Technológia prípravy granúl Wenyang Tongbian

Abstrakt:

CieľStanoviť a optimalizovať technológiu prípravy granúl Wenyang Tongbian.

MetódyVodný odvar bol extrahovaný. Ako indexy sa použil obsah echinaceového glykozidu v monarchovom lieku a výťažková zlúčenina. Na optimalizáciu extrakcie granúl Wenyang Tongbian sa použil ortogonálny test L9 (34). Najlepší proces tvarovania bol optimalizovaný na základe obtiažnosti granulácie, tvarovateľnosti a výťažku častíc. Výsledky Optimálna extrakcia zahŕňala pridanie 10 násobku vody a extrakciu 3-krát, zakaždým 1 hodinu. Najlepší proces tvorby: typ pomocnej látky bol dextrín, pomer pomocných látok bol 1∶0,9 a najlepšie zmáčadlo bol 85% etanol. Záver Proces extrakcie a formovania je stabilný a primeraný, jednoduchý a uskutočniteľný, s dobrou reprodukovateľnosťou, čo môže poskytnúť základ pre priemyselnú výrobu granúl Wenyang Tongbian.

Kľúčové slová: Wenyang Tongbian granule; ortogonálny test; extrakcia; formovanie

NOVÁ BYLINKOVÁ FORMULÁCIA PRE OBLIČKYNEDOSTATOK YANG

Podporná služba Wecistanche

E-mail:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel:+86 15292862950

Zápcha s nedostatkom janguje bežné u starších ľudí a žien. Liečebnou metódou by nemala byť jednoduchá očista. Metóda Warming Yang môže dosiahnuť dobré výsledky [1]. Wenyang Tongbian Granules je nemocničný prípravok vyvinutý na základe klinických skúseností profesora Lin Aizhena z provinčnej nemocnice Hubei tradičnej čínskej medicíny pri liečbe funkčnej zápchy u starších ľudí. Skladá sa z Cistanche deserticola, škoricovej kôry, astragalus a Atractylodes macrocephala. Vo vzorci má Cistanche deserticola funkcie tonizácie jangu obličiek a prospieva esencii a krvi a je hlavným liekom, ktorý ohrieva jang; škoricová kôra má funkcie ohrievania meridiánov a odblokovania krvných ciev, dopĺňa oheň a podporuje jang; astragalus má funkcie zvyšovania jangu a dopĺňania qi, sťahuje rany a podporuje regeneráciu tkanív; a Atractylodes macrocephala má funkciu posilňovania sleziny a dopĺňania qi, vysušuje vlhkosť a podporuje diurézu.

Štúdie ukázali, že fenyletanolové glykozidy sú hlavnými aktívnymi zložkami v Cistanche deserticola [2]. Medzi nimi sú echinakozid a verbascozid charakteristické zložky na kontrolu kvality Cistanche deserticola, ako je uvedené v Čínskom liekopise. Liu Xianhong a kol. [3] dospeli prostredníctvom in vivo štúdií k záveru, že Cistanche deserticola je vhodná na klinickú liečbu zápchy a môže liečiť symptómy aj hlavnú príčinu. Medzi hlavné chemické zložky škoricovej kôry patria prchavé oleje, polysacharidy, flavonoidy atď. Moderné farmakologické štúdie ukázali, že škoricová kôra má farmakologické účinky, ako je vazodilatácia, protižalúdočný vred a antibakteriálne účinky [4]. Polysacharidy, flavonoidy a astragalozid IV sú hlavnými chemickými zložkami, ktoré majú imunomodulačné účinky [5]. Atractylodes macrocephala má účinky na posilnenie sleziny a reguláciu porúch črevnej flóry a môže sa klinicky použiť na liečbu gastrointestinálnej dysfunkcie [6]. Pôvodný recept sa používa hlavne v odvaroch čínskej medicíny, ale má nevýhody, ako je nepríjemnosť pri odvare, veľké dávkovanie a ťažkosti pri prenášaní. Aby sa táto klinická skúsenostná receptúra ​​široko používala v klinickej praxi, bola vyvinutá do granúl. V tomto experimente sa ako indikátory použil výťažok pasty a obsah echinakozidu, hlavnej aktívnej zložky v hlavnom lieku, pokračoval sa v tradičnom procese odvaru vody a na optimalizáciu množstva pridanej vody sa použila ortogonálna testovacia metóda L9 (34). , čas odvaru a časy odvaru v procese extrakcie, aby sa dosiahol najlepší extrakčný proces. Súčasne sa skúmal proces formovania granúl, aby sa určil stabilný a primeraný proces formovania, ktorý poskytuje referenciu pre pilotnú výrobu, kontrolu kvality a klinickú aplikáciu prípravku [7-8].

1 Nástroje a činidlá

1.1 Nástroje

Aliancia e2695vysokovýkonný kvapalinový chromatograf, detektor diódového poľa 2998 (Waters, USA), ES225SMDR 1/100,000 analytické váhy (Precisa, Švajčiarsko), UPT-11-10T ultračistý vodný stroj (Shenzhen UPT Technology Co., Ltd.), KQ-500VDE dvojfrekvenčný CNC ultrazvukový čistič (Kunshan Ultrasonic Instrument Co., Ltd.).

1.2 Skúšobné lieky

Plátky vína Cistanche(číslo šarže: 2322050113, vyrobené vo Vnútornom Mongolsku), škoricové plátky (číslo šarže: 2323020103, vyrobené v Guangxi), plátky astragalus (číslo šarže: 2323020105, vyrobené v Gansu), Atractylodes macrocephala číslo012023 vyrobené v 801203 plátkoch ) (Hubei Chenmei Chinese Medicine Co., Ltd., všetky plátky sú označené ako autentické Chen Shuhe, hlavným farmaceutom InštitútuTradičná čínska medicínaprovinčnej nemocnice Hubei tradičnej čínskej medicíny a sú kvalifikovaní podľa vydania z roku 2020čínsky LiekopisČasť I). Referenčná látka echinakozid(číslo šarže: 111670-201907, čistota: 91,8 %, China Food and Drug Inspection Research).

Dextrín (číslo šarže: 230102), kukuričný škrob (číslo šarže: 221008) (Henan Zhenghong Pharmaceutical Excipients Co., Ltd.), sacharóza (číslo šarže: TF28221205), mikrokryštalická celulóza (číslo šarže: TF471211001), laktóza (číslo šarže: TF471211001 TF463Y230101) (Hunan Jiudian Hongyang Pharmaceutical Co., Ltd.).

2 Metódy a výsledky

2.1 Stanovenie obsahu echinakozidu

2.1.1 Chromatografické podmienky: Ako chromatografická kolóna sa použil Agilent 5 TC-C18 (250 nm x 4,6 mm, 5 μm); ako mobilná fáza A sa použil metanol, ako mobilná fáza B sa použil 0,1 % roztok kyseliny mravčej, gradientová elúcia (0-17 min, 26,5 % A; 17-20 min, 26,5 % —> 29,5 % A; 20-54 min,

29,5 % A, 54-55 min, 29,5 % → 26,5 % A; 55-60min, 26,5 %A); prietok 1.{11}} ml·min-1; teplota kolóny 30 stupňov; detektor diódového poľa, detekčná vlnová dĺžka 330 nm; vstrekovaný objem 10 μl; teoretický počet platní vypočítaný na základe píku echinakozidu by nemal byť menší ako 3000[9].

2.1.2 Príprava referenčného roztoku

Vezmite primerané množstvo echinakozidu, presne odvážte 9,65 mg, vložte ho do 25 ml odmernej banky, pridajte 50 %

metanol, aby sa rozpustil a zriedil po značku ako referenčný zásobný roztok. Do 25 ml odmernej banky presne napipetujte 1 ml zásobného roztoku echinakozidu, pridajte 50 % metanol na zriedenie po značku, dobre pretrepte a pripravte referenčný roztok s obsahom 14,17 ug na 1 ml [9].

2.1.3 Príprava skúšobného roztoku

Vezmite asi 0,5 g suchého pastového prášku, rozdrvte ho na prášok, presne odvážte, vložte do hnedej kónickej fľaštičky so zátkou, pridajte presne 50 ml 50 % metanolu, pevne zazátkujte, dobre pretrepte, odvážiť, 40 minút ošetriť ultrazvukom (výkon 250 W, frekvencia 45 kHz), nechať vychladnúť, znova odvážiť, pridať 50% metanol na doplnenie stratenej hmotnosti, dobre pretrepať, nechať postáť, odobrať supernatant, prefiltruje sa a odoberie sa filtrát.

2.1.4 Príprava roztoku negatívnej vzorky

Vezmite asi 0,5 g suchej pasty v prášku s receptúrou bez obsahu vína Cistanche s liečivými látkami a pripravte roztok negatívnej vzorky podľa metódy v časti „2.1.3“.

2.1.5 Test špecifickosti

Presne napipetujte skúšobný roztok, referenčný roztok a roztok negatívnej vzorky a merajte podľa chromatografických podmienok podľa bodu 2.1.1. Zaznamenajte chromatogram. Výsledky sú znázornené na obrázku 1. Neexistuje žiadna interferencia s negatívnou vzorkou. Výsledky ukazujú, že metóda má dobrú špecifickosť.

Obr. 1 Špecifický chromatogram granúl Wenyang Tongbian

2.1.6 Vyšetrovanie lineárneho vzťahu

Vezmite primerané množstvo echinakozidu, presne ho odvážte na 10,11 mg, vložte do 25 ml odmernej banky, pridajte 50 % metanol na zriedenie do série koncentrácií referenčného roztoku a vstreknite ho podľa chromatografických podmienok podľa „2.1. .1“ na určenie hodnoty plochy vrcholu echinakozidu. Nakreslite štandardnú krivku s referenčným množstvom vstreknutého echinakozidu ako vodorovnou osou (ug, X) a integrálnou hodnotou plochy píku ako zvislou osou (Y) a vykonajte lineárnu regresiu.

Regresná rovnica je Y=1,294×104X - 4,931×104, r=0,9997. Výsledky ukazujú, že integrálna hodnota plochy vrcholu vstrekovaného množstva echinakozidu je v dobrom lineárnom vzťahu medzi 1,4850 a 371,2392 ug.

2.1.7 Skúška presnosti

Presne odsajte 10 μl referenčného roztoku (hmotnostná koncentrácia 37,12 ug·mL – 1) podľa „2.1.6“, vstreknite 6-krát, zaznamenajte hodnotu plochy píku echinakozidu a vypočítajte hodnotu RSD na 1,1 %, čo znamená že prístroj má dobrú presnosť.

2.1.8 Skúška opakovateľnosti

Vezmite rovnakú suchú pastu, rozdrvte ju na prášok, presne odvážte 6 porcií, z ktorých každá má približne 0,5 g, a vložte ich do hnedej kónickej fľaštičky so zátkou. Extrahujte podľa metódy podľa "2.1.3", stanovte obsah a vypočítajte. Výsledky ukazujú, že priemerný obsah echinakozidu vo vzorke je 1,46 mg·g－1 a hodnota RSD je 2,7 %, čo naznačuje, že opakovateľnosť tejto metódy je dobrá.

2.1.9 Skúška stability

Vezmite rovnaký roztok vzorky, presne odoberte 10 μl a vstreknite ho do 0, 2, 4, 8, 12, 18 a 24 hodín. Hodnota RSD plochy píku je 0,71 %, čo naznačuje, že roztok vzorky má dobrú stabilitu do 24 hodín.

2.1.10 Test obnovy vzorky

Presne odvážte 6 porcií rovnakej šarže testovacích vzoriek, 0 0,24 g každá, a vložte ich do hnedej kónickej fľaše so zátkou. Podľa hmotnostného pomeru zložiek v testovanej vzorke 1:1 presne pridajte 0,9 ml echinakozidovej referenčnej látky (hmotnostná koncentrácia je 371,24 ug·mL－ 1) pod "2.1.6". pripravte skúšobný roztok podľa metódy uvedenej v "2.1.3", stanovte chromatografickú plochu píku echinakozidu a vypočítajte obsah. Výsledky ukazujú, že priemerná miera regenerácie echinakozidu je 101,09 % a hodnota RSD je 1,6 %.

2.2 Plán experimentu a ukazovatele hodnotenia

Množstvo pridanej vody (A), čas extrakcie (B) a počet extrakcií (D) boli vybrané ako faktory, ktoré sa mali skúmať. Tri úrovne faktorov boli nastavené podľa výsledkov predchádzajúceho jednofaktorového skúmania, pozri tabuľku 1. V experimente bola použitá ortogonálna testovacia tabuľka L9 (34), pozri tabuľka 2. Test využíval výťažnosť pasty a obsah echinakozidu ako hodnotiace ukazovatele na preskúmanie optimálneho procesu extrakcie vody.

Tab 1 Faktor a úroveň ortogonálneho testu

2.2.1 Ortogonálny test

Podľa predpísaného pomeru odvážte 18 porcií každej liečivej príchute, každá po 55 g, a vykonajte extrakciu vodným odvarom podľa ortogonálnej schémy v tabuľke 2. Každá skupina má 2 paralelné porcie. Odvar sa prefiltruje cez 80- sito, filtrát sa spojí, ochladí, odmeria sa objem odvaru, 50 ml sa presne odpipetuje do odparovacej misky, ktorá sa konštantne odváži, odparí sa do sucha a vysuší sa pri zníženom tlaku pri 60 stupňoch, čím sa získa ortogonálna experimentálna vzorka suchej pasty. Vypočítajte výťažok pasty (výťažok pasty=(hmotnosť suchej pasty × objem liečivej tekutiny) / (50 × hmotnosť kusu odvaru) × 100 %). Podľa chromatografických podmienok podľa "2.1.1" a metódy podľa "2.1.3" bolo stanovené extrakčné množstvo echinakozidu v 9 skupinách ortogonálnych testovacích extraktov. Množstvo extrahovaného echinakozidu=hmotnosť suchej pasty × obsah echinakozidu / hmotnosť kusového odvaru vína Cistanche. Komplexné skóre=obsah echinakozidu ÷ maximálny obsah × 0,5 × 100 % + výťažok pasty ÷ maximálny výťažok pasty × 0,5 × 100 % [10]. Výsledky sú uvedené v tabuľke 2.

Ako je uvedené v tabuľke 3, pri zohľadnení komplexného skóre výťažku pasty a obsahu echinakozidu ako hodnotiacich ukazovateľov, hodnota rozsahu R v tabuľke ukazuje, že primárne a sekundárne účinky každého faktora sú D > B > A; výsledky analýzy rozptylu ukazujú, že faktor D (časy odvaru) je štatisticky významný (P < 0.05) a je zvolená úroveň D3; faktor A (pridanie vody) a faktor B (čas odvaru) nie sú štatisticky významné (P > 0,05). Vzhľadom na to, že miera absorpcie vody liečivých materiálov v tomto prípravku je relatívne vysoká (155 %) a v kombinácii s faktormi, ako sú skutočné výrobné potreby, optimálne extrakčné podmienky sú zvolené ako A2B1D3, to znamená pridanie 10-násobku vody, odvar 3-krát, vždy na 1 hodinu.