Význam rôznych limitov obsahu pre markerové komponenty Cistache Deserticola a C. tubulofloris v čínskej farmakopoeii na základe diferenciálnych komponentov ⅱ

Abstraktný

Cieľ:Študovať diferenciálne zložky a porovnať ich obsah medzi Cistanche Tubulosa a C. Deserticola a analyzovať význam rôznych limitov obsahu pre markerové komponenty medzi dvoma rastlinami v čínskom Pharmacopoeia (vydanie 2020). Metódy: Diferenciálne zložky boli identifikované spektrometriou kvapalinovej chromatografie v kombinácii s multivariačnou štatistickou analýzou a obsah diferenciálnych komponentov bol stanovený vysoko výkonnou kvapalinovou chromatografiou. Výsledky: Diferenciálne zlúčeniny boli cistanozid A, izoacteosid, echinakoozid a akteozid. Echinacosid mal najvyšší obsah v oboch rastlinách, nasledovaný Acteosidom. Obsah echinakozidu, akteosidu a izoacteosidu v C. tubulosa bol vyšší ako obsah v C. púšť (P<0.01), and no cistanoside A was detected in C. tubulosa. Conclusion: There are differences in the chemical composition between C. deserticola and C. tubulosa. Cistanoside A can be taken as a maker component in C. deserticola. Echinacoside and acteoside are the common components in both plants, and they are specified in the Chinese Pharmacopoeia (2020 edition) as the marker components in both plants. The different content limits for the two components between C. deserticola and C. tubulosa reflect the objectivity in the standard.

Kľúčové slová: Cistanche Deserticola;Cistanche tubulosa; cistanozid a; izoacteosid;echinacozid; akteozid

 

 

 

 

Púšť cistancheje sušená mäsitá stonka so šupinatými listami Cistanche Deserticola yc ma alebo cistanche tubulosa (Schenk) Wight, rastlina rodiny Orobanchaceae [1]. Je to tonické a liečivé jedlo, známe ako „púštna ženšen“. Je distribuovaný hlavne vo vnútornom Mongolsku, Ningxia, Gansu, Xinjiang a ďalších regiónoch [2]. Cistanche Deserticola má teplú prírodu, sladká a slaná vkus a vstupuje do obličiek a poludníky čreva. Má účinky výživy pečene a obličiek, prospieva podstate a krvi a zvlhčuje črev a uľahčuje pohyby čriev. Môže sa použiť na liečbu nedostatku obličiek, impotencie a neplodnosti, bolestivosti pásu a kolená, slabosť šliach a kostí a zápchu spôsobenú suchými črevami [1]. Moderný výskum ukazuje, že mäsité stonky s mierkovými listami Cistanche Deserticola obsahujú hlavne rôzne chemické zložky, ako sú fenyletanoidové glykozidy, iridoidné éterové terpény a ich glykozidy, ligrány a cukry [3]. Medzi nimi sú fenyletanoidné glykozidy najdôležitejšie aktívne zložky, ktoré majú farmakologické účinky, ako je anti-starnutie [4], antioxidant, anti-útočisko a preháňadlo [5].
Na svete je asi 20 druhov cistanche a v mojej krajine je 5 druhov: Cistche Deserticola, Cistche Tubulosa, C. Salsa (Camey.) G.Beck, C. Sinensis G. Beck a C. Salsa Var. albiflora pf tu et zclou. Vydanie Pharmacopoeia v Čínskej ľudovej republike v roku 2020 (ďalej len „Čínska farmakopoeia“) stanovuje, že prvé dva druhy sú pôvodným druhom Cistanche Deserticola [6].

Púšť cistanche

Pred vydaním čínskeho Pharmacopoeia v roku 2005 bola pôvodom odvodeným od Cistanche Deserticola Cistche Deserticola. Vzhľadom na vysoký dopyt na domácich a medzinárodných trhoch a nedostatok zdrojov bol Cistanche Tubulosa pridaný ako právny pôvod. Ceny dvoch pôvodov Cistanche Deserticola na trhu sú však veľmi odlišné, pričom cena Cistanche Tubulosa je iba 1/4 až 1/6 ceny Cistache Deserticola [7]. Rozdiely v zložení a farmakologických účinkoch týchto dvoch pôvodov majú dlhodobý hĺbkový výskum a využitie. Pokiaľ ide o rozdiely v typoch prísad, Huang Xiongmei et al. [8] zistili, že cistancheside A bol hlavnou diferenciačnou zložkou prostredníctvom charakteristickej štúdie spektra týchto dvoch pôvodov. Pokiaľ ide o rozdiel v obsahu komponentov, Gao Yan et al. [9] zistili, že obsahové pomery echinakozidu k verbascosidu a verbascosid k izovalasozidu v cistanche Deserticola a Cistache tubulosa boli pomerne odlišné prostredníctvom ultravej výkonnej kvapalinovej chromatografie; Zhu Nailiang a kol. [10] zistili analýzou odtlačkov prstov, že obsah fenyletanoidných glykozidov v cistanche desertikola bol významne nižší ako v cistanche tubulosa a obsah fenyletanoidných glykozidov v cistanche tubulosa bol významne vyšší ako v prípade iridoidných glykozidov.
Naša výskumná skupina použila tekutú chromatografiu-masovú spektrometriu kombinovanú s multivariačnou štatistickou analýzou na porovnanie rozdielov v typoch chemických komponentov medzi Cistache Deserticola a Cistanche Tubulosa, identifikáciu diferenciálnych markerov a určovania ich obsahu v klinickej praxi, aby sa zistilo, že klinická prax v klinickej praxi. Okrem toho porovnaním rozdielov v obsahu komponentov indexu farmakopoeia (Echinacosid a verbascosid) týchto dvoch pôvodných cistanchov bola vysvetlená potreba stanovenia kombinovaných limitov týchto dvoch zložiek cistanches a cistanches tubulosa.

 

1 materiály

1.1 nástroje

Ultimate 3 000 Ultra-vysoký výkon kvapalný fázový elektrostatický terénový tandemový iónový lapací hmotnostný spektrometer s vysokým rozlíšením (UPLC-LTQ ORBITRAP XL, Thermo Fisher Scientific, USA); 2695 Vysoko výkonný kvapalný chromatograf, 2489 ultrafialové detektor (Waters, USA); BT125D 1/100 000 Elektronický vyváženie (Sartorius Instrument Systems, Nemecko); KQ -500 de CNC ultrazvukový čistiaci prostriedok (Kunshan Ultrazic Instrument Co., Ltd.); PL2002 ELEKTRONICKÁ ROZVOJ [Mettler-Toledo Instrument (Shanghai) Co., Ltd.].

 

Cistanche tubulosa

1,2 testovacie lieky

Referenčné látky Echinacosid, Cistancheside A, Verbascosid a Isoverbosasid (čistota vyššia ako 98%, dávkové čísla PS000867, PS010950, PS000683 a PS001059) boli zakúpené od Chengdu Pusi Biotechnology Co., Ltd.; Metanol s hmotnostnou spektrometrickou (Fisher); Kyselina mravčová spektrometria (čistota: 99%, Sigma Aldrich); Voda bola Destilovaná voda Watsons.

 

1,3 vzorky

10 šarží plátkov púšte Cistche Deserticola a 10 šarží čínskej medicíny Cistanche tubulosa bolo identifikované profesorom Li Xiagri z Pekinskej univerzity v Pekingu ako sušené mäsité stonky s mierky listami Cistanche Deserticola Ycma a Cistanche Tubulosa (Schenk) Wight Wight, rastlinami z rodiny Orobanchaceae rodiny. Podrobné informácie sú uvedené v tabuľke 1.

 

2 metódy

2.1 Štúdia o rôznych komponentoch Cistanche Deserticola z rôznych pôvodov

2.1.1 Príprava testovacieho roztoku

Vezmite si asi 0. 2 g suchého vzorkového prášku (prechádzajúci cez sito č. 4), presne vážte a vložte do 50 ml hnedej objemovej banky, pridajte 25 ml 50% metanolu, zvážte hmotnosť, studená namáčajte po dobu 30 minút, ultrazvukovo ošetrenie a zaokrúhľovanie a zaokrúhlenie a zaokrúhľovanie a zaokrúhlenie a zaokrúhlenie. na získanie.

 

2.1.2 Chromatografické stavy

Waters Acquity UplCtM BH C18 Chromatografický stĺpec (1 0 0 mm × 2,1 mm, 1,7 µm), teplota stĺpca 35 stupňov, teplota komory vzorky 1 {{} {} {}. Vodný roztok (B) ako mobilná fáza (0 min, 10%A; 0 ~ 4 min, 10%~ 26%A; 4 ~ 18 minút, 26%~ 40%A; 18 ~ 24 minút, 40%~ 100%A; 24 ~ 28 minút, 100%A), detekčná vlnová dĺžka 330 nm, prietok 0,3 ml · min -1.

 

2.1.3 Podmienky hmotnostnej spektrometrie

Použil sa zdroj elektrospray iónov (ESI), skenovanie negatívneho iónového režimu, teplota kapilárneho bolo 350 stupňov, prietok objemu plynu plášťom bol 30 AR, prietokom objemu plynu bol 10 ARB, napätie rozprašovania bolo 3 kV, kapilárne napätie bolo –35 V, skenovací rozsah M/Z100 ~ 1000 a systém získavania údajov bol xcalibur 2.1.

Cistanche tubulosa

2.1.4 Analýza hlavných komponentov (PCA)

Po získaní dvojrozmernej matice presných párov údajov o čase zadržiavania hmotnosti sa prístrojová doska zobrazí všetky automaticky importované informácie o presnom čase zadržania a na analýzu sa použije metóda PCA rozšíreného štatistického modulu.

 

2.1.5 Ortogonálna čiastočná analýza najmenších štvorcov (OPLS-DA)

Vykonaním dvojrozmernej analýzy údajov pomocou OPLS-DA sa získalo veľké množstvo ortogonalizovaných spektier, čo môže jasne ukazovať rozdiely medzi týmito dvoma skupinami vzoriek. Vo formáte S-Plot predstavujú páry dátových údajov o hmotnostnom čase na oboch koncoch krivky v tvare S tie najspoľahlivejšie charakteristické ióny z každej skupiny vzoriek.

 

2.2 Stanovenie diferenciálnych komponentov

 

2.2.1 Príprava zmiešaného referenčného roztoku

 

Vezmite vhodné množstvá echinakoozidu, cistancheside a, verbascosidu a izovakzozidu do 1 {0 ml ml hnedej brehovej banky, rozpúšťajú sa a zriedite na známku 5 {{{4}% metanol. 0,384 a 0,312 mg · ml - 1.

 

2.2.2 Príprava testovacieho roztoku

 

Metóda je rovnaká ako v 2.1.1.

 

2.2.3 Chromatografické stavy

Agilent Eclipse XDB-C18 stĺpec (25 0 mm × 4,6 mm, 5 μm) s metanolom (a) {{}}. 15%~ 21%a;

 

2.2.4 Metodologické vyšetrovanie

2.2.4.1 Lineárne vyšetrovanie vzťahov

Presne pipette {{0}}. 1, 0. 5, 1. Vložte vzorku na stanovenie, použite chromatografickú píkovú plochu ako súradnicu (Y) a koncentráciu ako Abscissa (X), nakreslite rozptylový graf a vykonajte regresnú analýzu, aby sa získala lineárna regresná rovnica rôznych referenčných látok.

 

2.2.4.2 Experiment s presnosťou

Vezmite zmiešaný referenčný roztok echinakoozidu, cistanchesidu A, verbascosidu a isoverbaccozidu, vstrekujte ho 6 -krát nepretržite, zaznamenajte píkovú plochu echinakozidu, cistanchesid A, verbascosid a isoverbaccosid referencia a vypočítajte hodnotu RSD každej zložky.

 

2.2.4.3 Experiment so stabilitou

Vezmite rovnaké testovacie riešenie Cistche Deserticola (číslo šarže: 16 0 901), vložte ho na 0, 2, 4, 8, 12, 24 h, stanovte obsah echinakoozidu, Cistancheside A, verbascosid a iserbaccozid v testovacom roztoku a vypočítajte hodnotu RSD každej komponentu.

 

2.2.4.4 Experiment s opakovateľnosťou

Vezmite si rovnakú vzorku (dávkové číslo: 160901) prášok, pripravte 6 testovacích roztokov podľa metódy pod 2.1.1, vstreknite a zmerajte, vypočítajte obsah echinakoozidu, cistanchesid A, verbascosid a izoverbaskozid do každého testovacieho riešenia a vypočítajte hodnotu RSD každej zložky.

 

2.2.4.5 Experiment na obnovenie vzorky

Presne vážte 6 vzoriek cistchanovej púšte (dávkové číslo: 160901), pridajte referenčný roztok ekvivalentný k známemu obsahu echinakozidu, cistancheside A, Verbascosid a Isoverbascosid, pripravte testovacie riešenia podľa metódy podľa 2,1.1, injekt a mieru a vypočítajte priemerné obnovenie vzorky.