Dva triterpenoidy z listov Rubus Fraxinifolius a ich inhibičné aktivity tyrozinázy a elastázy
Jul 27, 2022
Prosím kontaktujteoscar.xiao@wecistanche.comPre viac informácií
Mnohé terapeutické zlúčeniny boli izolované z prirodzene bohatých organických zdrojov, ktoré môžu ponúknuť ekonomické a udržateľné zdroje zlúčenín s bezpečnými a účinnými biologickými aktivitami. V kozmetickom priemysle sú netrpezlivo vyhľadávané prírodné zlúčeniny s aktivitami proti starnutiu. Takto sme pripravili rôzne extrakty z listov Rubusfraxinifolius a použili sme enzýmové inhibičné testy na izoláciu zlúčenín s ochrannými účinkami proti starnutiu pokožky. Dva triterpenoidy boli izolované z Rubus fraxinifolius Poir. listy. Štruktúry boli charakterizované spektroskopickými analýzami (LC-ESI-MS,1D/2D NMR) a porovnaním s uvedenými údajmi. Zlúčeniny 1 a 2 boli určené ako 2,3-O-etylénglykol,19-hydroxyurs-12-en-23,28-diová kyselina a 2,{{15} }O-propándiol, 19-hydroxyur-12-en-28-kyselina. Metanolový extrakt a izoláty boli hodnotené z hľadiska ich inhibičných účinkov na elastázu a tyrozinázu. Zlúčeniny 1 a 2 inhibovali elastázu s IC50 122,199 ug/ml a 98,22 ug/ml a tiež inhibovali tyrozinázu s IC50 207,79 ug/armáda a 221,51 ug/ml, v danom poradí. Molekulárne dokovanie dokázalo, že obe zlúčeniny majú afinity k enzýmom.
Ak chcete vedieť viac, kliknite sem
Hoci je to náročné na dosiahnutie, prírodné látky proti starnutiu, ktoré sú pre ľudí bezpečné, možno ekonomicky a udržateľne zbierať z bohatých prírodných zdrojov. Asi 700 druhov Rubus (Rosaceae) je rozšírených po celom svete, aj keď len málo druhov sa nachádza v trópoch. Tento rod obsahuje živiny (cukor, vitamíny atď.), sekundárne metabolity (triterpenoidy, flavonoidy, polyfenoly atď.) a má mnoho aktivít proti starnutiu (antioxidant, mravčia elastáza, mravčia tyrozináza, anti-kolagenáza, anti-UV, protizápalové, hojenie rán a pod.)1. Okrem toho druhy Rubus tiež uvádzali, že obsahujú rôzne triterpény s rôznymi biologickými aktivitami -'.
V Indonézii R. fraxinifolius Poir. (Rosaceae) je rozšírený na Jáve, Borneu atď., a ľudovo známy ako „mestský“.čo je cistancheOkrem toho niektorí miestni farmári zbierajú tieto rastliny a bobuľové ovocie sa zvyčajne konzumuje buď čerstvé alebo mrazené. Naša predchádzajúca štúdia preukázala, že extrakt zo stonky R. frascinifolius má aktivitu inhibovať elastázu, tyrozinázu a ako antioxidant8. Niektoré ďalšie výskumy tiež ukázali, že listy a plody R. fraxinifolius majú silnú antioxidačnú aktivitu?10. Štúdia R. fraxinifolius však bola málo preskúmaná a neboli hlásené žiadne štúdie chemických zložiek.
Cistanche môže proti starnutiu
Elastáza je serínový proteázový enzým, ktorý má kľúčovú úlohu pri zvráskavení alebo ochabnutí pokožky degradáciou dermálneho elastického vlákna (elastínu) a spôsobuje stratu elasticity pokožky. Jednou z nich je elastáza odvodená z kožných fibroblastov. Inhibítory elastázy ako moderátory degradácie elastínových vlákien, ktoré spôsobujú starnutie pokožky, pritiahli pozornosť ako činidlá pre kozmetické prípravky12. Melanogenéza je sprostredkovaná tyrozinázou a reguluje biosyntézu melanínu prostredníctvom dvojstupňovej reakcie. V prvom kroku sa L-tyrozín hydroxyluje na L-3,4-dihydroxyfenylalanín (L-DOPA). V druhom kroku sa L-DOPA oxiduje na zodpovedajúci O-chinón. Preto sa v kozmetike bežne používajú prírodné zlúčeniny s inhibičným účinkom na tyrozinázu, ktoré inhibujú hyperpigmentáciu melanínom a tým podporujú bielenie pokožky.Čistota proti starnutiuInhibítory enzýmov elastázy a tyrozinázy by sa mohli vyvinúť ako činidlá na bielenie pokožky, proti starnutiu alebo proti vráskam na liečbu dermatologických porúch44.
Táto štúdia izolovala ursanové triterpenoidy z listov R. fraxinifolius a objasnila ich štruktúry v spektroskopických analýzach s použitím elektrosprejovej ionizačnej hmotnostnej spektroskopie (ESI-MS) a 'H NMR, |3CNMR a 2D NMR (DEPT, HSQC, HMQC a HMBC). Následne sme vykonali testy inhibičných aktivít elastázy a tyrozinázy surových extraktov, frakcií a izolovaných zlúčenín.
V tomto výskume bola tiež sledovaná aktivita dvoch vybraných zlúčenín prostredníctvom metódy in silico. S DockThorl516 sa uskutočnil prístup molekulárneho dokovania. Makromolekuly použité v tomto výskume boli získané z proteínovej databanky (RCSB PDB, 2000) s identitami 2y9x a 3hgp pre tyrozinázu a elastázu, v tomto poradí 1718. Makromolekuly boli optimalizované vo výsledkoch UCSF Chimera a molekulárneho dock boli pozorované s PyMOL1920.
Výsledky a diskusia
The ethyl acetate and methanolic extracts of R. fraxinifolius leaves showed potential as elastase inhibitors with percent inhibitory>40 percent v 100 ug/ml, zatiaľ čo n-hexánový extrakt nemal žiadnu aktivitu (obr. 1). Niektoré Rubusy tiež vykazovali inhibičnú aktivitu elastázy, ako R. Sanctus（percentuálna inhibícia 14.68-49.20 v 100 ug/ml）, R.compactus,R. robustus atď.221. Preto sme frakcionovali aktívne extrakty pomocou vákuovej kvapalinovej chromatografie/VLC a z každého sme zhromaždili 11 frakcií. Frakcie z etylacetátového extraktu vykazovali slabé inhibičné účinky na elastázu (<20% in="" 100="" ug/ml),but="" some="" methanol="" fractions="" showed="" potential="" activity="" in="" these="" assays.="" we="" choose="" metha-nol="" fraction="" 8(m8)for="" further="" isolation="" because="" it="" hadthe="" largest="" yield(57%)="" and="" also="" have="" elastase="" inhibitory="" activity(44.82%).m8="" was="" further="" partitioned="" and="" purified="" over="" silica="" gel="" and="" through="" a="" sephadex="" column,="" and="" two="" amorphous="" powders="" were="">
Izoláty sa identifikovali a charakterizovali pomocou kvapalinovej chromatografie-hmotnostnej spektroskopie (LCMS), 'H a 13CNMR, DEPT, heteronukleárnej jednokvantovej koherencie (HSQC), heteronukleárnej viacnásobnej kvantovej korelácie (HMQC) a heteronukleárnej viacnásobnej kvantovej korelácie (HMBC). Tabuľka 1 ukazuje NMR spektrálne údaje zlúčenín.
Zlúčenina 1: bola izolovaná ako amorfný biely prášok. LCMS-ESI spektrá pre túto zlúčeninu vykazovali vrchol molekulových iónov pri m/z 543,32[MH]t, čo naznačuje molekulový vzorec C32H48O- s deviatimi ekvivalentmi nenasýtenosti. IR spektrá odhalili absorpčné maximá zodpovedajúce hydroxylu (3,343,4 cm-1) a olefínové (1,684 cm-1)funkčné skupiny. Okrem toho 'H NMR spektrá zlúčeniny I odhalili metínový protón (CH) singletový signál pri 2,6, charakteristický signál pre H-18 ursanového typu triterpény s 19-O-substitúciami. Triterpén typu 19a-hydroxy-ursan má tiež typický protónový signál v oblasti okolo 2,6 ppm. Tento odtienený signál sa môže výrazne líšiť od iných radových metylénových protónových signálov s charakteristickým posunom v dôsledku olefínového protónu (H12) pri 5,28 (t, J=6}Hz).cistanche benefíciosÚplné a jednoznačné priradenia chemického posunu 'H a 13C boli podporované spektrami HMQC(13Cx'H) a HMBC(15Cx'H). {5}} (Obr. 2a). Ďalšie špecifické znaky boli nájdené pre päť metylových singletov pri 1,89,1.{19}}2,0,82,1,32,1,20(každý,H24-27;29), metylový dublet pri og 0,92(d, J=6 Hz) a olefinický protónový signál pri 5,30 (t, J=7 Hz, H-12). Súčasné13CNMR spektrá ukazujú 32 uhlíkových rezonancií a so spektrami DEPT a HMQC ukázali dva karbonylové uhlíky（δC183.70,C-28 a 8-178.96,C{33}}）, olefínový uhlík pri oc 127,23,C-12,olefínový kvartérny uhlík (oc139,49,C-13),kvartérny uhlík obsahujúci kyslík （o-72,7,C-19 ） desať alifatických metylénov a šesť metylových uhlíkov. Dva olefínové uhlíky pri δ-127,23（C-12）a 139,49(C-13) boli charakteristické pre ursan-triterpenoidný typ. Ďalší signál indikujúci prítomnosť etylénglykolu （-OCH-CH-O-） sa ukázal pri signáloch 54,62（d, J=11,5 Hz）,4,05（d, J=11. 5 Hz）, 3,52（d, J=11,5Hz）a 4,06（d, J=11,5Hz）a podporované s δ61,27（t）a 63,20（t）. C-2aC-3 na základe prítomnosti korelácie s dlhým dosahom v spektrách HMBC. Preto bola zlúčenina 1 identifikovaná ako 2,3-0-etylénglykol,19-hydroxyurs-12-en-23,28-diová kyselina (obr. 3a).
Zlúčenina 2: bola získaná ako biely amorfný prášok. MS-ESI m/z 527,33 [MH]t (vypočítané pre 528,3815). V LCMS-ESI spektrách je vrchol molekulového iónu prítomný pri m/z 527,33 [MH]t, čo naznačuje molekulový vzorec CH Os, ktorý vyžaduje 8 stupňov nenasýtenia." IR spektrum obsahovalo absorpčné maximá zodpovedajúce hydroxylu (2 927,8 cm{ {15}}) a olefínové (1 686 cm{18}}) funkčné skupiny. Okrem toho 'HNMR spektrá zlúčeniny 2 ukázali singlet pri 2,42, čo je charakteristické pre H18 triterpénu ursánového typu s {{24 }}O-substitúcia.Cistanche Extract Anti RadiationĎalšie špecifické charakteristické spektrá zahŕňali prítomnosť šiestich metylových singletov na og1.22 0.76,0.97,0.69,1.30a 1.17(každý,H -24-28,H-30), metylový dublet pri 0,91 (d,J=7Hz) a olefinický protónový signál pri ou 5,37 (d, J=7 Hz, H-12). Zodpovedajúce 13 (spektrá CNMR a DEPT ukazujú 33 uhlíkových rezonancií a spektrá HSQC a HMQC indikujú prítomnosť karbonylového uhlíka (oc 182,23, C-28), olefínového uhlíka （δ-129,36, C -12）, olefínový kvartérny uhlík （δ-140.24, C-13）, kvartérny uhlík obsahujúci kyslík (oc73,68, C-19), jedenásť alifatických metylén a sedem metylových uhlíkov. Tieto údaje naznačujú, že zlúčenina 2 nesie ursan-triterpenoidný skelet. Ostatné signály naznačujú prítomnosť 1,3-funkčnej skupiny propándiolu, pri og 3,22(d,J=11} 0,5 Hz), 3,42 (d, J=10,5 Hz), 1,38 (m), 1,51 (m) a 4,02 (d, J=11 ,5 Hz) a 3,36 (t, J{ {57}}.5 Hz). Jej funkčná skupina má dlhodobú koreláciu s C2-C3. Na základe týchto výsledkov bola teda zlúčenina 2 identifikovaná ako 2,3-O-propándiol,{{ 66}}hydroxyurs-12-en-28-kyselina (obr. 2b a 3b). Podobnou zlúčeninou je kyselina 2,3-0-izopropylidén mučivá, izolovaná z Rubus xanthocarpus.7
V tabuľke 1 boli všetky 'H a ''C NMR spektrá porovnané s tormentsovou kyselinou (TA/2a,3a,19-trihydroxy-12-ursen-28-kyselina）², ktorá je ursanový triterpenoid, ktorý sa našiel v niekoľkých druhoch Rubus-p Kyselina tomentová sa veľmi podobala zlúčeninám 1 a 2, okrem toho, že sa líšili chemické posuny súvisiace s C-23 a C{10}}. Táto časť bola potvrdená aj v DEPT, HMQC a HMBCexperimenty (obr. 2).
Kyselina triterpenoidová je široko rozšírená v prírodných rastlinných potravinách. Má rôzne bioaktivity: hypoglykemické účinky, protizápalové a antiaterogénne vlastnosti znižujú proliferáciu buniek hladkého svalstva ciev a antiproliferatívne aktivity v bunkových líniách rakoviny obličiek, prostaty a melanómu2426. Preto, pretože tieto zlúčeniny majú rovnaký skelet, nemajú možné vhodné potenciálne aktivity.
Obrázok 4 predstavuje inhibičnú aktivitu elastázy a tyrozinázy izolátov. Údaje získané z in vitro testov inhibície enzýmov boli vyjadrené ako štandardná odchýlka (SD). Zlúčeniny 1 a 2 inhibovali elastázu s IC50 122,199 a 98,22 ug/ml a tiež inhibovali tyrozinázu s ICso 20}7,79 a 221,51 ug/ml, v danom poradí. Niektoré pentacyklické triterpenoidy (kyselina ursolová a kyselina oleanolová) vykazujú aktivitu inhibície elastázy2728. Tiež hodnota inhibície elastázy zlúčeniny 2 je nižšia ako hodnota zlúčeniny 1. Obidve zlúčeniny mali menšiu inhibičnú aktivitu ako pozitívna kontrolná kyselina oleanolová, ktorá mala hodnotu IC50 90,39 ug/ml. V zhode, predchádzajúce štúdie ukázali IC50 pre kyselinu oleanolovú 76,5 ug/ml a hodnotu ICso 31,0 ug/ml pre kyselinu ursolovú28. Predtým opísané kinetické analýzy pentacyklických triterpénov ukázali, že tieto zlúčeniny kompetitívne a reverzibilne inhibujú neutrofilnú elastázu. V tej istej štúdii experimenty s molekulárnym dokovaním ukázali, že molekulárna skafoldová časť 28-COOH a dvojité väzby v pentacyklických triterpénoch sú nevyhnutné pre ich inhibičné aktivity
Jedným z problémov, ktoré vznikajú s pribúdajúcim vekom, je hyperpigmentácia.cistanche herbaPreto sa neustále hľadajú činidlá na zosvetlenie pokožky alebo nové depigmentácie. Potlačenie tyrozinázy môže pôsobiť proti melanogenéze.“ Ako je znázornené na obr. 4, metanolový extrakt a zlúčeniny I a 2 vykazovali miernu aktivitu ako inhibítory tyrozinázy.
V tomto výskume sa molekulárne dokovanie použilo aj na analýzu väzbových aktivít vybraných zlúčenín na tyrozinázu a elastázu ako ich ciele. Použité kryštálové štruktúry boli 2Y9X, kryštalická štruktúra tyrozinázy z Agaricus bisporus s inhibítorom tropolónom; a BHGP, kryštálovú štruktúru prasacej pankreatickej elastázy v komplexe so silným peptidylovým inhibítorom FR130180. Obidva boli vybrané, pretože boli získané z rovnakého organizmu použitého na in vitro test tohto výskumu. Makromolekuly sú tiež naviazané na ich príslušné inhibítory, takže je možné získať aktívny stav enzýmových konformácií. Kokryštály sa použili ako stred molekulárneho dokovacieho cieľa na zúženie pravdepodobnosti viazania zlúčeniny tak, aby sa proces hodnotenia stal efektívnejší.
Z molekulárneho dokovania sa získali priemerné väzbové afinity pre obe zlúčeniny, ako je znázornené na obr. 5 a 6. Predikcia afinity sa používa na klasifikáciu rôznych ligandov s ohľadom na najvyššiu energetickú polohu každej zlúčeniny, predpoveď lepšej energetickej polohy je znázornená nižšie skóre väzbových afinit16. Opätovné dokovanie označeného inhibítora tropolónu sa uskutočnilo s priemernými väzbovými afinitami -7,41 kcal/mol. Priemerné väzbové afinity zlúčenín 1 a 2 k tyrozináze boli -7,84 kcal/mol a -8,37 kcal/mol, v danom poradí (tabuľka 2). Predpokladalo sa, že obe zlúčeniny majú lepšiu afinitu ako inhibítor.
Medzitým boli priemerné väzbové afinity elastaseredokingu -7,84 kcal/mol. Priemerné väzbové afinity zlúčenín 1 a 2 k elastáze boli -7,58 kcal/mol a -8,06 kcal/mol, v uvedenom poradí. Aj keď výsledok ukázal, že zlúčenina 1 má nižšie afinity ako kokryštál, je mierne odlišná (<0.5 kcal/mol)compared="" to="" the="" inhibitor="" used="" hence="" the="" scores="" may="" ovelrlap31.="" these="" scores="" showed="" that="" both="" compounds="" were="" predicted="" to="" have="" affinities="" toward="" the="" enzymes,="" which="" is="" in="" conjunction="" with="" the="" in="" vitro="" assay="">
Metódy
Všeobecné experimentálne postupy. 'H a' NMR spektrá boli zaznamenané pri 500 MHz s použitím prístroja JEOL JNM-ECZ500R/S1. Infračervené (IR) spektrá sa merali pomocou FTIR, IRPrestige-21, Shimadzu. Ďalšie analýzy sa uskutočnili pomocou prístroja Waters UPLC-MIS XEVO G2-XS QTof, čítačky mikrodoštičiek VersaMax a čítačky mikrodoštičiek BioTek ELX800, hliníkových plátov potiahnutých tradíciou TLC-Silica gel 60 GF254 (Merck, Darmstadt, Nemecko) stĺpcová chromatografia (CC) sa uskutočnila s použitím silikagélu 60 (Merck, Darmstadt, Nemecko) s 70-230 sieťkou pre otvorenú chromatografiu a 230-400 sieťkou pre vákuovú chromatografiu. Rastlinné materiály. Listy R. fraxinifolius boli zozbierané z oblasti plantáže v hore Pangrango v západnej Jáve vo výške 4 343 stôp v decembri 2018. Vzorku identifikoval botanik (Dr. Joni Setijo) z Výskumného centra pre biológiu, Indonézsky inštitút Sciences, Indonézia, s číslom vzorky 033/IPH.1.01/If.07. Zber rastlinného materiálu dostal povolenie od farmára a bol v súlade s inštitucionálnymi nariadeniami a usmerneniami.
Extrakcia a izolácia. Na vzduchu sušené práškové listy (2300 g) sa extrahovali pomocou Soxhletovej aparatúry s gradientovým rozpúšťadlom (n-hexán, EtOAc a MeOH), čím sa získali príslušné extrakty, a potom sa odparili na rotačnej odparke. a vákuová rúra. Metanolový extrakt (291 g) a etylacetátový extrakt (65 g) sa adsorbovali na silikagéli a uskutočnila sa vákuová kvapalinová chromatografia/VLC, elúcia s postupným gradientom EtOAc:MeOH (od 1:0 do 0:1) až produkovať frakcie pre každý extrakt (Eal-Hall a M{10}}Mlyn a). Podobné frakcie, ktoré mali pozitívne reakcie s vanilínovými sírovými činidlami v TLC, sa spojili. Výťažok frakcie: Eal-3 (2,27 g);Ea4-6(8,47 g);Ea7-8(12,9 g);Ea9-11 (22,3 g); a M1-3 (4,89 g);M{26}} (5,1 g);M{29}} (6,02g);M8(166,42g);M9(10,53g);M{38 }} (2,9 g). Všetky frakcie boli testované na aktivitu inhibítora elastázy, Fr. M8 poskytoval najvyšší výťažok a mal silnú aktivitu. Fr. M8 sa postupne ďalej delí pomocou CC cez silikagél (eluent CH2Cl2/MeOH s postupným gradientom) a čistí sa použitím kolóny Sephadex LH-20 (elúcia CHCl3-MeOH 100:10, obj./obj. Dve frakcie vykazovali pevnú povahu a boli kryštalizované s chloroformom a metanolom, čím sa získali dva izoláty: zlúčenina 1 (18 mg) a: 2 (31 mg). kyseliny v metanole, nasledovalo zahrievanie platní na 110 stupňov počas 5 minút.
Kryštály boli identifikované a charakterizované pomocou kvapalinovej chromatografie-hmotnostnej spektroskopie (LCMS), LH a '3C skreslenia zosilnenia polarizačným prenosom (DEPT)NMR, heteronukleárnej jednokvantovej koherencie (HSQC), heteronukleárnej viacnásobnej kvantovej korelácie (HMQC) a heteronukleárnych viacnásobných väzbová korelácia (HMBC).
Test inhibície elastázy. Test inhibície elastázy sa uskutočnil tak, ako je opísané vyššie, s niektorými modifikáciami32. Stručne povedané, v mikrotitračných platniach s jamkami Nunc{1}}, 20-μL alikvóty 0.8-jednotky/ml PPE v základnom pufri Trizma （pH 8.0 ） sa zmiešali s 20- μl vzorkami a zmesi sa potom zriedili na 180 μl v základnom pufri Trizma. Testované extrakty sa predinkubovali s enzýmom počas 15 minút a pridali sa 20-μl alikvóty substrátu N-sukcinyl-Ala-Ala-Ala-p-nitroanilid (A3PVN; 2,9 mM) a inkubovali sa ďalších 15 minút. Pozitívna kontrola a slepá jamka obsahovali kyselinu oleanolovú a vodu. Experimenty sa uskutočňovali trojmo a miera inhibície sa určila podľa absorbcie; pri 401 nm s použitím čítačky mikrodoštičiek VersaMax. Percentuálna inhibícia sa vypočítala pomocou nasledujúcej rovnice:
kde E je absorbancia enzýmovej reakcie, Eb je absorbancia enzýmového slepého pokusu, T je absorbancia testovanej vzorky a Tb je absorbancia slepého pokusu. hodnoty boli tiež stanovené z lineárneho grafu percenta inhibície elastázy proti koncentrácii (50,75,100,125,150 ug/ml). Test inhibície tyrozinázy. Inhibícia tyrozinázy sa stanovila pomocou metódy tvorby DOPA-chrómu, ako je opísané vyššie s miernymi modifikáciami13. Stručne, v 96-jamkových platniach sa 20 μl alikvóty DMSO (kontrola) alebo testovaných zlúčenín v rôznych koncentráciách zmiešali so 40 μl alikvótami 30 U/ml hubovej tyrozinázy （Sigma Aldrich） a 100- μl 0.{13}}M fosfátový pufor （pH 6,8）. Predinkubovali sa 10 minút pri teplote miestnosti. Reakcie sa iniciovali pridaním 4 μl alikvótov 10 mML-DOPA do každej jamky a inkubáciou pri 37 stupňoch počas 20 minút. Aktivita tyrozinázy sa potom stanovila meraním absorbancie pri 475 nm. Kyselina kojová sa použila ako pozitívna kontrola. Experimenty sa uskutočňovali trojmo. Percento inhibície tyrozinázy sa vypočítalo pomocou nasledujúcej rovnice:
kde E je absorbancia enzýmovej reakcie, Eb je absorbancia enzýmového slepého pokusu, T je absorbancia testovanej vzorky a Tb je absorbancia slepého pokusu. hodnoty boli tiež stanovené z lineárneho grafu percenta inhibície elastázy proti koncentrácii (250, 125, 62,5, 31,25, 15,6 ug/ml).
Molekulárne dokovanie. V tomto výskume bola in silico farmakologická aktivita predpovedaná pomocou molekulárneho dokovania pomocou lekára. Cielené molekulárne dokovanie sa uskutočnilo s použitím kokryštalizovaného ligandu ako centra aktívneho miesta. Štruktúra 2Y9X sa použila na molekulárne dokovanie tyrozinázy s tropolónom, inhibítorom tyrozinázy húb, ako jej kokryštálom. Stred molekulárneho dokovacieho miesta je definovaný na -10.032;-28.769 a -43.467 ako rozmery X, Y a Z. Reťazec A bol oddelený na použitie a atóm Holmia bol odstránený zo štruktúry pomocou UCSF Chimera.
V tomto výskume bola tiež použitá štruktúra 3HGP, prasacej elastázy. FR130180, keďže kokryštál bol použitý ako centrum molekulárneho dokovacieho miesta. Súradnice boli 12,453, 9,237 a 1,199 pre rozmery X, Y, Z. Väzbová afinita sa analyzovala z desiatich najlepších konformérov každého výpočtu molekulového dokovania.
Tento článok je prevzatý z Scientifc Reports|(2021) 11:20452|https://doi.org/10.1038/s41598-021-99970-x
