Preventívny účinok fenyletanoidových glykozidov Cistanche Salsa na potkany s vysokohorským edémom mozgu

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

Abstraktné

Cieľ Sledovať účinok a mechanizmus fenyletanoidných glykozidov z Cistamnche Salsa na potkanoch s vysokohorským edémom mozgu. Metódy Fenyletanoidové glykozidy sa podávali profylakticky na vytvorenie modelu cerebrálneho edému vo vysokej nadmorskej výške u potkanov pomocou hypobarickej komory v simulovanom prostredí s nadmorskou výškou 5000 m. Boli merané patologické zmeny v pľúcnom tkanive potkana, obsah vody, IL-6, TNF-a, MDA a enzymatická aktivita SOD a GSH-Px v pľúcnom homogenáte. Výsledky V porovnaní s kontrolnou skupinou vysokohorské cerebrálne edémové potkany vykazovali pozoruhodný charakter cerebrálneho edému a vysoký obsah vody v pľúcach. Obsah IL-6, TNF-a a MDA v pľúcnom homogenáte sa zvýšil, zatiaľ čo enzymatická aktivita SOD a GSH-Px sa významne znížila. Fenyletanoidové glykozidy by mohli zlepšiť patologické zmeny v pľúcnom tkanive, znížiť obsah vody, IL{10}}, TNF-a a MDA a zároveň zvýšiť enzymatickú aktivitu SOD a GSH-Px v pľúcnom homogenáte, Concision Fenyletanoidové glykozidy môžu zabrániť vysokohorskému edému mozgu. ktorých mechanizmus môže súvisieť s protizápalovým a antioxidačným stresom v pľúcnom tkanive.

Kľúčové slová: Cistanche Salsa; fenyletanoidový glykozid; vysokohorský edém mozgu

Cistanche fenyletanoidové glykozidy

Vysokohorský cerebrálny edém (HACE) sa vo všeobecnosti vyskytuje, keď je nadmorská výška prvýkrát väčšia ako 3000 m. Ide o závažné život ohrozujúce ochorenie spôsobené neprispôsobivosťou organizmu na výškové nízkotlakové a nízkokyslíkové prostredie. Súvisí s výškovou chorobou. Pľúcny edém vo vysokej nadmorskej výške sú tri prejavy akútnej výškovej choroby. Hoci existuje menej štúdií o HACE v porovnaní s vysokohorským pľúcnym edémom, súvisiace štúdie ukázali, že oxidačný stres a zápal zohrávajú dôležitú úlohu v patogenéze HACE (P-3).

Cistanche fenyletanoidové glykozidy(fenyletanoidové glykozidy z Cistanche Salsa, PhGCs) sa extrahujú z cistanche Xinjiang Cistanche a súvisiace štúdie úspešne izolovali rôzne fenyletanoidové glykozidy, najmä vrátane echinakozidu a verbaskozidu 1. Výskum farmakologických účinkov PhGC v priebehu rokov ukázal, že má podobné farmakologické účinky salidrosidu, aktívnej zložky proti výškovej chorobe. Má antihypoxiu, anti-radiáciu, zachytáva voľné radikály atď. P-7]. V tomto experimente bola vytvorená potkania HACE modelová sieť 91 v špeciálnej umelej experimentálnej komore v severozápadnej oblasti a PhGC boli podávané preventívne, aby sa pozoroval jeho preventívny účinok na HACE a jeho možný mechanizmus účinku.

Bylina cistanche:Cistanche fenyletanoidové glykozidy

1 materiál

1.1 Zvieratá

Experimentálne zviera potkan Wistar, stupeň SPF, polovičný samec a polovičný samec, hmotnosť 180-220g [Experimentálne zvieracie centrum lekárskej univerzity Xinjiang, licenčné číslo živočíšnej výroby SCXK (nové) 2011-0004, licenčné číslo na používanie zvierat SYXK ( nový) 2011- 0004].

1.2 Prístroj

Umelá experimentálna kabína v špeciálnom prostredí severozápadu (Guizhou Fenglei Aviation Ordnance Co., Ltd., DY{{0}}); optický mikroskop (Japonská spoločnosť Nikon, E 200); rezač tkaniva (nemecká spoločnosť Mecang, HM340E); elektronické váhy (Mettler-Toledo Instrument Co., Ltd., AL204, presnosť; 0,1 mg); čítačka mikrodoštičiek (Bio-RAD, XMark 7M, USA): UV spektrofotometer (Shanghai Lens Optical Technology Co., Ltd., SpectrumLab 22); elektrický ohrev sušiaca pec s konštantnou teplotou (Huangshi, Hubei) City Medical Equipment Co., Ltd., SKHG-01).

1.3 Testovaný liek

PhGC (profesor Tu Pengfei z Pekingskej univerzity, obsah: 90,70 percent, pripravené s destilovanou vodou, aby sa vytvoril roztok zodpovedajúcej koncentrácie); Rhodiola Rosea Oral Liquid (Tibet Tibetan Medicine Group Co., Ltd., číslo šarže: 120503, špecifikácia: 10 ml); súprava tumor necrosis Factor- (tumor necrosis factor- , TNF- ) (číslo šarže: ZJAGBZAB01), interleukín-6 (interleukín-6, IL-6) (číslo šarže: ZIBZAB 02) (Spoločnosť Shanghai Yikesai Biological Products Co., Ltd.); Pentobarbital sodný (American Amresco Company, číslo šarže: 20110612); paraformaldehyd (Chengdu Kelon Chemical Reagent Factory, číslo šarže: 20110901); Súprava superoxiddismutázy (SOD) (číslo šarže: 20130812), súprava malondialdehydu (MDA) (číslo šarže: 20130812), súprava glutatiónperoxidázy (GSH-Px) (číslo šarže: 20130814) (Nanjing Jiancheng Institute of Bioengineering); PBS fosfátový tlmivý prášok (Fuzhou Maixin Biotechnology Development Co., Ltd., číslo šarže: 13061716).

bylina cistanche

2 spôsob

2.1 Zoskupovanie a lieky

Potkany Wistar boli náhodne rozdelené do 6 skupín: normálna kontrolná skupina, modelová skupina, skupina s perorálnym roztokom Rhodiola Rosea (1,78 ml·kg-'), skupina s nízkou dávkou PhGC (75 mg·kg-), skupina so strednou dávkou PhGC (15 0mg ·Kg-'), skupina s vysokou dávkou PhGC (300 mg·kg-), 12 potkanov v každej skupine. Každá skupina bola chovaná v prostredí SPF. Normálnej kontrolnej skupine a modelovej skupine bola intragastricky podaná destilovaná voda (1,0 ml/100 g). Ostatným skupinám sa podávali intragastricky podľa zodpovedajúcej dávky počas 10 po sebe nasledujúcich dní. Na 8. deň zvyšok okrem normálnej kontrolnej skupiny. Každá skupina bola držaná 72 hodín v umelej experimentálnej kabíne, ktorá simulovala prostredie náhornej plošiny v nadmorskej výške 5 000 m. Výška v kabíne stúpa konštantnou rýchlosťou 10 m·s-' do nadmorskej výšky 5000 m (atmosférický tlak je 54,1 kPa, parciálny tlak kyslíka je 11,52 kPa), počas ktorej zvieratá voľne vstupujú do vody a prijímajú potravu a kabína sa otvára každých 24 hodín na 0,5 hodiny. Liek, pridať krmivo a pitnú vodu.

2.2 Manipulácia so zvieratami

Potkany v každej skupine boli anestetizované intraperitoneálnou injekciou pentobarbitalu sodného (2 percentá, 0,2 ml/100 g) ihneď po opustení kabíny, bola im odobratá krv z brušnej aorty, bola otvorená lebečná dutina, mozgové tkanivo bola odobratá a horná polovica ľavej časti mozgu bola vybratá a odvážená. Balenie sa používa na stanovenie obsahu vody a dolná polovica ľavej časti mozgu sa fixuje 4 percentami paraformaldehydu na farbenie HE. Odvážte pravý mozog, pridajte roztok PBS, aby ste pripravili 10-percentný homogenát, centrifugujte pri 3 000 r·min-' 10 minút, alikvotujte supernatant a uložte ho do chladničky pri 80 stupňoch na stanovenie TNF- a, IIL{11}}, SOD, MDA, GSH-Px.

2.3 Pozorovanie patológie mozgového tkaniva

Po úplnom zafixovaní mozgového tkaniva v 4-percentnom paraformaldehyde, dehydratácii, zaliatí, narezaní a zafarbení HE sa patologické zmeny pozorujú pod optickým mikroskopom pri rôznych zväčšeniach a urobia sa obrázky.

2.4 Stanovenie obsahu vody v mozgu a stanovenie súvisiacich indexov zápalu homogenátu mozgového tkaniva a oxidačného stresu

Upečte mozgové tkanivo zabalené v alobale v rúre (80 stupňov, 72 h) na konštantnú hmotnosť, odvážte suchú hmotnosť a vypočítajte obsah vody: obsah vody=(hmotnosť tkaniva - hmotnosť sušiny tkaniva) / hmotnosť tkaniva × 100 percent . Na meranie obsahu TNF-, IL-6 použite súpravu enzýmovej imunoanalýzy, UV spektrofotometer na meranie MDA, SOD, GSH-Px, konkrétne kroky postupujte podľa pokynov.

2.5 Štatistická analýza

Na analýzu bol použitý softvér SPSS 16.0, všetky namerané údaje boli reprezentované dolnými znamienkami plus s, údaje boli najskôr testované na normalitu, nezávislý test vzorky 1 bol použitý na porovnanie medzi vyhovujúcimi skupinami a logaritmická transformácia bola vykonaná pre nezhodnú skupinu. Úroveň kontroly je =0.05.

extrakt z cistanche

3 Výsledky

3.1 Účinok PhGC na patologické zmeny mozgového tkaniva u potkanov HACE

Pozorovanie patologických rezov mozgových tkanív potkanov v každej skupine pod svetelným mikroskopom ukázalo, že molekulárna vrstva, vonkajšia vrstva granulovaných buniek, vrstva buniek stavcového tela, vnútorná vrstva granulovaných buniek a štruktúra viacradovej bunkovej vrstvy mozgového tkaniva normálnej kontrolnej skupiny boli jasné a nenašli sa žiadne lézie. V modelovej skupine mali mozgové tkanivá potkanov hyperémiu a edém kapilár a edém buniek v molekulárnej vrstve a vrstve vertebrálneho tela bol zrejmý. PhGCs skupina potkanov s nízkou dávkou molekulárnej vrstvy mozgového tkaniva časť vazodilatačného a kongestívneho edému, mierny edém buniek, edém menší ako modelová skupina: PhGCs skupina so strednou dávkou mozgového tkaniva potkanov časť submeningeálnej vazodilatácie a kongescie, občas edém buniek , edém v porovnaní s modelovou skupinou Skupina bola výrazne znížená; molekulárna vrstva skupiny s vysokou dávkou PhGC nemala žiadny zjavný edém a vyskytol sa mierny perivaskulárny edém, ktorý bol významne znížený v porovnaní s modelovou skupinou. Molekulová vrstva mozgového tkaniva potkanov v skupine Rhodiola Rosea mala rozptýlený edém a rozptýlené krvné cievy mali veľmi mierny edém. Edém bol výrazne znížený v porovnaní s modelovou skupinou. Je možné vidieť, že mozgové tkanivo potkanov v modelovej skupine je zjavne edém a model je vytvorený. PhGC a Rhodiola Rosea môžu znížiť stupeň edému mozgu u potkanov modelu HACE. Výsledky sú znázornené na obrázku 1.

Obrázok 1 Histopatologické pozorovanie mozgu potkanov v rôznych skupinách（HE ×400）

3.2 Účinok PhGC na obsah vody v mozgu u potkanov HACE

V porovnaní s normálnou kontrolnou skupinou sa obsah vody v mozgovom tkanive modelovej skupiny zvýšil a rozdiel bol štatisticky významný (P<0.01), indicating="" that="" the="" model="" was="" established.="" the="" brain="" tissue="" water="" content="" of="" rats="" in="" the="" low,="" medium,="" and="" high="" doses="" of="" phgcs="" and="" the="" rhodiola="" rosea="" group="" was="" lower="" than="" that="" of="" the="" model="" group,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant=""><0.01). there="" was="" no="" statistically="" significant="" difference="" in="" tissue="" water="">

3.3 Účinok PhGC na TNF-a a IL-6 v mozgovom tkanive potkanov HACE

V porovnaní s normálnou kontrolnou skupinou sa obsah TNF-a a IIL-6 v homogenáte mozgového tkaniva modelovej skupiny významne zvýšil (P<0.01). the="" contents="" of="" tnf-α="" and="" iil-6="" in="" the="" brain="" tissue="" homogenate="" of="" phgcs="" low,="" medium,="" and="" high="" dose="" groups="" and="" rhodiola="" rosea="" group="" were="" lower="" than="" those="" of="" the="" model="" group=""><0.05), and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant.="" there="" was="" no="" statistically="" significant="" difference="" in="" brain="" tissue="" tnf-a="" and="" iil-6="" levels="" between="" the="" phgcs="" dose="" groups="" and="" the="" rhodiola="" rosea="">

3.4 Účinok PhGC na oxidačný stres v mozgovom tkanive potkanov HACE

V porovnaní s normálnou kontrolnou skupinou boli aktivity enzýmov SOD a GSH-Px v mozgovom tkanive modelovej skupiny významne znížené a obsah MDA bol významne zvýšený (P<0.01). the="" sod="" and="" gsh-px="" enzyme="" activities="" in="" the="" brain="" tissue="" of="" the="" phgcs="" low,="" medium,="" and="" high="" dose="" groups="" and="" rhodiola="" rosea="" group="" were="" higher="" than="" the="" model="" group,="" and="" the="" mda="" content="" was="" lower="" than="" that="" of="" the="" model="" group.="" the="" difference="" was="" statistically="" significant=""><0.05). there="" was="" no="" significant="" difference="" in="" the="" content="" of="" sod,="" gsh-px,="" and="" mda="" in="" the="" brain="" tissue="" between="" the="" phgcs="" groups="" and="" the="" rhodiola="" rosea="">

doplnok cistanche: zlepšenie imunity

4. Diskusia

V posledných rokoch domáci výskum prevencie a liečby výškovej choroby pomocou tradičnej čínskej medicíny dosiahol významné inovatívne výsledky a úspešne sa vyvinuli tradičné čínske lieky s nezávislými právami duševného vlastníctva na prevenciu a liečbu výškovej choroby. Napríklad kapsuly Rhodiola vyvinuté vojenskou oblasťou Tibet získali schvaľovacie číslo vojenských špeciálnych liekov a používajú sa v pohraničných obranných silách náhornej plošiny ako špeciálne lieky na prevenciu a liečbu chorôb z náhornej plošiny. Orálna tekutina Rhodiola Rosea uvedená na trh miestnymi farmaceutickými spoločnosťami Qinghai a Tibet získala oficiálne číslo schválenia národných odrôd čínskej medicíny a je klinicky vhodná na prevenciu a liečbu akútnej a chronickej výškovej choroby10. Farmakologické účinky PhGC sú podobné ako salidrozid, preto sme ako liek na pozitívnu kontrolu zvolili perorálnu tekutinu Rhodiola Rosea, ktorá sa predáva a používa na trhu a má štandardný liek.

Veľký počet štúdií [1H12 dokázal, že hladiny TNF- a IL-6 u pacientov s HACE sú zvýšené, Zhou Qiquan et al. [3 Štúdie ukázali, že TNF- hrá dôležitú úlohu pri zmene permeability hematoencefalickej bariéry. Dôležitý faktor pre zvýšenie priepustnosti bariéry. Sekrécia TNF sa zvyšuje počas hypoxémie. Keď sa TNF- v krvi abnormálne zvýši, môže poškodiť vaskulárne endotelové bunky, čo spôsobí zmeny morfológie vaskulárnych endotelových buniek, poškodenie bunkovej membrány a organel atď., a TNF-a môže byť tiež použitý ako intracelulárny signál apoptózy indukuje apoptózu vaskulárnych endotelových buniek, podporuje produkciu endotelínu (ET-1) a zhoršuje poškodenie steny krvných ciev a má vplyv na podporu sekrécie IIL-614.

Hypoxia sa považuje za kľúčový faktor vedúci k vzniku akútnej výškovej choroby. Reakcia na oxidačný stres vyvolaná hypoxiou hrá dôležitú úlohu pri cerebrálnej arteriálnej hypertenzii a vaskulárnom presakovaní. Lokálne voľné radikály sa podieľajú na spôsobení poškodenia ciev. Cerebrovaskulárne poškodenie a zvýšený únik tekutín môžu spôsobiť edém mozgu 13i4. Zhou Qiquan a kol. [7 Štúdie ukázali, že voľné radikály kyslíka hrajú dôležitú úlohu pri tvorbe HACE a sú dôležitým faktorom pri zvyšovaní priepustnosti hematoencefalickej bariéry v prostredí s vysokou nadmorskou výškou. V hypoxickom prostredí budú voľné radikály a MDA výrazne zvýšené, zatiaľ čo funkcia antioxidačných enzýmov je znížená. Preto nízka funkcia antioxidačných enzýmov a zvýšenie poškodenia peroxidáciou lipidov môžu mať dôležitý význam v patogenéze akútnej výškovej choroby. MDA sa vyrába rozkladom peroxidov mastných kyselín a je najbežnejšie meraným produktom peroxidácie lipidov v biologických systémoch. Antioxidačné enzýmy v tele zahŕňajú SOD, GSH-Px atď., ktoré buď priamo vychytávajú superoxidové voľné radikály a peroxid vodíka, alebo ich premieňajú na menej aktívne látky, ktoré zohrávajú obrannú úlohu. V homogenáte mozgového tkaniva sme teda detekovali SOD, MDA, GSH-Px.

V tomto experimente v porovnaní s normálnou kontrolnou skupinou sa množstvo TNF-a a IIL-6 v homogenáte mozgového tkaniva modelovej skupiny HACE významne zvýšilo, aktivita SOD, enzýmov GSH-Px sa znížila a obsah MDA sa výrazne zvýšil. Ukazuje sa, že hypoxiou indukovaná dysfunkcia oxidačného stresu a zápal u potkanov sa podieľajú na tvorbe HACE. Preventívne podávanie PhGC môže znížiť obsah vody v mozgovom tkanive u potkanov s cerebrálnym edémom a výrazne zlepšiť patologické zmeny edému mozgového tkaniva, čo naznačuje, že má účinok prevencie výskytu HACE. PhGC môžu zvýšiť SOD a GSH-Px v mozgovom tkanive potkanov počas hypoxie. Enzýmová aktivita znižuje obsah MDA v mozgovom tkanive spôsobený hypoxiou. Obsah TNF- a IL-6 v mozgovom tkanive potkanov v skupine s preventívnym podávaním PhGC je výrazne nižší ako v modelovej skupine, čo naznačuje, že prevenciou a liečbou môže byť náš antioxidačný stres a protizápalové látky. PhGCs Jeden z mechanizmov výškovej choroby. Na základe výsledkov tohto experimentu je účinok PhGC v skupine so strednou dávkou o niečo lepší ako pri vysokej dávke, ale rozdiel nie je štatisticky významný. Žiadna súvisiaca literatúra neuvádza PhGC sú induktory pečeňových liekových enzýmov, čo môže vylúčiť možnosť, že lieky indukujú zvýšenie aktivity pečeňových liekových enzýmov a urýchľujú vlastný metabolizmus. Špekuluje sa, že možným dôvodom je to, že so zvyšujúcou sa koncentráciou liečiva koncentrácia liečiva v tele presahuje rozsah vzťahu dávka-účinok. Pri strednej dávke sú všetky receptory v tele obsadené a receptory nasýtené, takže nedochádza k ďalšiemu zvyšovaniu účinku vysokých dávok a liečivo je glykozid, ktorý môže hydrolyzovať cukor v žalúdku a zvýšenie viskozity obmedzí účinnú absorpciu liečiva, keď je koncentrácia príliš vysoká.

doplnok cistanche: zlepšenie imunity

Odkaz

[1] John B. West, anglický preklad „názvoslovia, klasifikácie a diagnostických kritérií chorôb z vysokej nadmorskej výšky v Číne“[J]. High Altitude Med Biol, 2010, 11(2): 169-172.

[2] Bailey DM, Evans KA, James PE a kol. Zmenený metabolizmus voľných radikálov pri akútnej horskej chorobe: dôsledky pre dynamickú cerebrálnu autoreguláciu a funkciu hematoencefalickej bariéry [J]. J Physiol, 2009, 587(1): 73-85.

[3] Tang YP, Wu P, Su JJ a kol. Účinky akvaporínu-4 na tvorbu edému po intracerebrálnom krvácaní [J]. Experimentálna neurológia, 2010, (223): 485-495.

[4] Cai Hong, Bao Zhong, Jiang Yong, atď. Účinné zložky v Cistanche cistanche rôznych pôvodov Kvantitatívna analýza [J]. Chinese Herbal Medicine, 2007, 38(3): 452-455.

[5] Muhebuli • Abuliz, Mao Xinmin, Rena • Kasmu, atď. PhGCs Antioxidačná aktivita v HL-60 bunkách [J]. Chinese Pharmacological Bulletin, 2008, 3 (24): 362-364.

[6] Liu Fengxia, Wang Xiaowen, Luo Lan a kol. PhGCs proti a-amyloidnému peptidu Účinok a mechanizmus na učenie a pamäť na myšom modeli Alzheimerovej choroby [J]. Chinese Pharmacology Science Bulletin, 2006, 22(5): 595-599.

[7] Liu Zhiqin, Chen Quieting, Li Yan a kol. Účinky Cistanche na hematopoézu a hematopoetické účinky chemoterapie u myší s nádorom Vplyv imunitnej funkcie [J]. Journal of Beijing University of Traditional Chinese Medicine, 2010, 33 (11): 758-761.

[8] Xu Yonghua, Zhang Qiong, Cao Jinjun atď. Vytvorte rozsiahlu zloženú nízkotlakovú komoru na rozšírenie medicíny Typy experimentálnych platforiem [J]. Chinese Journal of Comparative Medicine, 2012, 22(7): 60-63.

[9] Tao Yicun, Shi Wen Hui, Xu Yonghua a kol. Pľúcny edém vo vysokej nadmorskej výške v prostredí simulovanej plošiny Vytvorenie myšacieho modelu [J]. Chinese Journal of Experimental Animal, 2014, 22 (1): 76-78.

[10] Wang Hai. Farmakoterapia pre chorobu z povolania [M]. Peking: Military Medical Science Publishing House, 2010: 131-148.

[11] Chen Yuntian, Hu Ying. Zmeny plazmatického interleukínu-6 u pacientov s akútnym HACE [J]. Chinese Journal of Preventive Medicine, 2006, 24 (2): 92-94.

[12] Colleen Glyde JL, Andrew WS, Megan JW a kol. Akútna horská choroba, zápal a priepustnosť: nové poznatky zo štúdie krvných biomarkerov [J]. J Appl Physiol, 2011, 111: 392-399.

[13] Zhou QQ, Tan XL, Wang J. Zvýšená permeabilita hematoencefalickej bariéry spôsobená zápalovými mediátormi sa podieľa na vysokom edéme mozgu [J]. Sci Res and Essays, 2011, 6 (3): 607-615.

[14] Ohga E, Matsuset. Vzťah medzi adhéznymi molekulami a hypoxiou [J]. Nippon Rinsho, 2000, 59 (8): 1587-1591.

[15] Bakonyi T, Radak Z. Vysoká nadmorská výška a voľné radikály [J]. J Sports Sci Med, 2004, 3(2): 64-69.

[16] Bailey DM, Evans KA, James PE a kol. Zmenený metabolizmus voľných radikálov pri akútnej horskej chorobe: dôsledky pre dynamickú cerebrálnu autoreguláciu a funkciu hematoencefalickej bariéry [J]. J Physiol, 2009, 587(1): 73-85.

[17] Zhou Qiquan, Wang Jing, Wang Yunli a kol. Krvný mozog vo vysokej nadmorskej výške vystavený voľným kyslíkovým radikálom Úloha bariérovej permeability sa mení a jej vzťah s HACE [J]. China Micro Circulation, 2007, 11(3): 149-153.