Terapeutický účinok Cistanosidu A na kostný metabolizmus myší po ovariektómii

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

Abstraktné

Cistanozid A (Cis A) je aktívny fenyletanoidový glykozid izolovaný zCistanche deserticola YC Mazískal našu pozornosť kvôli jeho možnej úlohe pri liečbeosteoporóza. V tejto štúdii sme hodnotili účinky Cis A na modeli myší s ovariektómiou (OVX) a skúmali sme jeho základné molekulárne mechanizmy účinku. Po 12 týždňoch perorálne podávanej intervencie vykazoval Cis A (20, 40 a 80 mg/kg telesnej hmotnosti/deň) významné antiosteoporotické účinky na myši OVX, o čom svedčí zvýšená pevnosť kostí, hustota minerálov v kostiach a zlepšená mikroarchitektúra trabekulárnej kosti. Medzitým sa znížili aktivity markerov kostnej resorpcie vrátane kyslej fosfatázy rezistentnej na vínan (TRAP), deoxypyridinolínu (DPD) a katepsínu K a zvýšila sa bioaktivita markera tvorby kostí alkalickej fosfatázy (ALP). Cis A mechanicky inhiboval expresiu faktora 6 spojeného s TNF-receptorom (TRAF6), upstream molekuly, ktorá je zdieľaná zosilňovačom ľahkého reťazca nukleárneho faktora kappa aktivovaných B buniek (NF-κB) a fosfatidylinozitol 3-kinázou ( PI3K)/Akt dráhy a následne potlačil hladiny receptorových aktivátorov ligandu jadrového faktora kappaB (RANKL), znížil expresiu NF-κB a upreguloval osteoprotegerín (OPG), PI3K a Akt, čo znamená, že Cis A má antiosteoporotickú aktivitu u myší po ovariektómii prostredníctvom TRAF{14}}sprostredkovanej inaktivácie NF-kappaB a aktivácie PI3K/Akt. Spolu uvádzame nové zistenia, že Cis A downreguláciou TRAF6 koordinuje inhibíciu NF-KB a stimuláciu dráh PI3K / Akt, aby sa podporila tvorba kostí a zabránilo sa kostnej resorpcii. Tieto údaje demonštrovali potenciál Cis A ako sľubného činidla na liečbuosteoporózachoroba.

Kľúčové slová: cistanoside A; ovariektomizované myši; antiosteoporotické; TRAF6; RANKL

Úvod

Osteoporóza, systémový kostný „tichý zabijak“, sa v posledných rokoch stal veľkým zdravotným rizikom, ktoré postihuje viac ako 2 000 miliónov ľudí na celom svete [1]. Je charakterizovaná nízkou hustotou kostnej hmoty (BMD) a mikroarchitektonickým zhoršením, ktoré vyplýva z nadmernej resorpcie kosti nad tvorbou kosti a nakoniec vedie k osteoporotickej zlomenine [2,3]. V súčasnosti je identifikácia látok na blokovanie osteoklastickej diferenciácie a resorpcie bežnou a úspešnou stratégiou pre vývoj terapeutických liečiv preosteoporóza[4] a skutočne existuje veľa syntetických činidiel, vrátane estradiolvalerátu a alendronátu sodného, ​​ktoré by mohli predchádzať a liečiťosteoporóza. Avšak lieky na choroby nie sú ani zďaleka ideálne; niektoré z týchto liekov by mohli zvýšiť riziko rakoviny endometria a prsníka a majú tiež určitý stupeň vedľajších účinkov, ako je hyperkalcémia, hyperkalciúria atď. [5], ktoré obmedzujú ich klinické použitie. Preto sa tradičná čínska medicína (TCM), najmä jedlá TČM s izolovanými bioaktívnymi zlúčeninami a frakciami, už viac ako tisícročie vo veľkej miere bezpečne a účinne používajú v ázijských krajinách na prevenciu a liečbu rôznych chorôb, vrátaneosteoporóza[6,7].

Osteoporózaje charakterizovaná ako zvýšená kostná resorpcia v dôsledku zvýšenej osteoklastogenézy a tento proces zahŕňa vloženie hematopoetických monocytov do prekurzorov osteoklastov, ktoré sa zlúčia a vytvoria viacjadrové osteoklasty, ktoré sa zameriavajú na miesta kostí, ktoré prechádzajú remodeláciou [4]. Aktivátor receptora pre nukleárny faktor-κB ligand (RANKL), kľúčový faktor, ktorý sa vylučuje z osteoblastov, stimuluje diferenciáciu monocytov na osteoklasty [8,9]. Interakcia RANKL s jeho receptorom RANK vedie ku kaskáde intracelulárnych udalostí, vrátane NF-KB, PI3K/Akt, kalcium/kalmodulín-dependentnej kinázy náborom adaptorového signálneho proteínu TNF receptor-asociovaného faktora (TRAF6). Výsledkom je, že niekoľko markerových génov súvisiacich s osteoklastom, vrátane TRAP, katepsínu K a DPD, je upregulovaných a proces kostnej resorpcie sa urýchľuje.

Fenyletanoidové glykozidy sa vyznačujú kyselinou škoricovou a hydroxylfenyletylovými skupinami, ktoré sú naviazané na -glukopyranózu (apóza, galaktóza, ramnóza, xylóza atď.) prostredníctvom glykozidickej väzby, ktoré sú široko rozšírené v liečivých rastlinách [10]. Cistanozid A (Cis A) je aktívny fenyletanoidový glykozid vCistanche deserticola YC Ma. Podľa záznamov z čínskeho liekopisu sa C. deserticola tradične používala na liečbu deficitu jinu obličiek, svalovej slabosti, bedrovej slabosti atď. a fenyletanoidové glykozidy sú hlavnými bioaktívnymi zložkami tejto byliny [11]. Na základe „obličkovej“ teórie TCM by obličky mohli riadiť kostný systém, čo znamená, že vývoj a funkcie kostí závisia od obličkovej esencie a táto obličková esencia sa môže premeniť na kostnú dreň, aby vyživovala kosti. podporujú rast a opravu kostry a posilňujú kostru [12]. Keďže C. deserticola môže posilniť obličky, predpokladali sme, že Cis A môže predchádzať a liečiťosteoporóza. Táto štúdia bola preto navrhnutá tak, aby potvrdila potenciál Cis A pri prevenciiosteoporózas použitím modelu myší s odstránením vaječníkov a markery tvorby a resorpcie kostí, ako aj súvisiace potenciálne mechanizmy, sa určili na odhadnutie antiosteoporotickej bioaktivity tohto činidla.

Výsledky

Účinky Cis A na testovanie trojbodového ohybu kostí

Aby sme analyzovali, či liečba Cis A robí kosť silnejšou, podrobili sme stehenné kosti testu trojbodového ohybu. Ako je znázornené na obrázku 1, maximálna záťaž aplikovaná pri zlomeninách kostí bola 21,5 percenta a 22.0 percent vyššia u zvierat liečených dávkou 20 mg/kg a 80 mg/ kg Cis A, v tomto poradí, v porovnaní so zvieratami v skupine s odstránením vaječníkov (OVX) (p < 0.05).="" medzitým="" liečba="" s="" cis="" a="" tiež="" zvýšila="" stuhnutosť="" kostí;="" všetky="" myši="" liečené="" cis="" a="" vykazovali="" významne="" zvýšenú="" tuhosť="" s="" údajmi="" 121.{27}}="" ±="" 12,1="" (p="">< 0,05),="" 124,1="" ±="" 16,2="" (p="">< 0,05)="" a="" 127,7="" ±="" 9,6="" (p="">< 0,01).="" v="" porovnaní="" so="" 102,2="" ±="" 10,7="" ovx="" myší.="" výsledky="" naznačujú,="" že="" zvýšená="" sila="" kostí="" u="" ovx="" myší="" liečených="" cis="" a="" bola="" spôsobená="" zvýšeným="" množstvom="" kosti="" a="" zlepšením="" kvality="">

Účinky Cis A na mikroarchitektúru kostí

Trojrozmerná mikroarchitektúra trabekulárnej kosti myší meraná pomocou mikro-CT (obrázok 2 a tabuľka 1) intuitívne ukazuje, že myši v skupine OVX vykazovali významné zníženie trabekulárnej plochy a počtu trabekulárnej kosti v porovnaní so simulovanou skupinou, čo naznačuje, že ovariektómia môže vyvolať výrazné zníženie hustoty kostnej hmoty (BMD, -46 percent), obsahu minerálov v kostiach (BMC, -66 percent), obsahu minerálov v tkanivách (TMC, -85 percent), objemovej frakcie kostí (BVF, -82 percent), trabekulárne číslo (Tb. N, −76 percent ) a zvýšenie trabekulárnej separácie (Tb. Sp, plus 80 percent ) bez akejkoľvek modifikácie celkovej hustoty tkanivových minerálov (TMD) a hrúbky trabekulárnej dutiny (Tb. Th) po operácii 12 týždňov.

Avšak OVX myši liečené Cis A viedli v závislosti od dávky k zvýšeniu BMD (plus 43 percent ~57 percent), BMC (plus 65 percent ~73 percent), TMC (plus 83 percent ~90 percent), BVF (plus 80 percent ~88 percent), väčšie zníženie Tb. Sp (-79 percent ~ 88 percent) a ďalej zvýšený Tb. N (plus 73 percent ~ 82 percent) v porovnaní so skupinou OVX. Zdá sa, že TMD nebola ovplyvnená ovariektómiou, ale bola významne zvýšená liečbou estradiolvalerátom (EV).

Účinky Cis A na markery tvorby kostí a resorpcie

Účinky Cis A na markery kostnej resorpcie, vrátane TRAP, DPD, katepsínu K a indexu tvorby kostí ALP a kostného Gla-proteínu (BGP), sú znázornené na obrázku 3. Po 12 týždňoch operácie ovariektómie sa aktivity TRAP, DPD a katepsínu K v skupine OVX sa významne zvýšili, najmä DPD, ktoré sa zvýšilo takmer o 55,6 percent; TRAP a katepsín K sa zvýšili o 43,5 percenta a 38,1 percenta v porovnaní so simulovanou skupinou. Cis A podávaný perorálne počas 12 týždňov preukázal značný potenciál v prevencii všetkých vyššie uvedených markerov kostnej resorpcie, najmä vysoká dávka (80 mg/kg), ktorá má významný účinok na potlačenie aktivít DPD o 45.0 percent , TRAP o 49.0 percent a katepsín K o 44.0 percent (p < 0,01)="" v="" porovnaní="" s="" skupina="" ovx="" (obrázok="" 3).="" aj="" keď="" sa="" v="" skupine="" ovx="" preukázal="" rastúci="" trend="" aktivít="" alp="" a="" bgp,="" neboli="" pozorované="" žiadne="" štatisticky="" významné="" zmeny.="" avšak="" významné="" zlepšenie="" aktivity="" alp="" bolo="" pozorované="" v="" skupinách="" liečených="" nízkou="" a="" vysokou="" cis="" a="" v="" porovnaní="" so="" skupinou="" s="" falošným="" pokusom="" (p=""><>

Účinky Cis A na hladiny proteínovej expresie TRAF6, NF-KB PI3K, Akt, OPG a RANKL

Analýza Western blot odhalila, že v porovnaní s falošnou skupinou boli hladiny proteínov TRAF6, NF-κB a RANKL v skupine OVX významne zvýšené (p < 0.05),="" zatiaľ="" čo="" opg,="" pi3k="" a="" akt="" boli="" významne="" znížené="" (obrázok="" 4).="" cis="" a="" (20="" mg/kg="" alebo="" 80="" mg/kg)="" významne="" znížila="" expresiu="" traf6="" (p="">< 0.05),="" po="" ktorej="" nasledovala="" expresia="" rankl="" znížil="" a="" opg="" zvýšil,="" čo="" znamená,="" že="" pomer="" opg/rankl="" bol="" upregulovaný.="" v="" dôsledku="" toho="" boli="" signálne="" kaskády="" nf-kb="" downregulované="" a="" pi3k/akt="" boli="" upregulované="" liečbou="" cis="" a="" (p="">< 0,05).="" molekuly="" 2017,="" 22,="" 197="" 5="" z="" 11="" 2.1.4.="" účinky="" cis="" a="" na="" hladiny="" proteínovej="" expresie="" traf6,="" nf-kb="" pi3k,="" akt,="" opg="" a="" rankl="" western="" blot="" analýza="" odhalila,="" že="" v="" porovnaní="" s="" falošnou="" skupinou="" boli="" hladiny="" proteínov="" traf6,="" nf-kb="" a="" rankl="" v="" skupine="" ovx="" významne="" zvýšené="" (p="">< 0,05),="" zatiaľ="" čo="" opg,="" pi3k="" a="" akt="" boli="" významne="" znížené="" (obrázok="" 4).="" cis="" a="" (20="" mg/kg="" alebo="" 80="" mg/kg)="" významne="" znížila="" expresiu="" traf6="" (p="">< 0,05),="" po="" čom="" nasledovalo="" zníženie="" expresie="" rankl="" a="" zvýšenie="" opg,="" čo="" znamená,="" že="" pomer="" opg/rankl="" bol="" upregulovaný.="" v="" dôsledku="" toho="" boli="" signálne="" kaskády="" nf-kb="" downregulované="" a="" pi3k/akt="" boli="" upregulované="" liečbou="" cis="" a="" (p=""><>

Diskusia

Vzhľadom na obmedzenia súčasných terapeutických možností preosteoporózachoroby, sú potrebné alternatívy z potravín alebo prírodných jedlých liečivých rastlín. Ako súčasť nášho pokračujúceho úsilia objaviť účinné antiosteoporotické látky z TČM sme našli sériu extraktov, frakcií a zlúčenín, ktoré majú účinok antiosteoporotických vlastností [13,14].Cistanche deserticolaje dôležitá klasická TČM, o ktorej sa zistilo, že má priaznivý bezpečnostný profil [15] a široké medicínske funkcie pri liečbe obličkovej nedostatočnosti atď. [16]. Podľa teórie TČM sa na liečbu zvyčajne používali TČM, ktoré majú povzbudzujúci účinok na obličkyosteoporóza; fenyletanoidové glykozidy sú hlavnými bioaktívnymi zložkami tejto byliny, čo znamená, že fenyletanoidové glykozidy obsiahnuté v C. deserticola môžu mať antiosteoporotické vlastnosti. Bolo dokázané, že extrakt z C. deserticola môže významne inhibovať zníženie BMD a zabrániť zhoršeniu trabekulárnej mikroarchitektúry spôsobenej OVX [17]. V experimente in vitro tiež významne zvýšil ALP, kostný morfogenetický proteín-2 a mRNA osteopontínu, ako aj mineralizáciu kostí kultivovaných osteoblastov [18]. Echinakozid, hlavná bioaktívna zložka C. deserticola oficiálne zaznamenaná v čínskom liekopise [11], vykazovala antiosteoporotickú aktivitu pri vysokej dávke 30~270 mg/kg telesnej hmotnosti/deň [19] a ďalšie výsledky in vitro ukázali, že mohol podporiť regeneráciu kostí zvýšením pomeru OPG/RANKL v bunkách MC3T3-E1 Subklon 14 [20]. Cis A bol jedným z fenyletanoidových glykozidov izolovaných z C. deserticola a niekoľko správ odhalilo, že táto zlúčenina má antioxidačnú aktivitu [21] a protizápalové vlastnosti [22,23]. Nedávno publikovaná práca zistila, že Cis A vykazuje ochranné účinky na CCl4 a alkoholom indukovanú hepatotoxicitu u myší a tiež vykazuje ochrannú vlastnosť na poškodenie etanolom indukované v primárnych kultivovaných myších hepatocytoch in vitro [24]. V našej súčasnej štúdii výsledky ukázali, že Cis A mal antiosteoporotickú aktivitu pri nízkej dávke (20 ~ 80 mg/kg telesnej hmotnosti/deň) pomocou modelu myší s ovariektómiou a táto biologická aktivita sa prejavila znížením hladiny TRAF6, potlačením expresia RANKL a NF-KB a stimulácia OPG, PI3K a Akt, čo znamená, že terapeutický účinok Cis A u OVX myší bol prostredníctvom mechanizmu TRAF6-sprostredkovanej inaktivácie NF-kappaB a aktivácie PI3K/Akt.

Je dobre známe, že príčinou môže byť ovariektómiaosteoporózaso zjavným poklesom BMD, biomechanickej sily, kvality kosti a mikroarchitektúry trabekulárnej kosti a vyššie uvedené zmeny sú čiastočne spôsobené deficitom estrogénu [25]. Teraz, v súčasnom experimente in vivo, naša štúdia ukazuje, že ovariektómia je vyvolanáosteoporózaviedlo k významnému zníženiu biomechanickej sily a trabekulárnych štrukturálnych parametrov, vrátane BMD, BMC, TMC a Tb. N a zvýšenie Tb. Sp; a liečba Cis A výrazne zlepšila mechanické vlastnosti kostí vrátane maximálneho zaťaženia a tuhosti, zlepšila BMD a zlepšila väčšinu štrukturálnych parametrov kostnej trabekulárnej mikroarchitektúry v porovnaní s myšami v skupine OVX, čo naznačuje, že Cis A bol účinný pri zlepšovaní kvality kostí. a trabekulárna mikroarchitektúra u OVX myší.

Okrem celkovej BMD by mohol priamo diagnostikovať trojbodový ohybový test a meranie mikroarchitektúry trabekulárnej kostiosteoporózamarkery tvorby kostí, vrátane ALP a BGP, a index kostnej resorpcie, vrátane TRAP, DPD a katepsínu K, sa tiež použili na objasnenie súvisiacich antiosteoporotických mechanizmov Cis A. V našej štúdii bola aktivita ALP u myší skupiny OVX preukázali nevýznamný rastúci trend, čo naznačuje zvýšenú mieru kostného obratu [26,27] v postmenopauzálnychosteoporóza; vysoká (80 mg/kg telesnej hmotnosti/deň) a nízka (20 mg/kg telesnej hmotnosti/deň) dávka liečby Cis A vykazovala významné zvýšenie aktivity ALP v porovnaní so simulovanou skupinou, zatiaľ čo aktivita BGP nebola ovplyvnená ovariektómiu vo všetkých liečených skupinách; TRAP, DPD a katepsín K boli významne zvýšené v skupine OVX a podávanie Cis A výrazne znížilo všetky tri markery kostnej resorpcie. Vyššie uvedené údaje naznačujú, že Cis A má potenciálnu antiosteoporotickú aktivitu a tento účinok sa prejavuje reguláciou metabolizmu kostí, vrátane potlačenia kostnej resorpcie a zvýšenia tvorby kostí.

Koordinácia medzi osteoblastom a osteoklastom je kritickým faktorom pri udržiavaní integrity kostry. Osteoklasty exprimujúce TRAP sa pripájajú k povrchu kosti prostredníctvom tvorby tesniacich zón naviazaných na aktín, v rámci ktorých sa uvoľňujú proteolytické enzýmy, ako je katepsín K, čo vedie k tvorbe resorpčných jamiek. Modulácia osteoklastogenézy nezrelými bunkami osteoblastickej línie je sprostredkovaná RANKL a OPG [28]. OPG je návnadový receptor, ktorý inhibuje RANKL aktiváciu osteoklastogenézy, čím znižuje kostnú resorpciu. RANKL, ktorý poskytuje dôležitý signál progenitorom osteoklastov, je membránovo viazaná molekula z rodiny ligandov faktora nekrózy nádorov, ktorá podporuje tvorbu osteoklastov. Pomer expresie OPG/RANKL sa považuje za kľúčový parameter osteoklastogénnej aktivity a signálne kaskády aktivované RANKL zahŕňajú dráhy NF-κB a PI3K [29]. Dôležitosť dráhy NF-κB pre osteoklastogenézu demonštruje skutočnosť, že delécia NF-κB u myší viedla k absencii zrelých osteoklastov [30]. TRAF6 sa ukázal ako sľubný cieľ pre nové antiosteoporotické lieky. Myši s deficitom TRAF{11}}vykazujúce defektnú osteoklastogenézu a závažnú osteopetrózu tak preukázali dôležitosť TRAF6 v metabolizme kostí. Nové dôkazy poukazujú na kritickú regulačnú funkciu pre TRAF6 v RANKL/RANK-sprostredkovaných signalizačných kaskádach [4,31]. Údaje zo súčasnej štúdie ukázali, že liečba Cis A na myšiach OVX viedla k zníženiu hladín expresie proteínu TRAF6, zníženiu RANKL a zvýšeniu expresie OPG, a tým zabránila aktivácii RANKL downstream NF-KB a aktivácii signálnych dráh PI3K/Akt. , čo naznačuje, že Cis A inhibuje diferenciáciu osteoklastov inaktiváciou NF-kappaB sprostredkovanou TRAF{20}} a aktiváciou PI3K/Akt a zvyšuje pomer OPG/RANKL, následne inhibuje osteoklastogenézu a podporuje tvorbu kostí.

Referencie

1. Lane, NE Epidemiológia, etiológia a diagnostikaosteoporóza. Am. J. Obstet. Gynecol 2006, 194 (Suppl. S2), S3–S11. [CrossRef] [PubMed]

2. Kanis, JA; McCloskey, EV; Harvey, NC; Johansson, H.; Leslie, WD Intervention Thresholds and the Diagnosis ofOsteoporóza. J. Bone Miner. Res. 2015, 30, 1747–1753. [CrossRef] [PubMed]

3. Jiang, J.; Li, J.; Jia, X. Antiosteoporotická aktivita centrálneho icaridínu (CIT) na kostný metabolizmus ovariektomizovaných potkanov. Molekuly 2014, 19, 18690–18704. [CrossRef] [PubMed]

4. Li, J.; Zeng, L.; Xie, J.; Yue, Z.; Deng, H.; Ma, X.; Zheng, C.; Wu, X.; Luo, J.; Liu, M. Inhibícia osteoklastogenézy a kostnej resorpcie in vitro a in vivo prenylovým flavonoidom xanthohumolom z chmeľu. Sci. rep. 2015, 5, 1–14.

5. Barzel, USA Estrogény v prevencii a liečbe postmenopauzyosteoporóza: Recenzia. Am. J. Med. 1988, 85, 847-850. [CrossRef]

6. Zhu, Z.; Xue, LM; Han, T.; Jiao, L.; Qin, LP; Li, YS; Zheng, HC; Zhang, QY Antiosteoporotické účinky a proteomická charakterizácia cieľa a mechanizmu Er-Xian odvaru na osteoblastickú UMR-106 a osteoklasty indukované z RAW264.7. Molekuly 2010, 15, 4695–4710. [CrossRef] [PubMed]

7. Wu, YB; Zheng, CJ; Qin, LP; Slnko, LN; Han, T.; Jiao, L.; Zhang, QY; Wu, JZ Antiosteoporotická aktivita antrachinónov z Morinda Officinalis na osteoblasty a osteoklasty. Molekuly 2009, 14, 573–583. [CrossRef] [PubMed]

8. Bonewald, LF Úžasný osteocyt. J. Bone Miner. Res. 2011, 26, 229–238. [CrossRef] [PubMed]

9. Banin Hirata, BK; Oda, JM; Losi Guembarovski, R.; Ariza, CB; de Oliveira, CE; Watanabe, MA Molekulárne markery pre rakovinu prsníka: predpoveď správania nádoru. Dis. Markers 2014, 2014, 1–12. [CrossRef] [PubMed]

10. Alipieva, K.; Korkina, L.; Orhan, IE; Georgiev, MI Verbascoside — Prehľad jeho výskytu, (bio)syntézy a farmakologického významu. Biotechnol. Adv. 2014, 32, 1065–1076. [CrossRef] [PubMed]

11. Pharmacopoeia, Redakčný výbor Čínskeho liekopisu. Pharmacopoeia Čínskej ľudovej republiky; China Medical Science and Technology Press: Peking, Čína, 2015.

12. Zhang, H.; Xing, WW; Li, YS; Zhu, Z.; Wu, JZ; Zhang, QY; Zhang, W.; Qin, LP Účinky tradičného čínskeho bylinného prípravku na osteoblasty a osteoklasty. Maturitas 2008, 61, 334–339. [CrossRef] [PubMed]

13. Ma, X.-Q.; Zheng, C.-J.; Zhang, Y.; Hu, C.-L.; Bing, L.; Fu, X.-Y.; Han, L.-Y.; Xu, L.-S.; Rahman, K.; Qin, L.-P. Antiosteoporotické flavonoidy z Podocarpium podocarpum. Phytochem. Lett. 2013, 6, 118–122. [CrossRef]

14. Áno, Q.; Ma, XQ; Hu, CL; Lin, B.; Xu, LS; Zheng, CJ; Qin, LP Antiosteoporotická aktivita a zložky Podocarpium podocarpus. Fytomedicína 2015, 22, 94–102. [CrossRef] [PubMed]

15. Gao, Y.; Qin, G.; Wen, P.; Wang, Y.; Fu, W.; On, L.; Yao, S.; Zhao, P. Hodnotenie bezpečnosti práškovCistanche deserticola YCMapomocou 90-denného testu kŕmenia na potkanoch Sprague-Dawley. Drug Chem. Toxicol. 2016, 1.–7. [CrossRef] [PubMed]

16. Huang, ZX; Chen, GM; Zhao, KT; Chen, R.; Lin, CF Štúdia o toxiciteCistanche Deserticola. Brada. J. Health Lab. Technol. 2014, 24, 1098–1100.

17. Zhang, L.; Yue, X.; Zhang, L.; Zhao, J.; Chen, Y.; Cao, Z.; Liu, Y. Anti-osteoporóza účinokExtrakt z Cistanche deserticola Mau ovariektomizovaných potkanov. Trop. J. Pharm. Res. 2016, 15, 1929–1933. [CrossRef]

18. Li, TM; Huang, HC; Su, CM; Ho, TY; Wu, CM; Chen, WC; Fong, YC; Tang, CHExtrakt z Cistanche deserticolazvyšuje tvorbu kostí v osteoblastoch. J. Pharm. Pharmacol. 2012, 64, 897–907. [CrossRef] [PubMed]

19. Li, F.; Yang, X.; Yang, Y.; Guo, C.; Zhang, C.; Yang, Z.; Li, P. Antiosteoporotická aktivita echinakozidu u ovariektomizovaných potkanov. Fytomedicína 2013,

20, 549-557. [CrossRef] [PubMed] 20. Li, F.; Yang, Y.; Zhu, P.; Chen, W.; Qi, D.; Shi, X.; Zhang, C.; Yang, Z.; Li, P. Echinakozid podporuje regeneráciu kostí zvýšením pomeru OPG/RANKL v bunkách MC3T3-E1. Fitoterapia 2012, 83, 1443–1450. [CrossRef] [PubMed]

21. Xiong, Q.; Kadota, S.; Tani, T.; Namba, T. Antioxidačné účinky fenyletanoidov zCistanche deserticola. Biol. Pharm. Bull. 1996, 19, 1580–1585. [CrossRef] [PubMed]

22. Nan, ZD; Zeng, KW; Shi, SP; Zhao, MB; Jiang, Y.; Tu, PF Fenyletanoidové glykozidy s protizápalovými aktivitami zo stoniekCistanche deserticolapestované v púšti Tarim. Fitoterapia 2013, 89, 167–174. [CrossRef] [PubMed]

23. Xiong, Q.; Tezuka, Y.; Kaneko, T.; Li, H.; Tran, LQ; Hase, K.; Namba, T.; Kadota, S. Inhibícia oxidu dusnatého fenyletanoidmi v aktivovaných makrofágoch. Eur. J. Pharmacol. 2000, 400, 137-144. [CrossRef]. Luo, H.; Cao, R.; Wang, L.; Zhu, L. Ochranný účinok Cistanchis A na poškodenie vyvolané etanolom v primárne kultivovaných myších hepatocytoch. Biomed. Pharmacother. 2016, 83, 1071–1079. [CrossRef] [PubMed]

25. Nian, H.; Ma, MH; Nian, SS; Xu, LL Antiosteoporotická aktivita icariínu u ovariektomizovaných potkanov. Fytomedicína 2009, 16, 320–326. [CrossRef] [PubMed]

26. Swaminathan, R. Biochemické markery kostného obratu. Clin. Chim. Acta 2001, 313, 95–105. [CrossRef]

27. Lim, DW; Kim, JG; Lee, Y.; Cha, SH; Kim, YT Preventívne účinky extraktu z kôry Eleutherococcus senticosus pri OVX-indukovanýchosteoporózau potkanov. Molekuly 2013, 18, 7998–8008. [CrossRef] [PubMed]

28. Bord, S.; Írsko, DC; Beavan, SR; Compston, JE Účinky estrogénu na expresiu osteoprotegerínu, RANKL a estrogénového receptora v ľudských osteoblastoch. Kosť 2003, 32, 136–141. [CrossRef]

29. Takayanagi, H. Osteoimunológia: zdieľané mechanizmy a presluchy medzi imunitným a kostným systémom. Nat. Rev. Immunol. 2007, 7, 292-304. [CrossRef] [PubMed]

30. Franzoso, G.; Carlson, L.; Xing, L.; Poljak, L.; Shores, EW; Brown, KD; Leonardi, A.; Tran, T.; Boyce, BF; Siebenlist, U. Požiadavka na NF-kappaB pri vývoji osteoklastov a B-buniek. Gene Dev. 1997, 11, 3482-3496. [CrossRef] [PubMed]

31. Tan, EM; Li, L.; Indran, IR; Chew, N.; Yong, EL TRAF6 sprostredkováva potlačenie osteoklastogenézy a prevenciu straty kostnej hmoty vyvolanej ovariektómiou novým prenylovým flavonoidom. J. Bone Miner. Res. 2016. [CrossRef] [PubMed]

32. Jiao, L.; Cao, DP; Qin, LP; Han, T.; Zhang, QY; Zhu, Z.; Yan, F. Antiosteoporotická aktivita fenolových zlúčenín z Curculigo orchioides. Fytomedicína 2009, 16, 874–881. [CrossRef] [PubMed]