chen, Q.; Lv, J.; Wang, X.; Li, J.Cistanche tubulosafenyletanoidové glykozidy indukujú apoptózu v Eca{0}} bunkách cestou závislou od mitochondrií. Oncol. Lett. 2019, 17, 303-313. [CrossRef] [PubMed]
7. Vy, SP; Ma, L.; Zhao, J.; Zhang, SL; Liu, T. Fenyletanol glykozidy zCistanche tubulosaPotlačiť aktiváciu pečeňových hviezdicových buniek a blokovať vedenie signálnych dráh v TGF-beta1/smad ako potenciálne činidlá proti fibróze pečene. Molekuly 2016,21,102. [CrossRef] [PubMed]
8. Vy, SP; Zhao, J.; Ma, L.; Tudimat, M.; Zhang, SL; Liu, T. Preventívne účinky fenyletanoidových glykozidov zCistanche tubulosana pečeňovú fibrózu u potkanov indukovanú hovädzím sérovým albumínom. DARU J. Pharm. Sci. 2015, 23, 52. [CrossRef] [PubMed]
9. Gao, XL; Wang, M.; Liu, L. Účinnosť pasce a absorpcia štyroch druhov prolipozómov. J. Xin Jiang Med. Univ. 2007, 8, 787-790.
10. Li, PY; Du, SY; Lu, Y.; Chen, XN Bio-adhezívny systém dodávania liečiv a jeho aplikácia v tradičnej čínskej medicíne. Brada. J. Mater. Medica 2017, 42, 4687-4693.
11. Li, Y.; Lu, A.; Long, M.; Cui, L.; Chen, Z.; Zhu, L. Nitroimidazolový derivát začlenil lipozómy na dodávanie liečiva spúšťané hypoxiou a zvýšenú terapeutickú účinnosť v nádorových xenoimplantátoch odvodených od pacienta. Acta Biomater. 2019, 83, 334-348. [CrossRef] [PubMed]
12. Tang, H.-X.; Zhao, T.-W.; Zheng, T.; Sheng, Y.-J.; Zheng, H.-S.; Zhang, Y.-S. Lipozómový systém na dodávanie liečiv na pečeň a jeho výskumný pokrok pri ochoreniach pečene. Svetová brada. J. Digest. 2016, 24,4238. [CrossRef]
13. Zhou, BH; Tan, PP; Jia, LS; Zhao, WP; Wang, JC; Wang, HW PI3K/AKT zapojenie signálnej dráhy do apoptózy indukovanej fluoridom v bunkách C2C12. Chemosphere 2018, 199, 297-302. [CrossRef] [PubMed]
14. Jia, Y.; Guan, Q.; Guo, Y.; Du, C. Echinakozid stimuluje bunkovú proliferáciu a bráni bunkovej apoptóze v intestinálnych epiteliálnych bunkách MODE-K up-reguláciou expresie transformujúceho rastového faktora-p1. J. Pharm. Sci. 2012, 118, 99-108. [CrossRef]
15. Lin, L.-W.; Hsieh, M.-T.; Tsai, F.-H.; Wang, W.-H.; Wu, C.-R. Antinociceptívna a protizápalová aktivita spôsobenáCistanche deserticolau hlodavcov. J. Ethnopharmacol. 2002, 83, 177-182. [CrossRef]
16. Li, T.-M.; Huang, H.-C.; Su, C.-M.; Ho, T.-Y.; Wu, C.-M.; Chen, W.-C.; Fong, Y.-C.; Tang, C.-H.Cistanche deserticolaextrakt zvyšuje tvorbu kostí v osteoblastoch. J. Pharm. Pharmacol. 2012, 64, 897-907. [CrossRef] [PubMed]
17. Liang, H.; Yu, F.; Tong, Z.; Huang, Z. ÚčinokCistanches HerbaVodný extrakt pri strate kostí u potkanov s ovariektómiou. Int. J. Mol. Sci. 2011, 12, 5060-5069. [CrossRef]
18. Lu, M.-C. Štúdie o sedatívnom účinkuCistanche deserticola.J. Ethnopharmacol. 1998, 59, 161-165. [CrossRef]
19. Cai, R.-L.; Yang, M.-H.; Shi, Y.; Chen, J.; Li, Y.-C.; Qi, Y. Protiúnavová aktivita extraktu bohatého na fenyletanoidy zCistanche deserticola. Phytother. Res. 2010, 24, 313-315. [CrossRef]
20. Geng, X.; Tian, X.; Tu, P.; Pu, X. Neuroprotektívne účinky echinakozidu v myšom MPTP modeli Parkinsonovej choroby. Eur. J. Pharmacol. 2007, 564, 66-74. [CrossRef]
21. Morikawa, T.; Pan, Y.; Ninomiya, K.; Imura, K.; Matsuda, H.; Yoshikawa, M.; Yuan, D.; Muraoka, O. Acylované fenyletanoidné aminoglykozidy s hepatoprotektívnou aktivitou z púštnej rastliny Cistanche tubulosa1. Bioorg. Med. Chem. 2010, 18, 1882-1890. [CrossRef] [PubMed]
22. Yang, F.-R.; Wen, D.-S.; Fang, B.-W.; Lou, J.-S.; Meng, L. Prevencia extraktu Cistanche salsa pri fibróze pečene indukovanej chloridom uhličitým u potkanov. Brada. Herbal Med. 2013, 5,199-204.
23. Li, M.; Li, Y.; Liu, W.; Li, R.; Qin, C.; Liu, N.; Han, J. Príprava Cistanche fenyletanoidných glykozidov tekutých prolipo some: Optimalizovaná formulácia, charakterizácia a prolipo niektoré kvapkajúce pilulky in vitro a in vivo hodnotenie. Eur. J. Pharm. Sci. 2016, 93, 224-232. [CrossRef] [PubMed]
24. Ergen, C.; Niemietz, PM; Heymann, F.; Bauer, M.; Gremse, F.; Pola, R.; van Bloois, L.; Storm, G.; Kiessling, F.; Trautwein, C.; a kol. Fibróza pečene ovplyvňuje vlastnosti zacielenia systémov na dodávanie liečiv na podskupiny makrofágov in vivo. Biomateriály 2019, 206, 49-60. [CrossRef] [PubMed]
25. Li, M.; Du, C.; Guo, N.; Teng, Y.; Meng, X.; Sun, H.; Li, S.; Áno.; Gallons, H. Dizajn zloženia a medicínska aplikácia lipozómov. Eur. J. Med. Chem. 2019 164, 640-653. [CrossRef]
26. Paliwal, S.; Tilak, A.; Sharma, J.; Dave, V.; Sharma, S.; Verma, K.; Tak, K.; Reddy, KR; Sadhu, V. Flurbiprofénom naplnené etanolické lipozómové častice pre biomedicínske aplikácie. J. Microbiol. Metódy 2019, 161, 18-27. [CrossRef] [PubMed]
27. Sakai-Kato, K.; Yoshida, K.; Izutsu, K.-I. Účinok povrchového náboja na bunkovú internalizáciu lipozómov závislú od veľkosti. Chem. Phys. Lipidy 2019. [CrossRef] [PubMed]
28. Zhu, J.; Wang, Q.; Li, H.; Zhang, H.; Zhu, Y.; Omari-Siaw, E.; Sun, C.; Wei, Q.; Deng, W.; Yu, J.; a kol. Galangínom nabité lipozómy zamerané na pečeň: Optimalizácia a hepatoprotektívna účinnosť. J. Drug Deliv. Sci. Technol. 2018, 46, 339-347. [CrossRef]
29. Ezhilarasan, D.; Sokal, E.; Najimi, M. Fibróza pečene: Je čas ísť s terapeutickými cieľmi špecifickými pre pečeňové hviezdicové bunky. Hepatobiliárna porucha pankreasu. Int. 2018, 17, 192-197. [CrossRef]
30. Moehrle, BM; Nattamai, K.; Brown, A.; Florian, MC; Ryan, M.; Vogel, M.; Bliederhaeuser, C.; Soller, K.; Prows, DR; Abdollahi, A. Mechanizmy špecifické pre kmeňové bunky zabezpečujú genomickú vernosť v rámci HSC a pri starnutí HSC. Cell Rep. 2015, 13, 2412-2424. [CrossRef]
31. Brea, R.; Motion, O.; Frances, D.; Garcia-Monzon, C.; Vargas, J.; Fernandez-Velasco, M.; Bosca, L.; Casado, M.; Martin-Sanz, P; Agra, N. PGE2 indukuje apoptózu pečeňových hviezdicových buniek a zmierňuje fibrózu pečene u myší znížením miR-23a-5p a miR{7}}a-5p. Biochim. Biophys. Acta Biophys. Vrátane Fotosyntéza. 2018,1864, 325-337. [CrossRef] [PubMed]
32. Lauridsen, FKB; Jensen, TL; Rapin, N.; Aslan, D.; Wilhelmson, AS; Pundhir, S.; Rehn, M.; Paul, F.; Giladi, A.; Hasemann, MS; a kol. Rozdiely v stave bunkového cyklu sú základom transkripčnej heterogenity v oddelení HSC. Cell Rep. 2018, 24, 766-780. [CrossRef] [PubMed]
33. El-Lakkany, NM; El-Maadawy, WH; Seif El-Din, SH; Hammam, OA; Mohamed, SH; Ezzat, SM; Safar, MM; Saleh, S. Kyselina rozmarínová zoslabuje pečeňovú fibrogenézu prostredníctvom potlačenia aktivácie/proliferácie pečeňových hviezdicových buniek a indukcie apoptózy. Ázijský Pac. J. Trop. Med. 2017, 10, 444-453. [CrossRef] [PubMed]
34. Chen, XX; Zhang, XY; Ding, YZ; Li, X.; Guan, XM; Li, H.; Cheng, M.; Cui, XD Účinky endotelových progenitorových buniek na proliferáciu a biologickú funkciu pečeňových hviezdicových buniek pri šmykovom strese. Brada. J. Appl. Physiol. 2018, 34, 404-407.
35. Zhang, R.; Lin, XH; Liu, HH; Ma, M.; Chen, J.; Chen, J.; Gao, DM; Cui, JF; Chen, RX Aktivované pečeňové hviezdicové bunky podporujú progresiu post-heat zvyškového hepatocelulárneho karcinómu z autofagického prežitia k proliferácii. Int. J. Hyperthermia 2019, 36, 253-263. [CrossRef] [PubMed]
36. Park, SY; Le, CT; Sung, KY; Choi, DH; Cho, EH sukcinát indukuje pečeňovú fibrogenézu podporou aktivácie, proliferácie a migrácie a inhibíciou apoptózy pečeňových hviezdicových buniek. Biochem. Biophys. Res. komun. 2018, 496, 673-678. [CrossRef] [PubMed]
37. Tsukada, S.; Parsons, CJ; Rippe, RA Mechanizmy fibrózy pečene. Clin. Chim. Acta 2006, 364, 33-60. [CrossRef]
38. Copple, BL; Roth, K. 2.16一Mechanizmy fibrózy pečene. In Comprehensive Toxicology, 3. vyd.; McQueen, CA, Ed.; Elsevier: Oxford, Spojené kráľovstvo, 2018; str. 397^08.
39. Breitkopf, K.; Roeyen, životopis; Sawitza, I.; Wickert, L.; Floege, J.; Gressner, AM Vzory expresie PDGF-A, -B, -C a -D a PDGF-receptorov a a |3 v aktivovaných potkaních pečeňových hviezdicových bunkách (HSC). Cytokine 2005, 31, 349-357. [CrossRef]
