Pohlavne špecifická vrodená imunita a starnutie u sladkovodných korytnačiek s dlhou životnosťou (Kinosternon Favescens: Kinosternidae)
Oct 12, 2023
Abstraktné
Pozadie
Progresívna deregulácia imunitného systému s vekom, nazývaná imunosenescencia, bola dobre študovaná v systémoch cicavcov, ale štúdie imunitnej funkcie v dlho žijúcich, divokých, necicavčích populáciách sú vzácne. V tejto štúdii využívame 38-ročnú štúdiu opätovného zachytenia známok na kvantifikáciu vzťahov medzi vekom, pohlavím, prežitím, reprodukčným výkonom a vrodeným imunitným systémom u dlhovekých plazov, žltých bahenných korytnačiek (Kinosternon favescens;testudíny; Kinostternidae).
výhody doplnku cistanche-zvýšenie imunity
Metódy
Odhadli sme mieru prežitia a úmrtnosti špecifickú pre vek podľa pohlavia na základe údajov o opätovnom odchyte 1 530 dospelých žien a 860 dospelých mužov po 38 rokoch odchytu. Analyzovali sme baktericídnu kompetenciu (BC) a dve imunitné reakcie na cudzie červené krvinky – prirodzenú protilátkou sprostredkovanú hemaglutináciu (NAbs) a komplementom sprostredkovanú hemolýzu (Lys) – u 200 dospelých (102 žien; 98 mužov), ktoré sa pohybovali od 7 až 58 rokov zachytené v máji 2018 počas ich objavenia sa z brumácie a pre ktoré boli k dispozícii údaje o reprodukčnom výkone a dlhodobom odchyte znamienok.
Výsledky
Zistili sme, že ženy sú menšie a žijú dlhšie ako muži v tejto populácii, ale miera zrýchľovania úmrtnosti v dospelosti je rovnaká pre obe pohlavia. Na rozdiel od toho muži vykazovali vyššiu vrodenú imunitu ako ženy pre všetky tri imunitné premenné, ktoré sme merali. Všetky imunitné reakcie sa tiež menili nepriamo s vekom, čo naznačuje imunosenescenciu. U samíc, ktoré sa rozmnožovali v predchádzajúcej reprodukčnej sezóne, sa hmotnosť vajec (a teda celková hmotnosť znášky) s vekom zvyšovala. Okrem imunosenescencie baktericídnej kompetencie mali samice, ktoré produkovali menšie znášky, aj nižšiu baktericídnu schopnosť.
Závery
Na rozdiel od všeobecného vzorca nižších imunitných reakcií u stavovcov u samcov ako u samíc (pravdepodobne odrážajúcich supresívne účinky androgénov) sme u mužov našli vyššie hladiny všetkých troch imunitných premenných. Okrem toho, na rozdiel od predchádzajúcej práce, ktorá nenašla žiadny dôkaz imunosenescencie u maľovaných korytnačiek alebo korytnačiek s červenými ušami, sme zistili pokles baktericídnej kompetencie, schopnosti lýzy a prirodzených protilátok s vekom u korytnačiek žltých bahenných.
Kľúčové slová
Vrodená imunitná funkcia, plaz, starnutie, špecifická pre pohlavie, starnutie
výhody doplnku cistanche-zvýšenie imunity
Pozadie
Starnutie v mnohých systémoch stavovcov je charakterizované starnutím organizmu – klesajúcou účinnosťou a výkonnosťou fyziologických a bunkových procesov [1], čo vedie k znižovaniu veku špecifického prežitia a plodnosti s postupujúcim vekom [2]. Štúdie starnutia vo voľne žijúcich populáciách stavovcov sa často zameriavali na kvantifikáciu zmien v plodnosti a úmrtnosti súvisiacich s vekom [3], ale menej často na fyziologické mechanizmy, ktoré môžu prispieť k takémuto demografickému starnutiu (napr. [4–6]). Jedným z takýchto kandidátskych fyziologických mechanizmov je imunitná funkcia, ktorá hrá rozhodujúcu úlohu pri prežití. Ukázalo sa, že znížená imunitná funkcia negatívne ovplyvňuje prežitie a reprodukciu [6–8]. Progresívna deregulácia imunitného systému s vekom, nazývaná imunosenescencia, bola u ľudí dobre študovaná pre vrodenú imunitu (ktorej dysregulácia s vekom môže viesť k chronickému zápalu [9]), ako aj pre získanú imunitu, kde sú najlepšie študované zmeny. nárast pamäťových T buniek a pokles naivných T buniek s postupujúcim vekom (ale aj tu zostáva imunosenescencia záhadná [10]). Vekovo špecifické zmeny v imunitnom systéme dlho žijúcich, divokých, necicavčích populácií však nie sú v literatúre dobre opísané a štúdie zamerané na imunosenescenciu plazov sú dokonca zriedkavé (prehľad v [8]). Starnutie organizmu, ktoré spôsobuje demografické starnutie v populáciách, sa vyvinulo vo voľnej prírode. Štúdie na prirodzených populáciách sú teda v dobrej pozícii, aby odhalili evolučne konzervované starnúce procesy, ktoré sú možnými obmedzeniami toho, ako dochádza k starnutiu. Štúdium starnutia organizmu a demografického vývoja vo voľnej prírode zároveň poskytuje realistické ekologické súvislosti a odhaľuje mieru, do akej sú mechanizmy starnutia flexibilné. Najmä plazy majú mnoho znakov, ktoré ich odporúčajú na štúdium mechanizmov starnutia, vrátane imunosenescencie. Po prvé, sú sesterským kladom cicavcov, ktoré spolu tvoria monofyletický klad amniotov; imunitná funkcia a bunkové signálne dráhy sú u amniotov vysoko konzervované (prehľad v [11]). Po druhé, plazy vykazujú niekoľko fenotypov, ktoré umožňujú štúdium starnutia v celom rade fyziologických a morfologických kontextov, čo nie je možné u väčšiny druhov cicavcov (napr. odolnosť voči hypoxii, mrazuvzdornosť, jed, pancier, tepelná tolerancia, prehľad v [8] ]). S výnimkou vtákov sú plazy poikilotermné a mnohé z nich pokračujú v raste ako dospelí (napr. [12], ale pozri [13]) a zvyšujú svoju plodnosť s postupujúcim vekom ([14–17], prehľad v [8]). Okrem toho mnohé línie plazov majú jedinečné morfologické vlastnosti. Príklady druhých zahŕňajú ochranné fenotypy - ako sú vonkajšie rebrá u korytnačiek a jed u niektorých hadov. Nedávne fylogenetické analýzy miery úmrtnosti starnutia ukázali silnú podporu pre hypotézu, že línie plazov s ochrannými fenotypmi mali dlhší život a pomalšie starnutie ako podobne veľké cicavce, najmä medzi korytnačkami [18] (pozri tiež [19, 20]). V 300 druhoch tetrapodov [18] odobratých vo voľnej prírode boli korytnačky jedinečné v tom, že celá línia bola charakterizovaná druhmi s takmer zanedbateľnou úmrtnosťou, starnutím a dlhou životnosťou – pocit, ktorý sa odráža v zajatí [21]. Vzhľadom na to, že rast (a teda plodnosť) môže pokračovať počas dospelého života, selekcia proti škodlivým mutáciám s fenotypmi neskorého veku môže byť silnejšia vo vyššom veku u korytnačiek a iných plazov s týmito vlastnosťami v porovnaní s cicavcami (ako v [22]). Tieto znaky naznačujú, že imunosenescencia sa nemusí prejaviť rovnakým spôsobom u plazov v porovnaní s inými amniotickými stavovcami, ako sú cicavce alebo vtáky, a môže dokonca chýbať v dôsledku selektívnych tlakov na udržanie imunitnej funkcie so zvýšenou reprodukciou (napr. [5]). . Tu sa zameriavame na rozšírenie komparatívneho prostredia štúdií starnutia u korytnačiek s cieľom podporiť ich použitie ako modelov pomalého starnutia. Imunitný systém korytnačiek, podobne ako iných amniotov, zahŕňa vrodené a získané zložky (prehľad v [23]), ale nedávne analýzy naznačujú, že plazy sa môžu viac spoliehať na vrodenú obranu v porovnaní s cicavcami a vtákmi [24]. Konkrétne, hoci plazy majú B a T bunky spojené s adaptívnou imunitou, tradičná adaptívna rýchla reakcia po sekundárnej expozícii patogénom sa môže viac spoliehať na vrodenú imunitu [24]. Existuje čoraz viac literatúry o vzorcoch vrodenej imunity u ektotermických plazov súvisiacich s vekom [4, 25–27], ktorá poskytuje prvú líniu obrany proti cudzím patogénom. Štúdium pohlavných rozdielov v starnutí organizmu a demografickom starnutí sa zároveň rozšírilo na lepšie fylogenetické pokrytie vrátane plazov [28]. Dôležité je, že tieto štúdie sú možné vo voľne žijúcich populáciách len so schopnosťou presne zostarnúť jedincov, čo si vyžaduje dlhodobé štúdium pre dlhoveké druhy ([29, 30], prehľad v [31]). Túto literatúru dopĺňame skúmaním aspektov pohlavnej a vekovej špecifickosti vrodenej imunity, prežívania, reprodukcie žien a vzťahov medzi nimi u dlhovekého plaza. Využívame 38-ročnú štúdiu opätovného zachytenia známok žltých bahenných korytnačiek v známom veku (Kinosternon favescens) kvantifikovať vzťahy medzi vekom, pohlavím, prežitím a reprodukčným výkonom na vrodenom imunitnom systéme ako integračný prístup k pochopeniu imunosenescencie. Rovnako ako u iných korytnačiek sa zistilo, že tento druh pomaly starne, keď sa pohlavia zvažujú spolu [18]. Konkrétne sme hodnotili tri vrodené imunitné opatrenia – cirkulujúce prirodzené protilátky, komplementom sprostredkovanú schopnosť lýzy a baktericídnu kompetenciu plazmy – v našej dlhodobej študovanej populácii v Nebraske (USA). Podľa existujúcej paradigmy vrodenej imunosenescencie sme predpovedali, že miery vrodenej imunity budú klesať s postupujúcim vekom, napriek niektorým dôkazom o opaku [5, 32].
cistanche tubulosa - zlepšenie imunitného systému
Výsledky
V roku 2018 sa odobrali vzorky z dvoch stoviek zvierat na imunitné premenné (N=98 samcov, N=102 samíc) a tieto pozorovania zahŕňajú naše imunitné údaje. Z týchto 102 samíc sa 85 rozmnožilo v roku 2017 a tieto zahŕňajú naše reprodukčné údaje žien. Nakoniec sme na analýzu starnutia úmrtnosti v populácii ako celku použili našu dlhodobú databázu N=2380 jedinečných jedincov v známom veku (N=860 mužov, N{10}} žien ). V našej vzorke jedincov s imunitnými údajmi (200 dospelých) vek vysoko koreloval s veľkosťou tela; staršie zvieratá boli väčšie z hľadiska hmotnosti aj dĺžky (napr. telesná hmotnosť, r=0.58, Pr.<0.0001; plastron length, r=0.60, Pr. <0.0001). Therefore body size was not included in models where age was an explanatory factor. In the immune data individuals, adult females were smaller than males and tended to be older (Table 1, Fig. S2), a result that is mirrored in the population as a whole (see Fig. 5 in [33]). Because adult females in our immune sample were significantly older than males, we z-transformed age for all analyses of innate immune function to dissociate the confound of age and sex. This allowed for a comparison of relatively old and young adult males and females.
Tabuľka 1 Veľkosť, vek a úmrtnosť Starnutie u žltých bahenných korytnačiek
V populácii ako celku mali ženy väčšiu strednú a maximálnu dĺžku života v dospelosti (vek, v ktorých zomrelo 50 a 95 % dospelých). Dospelí samci aj samice korytnačiek vykazovali nárast morálky súvisiaci s vekom, čo naznačuje starnutie. Počiatočná miera úmrtnosti dospelých bola vyššia u mužov ako u žien, ale miery zrýchlenia úmrtnosti boli ekvivalentné (tabuľka 1, obr. 1). V našej imunitnej podvzorke jednotlivcov tri miery vrodenej imunitnej funkcie navzájom významne (pozitívne) korelovali (hemaglutinácia sprostredkovaná prirodzenou protilátkou, hemolýza sprostredkovaná komplementom a baktericídna kompetencia, tabuľka S1). Ale pretože korelácie boli slabé (všetky |r|< 0.28), we analyzed each variable separately. For all three variables, batch represents the reagents used. For bactericidal competence, five individual lyophilized pellets of Escherichia coli were used to generate control plates across the experiment; as control plates decreased in their colony count, a fresh control solution was made. For natural antibodies and cell lysis capability, two separate bottles of rabbit red blood cells were used sequentially. Significant variation among E. coli pellets and individual rabbits (that generate the red blood cells) is expected, and we controlled for it here as a batch effect in our models. All three immune variables declined with advancing age (BC and Lysis, Pr< 0.05; Nabs, Pr=0.08, Table 2, Fig. 2) and were higher in males than females (Table 2, Fig. 3). For the 85 females in our data for which we had both most-recent reproductive output and immune measures, clutch size did not change with age, whereas egg mass increased with age (Tables 3, S2, Fig. 4). Because clutch size did not change with age, a third measure of reproductive effort, total clutch mass followed the identical trend as egg mass and was not considered further. Interestingly, the three females greater than 50 years old had lower age-corrected egg mass (age>50 rokov) ako ženy v ďalšom najnižšom vekovom intervale (N=13 vek 40–50 rokov (t=2.45, Pr.=0.014)), čo naznačuje možnosť starnutia v reprodukčnom výkone u veľmi starých samíc (pozri obr. 4). U týchto 85 reprodukčných samíc sledovali staršie samice rovnaký trend pozorovaný u všetkých dospelých: znížená baktericídna kompetencia a komplementom sprostredkovaná hemolýza s vekom (tabuľka 3, pozri obr. 1). Okrem toho samice s väčšími znáškami - bez ohľadu na vek - mali vyššiu baktericídnu schopnosť ako samice s menšími znáškami (obr. S1). Na rozdiel od veľkosti znášky sme nezistili žiadne účinky vaječnej hmoty na imunitnú funkciu (údaje nie sú uvedené).
Diskusia
Výhody doplnku cistanche-ako posilniť imunitný systém
Kliknite sem pre zobrazenie produktov Cistanche Enhance Immunity
【Požiadať o viac】 E-mail:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692
Úmrtnosť a reprodukčná senescencia
Samice žltých bahenných korytnačiek žijú v tejto populácii dlhšie ako samce; starnú však podobným tempom (obr. 1) a vekovo špecifická úmrtnosť stúpa s vekom u oboch pohlaví (obr. 1), aj keď pomaly. Tieto údaje ukazujú pomalé starnutie úmrtnosti u tohto druhu, ale v našich vzorkách samíc sme nenašli žiadny dôkaz reprodukčného starnutia. Vo fylogenetickej štúdii veľkých tetrapodov [18], ako aj v individuálnych dlhodobých štúdiách obrovských korytnačiek [34] a maľovaných korytnačiek bolo zaznamenané malé zrýchlenie úmrtnosti dospelých korytnačiek ([35, 36], ale pozri [ 37, 38] a druhy korytnačiek s krídlom [39]); u iných druhov korytnačiek však úmrtnosť často zostáva konštantná s postupujúcim vekom dospelosti [40] alebo klesá s vekom [3, 15, 41]. Naprieč populáciami korytnačiek v zajatí (napr. záznamy zoo) da Silva et al. [21] zistili, že väčšina druhov korytnačiek vykazovala pomalý alebo zanedbateľný pokles úmrtnosti s vekom. Reprodukčné starnutie samíc (tj pokles reprodukčného výkonu špecifického pre daný vek) sa zatiaľ u druhov korytnačiek nepozoruje (korytnačky maľované [30], Blandingove korytnačky [15, 41], púštne korytnačky [3] a korytnačky boxerské [42]). . Warner a kolegovia [30] zaznamenali znížené prežívanie mláďat vyliahnutých korytnačiek maľovaných v porovnaní s najstaršími samicami maľovaných korytnačiek, a to napriek žiadnemu zníženiu reprodukčného výkonu. Okrem toho mnohé reprodukčné štúdie korytnačiek preukázali pozitívnu koreláciu medzi veľkosťou znášky, veľkosťou vajec a/alebo hmotnosťou znášky s veľkosťou tela korytnačiek ([43]; prehľad [44]), kde veľkosť tela je často pozitívne spojená s vekom korytnačky (napr. súčasná štúdia [17, 32], ale pozri [41]). Tieto údaje naznačujú, že reprodukčné starnutie sa u korytnačiek vyskytuje zriedka, ak vôbec.
Obr. 1 Prežitie a vekovo špecifická úmrtnosť u dospelých mužov a žien K. favescens. Stredná (50 % nažive) a maximálna (5 % nažive) dĺžka života je väčšia u dospelých samíc (čierne prerušované čiary) žltých bahenných korytnačiek ako u dospelých samcov (sivé plné čiary). Os Y predstavuje prežitie Lx pre dospelých, ktorí začínajú vo veku 11 rokov. Čiary klesajúce na os x ukazujú strednú a maximálnu dĺžku života v chronologickom veku. Vložka ukazuje Gompertzove modely zrýchľovania úmrtnosti v dospelosti; počiatočná úmrtnosť dospelých mužov je výrazne vyššia ako u žien (prevýšenie čiar), s ekvivalentnými nárastmi (sklony čiar) (tabuľka 1). Os Y je prirodzený logaritmus vekovo špecifickej úmrtnosti z prispôsobeného Gompertzovho akceleračného modelu
Pohlavne špecifická dlhovekosť a starnutie
Štúdie pohlavných rozdielov v organizmovom a demografickom starnutí zostávajú zriedkavé u necicavčích druhov. Sú na to pravdepodobne dva dôvody: počiatočné demografické správy o voľne žijúcich populáciách často zhromažďujú údaje, aby bolo možné odhadnúť zrýchlenie úmrtnosti; a u mnohých druhov je pohlavie mláďat neznáme v dôsledku nedostatku vonkajších genitálií a pri priraďovaní pohlavia u novozrelých zvierat sa musia spoliehať na vývoj sekundárnych sexuálnych fenotypov. V prehľade údajov o dlhovekosti v zajatí, da Silva a kolegovia [21] uviedli, že priemerná dĺžka života dospelých mužov prekročila priemernú dĺžku života samíc asi o 20 %, na rozdiel od našich výsledkov pre korytnačky žlté bahenné. Zdá sa však, že väčšia dlhovekosť u samíc vo voľne žijúcich populáciách korytnačiek je vzor (korytnačky maľované [28, 45]), korytnačky škvrnité [46, 47], korytnačky drevené [48], korytnačky mapové [49] cooters [50], korytnačky boxerské [51] a kĺzačky červenoušské [52]). Na rozdiel od toho poznáme iba dve štúdie, ktoré uvádzajú, že samce korytnačiek prežijú vo voľnej prírode samice (korytnačky gopher [53], ale pozri [54], a populácia korytnačiek maľovaných [36]. Sú potrebné ďalšie údaje, ale tieto terénne údaje kontrastujú so záznamami v zajatí zhrnutými v [21] a naznačujú možnú interakciu medzi pohlaviami a prostredím súvisiacu s dlhovekosťou a starnutím.
Tabuľka 2 Analýza rozptylu imunitných premenných u dospelých samcov a samíc žltých bahenných korytnačiek
Pohlavne špecifická imunitná funkcia
Zistili sme vyššie úrovne imunitnej funkcie u samcov ako u samíc, čo je opak všeobecného vzorca u stavovcov [55, 56] a predpokladá sa, že aspoň čiastočne súvisí so supresiou imunitného systému androgénmi [57, 58]. Mnohé druhy korytnačiek sú vhodnými modelmi pre túto otázku, pretože im chýbajú pohlavné chromozómy, a preto majú pohlavia pri počatí identickú architektúru genómu. Namiesto toho má Tey určovanie pohlavia závislé od teploty (TSD), pričom pohlavie je určované tepelným prostredím prežívaným počas kritického obdobia embryonálneho vývoja, čím sa odstraňuje akýkoľvek zmätok medzi pohlavne špecifickými genómami a pohlavne špecifickým sexuálnym vývojom [59]. López-Pérez a kolegovia [60] nenašli žiadny rozdiel v baktericídnej kompetencii medzi samcami a samicami u druhu pižmovej korytnačky (ďalšia kinosternidná korytnačka s TSD). Podobne Zimmerman a kolegovia [32, 61, 62] nezistili žiadny rozdiel medzi pohlaviami v meraniach vrodenej imunity u korytnačiek s červenými ušami (tiež s TSD). Naproti tomu u korytnačiek maľovaných [5] – ďalšieho druhu s TSD – bola u samcov zaznamenaná vyššia schopnosť hemolýzy sprostredkovaná komplementom a u samíc vyššie prirodzené titre protilátok bez pohlavného vplyvu na baktericídnu schopnosť. Okrem toho Freedberg a kolegovia [63] zistili, že chladné inkubačné teploty produkujúce samcov v inej korytnačke TSD zvýšili imunokompetenciu u samcov viac ako u samíc, ale nezistili žiadne takéto účinky u blízko príbuzného kongenera. Aj keď sa zdá, že tieto predbežné údaje naznačujú, že korytnačky nemusia nasledovať všeobecný vzorec nižších imunitných reakcií u samcov u stavovcov, je jednoznačne potrebný ďalší výskum. Podľa teórie ekoimunológie, ktorá predpokladá asociácie medzi imunitnou obranou a životným príbehom [64, 65], by sme očakávali, že pohlavie s dlhším životom bude investovať viac do získanej imunity v porovnaní s vrodenou imunitou [66]; obmedzené údaje o dlhovekosti podľa pohlavia znemožňujú komplexný test naprieč druhmi.
cistanche rastlina zvyšujúca imunitný systém
Rozdiely v správaní a vzorce aktivity môžu vystaviť samice korytnačiek žltých bahenných väčším infekčným tlakom ako samce, čo môže potlačiť imunitnú funkciu samíc [55, 56]. Náš študijný druh má nezvyčajný ročný cyklus aktivity (pozri Metódy). Na našom pracovisku štúdie dospelé samce vychádzajú z brumácie v priemere 5 dní pred samicami na jar [Iverson a Greene, nepublikované údaje], zostávajú aktívne vo vode v júni počas dlhých hniezdnych nájazdov samíc a v priemere prechádzajú na letný čas. neskôr ako ženy [67]. Preto je ročné obdobie aktivity tohto druhu nezvyčajne krátke, pričom typický samec je aktívny vo vode možno o 25 % dlhšie ako typická samica. Nie je však jasné, prečo by ich kratšia sezóna aktivity samíc vystavila väčšiemu tlaku na imunitný systém. Reprodukčná aktivita samcov a samíc sa tiež líši, pričom párenie a oplodnenie prebieha vo vodnom stĺpci, po ktorom sa samice musia vynoriť z vody na súš, aby uložili vajíčka (zatiaľ čo samce nemajú takýto povinný nájazd na pevninu) [67]. sezónne (napr. [Koncentrácie plazivých cirkulujúcich steroidov sú vysoké 68, 69]), a teda model, ktorý sme pozorovali pri vyššej imunitnej funkcii u samcov, možno pripísať odberu vzoriek iba počas jarného vzchádzania – tj veľmi skoro v sezóne. Sezónne variácie androgénov korytnačiek boli dostatočne dobre preštudované a hladiny cirkulujúceho testosterónu u samcov korytnačiek sú vo všeobecnosti veľmi nízke skoro na jar (prehľad v [69]), zatiaľ čo u samíc vrcholí na jar, keď sa pripravujú na ovuláciu [69– 74]. Je známe, že testosterón potláča imunitnú funkciu ([57], ale pozri [58]), čo by mohlo vysvetliť nižšie imunitné reakcie u žien v porovnaní s mužmi. Je však známe, že estradiol zvyšuje imunitnú funkciu [23] a vo všeobecnosti je zvýšený u žien skoro na jar, po čom nasleduje vrchol krátko potom v spojení s ovuláciou a ovipozíciou ([75], prehľad v [69]). Takže na základe nášho skorého jarného odberu vzoriek estradiolu a testosterónu sú nepravdepodobné vysvetlenia nižších imunitných reakcií pozorovaných u našich žien. Bohužiaľ nám chýbajú údaje o hladinách cirkulujúcich hormónov v našom študijnom druhu, ale vzhľadom na práve opísané všeobecné vzorce vplyv cirkulujúcich steroidov na imunitnú funkciu stále nie je jasný.
Obr. 2 Vrodená imunita klesá s vekom u dospelých K. favescens. A Baktericídna kompetencia a lýza sprostredkovaná komplementom B klesali s vekom podobne u dospelých samcov a samíc žltých bahenných korytnačiek (štatistický výstup pozri v tabuľke 2). C Natural Antibodies (NAbs) vykazovali rovnaký trend. Vo všetkých paneloch predstavuje os Y zvyšky z lineárnych modelov s vekom odstráneným z modelu (tabuľka 2). Os X je z-transformovaný vek s vloženými čiarami, ktoré označujú vek v rokoch pre dospelé samce a samice korytnačiek. Regresie: BC reziduá=−{{10}}.138(zVek), R2=0.06; Zvyšky lýzy=-0,01(zVek), R2=0,02; Zvyšky NAbs=-0,01(zAge), R2=0,01
Reprodukcia žien a imunitná funkcia
Nenašli sme žiadne dôkazy o imunitných nákladoch na reprodukciu žien. Ani veľkosť znášky (tabuľka 3), ani hmotnosť vajec (údaje nie sú uvedené) negatívne neovplyvnili žiadnu imunitnú premennú. V skutočnosti, samice, ktoré znášali väčšie znášky vajíčok, mali vyššiu baktericídnu schopnosť (obr. S1). Teória histórie života predpovedá, že jednotlivci musia alokovať zdroje na vlastnosti, ako sú tie, ktoré podporujú sebaudržiavanie a reprodukciu, aby maximalizovali kondíciu [76]. Reprodukcia však predstavuje pre samice značné energetické náklady, a preto zdroje vyčlenené na reprodukciu môžu ísť na úkor iných vlastností [77]. Dá sa teda očakávať, že ženy, ktoré investujú veľa do súčasnej reprodukcie, zažijú kompromis so súčasnou imunitnou účinnosťou [78]. Tento kompromis medzi reprodukciou a imunitnou funkciou bol skúmaný u iných plazov so zmiešanými výsledkami. Gravidné západné suchozemské podväzkové hady (Tamnophis elegans) vykazovali nižšiu schopnosť proliferácie T-lymfocytov v reakcii na mitogén v porovnaní s negravidnými druhmi, ale nevykazovali žiadny rozdiel v BC medzi reprodukčnými stavmi [27]. Na rozdiel od toho gravidné štrkáče zakrpatené (Sistrurus milarius) vykazovali zníženú schopnosť BC v porovnaní s negravidnými hadmi [79]. Merania vrodenej imunity medzi reprodukčnými stavmi u korytnačiek maľovaných (Chrysemys picta) boli závislé od veku [5]. Konkrétne mladšie samice, ktoré mali veľké znášky, vykazovali väčšiu schopnosť lýzy ako staršie samice s podobne veľkými znáškami. Táto istá štúdia však zistila zvýšenú BC u starších žien, čo je v kontraste so zisteniami v tejto štúdii o znížení imunitnej funkcie s postupujúcim vekom. Okrem toho, bez ohľadu na vek, sme zistili, že väčšie veľkosti spojok korelovali s vyšším BC a že neexistoval žiadny vplyv reprodukcie na prirodzenú produkciu protilátok alebo schopnosť lýzy. Tieto výsledky naznačujú, že kompromisy medzi imunitnou funkciou a reprodukciou sú pravdepodobne špecifické pre imunitnú zložku.
Obr. 3 Vrodená imunita je významne vyššia u mužov ako u dospelých žien K. favescens. Spätne transformovaný najmenší štvorec znamená ±1 SE pre A) baktericídnu kompetenciu (os y je podiel usmrtených kolónií E. coli) a B) prirodzené protilátky (os y je maximálny riediaci titer, pri ktorom dochádza k hemaglutinácii králičích červených krviniek ) a komplementom sprostredkovaná lýza (maximálny titer riedenia, pri ktorom dochádza k lýze králičích červených krviniek). Hviezdičky predstavujú významný rozdiel medzi pohlaviami pre danú mieru imunity. (Štatistický výstup nájdete v tabuľke 2). LS znamená: BC=0.37, 0.62; NAbs=4.0, 4.6; Lys=8.2, 9.0
Tabuľka 3 Analýza imunitných premenných a reprodukčného úsilia pre reprodukčné samice žltých bahenných korytnačiek
Obr. 4 Hmotnosť vajec, nie veľkosť znášky, sa zvyšuje s vekom u reprodukujúcich sa samičiek K. favescens. Os Y predstavuje zvyšky z lineárneho modelu v tabuľke 3 s vekom odstráneným z modelu. Zvyšky hmotnosti vajec=0.025 (vek) – 0,73, R2=0,40
Imunosenescencia
Z vrodených imunitných premenných, ktoré sme skúmali u žltých bahenných korytnačiek, sme našli dôkaz imunosenescencie u všetkých troch (obr. 2; tabuľka 2). Výsledky z iných štúdií sú zmiešané. Napríklad väčšie (pravdepodobne staršie) kĺzačky s červenými ušami nevykazovali žiadnu zmenu v BC v porovnaní s menšími jedincami [32, 61], podobne ako zistenia o baktericídnej kompetencii u maľovaných korytnačiek, kde bol známy vek [5]. Táto posledná štúdia tiež zaznamenala zvýšenie hemaglutinácie u starších zvierat. Je zrejmé, že zatiaľ nie je zrejmý žiadny model zmien súvisiacich s vekom vo vrodenom imunitnom systéme korytnačiek. Medzi inými nelietavými plazmi sú výsledky tiež dosť variabilné (prehľad v [8, 26]). Napríklad v populáciách podväzkových hadov sa u starších hadov znižuje schopnosť hemaglutinácie aj hemolýzy [27, 80], rovnako ako imunitná odpoveď na mitogénny fytohemaglutinín u jašteríc obojkových Dickersonových [81]. Zatiaľ čo u vodných pytónov sa hemaglutinácia zvyšuje s vekom [82]. Na pochopenie tejto variácie v smere zmien vrodenej imunity súvisiacich s vekom u plazov všeobecne a konkrétne u korytnačiek bude potrebný ďalší výskum. Na rozdiel od toho údaje od cicavcov a vtákov vo všeobecnosti ukazujú pokles imunitnej funkcie s vekom. Okrem toho, v týchto taxónoch sa väčšina pozorovanej imunosenescencie vyskytla v adaptívnom imunitnom systéme [83–85] s menej výraznými zmenami zistenými vo vrodenej imunite (prehľad v [6]), aj keď ani tu nie sú vzorce nevyhnutne konzistentné v rámci meraní vrodenej imunity [ 86]. Avšak u plazov adaptívny imunitný systém reaguje pomalšie na výzvy a nevykazuje robustné reakcie počas opakovanej expozície patogénu (prehľad v [24, 87]). Vrodená imunitná funkcia a zmeny v takejto funkcii súvisiace s vekom môžu byť teda rozhodujúce pre celkové imunitné zdravie u plazov.
Závery
Tu sme sa pokúsili rozšíriť porovnávacie úvahy o vrodenej imunosenescencii a jej interakciách s úmrtnosťou a reprodukčným starnutím. Vybrali sme dlho študovanú divokú populáciu korytnačiek (žlté bahno), aby sme otestovali asociácie medzi týmito mierami starnutia, pretože nedávne rozsiahle porovnávacie štúdie identifikovali korytnačku s mimoriadne pomalým starnutím a dlhou životnosťou. Bez ohľadu na to, merania mechanizmov starnutia vyžadujú známy vek, ktorý je možné dosiahnuť iba dlhodobým štúdiom voľne žijúcich druhov s dlhou životnosťou. Zistili sme, že úmrtnosť a imunita mali pohlavne špecifické charakteristiky; samice žili dlhšie a mali nižšiu vrodenú imunitnú funkciu ako muži. Tento výsledok je pozoruhodný na základe teplotnej závislosti určenia pohlavia, čím sa vylučuje príspevok pohlavných chromozómov k starnutiu špecifickému pre pohlavie. Všetky tri miery vrodenej imunity klesali s postupujúcim vekom. U samíc sa hmotnosť znášky zvyšovala s postupujúcim vekom u samíc a reprodukčná produkcia nepredpovedala vrodenú imunitnú funkciu okrem toho, že samice s väčšími znáškami mali vyššiu baktericídnu schopnosť, čo naznačuje, že u samíc neexistujú žiadne zjavné náklady na reprodukčné úsilie o vrodenú imunitu. Toto je prvá štúdia, ktorá skúmala tri osi starnutia u korytnačiek, skupiny charakterizovanej pomalým až zanedbateľným starnutím. Tieto zistenia o imunosenescencii, úmrtnosti a reprodukcii naznačujú, že korytnačky sú novým modelom na pochopenie mechanizmov pomalého starnutia, alebo presnejšie, štúdium univerzálnych mechanizmov starnutia (ako je imunosenescencia) v monofyletickej skupine charakterizovanej pomalým zrýchľovaním úmrtnosti dospelých a zanedbateľné reprodukčné starnutie.
Metódy
Odber vzoriek v teréne
Odber vzoriek tkaniva korytnačiek žltých bahenných (YMT) pre túto štúdiu sa uskutočnil 2018. mája na jazere Gimlet na našom dlhodobom výskumnom mieste v Národnej prírodnej rezervácii Crescent Lake (CLNWR), v Garden County, Nebraska , USA (41 stupňa 45,24′ severnej šírky, 102 stupňa 26,12′ západnej dĺžky). Močiarový komplex Gimlet Lake je plytké (priemerná hĺbka 0,8 m), pieskové jazero s močiarnym biotopom [88]. YMT vykazujú teplotne závislé určenie pohlavia (TSD) u samíc produkovaných v teplých inkubačných podmienkach a u samcov aj samíc produkovaných v chladnejších podmienkach [59]. Od roku 1981 do roku 2018 tu prebiehali štúdie o znovuzachytení a hniezdení. Na tomto mieste YMT zvyčajne prezimujú na zemi pochované v horských piesočnatých kopcoch priľahlých k mokradiam, objavujú sa v apríli a máji a migrujú do vody, a potom sa väčšina samíc vracia do rovnaké piesočnaté kopce hniezdiť v júni, hoci niektoré sa nerozmnožujú každý rok [67, 87]. V júli začnú všetky korytnačky opúšťať mokrade, aby sa po zvyšok leta usadili v piesočných kopcoch (pozri tiež [89]). Počas poľných sezón boli paralelne s brehom medzi tromi zimoviskami a jazerom postavené záplavové ploty, ktoré boli nepretržite monitorované každý deň. Počas rokov (vrátane roku 2017), keď boli ploty na mieste počas hniezdnej sezóny, bola každá odchytená samica röntgenovaná, aby sa určila veľkosť znášky, a bola zmeraná šírka každého vajíčka na každom röntgenovom snímku. Regresná rovnica týkajúca sa strednej röntgenovej šírky znášky so skutočnou strednou hmotnosťou vajec z podskupiny hniezd, ktoré boli následne vykopané, nám umožnila odhadnúť hmotnosť vajec a hmotnosť znášky (obe v g) pre každú gravidnú samicu v roku 2017 (n{{24} }). Rovnice pre tieto vzťahy a ft sú nasledovné: Skutočná šírka vajíčka=0.98(Odhadovaná šírka vajíčka)+1.52, R2=0.89; Skutočná hmotnosť vajec=0,64 (odhadovaná hmotnosť vajec) – 6,07, R2=0,85; a vo vzorke vajec N=1795 YMT odobratých počas niekoľkých rokov možno šírku vajec spoľahlivo použiť na odhad hmotnosti vajec (a teda celkovej hmotnosti znášky) Hmotnosť vajec=0.68(Šírka vajec) – 6,77, R2=0.85 (Iverson, nepublikované údaje). To nám umožnilo preskúmať účinky týchto meraní reprodukčného výkonu na imunitu na jar 2018, keď sa týchto 85 korytnačiek vynorilo z brumácie. Po zachytení boli korytnačky transportované späť do poľného laboratória, kde boli zaznamenané morfometrické údaje vrátane maximálnej dĺžky panciera (CL v mm), maximálnej dĺžky plastrónu (PL v mm) a telesnej hmotnosti (BM v g). Z cervikálneho sínusu sa odobralo až 0,5 ml plnej krvi pomocou heparinizovanej injekčnej striekačky s kalibrom 26 a centrifugovalo sa (7000 ot./min.) v kryoskúmavke počas 5 minút, aby sa oddelili zložky krvi. Krvná plazma bola pipetovaná do samostatnej kryoskúmavky. Plazma aj balené červené krvinky boli okamžite zmrazené v tekutom dusíku, kým sa nepreviezli na Iowa State University na uskladnenie pri -80 stupňoch. Vzorky korytnačiek (98 samcov a 102 samíc) boli prevezené späť na miesto pôvodného odchytu a vypustené na opačnej strane plota, aby pokračovali do jazera.
Určenie veku
Od začiatku tejto štúdie v roku 1981 sa vek v rokoch pri počiatočnom odchyte každej korytnačky odhadoval ako počet zím po vyliahnutí. Odhad veku je každý rok rovnaký, a preto sa naše metódy na určenie veku vzťahujú na všetky údaje, o ktorých sa tu uvažuje (populácia a imunitná podvzorka). Pretože v tejto populácii sa každý rok vyprodukuje iba jeden prstenec scute, vek nedospelých korytnačiek sa zvyčajne rovná celkovému počtu prítomných prstencov. Počas extrémne drsných rokov však nemusí dôjsť k žiadnemu rastu a dva prstence sa môžu javiť ako jeden. Počty medzikruží sú teda minimálnym vekom a môžu byť podhodnotené, ak sa medzikružnice nepočítajú a nevyhodnocujú v kontexte všeobecných vzorcov rastu lastúr v celej populácii. Porovnaním vzoru prírastkov v raste mláďat nedospelej korytnačky so všeobecným vzorom rastu v populácii, bolo možné spoľahlivo určiť vek pri prvom odchyte až do veku najmenej 12 rokov. Počítali sme minimálny počet anuloidov na dospelých korytnačkách zachytených v prvých rokoch štúdie a vek všetkých týchto korytnačiek sme odhadli, ak bol počet medzikruží menší ako 20. Väčšina korytnačiek však bola pôvodne označená individuálne a zostarla pred šiestou zimou a následne starla na základe skutočného intervalu opätovného odchytu. Dospelé ženy boli v našich vzorkách výrazne staršie (a menšie) ako muži (tabuľka S3; nepárový t-test, P=0.0003, pozri obr. S2 a obr. 5 v [33]). Preto bol vek z-transformovaný v rámci každého pohlavia na priemer 0 s jednotkovým rozptylom. Táto premenná „vek“ bola použitá vo všetkých štatistických analýzach. Vylúčili sme údaje od 26 mladistvých bez pohlavia.
Reprodukčná analýza
Reprodukčný výkon – veľkosť spojky, celková hmotnosť spojky – sa zvyšoval s rastúcou veľkosťou a vekom. Preto sme pre analýzy, ktoré zahŕňali ženský reprodukčný výkon spolu s vekom v modeli, použili hrubé hodnoty reprodukčného výkonu bez korekcie na veľkosť tela. Všetky lineárne modely boli uskutočnené v SAS v. 9.4 (SAS Institute, Cary, NC, USA).
Analýza prežitia
Miera prežitia a vekovo špecifická úmrtnosť dospelých kinosternonských favescens zo západnej Nebrasky bola odhadnutá na základe Gompertzovho modelu (tabuľka 1) [18, 90, 91], ktorý odhaduje počiatočnú pravdepodobnosť úmrtnosti v počiatočnom veku a mieru zrýchľovania úmrtnosti v celej krajine. dĺžka života. Zložitejšie modely (napr. vrátane konštantného Makehamovho výrazu pre úmrtnosť nezávislú od veku, vrátane parametra spomalenia) tieto údaje na základe zmeny AIC (vypočítané v balíku BaSTAR [90]) nepodporili. Gompertzovo modelovanie bolo aplikované na náš dlhodobý súbor údajov o znovuzískaní značiek z Gimlet Lake vrátane údajov od 1 530 jednotlivých žien a 860 individuálnych mužov. Vek v dospelosti bol u oboch pohlaví v priemere 11 rokov, čo je známe z dlhodobého sledovania veku a reprodukcie v tejto populácii [88, 92, 93]. Pretože dospievanie závisí od veľkosti, tieto odhady veku dozrievania (tj 11 rokov) sú maximálne odhady (napríklad, príležitostne možno identifikovať samca korytnačky v mladšom veku). Testovali sme citlivosť použitia priemerného veku dozrievania 10 rokov bez výrazného vplyvu na odhady starnutia dĺžky života a úmrtnosti (údaje nie sú uvedené). Maximálna a stredná dĺžka života v dospelosti sa vypočítali ako počet rokov po dosiahnutí veku prvej reprodukcie až do 95 a odhaduje sa, že 50 % dospelých v syntetickej kohorte zomrelo. Súbory údajov sa analyzovali pomocou funkcie „basta“ z balíka BaSTA pre R [90].
Imunitné opatrenia
Uvádza sa, že prirodzenou protilátkou sprostredkovaná hemaglutinácia a komplementom sprostredkovaná hemolýza (NAbs, Lysis) sú prvou líniou obrany proti patogénom u stavovcov (prehľad v [94]) a tieto merania vrodenej imunitnej funkcie boli študované u mnohých plazov druhov (napr. [4, 5, 32, 80, 82, 95]). Dokončili sme testy na NAbs a schopnosť lýzy podľa testu hemolýzy-hemaglutinácie upraveného z [96] na použitie u maľovaných korytnačiek [5, 97]) pomocou králičích červených krviniek. Na dokončenie všetkých testov sme použili dve fľaše králičích červených krviniek (HemoStat HemoStat Laboratories, Dixon, CA, USA). Všetky platne s pozitívnymi a negatívnymi kontrolami a vzorkami sme testovali v duplikáte. Vyššie titre pre hemaglutináciu indikujú väčší počet prirodzených protilátok vo vzorke plazmy, keďže vysoké titre sú známkou toho, že prirodzené protilátky sú vo vysokých koncentráciách aj v čoraz zriedenejšej plazme [96]. Podobne vyššie titre hemolýzy naznačujú, že plazma je schopná lyzovať erytrocyty aj pri zriedenejších koncentráciách [96]. Zvýšené hladiny prirodzených protilátok a schopnosť lýzy sú teda spojené so zvýšenou imunitnou funkciou. Posúdili sme baktericídnu kompetenciu (BC) plazmy kvantifikáciou jej schopnosti inhibovať rast Escherichia coli pomocou nášho publikovaného protokolu pre maľované korytnačky [5, 97], upraveného z [98]. V tomto experimente sa použilo päť lyofilizovaných peliet E. coli (Microbiologics, ATCC#8739), pričom každá nová peleta sa použila na vytvorenie nového kontrolného roztoku, keď sme postupovali cez vzorky. Zvýšená baktericídna kompetencia zodpovedá zvýšenej imunitnej funkcii. Všetky imunitné testy boli vykonané na jar 2019 na vzorkách odobratých na jar 2018.
Imunitné meranie: štatistické analýzy
Závislé premenné boli analyzované pomocou všeobecných lineárnych modelov s vysvetľujúcimi premennými zAge (štandardizovaný vek v rámci každého pohlavia); Pohlavie (dospelí muži a dospelé ženy); obojsmerná interakcia medzi zAge a Sex; a obťažujúcu variabilnú testovaciu dávku (BC: N=4; NAbs a Lysis: N=2), aby sa zohľadnili kontrolné pelety (BC) alebo fľaša králičích červených krviniek (NAbs a Lysis). Baktericídna kompetencia bola transformovaná Arcsine tak, aby zohľadňovala proporcionálne údaje a spĺňala podmienky normality. NAbs a Lysis boli log-10 transformované tak, aby spĺňali podmienky normality. Všetky lineárne modely boli uskutočnené v SAS v. 9.4 (SAS Institute, Cary, NC, USA). Grafy boli vytvorené v ggplot2 [99].
Referencie
1. Harman D. Starnutie: prehľad. Ann NY Acad Sci. 2001;928:1–21.
2. Ricklefs RE. Evolúcia starnutia z komparatívnej perspektívy. Funkcia Ecol. 2008;22:379–92.
3. Jones OR, Scheuerlein A, Salguero-Gómez R, Camarda CG, Schaible R, Casper BB a kol. Rozmanitosť starnutia naprieč Stromom života. Príroda. 2014;505(7482):169–73.
4. Schwanz L, Warner DA, McGaugh S, Di Terlizzi R, Bronikowski AM. Fyziologické udržiavanie závislé od stavu v dlho žijúcej ektoterme, korytnačke maľovanej (Chrysemys picta). J Exp Biol. 2011;214:88–97.
5. Judson JM, Reding DM, Bronikowski AM. Imunosenescencia a jej vplyv na reprodukciu u dlhovekého stavovca. J Exp Biol. 2020;223:jeb223057.
6. Peters A, Delhey K, Nakagawa S, Aulsebrook A, Verhulst S. Imunosenescence u divokých zvierat: metaanalýza a výhľad. Ecol Lett. 2019;22:1709–22.
7. Schmid-Hempel P. Variácie v imunitnej obrane ako otázka evolučnej ekológie. Proc R Soc B. 2003;270(1513):357–66.
8. Hoekstra LA, Schwartz TS, Sparkman AM, Miller DA, Bronikowski AM. Nevyužitý potenciál biodiverzity plazov na pochopenie toho, ako a prečo zvieratá starnú. Funkcia Ecol. 2020;34:38–54.
9. Franceschi C, Capri M, Monti D, Giunta S, Olivieri F, Sevini F a kol. Infammaging a anti-infammaging: systémový pohľad na starnutie a dlhovekosť vyplynul zo štúdií na ľuďoch. Mech Age Develop. 2007;128:92–105.
10. Pawelec G, Bronikowski AM, Cunnane SC, Ferrucci L, Franceschi C, Fülöp T, Gaudreau P, Gladyshev VN, Gonos ES, Gorbunova V, Kennedy BK, Larbi A, Lemaître JF, Liu GH, Maier AB, Morais JA, Nóbrega OT, Moskalev A, Rikkert MO, Seluanov A, Senior AM, Ukraintseva S, Vanhaelen Q, Witkowski J, Cohen AA. Hádanka ľudského imunitného systému je „starnutie“. Mech Age Develop. 2020;192.
11. Schwartz TS, Bronikowski AM. Dráhy molekulárneho stresu a vývoj reprodukcie a starnutia u plazov. In (T. Flatt & A. Heyland, eds.) Molekulárne mechanizmy vývoja histórie života. Oxford: Oxford Univ Press; 2011. Pp. 193–209
12. Armstrong DP, Keevil MG, Rollinson NJ, Brooks RJ. Jemné individuálne variácie v neurčitom raste vedú k veľkým variáciám v prežívaní a celoživotnej reprodukčnej produkcii u dlhovekých plazov. Funkcia Ecol. 2007;32:752–61.
13. Omeyer LCM, Fuller WJ, Godley BJ, Snape RTE, Broderick AC. Určitý alebo neurčitý rast? Prehodnotenie stratégie rastu morských korytnačiek. Mar Ecol Prog Ser. 2018;596:199–211.
14. Bronikowski AM, Arnold SJ. Evolučná ekológia variácií histórie života u hada podväzkového Thamnophis elegans. Ekológia. 1999;80:2314–25.
15. Congdon JD, Nagle RD, Kinney OM, van Loben Sels RC. Hypotézy starnutia u dlhovekého stavovca, korytnačky Blandingovej (Emydoidea blandingii). Exp. Gerontol. 2001;36:813–27.
16. Wilkinson PM, Rainwater TR, Woodward AR, Leone EH, Carter C. Určiť rast a reprodukčnú dĺžku života u aligátora amerického (Alligator mississippiensis): dôkazy z dlhodobých odchytov. Copeia. 2016;104:843–52.
17. Hoekstra LA, Weber RC, Bronikowski AM, Janzen FJ. Pohlavne špecifický rast, tvar a ich vplyv na životnú históriu dlhovekého stavovca. Evol Ecol Res. 2018;19(6):639–57.
18. Reinke BA, Cayuela H, Janzen FJ, Lemaître JF. Gaillard JM a 110 ďalších. Rôzne rýchlosti starnutia v ektotermických tetrapodoch poskytujú pohľad na vývoj starnutia a dlhovekosti. Veda. 2022;376:1459–66.
19. Berkel C, Cacan E. Analýza dlhovekosti v Chordata identifikuje druhy s výnimočnou dlhovekosťou medzi taxónmi a poukazuje na vývoj dlhšej dĺžky života. Biogerontol. 2021;22:329–43.
20. Stark G, Tamar K, Itescu Y, Feldman A, Meiri S. Studené a izolované ektotermy: faktory dlhovekosti plazov. Biol J Linn Soc. 2018;125:730–40.
21. da Silva R, Conde DA, Baudisch A, Colchero F. Pomalé a zanedbateľné starnutie medzi Testudines spochybňuje evolučné teórie starnutia. Veda. 2022;376:1466–70.
22. Charlesworth B. Fisher, Medawar, Hamilton a evolúcia starnutia. genetika. 2000;156:927–31.
23. Zimmerman LM, Vogel LA, Bowden RM. Pochopenie imunitného systému stavovcov: pohľady z perspektívy plazov. J Exp Biol. 2010;213:661–71.
24. Zimmerman LM. Pohľad plazov na imunitu stavovcov: 10 rokov pokroku. J Exp Biol. 2020;223(Pt 21):jeb214171.
25. Palacios MG, Ganglof EJ, Reding DM, Bronikowski AM. Genetické pozadie a tepelné prostredie rozdielne ovplyvňujú ontogenézu imunitných zložiek počas raného života u ektotermného stavovca. J Anim Ecol. 2020;89:1883–94.
26. Field EK, Hartzheim A, Terry J, Dawson G, Haydt N, Neuman-Lee LA. Reptiliánska vrodená imunológia a ekoimunológia: čo vieme a kam smerujeme? Integra Comp Biol. 2022;62:1557–71.
27. Palacios MG, Bronikowski AM. Imunitné variácie počas tehotenstva naznačujú náklady na reprodukciu špecifické pre imunitnú zložku u viviparózneho hada s odlišnými stratégiami histórie života. J Exp Zool časť A. 2017;327:513–22.
28. Bronikowski AM, Meisel RP, Biga PR, Walters JR, Mank JE, Larschan E, et al. Pohlavne špecifické starnutie u zvierat: perspektíva a budúce smerovanie. Starnúca bunka. 2022;21:e13542.
29. Reed TE, Kruuk LE, Wanless S, Frederiksen M, Cunningham EJ, Harris MP. Reprodukčné starnutie u dlhovekých morských vtákov: miera poklesu výkonnosti v neskoršom veku je spojená s rôznymi nákladmi na skorú reprodukciu. Som Nat. 2008;171:E89–E101.
30. Warner DA, Miller DA, Bronikowski AM, Janzen FJ. Desaťročia terénnych údajov odhaľujú, že korytnačky prežívajú vo voľnej prírode. Proc Natl Acad Sci US A. 2016;113(23):6502–7.
31. Reinke BA, Miller DAW, Janzen FJ. Čo nás naučili dlhodobé terénne štúdie o populačnej dynamike? Ann Rev Ecol Evol Sys. 2019;50(1):261–78.
32. Zimmerman LM, Bowden RM, Vogel LA. Korytnačkám s červenými ušami chýba odpoveď na imunizáciu hemocyanínom prílipky, ale majú vysoké hladiny prirodzených protilátok. ISRN Zool. 2013a;2013:1–7.
33. Iverson JB. Klímou sprostredkované zlyhanie náboru v populácii korytnačiek a jeho vplyv na severné hranice rozšírenia. Chelonian Cons Biol. 2022;21(2):181–6.
34. Gibson CWD, Hamilton J. Populačné procesy u veľkého bylinožravého plaza: obrovská korytnačka atolu Aldabra. Ekológia. 1984;61:230–40.
35. Miller DAW, Janzen FJ, Fellers GM, Kleeman PM, Bronikowski AM. Biodemografia ektotermných tetrapodov poskytuje pohľad na vývoj a plasticitu vzorcov úmrtnosti. In: Weinstein M, Lane MA, redakcia. Socialita, hierarchia, zdravie: komparatívna biodemografia. Washington DC: National Academies Press; 2014. s. 295–313.
36. Reinke BA, Hoekstra L, Bronikowski AM, Janzen FJ, Miller DAW. Spoločný odhad rastu a prežitia z údajov o opätovnom zachytení značiek na zlepšenie odhadov starnutia vo voľne žijúcich populáciách. Ekológia. 2020;101(1):e02877. https://doi.org/10.1002/ecy.2877.
37. Keevil, MG 2020. Spoločný odhad rastu a prežitia z údajov o opätovnom zachytení značiek na zlepšenie odhadov starnutia u voľne žijúcich populácií: komentár. Ekológia e03232. https://doi.org/10.1002/ecy.3232.
38. Bronikowski AM, Reinke BA, Hoekstra L, Janzen FJ, Miller DAW. Spoločný odhad rastu a prežitia z údajov o znovuzískaní značiek na zlepšenie odhadov starnutia u voľne žijúcich populácií: odpoveď. Ekológia. 2022:103:e03571. https://doi.org/10.1002/ecy.3571.
39. Cayuela H, Akani GC, Hema EM, Eniang EE, Amadi N, Ajong SN a kol. Životná história a procesy úmrtnosti v závislosti od veku u tropických plazov. Biol J Linn Soc. 2019;128:251–62. 40. Gibbons JW. Prečo žijú korytnačky tak dlho? Bioveda. 1987;37:262–9.
41. Congdon JD, van Loben Sels RC. Vzťahy reprodukčných vlastností a veľkosti tela s dosiahnutím sexuálnej zrelosti a veku u Blandingových korytnačiek (Emydoidea blandingii). J Evol Biol. 1993;6:547–57.
42. Miller JK. Únikové starnutie: demografické údaje z korytnačky trojprstej (Terrapene Carolina Triunguis). Exp. Gerontol. 2001;36(4–6):829–32.
43. Moll EO. Reprodukčné cykly a adaptácie. In: Harless M, Morlock H, redaktori. Korytnačky: perspektívy a výskum. Malabar, Florida: John Wiley and Sons; 1979. s. 305–20.
44. Iverson JB, Lindeman PV, Lovich J. Pochopenie reprodukčnej alometrie u korytnačiek: klzký svah. Ecol Evol. 2019;9:11891–903.
45. Iverson JB. Chrysemys picta bellii (korytnačka maľovaná na západe). Dlhovekosť. Herpetol Rev. 2022;53:484.
46. Litzgus JD. Pohlavné rozdiely v dlhovekosti u korytnačky škvrnitej (Clemmys guttata). Copeia. 2006;2006:281–8.
47. Ernst CH. Rast korytnačky bodkovanej (Clemmys guttata). J Herp. 1975;9:313–8.
48. Brown DJ, Schrage M, Ryan D, Moen RA, Nelson MD, Buech RR. Glyptemys insculpta (drevná korytnačka) dlhovekosť vo voľnej prírode. Herpetol Rev. 2015;46:243–4.
49. Iverson JB, Smith GR, Rettig JE. Veľkosť tela, rast a dlhovekosť v severnej mapovej korytnačke (Graptemys geografická) v Indiane. J Herp. 2019;53:297–301.
50. Munscher E, Campbell K, Hauge JB, Hootman T, Osborne W, Butterfeld BP a kol. Pseudemys foridana peninsularis (cooter poloostrovný) a Pseudemys nelsoni (cooter červenobruchý floridský). Dlhovekosť. Herpetol Rev. 2020;51:111–3.
51. Lewis EL, Iverson JB. Terrapene ornata (zdobená korytnačka). Dlhovekosť. Herpetol Rev. 2018;49:530.
52. Lewis EL, Iverson JB, Smith GR, Rettig JE. Veľkosť tela a vzrast u klzáka červenoušého (Trachemys scripta) na severnom okraji jeho areálu: platí Bergmannovo pravidlo? Herp Conserv Biol. 2018;13:700–10.
53. Curtin AJ, Zug GR, Spotila JR. Dlhovekosť a stratégie rastu korytnačky púštnej (Gopherus agassizii) v dvoch amerických púštiach. J Arid Environ. 2009;73:463–71.
54. Medica PA, Nussear KE, Esque TC, Saethre MB. Dlhodobý rast púštnych korytnačiek (Gopherus agassizii) v populácii južnej Nevady. J Herpetol. 2012;46:213–20.
55. Klein SL. Hormóny a systémy párenia ovplyvňujú pohlavné a druhové rozdiely v imunitnej funkcii medzi stavovcami. Behav Proc. 2000;51:149–66.
56. Klein SL. Hormonálne a imunologické mechanizmy sprostredkujúce rozdiely medzi pohlaviami pri infekcii parazitmi. Parasite Immunol. 2004;26:247–64.
57. Foo YZ, Nakagawa S, Rhodes G, Simmons LW. Účinky pohlavných hormónov na imunitnú funkciu: metaanalýza. Biol Rev. 2007;92:551–71.
58. Kelly CD, Stoehr AM, Nunn C, Smyth KN, Prokop ZM. Sexuálny dimorfizmus v imunite u zvierat: metaanalýza. Ecol Lett. 2018;21:1885–94.
59. Janzen FJ, Paukstis GL. Environmentálne určovanie pohlavia u plazov: ekológia, evolúcia a experimentálny dizajn. Q Rev Biol. 1991;66(2):149–79.
60. López-Pérez JE, Meylan PA, Goessling JM. Obchodovanie s vrodeným a získaným imunitným systémom Sternotherus minor na základe pohlavia. J Exp Zool. 2021;333:820–8.
61. Zimmerman LM, Paitz RT, Vogel LA, Bowden RM. Variácie v sezónnych vzorcoch vrodenej a adaptívnej imunity v šmýkačke ušatej (Trachemys scripta). J Exp Biol. 2010;213:1477–148358.
62. Zimmerman LM, Clairardin SG, Paitz RT, Hicke JW, LaMagdeleine KA, Vogel LA a kol. Humorálne imunitné reakcie sa udržiavajú s vekom u dlhotrvajúcej ektotermy, korytnačky s červenými ušami. J Exp Biol. 2013b;216:633–40.
63. Freedberg S, Greives TJ, Ewert MA, Demas GE, Beecher N, Nelson CE. Inkubačné prostredie ovplyvňuje vývoj imunitného systému u korytnačky s environmentálnym určením pohlavia. J Herpetol. 2008;2008(42):536–41.
64. Lee KA. Prepojenie imunitnej obrany a histórie života na úrovni jednotlivca a druhu. Integr Comp Biol. 2006;46:1000–15.
65. Sheldon BC, Verhulst S. Ekologická imunológia: nákladná ochrana proti parazitom a obchod s evolučnou ekológiou. Trendy Ecol Evol. 1996;11:317–21.
66. Palacios MG, Cunnick JE, Bronikowski AM. Komplexná súhra stavu, životnej histórie a prevládajúceho prostredia formuje imunitnú obranu hadov vo voľnej prírode. Physiol Biochem Zool. 2013;86:547–58.
67. Iverson JB. Hniezdenie a rodičovská starostlivosť u korytnačky Kinosternon favescens. Môže J Zool. 1990;68:230–233.
68. Licht P. Endokrinné vzorce v reprodukčnom cykle korytnačiek. Herpetologická. 1982;38:51–61.
69. Graham SP, Ward CK, Walker JS, Sterrett S, Mendonça MT. Sexuálny dimorfizmus a sexuálne variácie reprodukčných hormónov u korytnačky Pascagoula Map Turtle, Graptemys gibons. Copeia. 2015;103:42–50.
70. Shelby JA, Mendonça MT, Horne BD, Seigel RA. Sezónne variácie v reprodukčných steroidoch samcov a samíc žlto-škvrnitých mapových korytnačiek, Graptemys favimaculata. Gen Comp Endocrinol. 2000;119:43–51.