Bieliaca kozmetika má veľký trhový rozsah a široké perspektívy rozvoja, zatiaľ čo bieliace produkty tradičnej čínskej medicíny boli vždy stredobodom výskumu. V tejto štúdii bol prvýkrát izolovaný a purifikovaný bieliaci aktívny extrakt Platycodon grandiflorum (PGE) a objasnený mechanizmus bieliacej aktivity a chemické zloženie PGE. Pomocou analýzy vysokoúčinnej kvapalinovej chromatografie-hmotnostnej spektrometrie (HPLC-MS) bolo identifikovaných celkom 45 zložiek, vrátane arbutínu, syringínu, kyseliny chlorogénovej, glykozidu E, platykodínu D3, baicalínu, platykodínu D, luteolínu. Miera vychytávania PGE voči voľným radikálom DPPH a ABTS bola 98,03 percenta a 84,30 percenta. Miera inhibície PGE voči tyrozináze bola až 97,71 percenta. PGE mal významné protizápalové účinky na makrofágy RAW264.7 stimulované lipopolysacharidom (LPS) a mal významné inhibičné účinky na tvorbu tyrozinázy a melanínu buniek B16F10 stimulovaných a-MSH. Výsledky ukázali, že PGE dosiahol synergický bieliaci účinok inhibíciou aktivácie voľných kyslíkových radikálov na tyrozináze, antioxidačným, protizápalovým účinkom, enzýmovou aktivitou a tvorbou melanínu. Ako bieliace činidlo extrahované z prírodných rastlín má PGE vynikajúci potenciál vo výskume a vývoji kozmetiky na bielenie rastlín, čo vytvára základ pre ďalší vývoj a využívanie zdrojov Platycodon grandiflorum a poskytuje teoretický základ pre vývoj zelenej a organickej bieliacej kozmetiky.
Podľa relevantných štúdiícistancheje obyčajná bylina, ktorá je známa ako "zázračná bylina, ktorá predlžuje život". Jeho hlavnou zložkou jecistanozid, ktorý má rôzne účinky ako naprantioxidant, aprotizápalovéa podpora imunitnej funkcie. Mechanizmus medzi cistanche abielenie kožespočíva v antioxidačnom účinku cistanche glykozidov. Melanín v ľudskej koži je produkovaný oxidáciou tyrozínu katalyzovanou otyrozinázaa oxidačná reakcia si vyžaduje účasť kyslíka, takže bezkyslíkaté radikály v tele sa stávajú dôležitým faktorom ovplyvňujúcim produkciu melanínu. Cistanche obsahuje cistanozid, ktorý je antioxidantom a môže tak znížiť tvorbu voľných radikálov v teleinhibícia produkcie melanínu.
Ďalšie informácie:
david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501
1. Úvod
V globálnom kozmetickom priemysle existuje množstvo druhov bieliacej funkčnej kozmetiky a očakáva sa, že podiel na trhu sa bude ďalej rozširovať. Na uspokojenie rastúceho dopytu po činidlách na bielenie pokožky v bieliacich kozmetických prípravkoch a na dosiahnutie účinku bielenia pokožky zaviedol kozmetický priemysel niekoľko chemických prísad, vrátane hydrochinónu, cysteínu, glutatiónu, vitamínu A a glukokortikoidu. Tieto zlúčeniny majú dobré bieliace účinky; niektoré z nich však majú toxické vedľajšie účinky; napríklad „rododendron“ spôsobuje biele škvrny na koži používateľa,1 „Hydrochinón“ má cytotoxické a mutagénne vlastnosti,2 „Glukokortikoid“ môže spôsobiť hormonálne závislú dermatitídu.3 V súčasnosti sa pridávanie týchto zložiek (rododendron, hydrochinón, glukokortikoid ) do kozmetiky nie je povolené. Účinok prípravku nie je jediným štandardom, ktorý spotrebiteľ pri kúpe kozmetiky zvažuje. V posledných rokoch dochádza k neustálemu výbuchu problémov s bezpečnosťou kozmetických výrobkov v snahe o zdravie. Vedci zistili, že bieliace účinné látky extrahované z prírodných bylín sú menej toxické a majú oveľa menej vedľajších účinkov. Čoraz väčší počet spotrebiteľov oceňuje bezpečnosť výrobkov. Okrem toho sa ekologické, ekologické a organické produkty stali populárnejšími, čo sa odráža v propagácii mnohých značiek priameho predaja. Preto sa výskum a objavovanie bezpečných a zdravých bieliacich zložiek starostlivosti o pleť stali trendom moderného vývoja. Použitie čínskych bylinných extraktov z prírodných rastlín ako surovín v kozmetike sa postupne stalo výskumným centrom vo vývoji produktov na bielenie a starostlivosť o pleť.4
Platycodon grandiflorum, tradičný čínsky liečivý materiál, sa v Číne používa už viac ako 2000 rokov. Najstarší záznam možno vysledovať späť k „bylinnej klasike Shennong“.5 Tradičným farmakologickým účinkom Platycodon grandiose je zníženie kašľa a vykašliavanie. Platycodon grandiflorum obsahuje saponíny, aleje, fenolové kyseliny, steroly a polysacharidy.6–8 Zložitosť a rozmanitosť chemických zložiek určuje rozmanitosť ich biologických aktivít.9 Moderný farmakologický výskum ukázal, že Platycodon grandiflorum má protizápalové, bakteriostatické a protizápalové účinky. -nádorové, antioxidačné, imunoregulačné a iné farmakologické účinky.10,11 V Kórei a severnej Číne je Platycodon grandiflorum široko používaný ako surovina v potravinách a kozmetike. Kozmetika vyrobená zo suroviny Platycodon grandiflorumas, ako je bieliaca esencia, bieliace mlieko a bieliaci sprchový gél, je obľúbená u spotrebiteľov v Kórei, Japonsku a ďalších ázijských krajinách.12 Extrakt z Platycodon grandiflorum je tiež uvedený v medzinárodnom kozmetickom raw Katalóg materiálov.13 Bieliace aktívne zložky a mechanizmus účinku Platycodon grandiflorum sú však stále nejasné a bolo vykonaných niekoľko predbežných štúdií o jeho bieliacej aktivite. Gong XJ a kol. porovnali inhibičné aktivity tyrozinázy rôznych čínskych bylín a zistili, že Platycodon grandiflorum má najsilnejší inhibičný účinok.14 Na tomto základe Xu BJ et al. vyhodnotili bieliaci účinok účinnej zložky Platycodon grandiflorum prostredníctvom experimentu s inhibíciou tyrozinázy a zistili, že účinnou zložkou Platycodon grandiflorum bol pravdepodobne celkový obsah saponínov.15 V tejto štúdii na ďalšie objasnenie aktívnych bieliacich látok a mechanizmu bielenia Platycodon grandiflorum sme ako výskumný objekt použili bieliaci aktívny extrakt Platycodon grandiflorum získaný metódou farmakodynamického sledovania. Štúdiom aktivity a zložiek objasňujeme zloženie bieliacich účinných látok Platycodon grandiflorum a skúmame mechanizmus bielenia bieliacich účinných látok Platycodon grandiflorum. Štúdia poskytne teoretický základ pre lepšie využitie Platycodon grandiflorum ako suroviny pre bieliacu kozmetiku.
Účinky bielenia pokožky zahŕňajú zníženie produkcie melanínu v koži. Melanín je hlavným pigmentom na kontrolu farby pokožky a vlasov. Je to vysokomolekulárna zlúčenina široko rozšírená u zvierat a rastlín. Pri nadmernej produkcii melanínu sa melanín hromadí v koži, vytvára škvrny a pehy, ktoré môžu viesť k ťažkej rakovine kože.16 Preto, aby sa predišlo nadmernej pigmentácii kože, je potrebné produkciu melanínu inhibovať. Melanocyty sa nachádzajú v epidermálnej bazálnej vrstve a sú kontrolované tyrozinázou. Reaktívne formy kyslíka aktivujú aktivitu tyrozinázy a tyrozináza katalyzuje 3,4-dihydroxyfenylalanín (DOPA) za vzniku DOPA chinónu a následne katalyzuje DOPA chinón za vzniku melanínu prostredníctvom autooxidácie a enzýmovej reakcie. Preto inhibícia tyrozinázy a proliferácie melanocytov môže výrazne inhibovať produkciu melanínu.17 Okrem toho dobré antioxidačné a protizápalové účinky môžu znížiť poškodenie spôsobené oxidáciou a zápalom kože, oddialiť starnutie pokožky a udržať pokožku elastickú a hladkú, a teda prejavujú synergický bieliaci účinok.18,19
Preto s cieľom nájsť prírodný aktívny extrakt z Platycodon grandiflorum s bieliacimi, antioxidačnými a protizápalovými vlastnosťami sa táto štúdia zamerala najmä na účinky extraktu Platycodon grandiflorum (PGE) na inhibíciu tyrozinázy, inhibíciu intracelulárnej tyrozinázy a inhibičnú aktivitu buniek. generácie melanínu. Cieľom štúdie bolo analyzovať inhibičný účinok PGE na aktivitu tyrozinázy a tvorbu melanínu a komplexne zhodnotiť účinok PGE na bielenie a starostlivosť o pokožku a jeho antioxidačné a protizápalové účinky. Chemické zloženie PGE sa identifikovalo a analyzovalo pomocou vysokoúčinnej kvapalinovej chromatografie (HPLC) a kvapalinovej chromatografie (LC)/hmotnostnej spektrometrie (MS) a objasnil sa špecifický bieliaci aktívny materiál PGE. Je nevyhnutné vyvinúť nové produkty Platycodon grandiflorum a podporiť rozvoj odvetvia Platycodon grandiflorum.
2. Materiály a metódy
2.1. Materiály
Kyselina mravčia, metanol, 2,2-difenyl-1-pikrylhydrazyl (DPPH), 2,20-kasíno-bis (3-etylbenzotiazolín-6-sulfónová kyselina) (ABTS ), acetylacetón, NaOH, K2S208 a Ehrlichovo činidlo boli získané od Beijing Chemical Plant. Platycodin D, arbutín, platycodin D3, glykozid E, syringín, kyselina chlorogénová, baikalín a luteolínové referenčné produkty boli získané z Čínskeho inštitútu pre identifikáciu farmaceutických biologických produktov. Chromatograficky čistý acetonitril a metanol boli získané od JT Baker Co., USA. Tyrozináza, L-tyrozín, hyaluronát sodný a hyaluronát boli získané od Beijing Solebo Technology Co., Ltd. Pôvodné bunky 264.7 a bunky B16F10 boli zakúpené od Centra bunkových zdrojov Šanghajského inštitútu biologických vied v Číne a uskladnené v laboratórium lekárskej fakulty pridruženej k Changchunskej univerzite čínskej medicíny. Dulbeccovo modifikované Eaglovo médium (DMEM), fetálne hovädzie sérum a antibiotiká (penicilín a streptomycín) boli získané od Gibco USA. Triton X-100, a-MSH, súprava ELISA (NO, IL-6, TNF-a) a súprava na počítanie buniek-8 (CCK{22}}) boli získané z Changchun Baijin Biotechnology Co., Ltd. Čistá voda bola získaná od spoločnosti Wahaha Food Co. Ltd.
2.2. Príprava bieliaceho aktívneho extraktu Platycodon grandiflorum
Platycodon grandiflorum bol dodaný spoločnosťou Hebei Renxin Pharmaceutical Co. Ltd. Platycodon grandiflorum bol rozdrvený na prášok, zahrievaný a znovu použitý s 95 percentným etanolovým roztokom trikrát, vždy 1 hodinu. Potom sa produkt prefiltroval a filtrát sa izoloval a spojil s filtrátom získaným z troch extrakcií. Filtrát sa vysušil a zmiešal sa s destilovanou vodou na rozlíšenie a n-butanol (1:1 objem) nasýtený vodou sa extrahoval päťkrát. Vrstva n-butanolu sa spojila, roztok n-butanolu sa odstránil a získal sa PGE. Rýchlosť extrakcie PGE z Platycodon grandiflorum bola 8,9 percenta.
2.3. Bunková kultúra
Bunky myšacieho melanómu B16F10 a bunky RAW264.7 sa kultivovali v DMEM doplnenom 10 percentami fetálneho hovädzieho séra, 100 U ml-1 penicilínu a 100 g ml-1 streptomycínu vo zvlhčenom vzduchu s 5 percentami CO2 pri 37 °C. boli pestované do fúzneho stavu, boli štiepené trypsínom a bunky boli prechádzať každé dva dni. Všetky experimenty sa uskutočnili trikrát a trikrát sa opakovali, aby sa zabezpečila opakovateľnosť.
2.4. Test životaschopnosti buniek
Na vyhodnotenie bezpečnosti PGE boli účinky PGE na bunky B16F10 a RAW264.7 stanovené metódou CCK-8 podľa pokynov výrobcu.20 Najprv sa bunky B16F10 a bunky RAW264.7 kultivovali v {{ 10}jamkové platne v koncentráciách 5 x 103 buniek na jamku a 1 x 10⒋ buniek na jamku počas 24 hodín a potom ošetrené PGE alebo DMEM v rôznych koncentráciách počas 72 hodín. Po ošetrení sa do každej jamky pridalo 10 ml CCK-8 činidla a bunka sa ďalej kultivovala 2 hodiny. Absorbancia pri 450 nm sa merala pomocou čítačky mikrodoštičiek.
2.5. Antioxidačná aktivita
Antioxidačná aktivita PGE sa stanovila pomocou testov na zachytávanie voľných radikálov DPPH a ABTS a kyselina askorbová sa použila ako pozitívna kontrola.21,22 Výsledky boli vyjadrené ako percentuálna miera inhibície.
Okrem toho roztok PGE, kyselina askorbová a platykodín D s rôznymi koncentráciami ({{0}}.2, 0.4, 0.6, 0.8 , 1.{19}} a 1,2 mg ml―1) sa pridali do skúmavky na upchatie. Potom sa do každej skúmavky pridali 2 ml roztoku DPPH; skúmavky sa vortexovali, zmes sa premiešala a nechala sa reagovať v tmavej komore počas 30 min. a stanovila sa absorbancia Al pri 520 nm. Potom sa ako kontrolná skupina použili 2 ml metanolu namiesto roztoku DPPH na stanovenie hodnoty absorbancie A2. Hodnota absorbancie A0 sa určila nahradením roztoku vzorky 2 ml metanolu ako slepej kontrolnej skupiny. Upravte hodnotu absorbancie na 0 pomocou metanolu. Rýchlosť zachytávania radikálov DPPH sa vypočítala podľa nasledujúceho vzorca:
Na prípravu ABTS plus $ matečný lúh sa zmiešalo 35,2 mg ABTS a 6,139 mg persíranu draselného na konštantný objem 10 ml. Kvapalina sa po 12 až 16 hodinách reakcie pri teplote miestnosti zriedila metanolom, kým hodnota absorpcie roztoku pri 734 nm nebola približne 7.{{10}}} × 0.2. Potom 30 ml roztoku PGE, kyseliny askorbovej a platykodínu D s rôznymi koncentráciami (0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.0, 1.2 mg ml―1) sa zmiešali s 220 ml roztoku ABTS plus c v 96-jamkovej doštičke označenej enzýmom a po reakcii v tme počas 6 minút sa merala absorbancia pri 734 nm.
kde A0 je absorbancia slepej vzorky a AS je absorbancia vzorky, ktorá sa má merať.
2.6. Lipopolysacharidmi indukovaná protizápalová aktivita makrofágov RAW264.7
Makrofágy RAW264.7 v 1 ml média sa naočkovali do 24-jamkovej platne s 1 x 104 buniek na jamku a kultivovali sa cez noc, aby bunky priľnuli k stene. Bunky sa kultivovali 24 hodín po expozícii lipopolysacharidom (LPS) a extraktom PGE v rôznych koncentráciách (10, 50, 100 mg ml-1). Koncentrácie NO, IL{11}} a TNF-a v bunkovom supernatante boli stanovené pomocou súpravy ELISA podľa pokynov výrobcu.23
2.7. Tyrozinázová aktivita
Použitím metódy opísanej v literatúre s fosfátovým tlmivým roztokom (25 mmol, pH=6,8) ako rozpúšťadlom, substrátovým roztokom L-tyrozínu (0,5 mg ml―1), tyrozínovým enzýmom roztoku (50 U ml―1) a ďalšie roztoky v 96-jamkových doštičkách 240 ml celkového reakčného systému, spolu so 120 ml substrátového roztoku, 40 ml fosfátového pufra, 40 ml roztoku vzorky a mixéra. Potom sa do vyššie uvedeného systému pridalo 40 ml roztoku tyrozínového enzýmu. Bola zaznamenaná odozva konštantnej teploty vodného kúpeľa s teplotou 37 °C počas 20 minút a absorbancia bola meraná pri 475 nm.
kde A je absorbancia roztoku vzorky nahradeného ekvivalentným tlmivým roztokom, B je absorbancia roztoku vzorky, roztok tyrozinázy je nahradený ekvivalentným tlmivým roztokom, C je absorbancia roztoku vzorky a D je absorbancia ekvivalentný tlmivý roztok namiesto roztoku tyrozinázy (tabuľka 1).
2.8. Inhibičná aktivita tvorby melanínu
Bunky melanómu B16F10 v 1 ml média sa naočkovali do 24-jamkovej kultivačnej platne s 1 x 104 buniek na jamku a kultivovali sa cez noc, aby bunky priľnuli k stene. Bunky sa kultivovali s hormónom stimulujúcim a-melanocyty (100 nM a-MSH) počas 48 hodín a kultivovali sa s rôznymi koncentráciami PGE a arbutínu (100, 150, 200 mg ml-1) počas 24, 48 a 72 hodín.
Po čase podávania boli bunky dvakrát premyté PBS (pH=7,2) a zmiešané s PBS 200 ml obsahujúcim 1 % Triton X-100. Bunky boli lyzované zmrazením a rozmrazením. Potom, čo bol systém centrifugovaný pri 12 000 rpm počas 30 minút, supernatant bol odstránený a do bunkových granúl bol pridaný 1 M NaOH obsahujúci 10 percent dimetylsulfoxidu (300 ml); potom reagovali pri 80 stupňoch počas 2 hodín, aby došlo k lýze melanínu v bunkách.25 Stanovila sa absorbancia pri 450 nm.
2.9. Aktivita bunkovej tyrozinázy
Bunky melanómu B16F10 v 1 ml média boli nasadené do 24-jamkovej kultivačnej platne s 1 x 104 buniek na jamku a kultivované cez noc, aby bunky priľnuli k stene. Bunky sa kultivovali s hormónom stimulujúcim a-melanocyty (100 nM a-MSH) počas 48 hodín a kultivovali sa s rôznymi koncentráciami (100, 150, 200 mg ml-1) PGE a arbutínu počas 24, 48 a 72 hodín. Po čase podávania boli bunky dvakrát premyté PBS (pH =7,2) a zmiešané s PBS 200 ml obsahujúcim 1 % Triton X-100. Bunky boli lyzované zmrazením a rozmrazením. Po centrifugácii pri 12 000 otáčkach za minútu počas 30 minút sa supernatant umiestnil na 96-jamkovú platňu, 100 ml na jamku, a zmiešal sa so 100 ml 0,1 % roztoku L-DOPA. Po inkubácii pri 37 stupňoch počas 2 hodín bola okamžite stanovená absorbancia pri 475 nm.
2.10. Analýza chemického zloženia
2.10.1. HPLC analýza.Roztok vzorky PGE sa analyzoval pomocou Shimadzu LC{{0}}AHT HPLC systému s ELSD6000 odparovacím detektorom rozptylu svetla (Alltech CHROM).27 Chromatografická separácia sa uskutočnila na Sepax Bio -C18 kolóna (4,6 x 250 mm, 5 mm, od Sepax Technologies, Delaware, USA). Systém mobilnej fázy sa skladal z mobilnej fázy A (acetonitril) a mobilnej fázy B (0,1 % kyselina mravčia voda). Gradient rozpúšťadla je uvedený v tabuľke 2. Chromatografické podmienky boli nasledovné: prietoková rýchlosť bola 0,8 ml min-1, počiatočná teplota detekcie rozptylu svetla odparovaním (ELSD) bola 105 x C, prietok plynu bol 2,8 l min-1 1 a vstrekované množstvo bolo 20 1. Pripravilo sa dvadsať dávok PGE.
2.10.2. Analýza chemického zloženia PGE pomocou HPLC v kombinácii s hmotnostnou spektrometriou.Technológia LC/MS s vysokým rozlíšením Q-Orbitrap sa použila v kombinácii s hmotnostným spektrometrom Q Exactive s vysokým rozlíšením na chromatografickom systéme Ultimate 3000 RS na analýzu a identifikáciu chemické zloženie roztoku vzorky PGE prostredníctvom MS.28 Podmienky MS sú nasledovné: iónový zdroj: elektrosprejový ionizačný zdroj; režim skenovania: prepínač skenovania pozitívnych a negatívnych iónov; metóda detekcie: plná hmotnosť/dd-MS2; rozlíšenie: 70 000 (plná hmotnosť), 17 500 (dd-MS2); rozsah skenovania: 150.0–2000.0 m/z; elektrosprejové napätie: 3,8 kV (kladné); kapilárna teplota: 300 stupňov C; kolízny plyn: vysoko čistý argón (čistota 99,999 percenta $); plášťový plyn: dusík (čistota 99,999 % $, 40 arb); pomocný plyn: dusík (čistota $ 99,999 percent, 350 stupňov); čas zberu dát: 30,0 min. Chromatografické podmienky: chromatická grafická kolóna: RP-C18 (150 x 2,1 mm, 1,8 mm, Welch); prietoková rýchlosť: 0,30 ml min― 1; vodná fáza: 0,1 % vodný roztok kyseliny mravčej; organická fáza: 0,1 % kyselina mravčia acetonitril; kvapalina na premývanie ihiel: metanol; teplota kolóny: 35 °C; injekčný objem: 5,00 ml. Gradient rozpúšťadla je uvedený v tabuľke 3.
2.11. Štatistiky údajov
Všetky experimenty sa uskutočnili najmenej trikrát. Údaje boli uvedené ako priemerná hodnota ± štandardná odchýlka. Štatistické analýzy boli vykonané pomocou SPSS 21.0 a Origin 9.0. Pre viacnásobné porovnania sa údaje podrobili jednosmernej ANOVA (Turecko post hoc) a párovému t-testu na stanovenie štatistickej významnosti. p < 0,05 sa považovalo za štatisticky významné rozdiely medzi skupinami.
3. Výsledky
3.1. Účinky PGE na životaschopnosť buniek B16F10 a 264.7
Účinky PGE na bunky melanómu B16F10 a makrofágy RAW264.7 sa detegovali pomocou metódy CCK-8. Bunky boli ošetrené rôznymi koncentráciami PGE počas 24 hodín a potom detegované pomocou metódy CCK-8. Výsledky sú vyjadrené ako percento prežitia v porovnaní s kontrolnou skupinou. Pri koncentráciách PGE 10–100 mg ml―1 (životaschopnosť buniek: 99,42 ±1,951–107,17 ±2,601 percenta) nevykázal PGE cytotoxicita na bunkách 264.7 (obr. 1). K významnému zníženiu bunkovej aktivity však došlo pri koncentrácii PGE 200 mg ml-1 (životaschopnosť buniek: 74,91 ± 1,574 percent). Preto je rozsah dávkovania 10 – 100 mg ml―1 (Rýchlosť extrakcie PGE v Platycodon Grandiflorum bola 8,9 percenta. Koncentrácia 10 – 100 mg ml―1 PGE je ekvivalentná 0,11 – 1,12 mg ml―1 Platycodonu Grandiflorum. Pridanie 1 ml média obsahujúceho liečivo na jamku je ekvivalentné pridania 0,11 – 0,12 mg Platycodon Grandiflorum.). Ako nízke, stredné a vysoké koncentrácie.
Aktivita buniek B16F10 sa mierne líšila od aktivity buniek 264.7. Keď bola koncentrácia PGE 10–200 mg ml―1 (životaschopnosť buniek: 99,03 ± 1,965 percenta –91,48 ± 1,382 percenta), aktivita buniek B16F10 sa významne nelíšila od aktivity kontrolnej skupiny. Keď však bola koncentrácia 250 mg ml―1 (životaschopnosť buniek: 85,69 ± 2,284 percenta), aktivita buniek B16F10 začala klesať a bunková aktivita pri koncentrácii PGE 1000 mg ml―1 (životaschopnosť buniek: 70,75). rozsah dávkovania 10–200 m3,337 percenta) bol najnižší. g ml―1 (Rýchlosť extrakcie PGE v Platycodon Grandiflorum bola 8,9 percenta. Koncentrácia 100–200 mg ml―1 PGE zodpovedá 1,12–2,24 mg ml―1 Platycodon Grandiflorum. Pridanie 1 ml liečiva obsahujúceho médium na jamku zodpovedá pridania 1,12 – 2,24 mg Platycodon Grandiflorum.). Tu je 100 mg ml―1, 150 mg ml―1 a 200 mg ml―1 (koncentrácia rastlinných liečivých materiálov: 1,12 mg ml―1, 1,68 mg ml―1 2,24 mg ml―1, v tomto poradí ) boli vybrané ako nízke, stredné a vysoké koncentrácie (obr. 2).
3.2. Antioxidačná kapacita PGE
Na meranie antioxidačnej aktivity PGE sa použili testy na zachytávanie voľných radikálov DPPH a ABTS. Vychytávacie aktivity PGE voči radikálom DPPH a ABTS boli stanovené pri rôznych koncentráciách PGE (0,5, 1.0, 1,5, 2.0, 2,5 mg ml― 1). Platycodin D a kyselina askorbová boli použité ako pozitívna kontrola. Ako je znázornené na obr. 3, vychytávacia aktivita PGE voči voľným radikálom DPPH a ABTS sa zvýšila v závislosti od dávky, podobne ako výsledky pozitívnej kontrolnej skupiny. Keď bola koncentrácia PGE 6,25 mg ml― 1, vychytávacia aktivita voči DPPH radikálu bola 98.03 ±0,60 percent, takmer rovnaká ako vychytávacia aktivita kyseliny askorbovej. Okrem toho PGE tiež vykazoval silnú zachytávaciu aktivitu voči ABTS radikálu (84,30 ± 0,53 percent), ktorá bola vyššia ako u kontrolnej skupiny platykodínu D.
3.3. Účinok redukcie PGE na LPS-stimulovanú zápalovú odpoveď makrofágov RAW264.7
Podľa výsledkov účinku PGE na aktivitu makrofágov RAW264.7 v časti 3.1 boli koncentrácie PGE 10, 50 a 100 mg ml―1 vybrané ako nízke, stredné a vysoké dávky na testovanie účinku. PGE na zápal makrofágov RAW264.7 stimulovaný LPS. Ako je znázornené na obr. 4, PGE v závislosti od dávky znižoval produkciu NO v makrofágoch RAW264.7 stimulovaných LPS a v závislosti od dávky znižoval hladiny zápalových faktorov IL{17}} a TNF-a.
3.4. Účinky PGE na aktivitu tyrozinázy húb, obsah melanínu v melanocytoch B16F10 a aktivitu intracelulárnej tyrozinázy
Ako je znázornené na obr. 5, inhibičná aktivita tyrozinázy PGE sa významne zvýšila so zvýšením koncentrácie extraktu. Čím vyššia je koncentrácia PGE, tým silnejšia je inhibičná aktivita tyrozinázy. Inhibičné aktivity tyrozinázy PGE pri 0,5, 1.0, 1,5, 2.0, 2,5 a 3.0 mg ml―1 boli 6{ {29}},29 percent, 79,32 percent, 85,14 percent, 95,23 percent, 96,43 percent a 97,71 percent, v uvedenom poradí. Keď však bola koncentrácia PGE 2,5–3.0 mg ml― 1, inhibičná aktivita tyrozinázy sa významne nezvýšila; preto nebolo potrebné vykonávať experimenty s vyššími koncentráciami. Za rovnakých podmienok bola miera inhibície 3,0 mg ml‵1 PGE (koncentrácia rastlinných liečivých materiálov: 33,71 mg ml―1) podobná ako pri arbutíne (3 mg ml―1, 96,97 ± 1,849 percenta) a vyššia ako platykodínu D (3 mg ml-1, 81,67 ± 2,331 percent).
Podľa účinku PGE na aktivitu melanocytov B16F10 v časti 3.1 boli koncentrácie PGE 100, 150 a 200 mg ml-1 PGE vybrané ako nízke, stredné a vysoké dávky na testovanie účinku PGE na obsah melanínu. a tyrozinázovú aktivitu B16F10 melanocytov stimulovanú a-MSH. Ako je znázornené na obr. 6, tyrozinázová aktivita buniek B16F10 stimulovaných 100 nM a-MSH (kontrolná skupina) bola významne vyššia ako aktivita nestimulovaných buniek. So zvýšením koncentrácie PGE sa inhibičné aktivity produkcie tyrozinázy a melanínu na bunkách B16F10 významne zvýšili v závislosti od dávky. So zvyšujúcim sa časom podávania sa postupne zvyšovala inhibičná aktivita PGE na produkciu tyrozinázy a melanínu v bunkách B16F10.
Ďalšie informácie: david.deng@wecistanche.com WhatApp:{0}}
