Pokrok vo výskume klasifikácie difúzneho veľkého B-bunkového lymfómu

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Difúzny veľkobunkový B-lymfóm (DLBCL) predstavuje 25 až 35 percent všetkých non-Hodgkinových lymfómov a je heterogénnou a agresívnou skupinou s rôznymi klinickými, patologickými a biologickými znakmi. lymfóm. Predchádzajúce klinické štúdie identifikovali rituximab, cyklofosfamid, doxorubicín, vinkristín a prednizón (R-CHOP) ako štandardnú liečbu prvej línie pre pacientov s DLBCL, z ktorých 50 percent až 70 percent pacientov môže. refraktérna alebo úplná remisia a potom relaps, zatiaľ čo iba 10 percent refraktérnych a relapsujúcich pacientov je možné vyliečiť tradičnou záchrannou imunochemoterapiou kombinovanou s autológnou transplantáciou krvotvorných buniek a zvyšných 90 percent pacientov má zlé výsledky liečby. Obrovskou výzvou sa preto stalo, ako zlepšiť prognózu týchto pacientov. V súčasnosti prebiehajú aj klinické štúdie, v ktorých sa diskutuje o kombinácii iných liečiv (napr. lenalidomid, ibrutinib a pod.) na báze R-CHOP na ďalšie zlepšenie účinnosti, ale nedošlo k výraznému pokroku. DLBCL má značnú heterogenitu, takže ako robiť presné stratifikované diagnózy a usmerňovať individualizovanú liečbu je tiež jedným zo súčasných hotspotov výskumu. Tento článok sumarizuje pokrok klasifikácie DLBCL.

cistamcheZvýšte proliferáciu buniek

1. COO typizácia DLBCL pomocou čipu na profilovanie génovej expresie

DLBCL má zjavnú heterogenitu v bunkovej morfológii a prognóze. V roku 2000 ALIZADEH a ďalší aplikovali technológiu génových čipov na skríning a detekciu 3 186 génov, ktoré zohrávajú dôležitú úlohu vo vývoji, diferenciácii a karcinogenéze lymfocytov, a zmapovali génovú expresiu DLBCL. Profil génovej expresie (GEP) ukázal, že DLBCL pochádza z B lymfocytov v rôznych štádiách diferenciácie. Podľa GEP možno DLBCL rozdeliť na dva podtypy: typ podobný germinálnym bunkám B (GCB) a typ podobný aktivovaným B bunkám (ABC). Následné štúdie ROSENWALD et al. aj tento výsledok potvrdili. Následné štúdie zahŕňali viac prípadov a viac typov genetického skríningu a zistili, že niektorí pacienti nedokázali určiť zdroj buniek, ktoré boli charakterizované medzi dvoma podtypmi, nazývanými typ 3, tiež známymi ako neklasifikované. Pre DLBCL rôzneho pôvodu štúdia zistila, že ukázala rôzne prognózy, medzi ktorými DLBCL odvodený z GCB mohol získať dlhší čas prežitia. Typizácia bunkového pôvodu (COO) odhalila heterogenitu DLBCL a pri liečbe R-CHOP boli medzi podtypmi významné rozdiely v prežití, čo poskytuje teoretický základ na vyhodnotenie prognózy a výber režimu. Výsledky testu GEP založené na technológii génových čipov sú v súčasnosti uznávané ako zlatý štandard na posudzovanie pôvodu buniek DLBCL. Výsledky testov sú najspoľahlivejšie, ale sú drahé a vyžadujú si vysoké vzorky, zvyčajne čerstvé zmrazené vzorky živého tkaniva, takže funkčnosť nie je silná. V klinickej praxi sa veľmi nepoužíva.

2. Použitie technológie NanoString na COO typizáciu DLBCL

NanoString (Fluorescent Barcode Labeled Single-Molecule Detection) je nová vysokovýkonná technológia profilovania génovej expresie na detekciu založená na priamom meraní fluorescenčných molekulárnych čiarových kódov na sondách po hybridizácii molekúl nukleových kyselín so sondami. Každý štítok s čiarovým kódom zodpovedá špecifickej sekvencii mRNA a v tej istej vzorke možno zmerať až 800 čiarových kódov, pričom požadovaný objem vzorky môže byť len 100 ng RNA. Digitálna kvantifikačná technológia NanoString eliminuje potrebu transkripcie, amplifikácie alebo konštrukcie knižnice, eliminuje zdĺhavé experimentálne postupy a ľudské zdroje a minimalizuje potenciálne skreslenie spôsobené enzymatickými reakciami. Pre klinické vzorky s riedkymi vzorkami môže technológia NanoString priamo použiť vzorky zaliate do parafínu na kvantifikáciu RNA bez extrakcie RNA. Táto technická výhoda ho robí praktickejším v klinickej praxi. SCOTT a kol. skrínoval 20 génov na základe údajov typizácie GEP a použil technológiu NanoString na vykonanie typizácie COO na 119 vzorkách DLBCL. Konzistencia medzi výsledkami výskumu a „zlatým štandardom“ dosiahla 95 percent, pričom pacientov možno rozdeliť aj na typ GCB, typ ABC a neklasifikovaný typ, pričom posledné dva sú súhrnne označované ako typ bez GCB, čo tiež ukazuje, že prognóza typu GCB je lepšia ako prognóza typu non-GCB. Ďalšie štúdie založené na technológii NanoString ďalej potvrdili hodnotu tejto technológie pri typizácii COO DLBCL.

Bylina tradičnej čínskej medicínycistamche, je tiež známy ako "púštny ženšen"

3. COO typizácia DLBCL pomocou technológie kvantitatívnej PCR

Typizácia génových čipov aj typizácia NanoString si vyžadujú drahé špeciálne vybavenie, ktoré sa v klinickej praxi ťažko široko používa. Kvantitatívna PCR je bežne používaná metóda na overenie génovej expresie. Vyznačuje sa jednoduchou obsluhou, vysokou citlivosťou a presnosťou a možno ho získať zo vzoriek zaliatych do parafínu. Tím Li Xiaoqiu použil kvantitatívnu PCR na uskutočnenie rozsiahlej klinickej validácie v populáciách čínskych pacientov po prvýkrát a vyvinul produkt vhodný na klinické genetické testovanie, konkrétne test DLBCL-COO. V tejto štúdii sa vo verejnej databáze skrínovalo 32 génov významne súvisiacich s typizáciou DLBCL-COO a zaradilo sa 160 pacientov a potom sa metódy imunohistochémie, kvantitatívnej PCR a génového čipu použili na detekciu ich vzoriek zaliatych v parafíne a zodpovedajúcich čerstvých Vo vzorkách tkanív výsledky ukázali, že výsledky typizácie testu DLBCL-COO boli na 92 ​​percent v súlade so „zlatým štandardom“; analýza prežitia ukázala, že výsledky typizácie testu DLBCL-COO významne korelovali s celkovým prežitím a prognóza typu GCB bola významne lepšia ako prognóza typu ABC (P =0.023), čo je vysoko konzistentné s domácim a výsledky zahraničných výskumov. Relatívne povedané, platforma metódy pre typizáciu pomocou technológie kvantitatívnej PCR je otvorenejšia, prevádzka je jednoduchšia a je vhodná na rutinný vývoj vo väčšine laboratórií molekulárnej patológie.

4. COO typizácia DLBCL imunohistochémiou

V niektorých oblastiach, kde sú finančné prostriedky a technológie vzácne, je ťažké široko použiť typizačnú technológiu založenú na GEP, takže klinicky najpoužívanejšou je stále metóda typizácie založená na imunohistochémii (IHC). V roku 2005 HANS a ďalší použili na typizáciu technológiu tkanivových mikročipov a vytvorili model typizácie IHC detekciou CD10, BCL6 a MUM-1. DLBCL možno rozdeliť na typ GCB a typ bez GCB. Prognóza prvého je výrazne lepšia ako prognóza druhého. (P<0.001), the="" agreement="" of="" this="" typing="" method="" with="" the="" gold="" standard="" was="" 84%.="" in="" order="" to="" further="" improve="" the="" accuracy="" of="" prognostic="" judgment,="" new="" typing="" systems,="" such="" as="" choi="" and="" tally,="" have="" been="" proposed="">

Typizácia Choi je založená na piatich biomarkeroch vrátane CD10, BCL6, MUM-1, FOXP1 a GCET1 a dva markery, FOXP1 a GCET1 sú pridané k metóde Hansovho typovania, čo je na 93 percent v súlade so „zlatým štandard“. Predchádzajúce štúdie ukázali, že FOXP1 je vysoko exprimovaný v type ABC a vysoká expresia je spojená so zlou prognózou. Keď je kritická hodnota FOXP1 80 percent, je možné špecificky rozlíšiť ABC typ DLBCL. GCET1 je však vysoko exprimovaný v B bunkách odvodených od germinálneho centra, takže pridanie GCET1 k Hansovmu typovaniu je užitočné na rozlíšenie DLBCL typu GCB a typu ABC. Čo sa týka predpovedania prognózy, Choiova klasifikácia sa použila na predpovedanie 3-ročnej miery prežitia pacientov, pričom typ GCB bol 88 percent , typ ABC 44 percent a výsledky predikcie klasifikácie GEP „zlatého štandardu“ (typ GCB bol 92 percent, typ ABC bol 44 percent) 44 percent) je pomerne blízko. Li Min a kol. porovnali predikčnú schopnosť Choiovej klasifikácie a Hansovej klasifikácie a tiež ukázali, že prvá z nich bola presnejšia. Celkové prežitie skupiny GCB a non-GCB skupiny podľa Hansovej klasifikácie nevykázalo žiadny významný rozdiel (P=0.102), zatiaľ čo klasifikácia Choi nevykázala žiadny významný rozdiel v celkovom prežívaní (P=0 .102). Prognóza skupiny GCB bola významne lepšia ako prognóza skupiny bez GCB (3-ročné miery prežitia boli 61,8 percenta a 42,5 percenta, v uvedenom poradí, P<0.05). however,="" it="" is="" worth="" noting="" that="" in="" recent="" years,="" with="" the="" high="" inconsistency="" of="" bcl6="" found="" by="" different="" research="" centers,="" the="" inclusion="" of="" bcl6="" in="" the="" improved="" classification="" of="" choi="" and="" hans="" has="" been="" canceled.="" operation="" and="" result="">

Ako je uvedené vyššie, typizácia Hans na základe IHC a typizácia Choi majú podobné funkcie a výsledky niekoľkých protilátok sa posudzujú v určitom poradí, čo vedie k tomu, že niektoré protilátky majú vyššiu prioritu ako iné. Metóda typu umožňuje vylúčiť následné výsledky protilátok, ak sú splnené predchádzajúce podmienky. Typ GEP však nesleduje určité poradie ani nevylučuje určité výsledky. Aby sa tieto rozdiely znížili, MEYER et al. vyvinula metódu typizácie, ktorá neposudzuje výsledky protilátok v špecifickom poradí, konkrétne metódu typizácie Tally. Najvyššia zhoda so „zlatým štandardom“ bola 93 percent, zatiaľ čo písanie Hansom aj Choiom bolo 87 percent. Metóda sčítacieho typu zahŕňa rovnaké množstvá protilátok GCB (GCET1 a CD10) a ABC (FOXP1 a MUM-1) a klasifikácia je určená imunofenotypovým párom, ktorý je pozitívnejší na antigén. Pre každý typ sa používajú dve protilátky, takže v prípade rovnakého pozitívneho výsledku pre každý typ je na určenie imunofenotypu potrebný LMO2 (LMO2 Väčšie alebo rovné 30 percent je hraničná hodnota). Štúdie potvrdili, že LMO2 je špecificky exprimovaný v B lymfocytoch alebo lymfómoch odvodených od GCB a jeho vysoká expresia je významne spojená s dobrou prognózou v DLBCL.

Na záver, hoci metóda typizácie COO DLBCL založená na IHC nie je taká dobrá ako typizácia NanoString a kvantitatívna typizácia PCR, konzistentnosť so „zlatým štandardom“ je tiež 74 percent -93 percent. Má výhody nízkych požiadaviek a ďalšie výhody, ktoré sú vhodné pre rutinný rozvoj rôznych nemocníc. Medzi nimi sú metódy typizácie Choi a Tally viac v súlade so „zlatým štandardom“, ale GCET1, FOXP1 a LMO2 nie sú stálymi protilátkami, čo do určitej miery obmedzuje ich široké použitie.

cistamche plátky na dennú spotrebu na zlepšenie bunkovej proliferácie a zníženie bunkovej apoptózy

5. Skúmanie typizácie DLBCL na základe génovej mutácie

Takmer všetci pacienti s DLBCL majú génové mutácie a pacienti s určitými mutáciami môžu ovplyvniť účinnosť špecifických cielených liekov a tým ovplyvniť prognózu. Preto má podtypovanie DLBCL na základe mutačných podpisov klinickú užitočnosť. SCHMITZ a kol. vybrali čerstvo zmrazené vzorky od 574 pacientov s DLBCL a použili sekvenovanie exómu a transkriptómu na analýzu počtu kópií DNA génového čipu. Spomedzi nich bolo vybraných 372 génov na cielenú amplifikáciu a opätovné sekvenovanie, aby sa identifikovali gény s reprodukovateľnými génmi. Sexuálne mutované gény. Výsledky štúdie rozdelili DLBCL na 4 genotypy: typ MCD (hlavne komutácia MYD88L265P a CD79B), typ BN2 (hlavne fúzia BCL6 a mutácia NOTCH2), typ N1 (hlavne mutácia NOTCH1) a typ EZB (hlavne mutácia EZH2) mutácia a BCL2 translokácia), medzi ktorými sú typy MCD a N1 odvodené hlavne od ABC, typ EZB je odvodený hlavne od GCB a typ BN2 predstavuje určitý podiel pacientov s ABC, GCB a neklasifikovaných pacientov (typ GCB predstavoval 19 percent, typ ABC typ tvoril 41 percent a nezaradený typ 40 percent). Štúdia tiež zistila, že nové genotypy môžu lepšie určiť prognózu, medzi ktorými typy BN2 a EZB majú lepšiu prognózu ako typy MCD a N1. Typy MCD, N1, BN2 a EZB predpovedajú 5-ročné miery prežitia 26 percent, 36 percent, 65 percent, 68 percent, multivariačná analýza tiež ukázala, že nový genotyp bol nezávislým faktorom ovplyvňujúcim prognózu a nebol ovplyvnený podľa skóre IPI. Výskumný tím vytvoril algoritmus LymphGen na klasifikáciu DLBCL do 7 genotypov na základe predchádzajúceho výskumu, pričom pridal A53 (s inaktiváciou TP53), ST2 (s mutáciami SGK1 a TET2) a ďalšie neklasifikovateľné. Táto metóda genotypovania mohla identifikovať 63,1 percent genotypov DLBCL. . Spomedzi nich má najlepšiu prognózu subtyp BN2 v type ABC a subtyp ST2 v type GCB má lepšiu prognózu ako subtyp EZB. Preto sa predpokladá, že nová genotypizácia ďalej odhaľuje patogenézu DLBCL s rôznou patogenézou medzi podtypmi a rôzne genotypy reagujú odlišne na imunochemoterapiu, čo môže ovplyvniť výber cielenej terapie, ale najväčším obmedzením tejto klasifikačnej metódy je, že niektoré pacientov nemožno zaradiť do žiadneho podtypu, čo si zaslúži ďalšie štúdium.

Prostredníctvom celoexómového sekvenovania 3{{30}}4 pacientov s DLBCL, CHAPUY et al. získali údaje o nízkofrekvenčných mutáciách, rekurentných mutáciách, zmenách počtu somatických kópií a štrukturálnych variantoch a definovali pacientov ako päť genotypov: typ C1 (hlavne BCL10, TNFAIP3, UBE2A, mutácia CD70 a translokácia BCL6, väčšinou pôvodu ABC), typ C2 (dochádza k bialelickej inaktivácii TP53, ktorá ovplyvňuje chromozomálnu stabilitu a bunkový cyklus a nemá nič spoločné s pôvodom ABC/GCB), typ C3 (hlavne mutácie BCL2, CREBBP2, EZH2, KMT2D, TNFRSF14, hlavne pôvod GCB), typ C4 (hlavne mutácie SGK1, HIST1H1E, NFKBIE, BRAF a CD83, väčšinou pôvodu GCB), typ C5 (hlavne CD79B, MYD88L265P, ETV6), mutácie PIM1 a TBL1XR1, väčšinou pôvodu ABC, bežné v primárnom centrálnom nervovom systéme a testikulárny DLBCL) a typ C0 (nedostatok jasných genetických ovládačov). Štúdia tiež ďalej analyzovala vzťah medzi novými genotypmi a prognózou. Výsledky ukázali, že C0, C1 a C4 mali lepšie prognózy, zatiaľ čo C3 a C5 mali zlú prognózu. U pacientov s ABC bola prognóza typu C1 významne lepšia ako u typu C5. , zatiaľ čo typ C4 bol významne lepší ako typ C3 u pacientov odvodených od GCB. Nová genotypizácia tiež definuje DLBCL typu ABC s nízkym rizikom (typ C1), ktorého bunky môžu pochádzať z extrafolikulárnej marginálnej zóny; a vysokorizikové DLBCL typu GCB so štrukturálnymi variantmi BCL2 a PETN a epigenetickými enzýmami. Zmeny (typ C3), zatiaľ čo nízkorizikový DLBCL typu GCB je spojený so zmenami v kinázach a viacerých rekombinantných proteínoch viacerých dráh (BCR/PI3K, JAK/STAT, BRAF) (typ C4); typizácia nesúvisiaca s pôvodom ABC/GCB S bialelickou inaktiváciou TP53, nestabilitou 9p21.3/CDKN2A a príbuzných génov (typ C2). Kľúčové genetické vlastnosti týchto DLBCL zahŕňajú mutácie, zmeny v počte somatických kópií a štrukturálne variácie a zmeny v týchto troch triedach genetických informácií, ktoré možno použiť na vysvetlenie rozdielov v chorobách a výsledkoch liečby.

Na základe cieleného sekvenovania 293 génov LACY et al. analyzovali charakteristiky génových mutácií 928 pacientov s DLBCL a rozdelili pacientov do 5 podtypov: typ MYD88 (hlavne mutácie MYD88L265P, PIM1, CD79B, hlavne pôvodu ABC, do tohto podtypu patrí väčšina pôvodných pacientov s DLBCL s centrálnym nervovým systémom, semenníkmi a prsníkmi ); Typ BCL2 (s EZH2, BCL2, CREBBP, T

Mutácie NFRSF14, KMT2D a MEF2B sú hlavne, hlavne z GCB, niektorí pacienti s lymfómom vysokého stupňa a pacienti s DLBCL transformovaní z folikulárneho lymfómu patria k tomuto typu); typ SOCS1/SGK1 (zahŕňajúci najmä mutácie SOCS1, CD83, SGK1, NFKBIA, HIST1H1E a STAT3 pochádzajú hlavne z GCB a väčšina primárnych mediastinálnych DLBCL patrí k tomuto typu); typ TET2/SGK1 (predovšetkým vrátane mutácií TET2, SGK1, KLHL6, ZFP36L1, BRAF, MAP2K1 a KRAS, hlavne pôvodu GCB); typ NOTCH2 (najmä vrátane mutácií NOTCH2, BCL10, TNFAIP3, CCND3, SPEN, TMEM30A FAS a CD70, zložených z ABC, GCB a neklasifikovaného pôvodu, s podobnými znakmi ako lymfóm marginálnej zóny); nezaradený podtyp (inde nezaradený, NEC). Štúdia analyzovala vzťah medzi rôznymi genotypmi a prognózou a výsledky ukázali, že najhoršiu prognózu má MYD88 s 5-ročnou mierou prežitia 42 percent; BCL2, SOCS1/SGK1 a TET2/SGK1 mali dobrú prognózu s 5-ročnou mierou prežitia 64,9 percenta, respektíve 62,5 percenta a 60,1 percenta; zatiaľ čo prognóza typov NOTCH2 a NEC bola medzi týmito dvoma a 5-ročná miera prežitia bola 48,1 percenta a 53,6 percenta.

Stručne povedané, možno vidieť, že tieto tri klasifikačné systémy sa nielen líšia, ale majú aj určitý obsah, ktorý sa prekrýva. Medzi nimi typy MYD88, C5 a MCD súvisia so zdrojom ABC. Primárne lymfómy centrálneho nervového systému a testikulárne lymfómy sa väčšinou vyskytujú v týchto troch typoch a prognóza je zlá. Typ C2 je charakterizovaný mutáciou/deléciou TP53 a väčšina z nich má zlú prognózu a A53 zodpovedá C2. Typy BCL2, C3 a EZB sú spojené so zdrojom GCB, majú rovnaký mutačný podpis ako folikulárny lymfóm a hoci u tohto typu sú bežnejšie lymfómy s dvojitým zásahom a lymfómy vysokého stupňa, celková prognóza je dobrá. Typy SOCS1/SGK1 a C4 sú hlavne DLBCL odvodené od GCB, ktoré majú podobné genetické vlastnosti ako primárny mediastinálny veľkobunkový B-lymfóm a majú najlepšiu prognózu. Súčasné typovanie mutácií je však zložité a metódy a výsledky rôznych štúdií sa líšia. Preto je potrebné proces analýzy v budúcnosti ešte zjednodušiť, aby sa ďalej objasnil vplyv génov jadrovej mutácie na prognózu a liečbu.

cistamcheobsahuje bohatý echinakozid a akteozid, ktoré môžu vyživovať a chrániť telo pred vírusmi a chorobami

Zhrnutie

Typizácia COO na základe GEP je „zlatým štandardom“, ale vyžaduje si vysoké vzorky, je drahá a nie je ľahké ju rutinne vykonávať v klinickej praxi. Ako alternatíva sa typizácia COO založená na NanoString, kvantitatívnej PCR a imunohistochemických technikách ďalej optimalizovala z hľadiska požiadaviek na vzorky, technickej náročnosti a experimentálnych nákladov, ale presnosť prognostického úsudku a úloha vedenia liečby je stále vyššia ako pri Zlatý štandard. Existuje určitá medzera. Súčasné štúdie tiež ukázali, že takmer všetci pacienti s DLBCL obsahujú genetické mutácie a nepriaznivé genetické mutácie môžu výrazne ovplyvniť prognózu. Cielená terapia niektorých špecifických mutácií môže tiež zlepšiť prognózu, takže nová klasifikácia založená na génových mutáciách má dôležitý klinický význam. Typizácia génových mutácií je komplementárna k typizácii COO, čo vysvetľuje, že v rámci rovnakého podtypu COO existuje aj významná heterogenita. Typizácia génových mutácií však nemôže zahŕňať všetkých pacientov a je potrebný ďalší výskum, aby sa potvrdil hlavný význam klinickej prognózy a či tradičné a nové cielené lieky, ktoré sa v súčasnosti používajú, môžu viesť liečbu týmto typizáciou.