Účinok antidiabetík na obličky potkanov

Kontakt: Audrey Huaudrey.hu@wecistanche.com

R Mary Sujin a kol

Abstraktné

Optimalizácia tejto štúdie jeanti-diabetikúčinok vobličkyalbínskych potkanov Wistar s použitím Gymnema Sylvestre (Retz) R.Br. bylinný prášok. Histopatologické a biochemické testy sa uskutočňovali v orgáne a krvnom séreobličky. Rôzne koncentrácie prášku ošetrené ako 5, 10, 15, 20/g/25 dní. Účinok surových liečiv u potkanov znížil telesnú hmotnosť a rozsahdiabetikovbola hodnotená vobličkymeraním hladín vybraných krvných parametrov bielkovín, glukózy, cholesterolu, inzulínu a triglyceridov a efektom histopatológie. Surové liečivá znížili telesnú a obličkovú hmotnosť zvierat a znížili významné hladiny inzulínu, bielkovín, triglyceridov, cholesterolu a glukózy. Dáta boli analyzované pomocou matematických výpočtov, hodnoty boli vyjadrené ako významné.

Kľúčové slová:Anti-diabetikefekt, Gymnema Sylvestre, Histopatologický a biochemický test vObličky.

Cistanche tubulosa zabraňuje ochoreniu obličiek, kliknite sem a získajte vzorku

Úvod

Bylinkárstvo je tradičná liečebná alebo ľudová medicína založená na používaní rastlín a rastlinných extraktov. Bylinné lieky sú ľahko dostupné na trhu v obchodoch so zdravou výživou bez lekárskeho predpisu a sú široko používané v Indii, Číne, USA a na celom svete. Podľa nedávneho prieskumu väčšina ľudí, ktorí užívajú bylinné lieky, neinformuje svojich lekárov o ich konzumácii, čo môže spôsobiť abnormálne výsledky testov a zmätok pri správnej diagnóze. Interakcie liečivých bylín môžu viesť k neočakávaným koncentráciám terapeutických liečiv. Niektoré rastlinné produkty interferujú s imunotestami používanými na monitorovanie koncentrácií terapeutických liečiv. Rastlinné lieky môžu tiež spôsobiť nežiaduce účinky. Preto zaužívaný názor, že všetko prirodzené je bezpečné, nie je správne.

Gymnema Sylvestre je veľká drevitá horolezkyňa. Jeho hlavnou zložkou je kyselina gymnemová, ktorá máanti-diabetika vlastnosti hyperglykémie. Odstraňuje chuť cukru a predpokladá sa, že neutralizuje nadmerný cukor prítomný v tele pri diabetes mellitus¹.

Celá rastlina pôsobí žalúdkovo, povzbudzujúco, laxatívne a diureticky. Je dobrý pri kašli, žlčníku a boľavých očiach. Ak sa listy rastliny žuvajú, potláča sa chuť na sladké a horké látky.

Kyselina germánska sa skladá z molekúl, ktorých usporiadanie atómov je podobné usporiadaniu molekúl glukózy. Tieto molekuly naplnia receptorové miesta na chuťových pohárikoch na dobu jednej až dvoch hodín, čím zabránia aktivácii chuťových pohárikov akýmikoľvek molekulami cukru prítomnými v jedle. Podobne molekuly podobné glukóze v kyseline gymnemovej vyplňujú receptorové miesta v absorpčných vonkajších vrstvách čreva, čím bránia črevu absorbovať molekuly cukru.

Bezpochyby dve z najviac prehliadaných, pokiaľ ide o detoxikáciu, sú pečeň a obličky. Keď je pečeň prepracovaná, obličky sa snažia zachytiť ochabnutie. Obličky sú dva orgány v tvare fazule, z ktorých každý je približne veľký ako váš prvý. Hoci sú obličky váhovo malé orgány, dostávajú obrovské množstvo (približne 20 percent) krvi čerpanej srdcom. Každý deň obličky spracujú asi 200 litrov krvi, aby sa preosiali 2 litre odpadových produktov a prebytočnej vody. Bez obličiek by sa odpadové látky a toxíny hromadili v krvi na nebezpečnú úroveň a následne by poškodzovali organizmus. V dôsledku nahromadenia toxických látok alebo zanedbania stravy sa tieto dôležité orgány filtrujúce toxíny môžu zapáliť, infikovať a môžu sa u nich vyvinúť obličkové kamene alebo môžu úplne zlyhať.

Tak ako prakticky všetky orgány tela, aj obličky podliehajú celému radu porúch a chorôb. Poškodenie obličiek zvyčajne prebieha postupne a bez príznakov a až po rokoch ochorenia obličiek sa funkcia obličiek výrazne zníži. Pri ochorení obličiek môže človek vo všeobecnosti stratiť až 75 percent funkcií obličiek predtým, ako sa účinky stanú akútne zjavnými. Ak sa ochorenie obličiek nelieči, môže sa stať nezvratným a môže predstavovať značnú hrozbu pre vaše zdravie. Ľudia s cukrovkou, vysokým krvným tlakom alebo s ochorením obličiek v rodinnej anamnéze musia tiež aktívne predchádzať ochoreniam obličiek a udržiavať orgány v optimálnom stave.

Ochorenie obličiek spojené s kyselinou aristolochovou (nazývané čínska bylinná nefropatia) môže pomerne rýchlo viesť k zlyhaniu obličiek v konečnom štádiu. Čínska bylinková nefropatia bola prvýkrát identifikovaná v Belgicku v 90. rokoch 20. storočia. Zistilo sa, že asi 100 pacientov so zlyhaním obličiek užívalo „režim chudnutia“, ktorý bol neskôr identifikovaný ako kyselina aristolochová. Biopsie obličiek medzi týmito pacientmi boli veľmi podobné, pričom vykazovali rozsiahle a vážne zjazvenie obličiek. Najmenej 70 z týchto pacientov potrebovalo dialýzu alebo transplantáciu obličky. Ďalšie prípady čínskej bylinnej nefropatie boli neskôr identifikované vo Francúzsku, Spojenom kráľovstve a Spojených štátoch. V dôsledku toho v roku 2001 vydala americká FDA prísne varovanie a zákaz dovozu výživových doplnkov obsahujúcich túto zlúčeninu.

V tejto štúdii sú účinky rôznych koncentrácií G. Sylvestre u albínskych potkanov Wistar prostredníctvom histopatologickej a biochemickej reakcie u potkanov.

Materiály a metódy

Zber a príprava surových drog

Rastlina bola zozbieraná a spárovaná s herbárom Holy Cross College v Nagercoil, okres Kanyakumari, Tamilnadu-India. Vzorky boli vysušené v tieni a nahrubo práškované.

Pokusné zvieratá

Potkany Albino Wister oboch pohlaví s hmotnosťou 180-210 g boli držané v oddelených klietkach za štandardných podmienok prostredia s teplotou 20 až 30 °C a vlhkosťou bola poskytnutá štandardná potrava pre potkany a voda ad libitum. Experimentálne postupy sa uskutočňovali v prísnom súlade s nariadeniami inštitucionálnej etickej komisie pre zvieratá.

Protokol štúdie

Uskutočnila sa pilotná štúdia na štúdium vzťahu medzi dávkou a odozvou rastlinného prášku Gymnema, dávka 5, 10, 15, 20, 25 g s ryžou a mliekom počas 25 dní.

Liečebný protokol

Zvieratá boli rozdelené do 5 skupín po 5 zvierat a liečené podľa protokolu uvedeného nižšie.

Kontrolná skupina (G1):

Liečebná skupina (G2): Liečená skupina (G3): Liečená skupina (G4): Liečená skupina (G5):

Zvieratám bola po dobu 25 dní podávaná normálna strava zložená z ryže a mlieka.

Zvieratám bolo podaných 5 g prášku s ryžou a mliekom.

Zvieratám bolo podaných 10 g prášku s ryžou a mliekom.

Zvieratám bolo podaných 15 g prášku s ryžou a mliekom.

Zvieratám bolo podaných 20 g prášku s ryžou a mliekom.

Zníženie telesnej hmotnosti u potkanov bolo uskutočnené tak, že po experimentálnom období cez noc hladovali. Boli usmrtené anestéziou s použitím chloroformových pár a krv bola odobratá vykrvácaním srdcovej tepny a okamžite prenesená do skúmavky ošetrenej EDTA. Krv sa potom centrifugovala pri 4000 otáčkach za minútu počas 10 minút, aby sa odstránili červené krvinky a získala sa plazma. Oblička bola vypreparovaná, odvážená a uchovaná na histopatologické štúdie. Obličky z rôznych skupín sa odvážili a zaznamenali sa rozdiely v hmotnostiach.

Histopatologické štúdie

Rezy žalúdka boli konzervované v 10 percentnom formalíne. Boli zafarbené hematoxylínom a eozínom, zafarbené rezy boli pozorované pod mikroskopom, aby sa odhadol rozsah diabetického Mellitu.

Biochemické testy

Odhad glukózy:Zmes činidiel (fosfátový pufor pH 7,5:250 mmol/1, fenol 5 mmol/1, 4- aminoantipyrín 0,5 mmol/1, glukózooxidáza (GOD) Väčšie alebo rovné 10 KU/1 Peroxidáza (POD), väčšia alebo rovná 1 KU/1, bola odobratá do troch skúmaviek, každá 1000 ul štandard (S), test (T) a slepý pokus (B). 10 ul séra sa pridalo do (T). Do (S) sa pridal štandardný roztok 10 ul/100 mg/dl a do (B) sa pridalo 10 ul destilovanej vody. Obsah sa dobre premieša a inkubuje

10 minút pri 37°C. Absorbancia (S) a (T) bola odčítaná oproti reagentu

(B) spektrofotometricky. Intenzita bola meraná pri 505 nm.
Odhad bielkovín:Zmes biuretových činidiel Hydroxid sodný 500 mmol/1, vínan sodno-draselný 35 mmol/1, jodid draselný 30 mmol/1, síran meďnatý 10 mmol/1) sa odobrala do troch skúmaviek, každá 1000 ul štandard (S) a test (T) slepý pokus. (B) a pridalo sa 10 ul séra (T). Štandardný roztok 10 ul/6 g/dl sa pridal do štandardu (S) a do (B) sa pridalo 10 ul destilovanej vody. Obsah sa dobre premieša a inkubuje sa 10 minút pri 37 °C. Absorbancia (S) a (T) bola spektrofotometricky odčítaná oproti reagentu (B). Intenzita bola meraná pri 546 nm.

Odhad cholesterolu:Zmes činidiel (Goodov pufer pH 6,7:50 mmol/1, fenol 5 mmol/1, 4-aminoantipyrín 0,3 mmol/1, cholesterol esteráza (CHE) Väčšie alebo rovné 200 U/1, Cholesteroloxidáza (CHOD) Viac ako alebo rovné 50 U/1, peroxidáza (POD) Väčšie alebo rovné 3 kU/1) sa odobrali v troch skúmavkách, z ktorých každá má 1000 µl štandard (S) a test (T) slepý pokus (B) a pridalo sa 10 ul séra (T). Do (S) sa pridal štandardný roztok 10 ul/200 mg/dl a do (B) sa pridalo 10 ul destilovanej vody. Obsah sa dobre premieša a inkubuje sa 10 minút pri 37 °C. Absorbancia (S) a (T) bola spektrofotometricky odčítaná oproti reagentu (B). Intenzita bola meraná pri 505 nm.

Odhad triglyceridov:Zmes činidiel Goodov pufer pH 7,2:50 mmol/1, 4-chlórfenol 4 mmol/1, ATP 2 mmol/1, Mg2 plus 15 mmol/1, glycerokináza (GK) Väčšie alebo rovné až {{20}},4 kU/1, peroxid (POD) väčší alebo rovný 2 kU/1, lipoproteínová lipáza (LPL) väčší alebo rovný 2 kU/1, 4- Aminoantipyrín 0,5 mmol/1, glycerol-3-fosfát-oxidáza Väčší alebo rovný 0,5 kU/1) ) sa odobrali do troch skúmaviek, každá 1000 ul štandard (S) a test (T) slepý pokus (B) a 10 ul séra sa pridalo (T). Do (S) sa pridal štandardný roztok 10 ul/200 mg/dl a do (B) sa pridalo 10 ul destilovanej vody. Obsah sa dobre premieša a inkubuje sa 10 minút pri 37 °C. Absorbancia (S) a (T) bola spektrofotometricky odčítaná oproti reagentu (B). Intenzita bola meraná pri 546 nm.

Odhad inzulínu:Kvantitatívne meranie inzulínu sa uskutočnilo kompetitívnym enzýmovým imunosorbentným testom na pevnej fáze (ELISA). Inzulín bol odhadnutý v laboratóriách Vivek, Nagercoil.

Štatistická analýza

Všetky hodnoty boli vyjadrené ako priemer ± SD. Údaje boli analyzované pomocou matematických výpočtov, hodnoty boli vyjadrené ako významné.

Výsledky a diskusia

Biochemické parametre

V tomto výskume potkany kŕmené G. Sylvestre na G2 vykazovali zníženie telesnej hmotnosti zo 178.0 ± 17,6 na 156 ± 12,2 g. Podobne u zvierat kŕmených G3, G4 a G5 vykazovali významný pokles v porovnaní s počiatočným dňom na konci 25. dňa (tabuľka 1).

V G2 došlo k miernemu zvýšeniu (0,20 ± 0.05) v porovnaní s G1 (0,13 ± 0,02). Ale G4 a G5 vykazovali zníženie hladiny inzulínu v porovnaní s G1. G. Sylvestre významne ovplyvnil plazmatický inzulínový profil normálnych samcov potkaních albínov pri vyšších koncentráciách skupín G4 a G5 (tabuľka 2).

Hladina glukózy vykazovala normálnu hodnotu 88,98 ± 4,6, 84,87 ± 4,3 a 83,70 ± 4,2 v G1, G2 a G3. Avšak pri vyšších koncentráciách skupiny G4 a G5 obsah glukózy neustále klesal s maximálnym poklesom v G5. V skupinách s vyššou koncentráciou G4 a G5 obsah glukózy neustále klesal s maximálnym poklesom v G5 (tabuľka 3).

G2 a G3 nedokázali vytvoriť štatisticky významné zníženie. Ale G4 a G5 (7,94 ± 0,4 a 8,12 ± {{10}},1 mg/dl) vykázali mierny nárast v porovnaní s G1 (7,16 ± 0,3 g/dl). G. Sylvestre významne neovplyvňuje profil plazmatických proteínov normálnych samcov potkanov albínov ani do vyššej koncentrácie G5 (tabuľka 4).

Hladina triglyceridov vykazovala normálnu hodnotu 51,47 ± 3,8, 44,75 ± 2,7 a 42,30 ± 3,7 g/dl v G1, G2 a G3, v tomto poradí. Avšak pri vyšších koncentračných skupinách G4 a G5 hodnota stabilne klesala s maximálnym poklesom v G5 (tabuľka 5).

Rozdiel v hladine cholesterolu 72.05 ± 4,0 a 49,40 ± 5,9 mg/dl bol zaznamenaný u potkanov kŕmených Gymnemou až G4 a G5 v porovnaní s G1 hodnotou 87,15 ± 3,6 mg/dl. Skupina s nízkou dávkou G2 a G3 bola podobná normálnej skupine (tabuľka 6).

Histopatologické štúdie

Výsledky histopatologických štúdií sú uvedené na doštičke 1. Rezy z G1 ukázali normálnu histológiu obličiek potkanov. Proximálne stočené tubuly, distálne stočené tubuly a obličkové telieska s glomerulom a glomerulárnou kapsulou sú veľmi jasné a výrazné. Jasne sa pozoruje obličkové teliesko s viscerálnou vrstvou, parietálnou vrstvou a kapsulárnym priestorom. Zvieratá ošetrené práškom na G2 a G3 neboli veľmi ovplyvnené. Liečba G (4) a (5) obličiek u zvierat kŕmených práškom ukazuje nekrózu, vakuolizáciu a narušenie glomerulárnych tubulov. Pri vysokých dávkach (15 a 20 g/kg telesnej hmotnosti) bylinného prášku sa vyskytli mierne degeneratívne zmeny a nekróza epitelu obličkových tubulov a glomerulov. Vakuolizácia bola tiež zaznamenaná pri oboch dávkach G4 a G5; toto sa však nepozorovalo v skupinách s nízkou dávkou telesnej hmotnosti G2 a G3.

Významné zmeny boli pozorované v hladinách sérového cholesterolu a hladín triglyceridov u zvierat kŕmených nízkou dávkou G. Sylvestre, čo môže byť spôsobené normálnou stravou a normálnymi potkanmi, ako bolo pozorované. Pri vyššej koncentrácii telesnej hmotnosti G4 a G5 došlo k poklesu cholesterolu, čo môže byť spôsobené tým, že gymnemagenin a gymnemické kyseliny interagovali so steroidmi, najmä s cholesterolom a žlčovými kyselinami odvodenými od CA v črevnom trakte potkanov. Pokles cholesterolu teda môže byť spôsobený fekálnym vylučovaním cholesterolu, čo môže byť spôsobené prerušením tvorby miciel, ktoré obsahujú cholesterol a žlčové kyseliny v čreve a následnou interferenciou s absorpciou cholesterolu. Zníženie hladín cholesterolu, triglyceridov a voľných mastných kyselín v plazme sa pozorovalo v dvoch štúdiách u diabetických pacientov, ktorí dostávali doplnky Gymnema okrem ich obvyklej antidiabetickej liečby (napr. inzulín, glibenklamid alebo tolbutamid). tieto hladiny sa postupne zvyšovali od východiskovej hodnoty u pacientov v kontrolnej skupine, ktorí neužívali lieky. Je potrebné poznamenať, že zníženie lipidov bolo sekundárnym koncovým bodom v týchto štúdiách, ktoré boli navrhnuté tak, aby demonštrovali antidiabetické účinky Gymnemy.

Tradičné skúsenosti môžu len málo pomôcť pri rozpoznávaní škodlivých interakcií s konvenčnými liekmi^9,10. Úmrtnosť a zmeny správania sa považujú za základné parametre na posúdenie toxicity akéhokoľvek rastlinného produktu. Listy G. Sylvestre sa široko používajú ako zdravé potraviny, pretože používatelia často očakávajú zníženie hmotnosti a zlepšenie cukrovky kvôli ich schopnosti potlačiť chuť na sladkosti a inhibovať absorpciu glukózy8.

V tejto štúdii sa prírastok telesnej hmotnosti a príjem potravy znížili v závislosti od dávky u potkanov, ktorým bol podávaný G. Sylvestre. Zníženie prírastku telesnej hmotnosti mohlo byť spôsobené znížením príjmu potravy. Okrem toho je známe, že tento rastlinný prášok potláča receptor chuti na sladké na jazyku, čo môže byť ďalšou príčinou.

Zmeny závislé od dávky sa pozorovali aj v semenách senovky gréckej. V tomto pozorovaní nebola pozorovaná žiadna významná úmrtnosť. Možným dôvodom môže byť, že Gymnema nezasahuje do rôznych vitálnych funkcií zvieraťa, a preto nepredstavuje závažnú toxicitu, ktorá môže viesť k smrti zvieraťa. Listy zvyšujú hladinu inzulínu, podľa výskumu na zdravých dobrovoľníkoch2, pravdepodobne v dôsledku regenerácie buniek pankreasu³.

Toxické látky môžu ovplyvniť obličky a zhoršiť ich fyziologické funkcie. Tieto účinky sú zistiteľné a/alebo kvantifikovateľné krížovou kontrolou normálne očakávaných funkcií obličiek pri vylučovaní bezprahových dusíkatých odpadových produktov metabolizmu, ako je močovina a kreatinín. Tiež stanovením schopnosti obličiek filtrovať a reabsorbovať prahové látky, ktoré telo potrebuje, ako sú elektrolyty, možno zistiť toxicitu pre obličky7. Niektorí autori preukázali, že odhad hladín močoviny a kreatinínu nie je dostatočne citlivý na zistenie nízkej úrovne renálnej toxicity alebo poškodenia. Iní pozorovali, že absolútna hmotnosť obličiek je relatívne citlivým indikátorom nefrotoxicity pre známe nefrotoxické látky. Nefrotoxicita bola preto definovaná ako zvýšená hmotnosť obličiek (či už absolútna alebo relatívna) spojená s významnou zmenou aspoň jedného sérového parametra ⁶.

Histopatologické štúdie sa uskutočnili v pečeni potkanov. Fibróza pečene bola indukovaná CCL4 a rozsah ochorenia bol hodnotený meraním hladiny HP a TBL pomocou Trigonella foenumgraecum¹¹Liečba zvierat pomocou G2 a G3 nebola príliš ovplyvnená G. Sylvestre. Rezy obličiek u zvierat kŕmených práškom do G4 a G5 vykazujú nekrózu, vakuolizáciu a narušenie glomerulárnych tubulov. Pri vysokých dávkach (15 a 20 g/kg telesnej hmotnosti) bylinného prášku sa vyskytli mierne degeneratívne zmeny a nekróza epitelu obličkových tubulov a glomerulov. Pri oboch dávkach bola tiež zaznamenaná vakuolizácia; toto sa však nepozorovalo v skupinách s nízkou dávkou G2 a G3. Nekróza a bunková infiltrácia boli zaznamenané v niektorých glomeruloch a renálnych tubuloch potkanov v skupine s vysokou dávkou.

Glomeruly, pretože prijímajú jednu štvrtinu srdcového výdaja a sú perfundované pri najvyššom tlaku akéhokoľvek kapilárneho riečiska v tele, sú náchylné na poškodenie množstvom liekov a iných toxických látok. Tieto látky môžu viesť k poškodeniu jedným z dvoch základných mechanizmov: 1) priame toxické poškodenie závislé od dávky; 2) nepriame, imunologicky sprostredkované poškodenie, do značnej miery závislé od dávky. Oblička z kontrolných zvierat vykazovala normálnu renálnu morfológiu. Keďže liečivé byliny si spotrebitelia zvyčajne predpisujú sami, chýbajú odporúčania na používanie predpísaných liekov, ako je dávka, spôsob a frekvencia podávania, ktoré kontroluje a kontroluje predpisujúci lekár. Tieto faktory zvyšujú riziko toxicity Gymnemy, keďže konzumenti užívajú extrakt tak dlho, kým im stav trvá, a to aj vo zvýšených dávkach. Extrakt z listov Gymnema Sylvestre: 52-týždňová štúdia toxicity stravy na potkanoch Wistar⁵.

V obličkách boli histopatologické zmeny ako akútna tubulárna nekróza s difúznym intersticiálnym a glomerulárnym krvácaním. To naznačuje, že došlo k ireverzibilnému bunkovému poškodeniu ovplyvňujúcemu epiteliálny parenchým a endotelové bunky. Histológia obličiek liečených potkanov vykazovala znaky konzistentné s poškodením renálneho epitelu toxínmi. Zistilo sa, že mnohé rastlinné prípravky vykazujú renálnu tubulárnu nekrózu vykazujúcu rozsiahlu intersticiálnu fibrózu a závažnú tubulárnu stratu, ktorá je najvýraznejšia vo vonkajšom kortexe4 (doštička 1).

Záver

G. Sylvestre pri koncentráciách do 10 g/kg telesnej hmotnosti nepredstavuje pre diabetikov vážnu hrozbu. Vyššie koncentrácie 15 a 20 g/kg telesnej hmotnosti spôsobujú histopatologické zmeny, ich závažnosť je veľmi znížená a dávka do 10 g/kg telesnej hmotnosti neovplyvňuje bielkoviny, glukózu, inzulín, cholesterol alebo triglyceridy. G. Sylvestre by sa na odporúčanie lekára mohol použiť pri rôznych ochoreniach v obmedzenom dávkovaní.

Referencie

1. Shanmugasundaram KR, Panneerselvam C, Sumudram P a Shanmugasundaram ER, 1983. Enzýmové zmeny a využitie glukózy u diabetických králikov účinokGymnema Sylvestre, J. Ethnopharmacol 2: 205-34.

2. Beckles GLA, American Diab AK, Mathur KK, Datta SK, Tandon a Dikshith TSS, 1998. Výskumné centrum priemyselnej toxikológie,Diabetes Starostlivosť 21:1432-1438.

3. Mhasker KS a Caius JF, 1930. Štúdium indických liečivých rastlín. II.Gymnema SyvestreR.Br,,indický. J. Med. Res. Memoáre 16: 72-75.

4. Vanherweghem JL, Depierreux M, Tielemans C, Abramowicz D, Dratwa M, Jadoul M, Richard C, Vandervelde D, Verbeelen D a Vanhaelen-Fastre R, 1993. Rýchlo progresívna intersticiálna renálna fibróza u mladých žien,čínsky Bylinky Lancet 341 : 387–391.

5. Ogawa Y, Sekita K, Umemura T, Saito M, Ono A, Kawasaki Y, Uchida O, Matsushima Y, Inoue T a Kanno J,2004. Gymnema Sylvestreextrakt z listov: 52-týždňová štúdia toxicity stravy na potkanoch Wistar,Shokuhin Eiseigaku zasshi, 45(1): 8-18.

6. Srivasta S, Srivastava AK, Patnaik GK a Dhawan BN. 1996. Účinok picrolivu na regeneráciu pečene u potkanov,Fitoterapia, 67: 252-256.

7. Barzaghi N, Creama F, Gatti G, Pifferi G a Perucca E, 1990. Farmakokinetické štúdie komplexu silybín-fosfatidylcholín u zdravých ľudí,Eur. J. Drug Meta Farmakokinet 15: 333-338.

8. Ueno G, 1997. Applications ofGymnema sylvestrevýťažky z potravín,Shokuhin do Kagaku 1 : 100-103.

9. De Smet PAGM, 1993.Úvod do farmakoepidemiológie bylín.J. Ethnopharmacol 38: 197-208.

10. Atherton DJ. 1994, Smerom k bezpečnejšiemu používaniu tradičných liekov je potrebné väčšie povedomie o toxicite.BMJ, 308: 673-674.

11. Santha Rani Thakur, Saraswathy GR, Maheswari E, Sunil Kumar N, Hazarathiah T, Sowmya K, Dwarakanadha Reddy P a Ramesh Kumar B, 2007. Inhibícia fibrózy pečene vyvolanej CCl4Trigonella foenumgraecum L, Prirodzené Produkt Žiarenie 6(1): 11-17.