Dendritické bunky typu 1 (DC) pri ochoreniach obličiek

pre viac informácií:{0}}

Konvenčné dendritické bunky typu 1 (cDC1) pri ochoreniach ľudských obličiek: klinicko-patologické korelácie

Titi Chen, Qi Cao a kol.

ABSTRAKT

Pozadie: Dendritické bunky typu 1(cDC1) je podskupina konvenčných DC, ktorých najuznávanejšou funkciou je krížová prezentácia CD8 plus T bunkám. Túto štúdiu sme vykonali, aby sme zistili počet a umiestnenieDendritické bunky typu 1(cDC1s) u rôznych ľudíochorenia obličiekako aj ich koreláciu s klinicko-patologickými znakmi a CD8 T bunkami.

Metódy: Analyzovali sme 135obličkyvzorky biopsie.Ochorenia obličiekzahrnuté: akútna tubulárna nekróza (ATN), akútna intersticiálna nefritída (AIN), proliferatívna glomerulonefritída (GN) (IgA nefropatia, lupusová nefritída, pauci-imunitná GN, ochorenie proti GBM), neproliferatívne GN (ochorenie s minimálnymi zmenami, membránová nefropatia a diabetická nefropatia. Na kvantifikáciu cDC1 sa použilo nepriame imunofluorescenčné farbenie (Dendritické bunky typu 1), CD1ct DC a CD8 plus T bunky.

Výsledky:Dendritické bunky typu 1(cDC1s) boli zriedkavo prítomné v normálnom staveobličky. Ich počet sa výrazne zvýšil v ATN a proliferatívnej GN, proporcionálne oveľa viac ako CD1ct DC. cDC1s (Dendritické bunky typu 1)sa našli hlavne v interstíciu, s výnimkou lupusovej nefritídy, pauci-imunitného GN a anti-GBM ochorenia, kde boli výrazné v glomerulách a periglomerulárnych oblastiach. Počet cDC1 (Dendritické bunky typu 1)koreloval so závažnosťou ochorenia v ATN, počtom polmesiaca pri pauci-imunitnom GN, intersticiálnou fibrózou pri lgA nefropatii a lupusovej nefritíde, ako aj s prognózou pri IgA nefropatii. Počet CD8 plus T buniek sa tiež významne zvýšil v týchto podmienkach a cDC1 (Dendritické bunky typu 1)počet koreloval s počtom CD8 plus T-buniek pri lupusovej nefritíde a pauci-imunitnom GN, pričom mnohé z nich sú úzko ko-lokalizované. Závery: cDC1 (Dendritické bunky typu 1)počet koreloval s rôznymi klinicko-patologickými znakmi a prognózou odrážajúc možnú úlohu v týchto stavoch. Ich spojenie s CD8 plus T bunkami naznačuje kombinovaný mechanizmus v súlade s výsledkami na zvieracích modeloch.

ÚVOD

Dendritické bunky(DC) sú centrálnymi organizátormi efektívnej imunity. Tieto bunky sú heterogénne a možno ich rozdeliť do odlišných podskupín na základe ich fenotypu a funkcie. Dendritické bunky môžu byť široko kategorizované do plazmacytoidných DC (Dendritické bunky)(pDC) a konvenčné DC (Dendritické bunky)(cDC).cDC pozostáva z dvoch hlavných podskupín: cDC1 (Dendritické bunky typu 1)(CD141* DCs (Dendritické bunky) u ľudí a CD103t alebo CD8ot DC u hlodavcov) a cDC2 (CD1c DC u ľudí a CD1 lbt DC u hlodavcov) (1).cDC1 (Dendritické bunky typu 1)boli objavené najprv u myší a potom u ľudí a sú charakterizované ich vynikajúcou schopnosťou fagocytovať nekrotické bunky prostredníctvom receptora Clec9A spojeného s molekulárnym vzorom (DAMP) a krížovo sa prezentovať CD8 plus T bunkám. Na rozdiel od toho sú cDC2 účinné aktivátory CD4* T buniek, ale horšie pri aktivácii CD8t T buniek (2).

DC (Dendritické bunky)boli študované u ľudíochorenie obličieka zistilo sa, že ich počet je zvýšený pri glomerulonefritíde (GN) (3, 4). Po objavení cDCI, hromadiace sa štúdie na zvieratách ukázali, že hrajú kľúčovú úlohu vochorenia obličiek, ako napríklad pri adriamycínovej nefropatii a crescentickej GN, prostredníctvom interakcie s T bunkami (5-8). Takéto štúdie však u ľudí chýbajúochorenie obličiek, pričom iba jedna štúdia preukázala zvýšený počet cDC (KonvenčnéDendritické bunky)v GN (9). Túto štúdiu sme uskutočnili s cieľom poskytnúť analýzu kľúčových podskupín cDC, cDC1 (Dendritické bunky typu 1)a cDC2 u širokého spektra ľudíochorenia obličiekvrátane neglomerulárnych ochorení [akútna tubulárna nekróza (ATN), akútna intersticiálna nefritída (AIN)], proliferatívna GN (IgA nefropatia, lupusová nefritída, pauci-imunitná GN, ochorenie anti-GBM), neproliferatívne GN (ochorenie s minimálnymi zmenami ( MCD), membranózna nefropatia) a diabetická nefropatia. Zistili sme, že cDC významne koreluje s patologickými znakmi vrátane závažnosti ATN, tvorby polmesiaca v pauci-imunitnom GN a intersticiálnej fibrózy v imunitne sprostredkovanej GN. Okrem toho v súlade s ich špecializovanou schopnosťou aktivovať CD8 plus T bunky u zvierat V týchto vzorkách sme tiež preukázali ich koreláciu s CD8t T bunkami. Tieto zistenia poskytujú impulz na skúmanie nových terapeutických cieľov, ktoré manipulujú s týmito bunkami na liečbuobličkychoroby.

Kliknite na kmeň Cistanche pre ochorenie obličiek

MATERIÁL A METÓDY

Pacienti a vzorky tkanív

Štúdia bola vykonaná v súlade so zásadami Helsinskej deklarácie a bola schválená Etickým výborom pre ľudský výskum v miestneho zdravotníckeho okresu Western Sydney. Bol získaný informovaný súhlas pacienta. Analyzovali sme 176 zmrazených diagnostikobličkybiopsy samples taken from non-pregnant adult patients(>18 rokov) v období od 18. júna 2016 do 30. júna 2017 v nemocnici Westmead, Sydney, Austrália.Obličkytkanivá boli rýchlo zmrazené v zmesi OCT (Tissue-Tek Sakura, USA) a skladované pri -80 stupňoch. Štyridsaťjeden (41) vzoriek malo zlú kvalitu tkaniva a boli zo štúdie vylúčené. Východiskové údaje o pacientoch vrátane veku, pohlavia, odhadovanej rýchlosti glomerulárnej filtrácie (eGFR) a stupňa proteinúrie boli zhromaždené v časeobličkybiopsia.eGFR sa vypočítal pomocou vzorca CKD-EPI. Diagnózu stanovil renálny patológ na základe svetla, imunofluorescencie (IF) a elektrónovej mikroskopie, ako aj klinickej anamnézy.

Analyzovali sa rôzne ochorenia vrátane neglomerulárnych ochorení (ATN, AIN), proliferatívnej GN (IgA nefropatia, lupusová nefritída, pauci-imunitná GN, anti-GBM choroba), neproliferatívnej GN (MCD, membránová nefropatia) a diabetická nefropatia. V prípade ATN sme zahrnuli iba neseptické prípady, pretože septická ATN má odlišnú patofyziológiu. ATN bola ďalej kategorizovaná na mierne až stredne ťažké ochorenie (definované ako<50%cortical tubules="" showing="" injury)and="" severe="" disease="" (="">=50 percent kortikálnych tubulov vykazujúcich poškodenie). IgA nefropatia bola klasifikovaná podľa Oxford MEST skóre (M mezangiálna hypercelularita, E endokapilárna hypercelularita, S segmentálna glomeruloskleróza, T tubulárna atrofia/intersticiálna fibróza). Analyzovali sme tiež koreláciu medzi cDC1 (Dendritické bunky typu 1) number and prognosis (defined a priori as >20% reduction in eGFR on or before 31t December 2019)in IgA nephropathy by dividing patients into 2 groups according to cDC number with a cut-off point at the upper quartile(>=15). Lupusová nefritída bola ďalej klasifikovaná do 2 skupín podľa úrovne intersticiálnej fibrózy (<25%,>=25 percent postihnutia intersticiálnej kôry). Pauci-imunitný GN bol klasifikovaný do 2 skupín podľa percenta glomerulov s mesiačikmi (<40%,>=40 percent).

Ako normálneobličkykontrol, použili sme 5 normálnych obličkových kôr zo vzoriek z nefrektómie, ako aj 2 darcovobličkynevhodné na transplantáciu. Pri nádorových nefrektómiách sa vzorky odoberali z pólu opačného k nádoru a aspoň 5 cm od okraja nádoru. Tieto tkanivá mali normálny makroskopický vzhľad. Mikroskopicky nič z tohoobličkyvzorky mali dôkaz významného glomerulárneho alebo tubulointersticiálneho zápalu alebo poranenia. Použili sme normálne slezinové tkanivo dospelého darcu ako pozitívnu kontrolu na testovanie protilátok.

Imunofluorescenčné farbenie

Sériové rezy kryostatu boli narezané na 5 μm a umiestnené na sklenené sklíčka Superfrost Ultra Plus (Thermo Scientific, USA). Snímky boli uložené pri -80 stupňoch . Tkanivové rezy sa fixovali 100 percentným metanolom pri -20 stupňoch počas 10 minút a potom sa vysušili na vzduchu. Nepriame imunofluorescenčné farbenie sa uskutočnilo s použitím nasledujúcej metódy: tkanivové rezy sa premyli v DPBS (Lonza, USA) a blokovali sa 2 percentami albumínu hovädzieho séra (Sigma-Aldrich, USA) počas 15 minút; potom boli zafarbené primárnou protilátkou pri 4 stupňoch cez noc a následne sekundárnymi protilátkami počas 40 minút pri teplote miestnosti. Tabuľka 1 je zoznam použitých primárnych a sekundárnych protilátok a ich riedení. Jadrá boli zafarbené pomocou DAPI (1:250,000, ThermoFisher, USA) predtým, ako boli vzorky pripevnené na krycie sklíčka s fluorescenčným montážnym médiom (Dako, USA). Nešpecifické farbenie a krížová reaktivita medzi rôznymi primárnymi a sekundárnymi protilátkami boli skontrolované a vylúčené.

TABUĽKA 1|Primárne a sekundárne protilátky použité v štúdii

cDCI boli identifikované farbením na marker Clec9A. U ľudí je expresia Clec9A vysoko obmedzená na cDCI v krvi a tkanivách (10, 11). Aby ste to potvrdili vobličky, vykonali sme dvojité farbenie Clec9A a HLA-DRB1, ako aj Clec9A a CD1lc vo vybraných normálnych a chorobných stavoch. Väčšina, ak nie všetky, Clec9A sa prekrývali s HLA-DRB1 (doplnkový obrázok 1) a CD1lc (doplnkový obrázok 2).

OBRÁZOK 1|Normálna oblička cDC1 (Dendritické bunky typu 1)cDC2 a CD8 plus T bunky.

DC (Dendritické bunky)boli zriedkavo prítomné v normálnom staveobličkya cDC2 počty boli približne 7-násobkom počtu cDC1 (Dendritické bunky typu 1). (Pruh=100 mm).

VÝSLEDKY

Základné charakteristiky pacienta.Základné charakteristiky pacientov v kontrolnej skupine a kohortách s chorobami sú zhrnuté v tabuľke 2. Do štúdie bolo zahrnutých celkovo 135 pacientov.obličkychorobyboli analyzované vrátane neglomerulárnych ochorení [ATN (22), AIN (10)], proliferatívnej GN[gA nefropatie (44), lupusovej nefritídy (12), pauci-imunitného GN(12), anti-GBM ochorenia (4)] neproliferatívna GN[MCD(5), membranózna nefropatia(5)] a diabetická nefropatia (21). V skupine s lupusovou nefritídou bolo viac žien a ich vek mal tendenciu byť mladší v porovnaní s ostatnýmiobličkychoroby, čo je v súlade s literatúrou(12). Pacienti s pauci-imunitným GN a anti-GBM ochorením mali najnižšiu eGFR. Hladina proteinúrie bola najvyššia pri MCD a membránovej nefropatii.

TABUĽKA 2|Základné charakteristiky.

Počet a umiestnenie DC (Dendritické bunky)in Control and Disease.cDCI boli zriedkavo prítomné v normálnom staveobličky(obrázok 1) a čísla cDC2 boli približne 7-násobkom počtu cDC1 (Dendritické bunky typu 1)Počet cDC1 (Dendritické bunky typu 1)sa významne zvýšil v ATN a proliferatívnej GN (obrázok 2A), zatiaľ čo ich počet zostal nezmenený v porovnaní s kontrolou pri AIN, membránovej nefropatii, MCD a diabetickej nefropatii (doplnkový obrázok 3). Počet cDC2 sa tiež významne zvýšil v ATN a proliferatívnom GN (obrázok 2B). Došlo k zníženiu cDC2 (Dendritické bunky typu 2)/cDC1 (Dendritické bunky typu 1)pomer označujúci cDCI (Dendritické bunky typu 1)zvýšil proporcionálne viac ako cDC2 (obrázok 2C).

OBRÁZOK 2|Počet cDC1 (Dendritické bunky typu 1)a cDC2, pomer cDC2/cDC1 a CD8 plus T bunka pri kontrolných a vybraných ochoreniach.

P-hodnota sa vypočíta pre každé ochorenie oproti kontrole. Obe cDC1 (Dendritické bunky typu 1)a cDC2 sa významne zvýšili pri ATN, IgA, lupusovej nefritíde, pauci-imunitnej GN a chorobe proti GBM (A, B)

s cDC1 (Dendritické bunky typu 1)sa zvýšil proporcionálne viac ako cDC2 v ATN, lupusovej nefritíde, pauci-imunitnom GN a anti-GBM ochorení (C).

CD8 plus T bunky sa významne zvýšili pri ATN, IgA, lupusovej nefritíde, pauci-imunitnom GN a anti-GBM ochorení (D).

Väčšina cDCI sa nachádzala v interstíciu, s výnimkou lupusovej nefritídy, pauci-imunitnej GN a anti-GBM choroby, kde sa tiež našli v periglomerulárnych a intraglomerulárnych oblastiach (obrázok 3A). počet CD8t T buniek v periglomerulárnych a intraglomerulárnych oblastiach (obrázok 3A) a mnohé z nich sú lokalizované spolu s cDCI (obrázok 3B). Na druhej strane, cDC2 sa zriedkavo našli v intraglomerulárnych oblastiach a minimálna spoločná lokalizácia s CD8 plus T bunkami.

OBRÁZOK 3|(A) cDC1 (Dendritické bunky typu 1)a CD8 plus T bunky v intraglomerulárnych oblastiach. (B) Spoločná lokalizácia cDC1 s CD8 plus T bunkami. (Tyč=100 mm). * P < 0.05,="" **="" p=""><>

Asociácia medzi cDC1 (Dendritické bunky typu 1)S klinicko-patologickými vlastnosťami a CD8 plus T bunkami Analyzovali sme koreláciu medzi cDCI (Dendritické bunky typu 1)a klinickopatologické znaky, ako aj CD8 plus T bunky. Vyskytlo sa 22 prípadov ATN (mierne modifikované ochorenie n=12, závažné ochorenie n=10). Závažnejšie ochorenie bolo spojené s vyšším počtom cDC1 (Dendritické bunky typu 1)(p=0.032), ale nie cDC2 (obrázok 4A).cDC1 (Dendritické bunky typu 1)vzrástol proporcionálne viac ako cDC2 (pomer cDC2/cDC1 2,5, p=0.019). Počet CD8 plus T buniek sa tiež významne zvýšil v ATN(p=00,005) (tabuľka 3, obrázok 2D). Počet cDC1 (Dendritické bunky typu 1)nekoreloval s počtom CD8* T buniek v ATN.

TABUĽKA 3|CD8 plus počet T buniek a korelačný koeficient medzi cDC1 (Dendritické bunky typu 1)a počet CD8 plus T buniek v kontrolných a chorých obličkách.

Analyzovalo sa 44 prípadov IgA nefropatie. Použitím skóre Oxford klasifikácie MEST (M mezangiálna hypercelularita, E endokapilárna hypercelularita, S segmentálna glomeruloskleróza, T tubulárna atrofia/intersticiálna fibróza), vyšší počet cDC1 (Dendritické bunky typu 1)bolo spojené s vyšším skóre T (p=0,008), ale nie skóre MES (obrázok 4B). Vyskytlo sa 7 prípadov s mesiačikmi a počet cCD1 nesúvisel s počtom mesiačikov. PočetobličkyCD8* T bunky boli významne vyššie pri IgA nefropatii ako v kontrole (str<0.001) (table="" 3,="" figure="" 2d).="" there="" was="" no="" correlation="" between=""> (Dendritické bunky typu 1) and CD8+ T cell numbers. Thirty-five(35)patients had follow-up data on or before 31sf December 2019, of whom9experienced>20-percentné zníženie eGFR. Rozdelenie pacientov do 2 skupín podľa cDCl (Dendritické bunky typu 1) number with a cut-off point at the upper quartile(>=15), čím vyššie cDC1 (Dendritické bunky typu 1)číselná skupina bola spojená s horšími výsledkami (obrázok 4E).

OBRÁZOK 4|Korelácia medzi cDC1 (Dendritické bunky typu 1), cDC2 a CD8 plus počet T buniek a závažnosť ochorenia (A–D).

Kaplan Meierova krivka prežívania IgA nefropatie (E). T skóre 0 sa vzťahuje na percento oblasti vykazujúcej tubulárnu atrofiu/intersticiálnu fibrózu <=25>

T skóre 1 sa týka percenta plochy vykazujúcej tubulárnu atrofiu/intersticiálnu fibrózu 26 - 50 percent, T skóre 2 sa týka percenta plochy vykazujúcej tubulárnu atrofiu/intersticiálnu fibrózu > 50 percent.

Prežitie bolo definované ako > 20 percentné zníženie eGFR do 31. decembra 2019 alebo skôr. NS, nevýznamné.

Vyskytlo sa 12 prípadov lupusovej nefritídy. Rovnako ako pri IgA nefropatii bol vyšší počet cDCI spojený so závažnejšou fibrózou (p=0.020) (obrázok 4C). Okrem toho sa významne zvýšil aj počet CD8 plus T buniek (P<0.001) (table="" 3,="" figure="" 2d)="" and="" this="" correlated="" with="" the="" number="" of="" cdcl="" cells="" (r="0.614," p="0.034)" (table="" 3).a="" significant="" number="" of=""> (Dendritické bunky typu 1)a CD8t T bunky sa našli v periglomerulárnych, ako aj intraglomerulárnych, čo naznačuje, že môžu hrať úlohu v tomto stave. Po druhé, pri imunitne sprostredkovanej chorobe spojenej s intersticiálnou fibrózou (IgA nefropatia a lupusová nefritída) sme zistili, že cDC1 (Dendritické bunky typu 1)počet koreloval so závažnosťou fibrózy, ako aj s prognózou IgA nefropatie, zatiaľ čo žiadna takáto korelácia nebola zistená pri neimunitnom sprostredkovanom fibrotickom ochorení (diabetická nefropatia). Po tretie, existovala silná korelácia medzi počtom cDCI a tvorbou polmesiaca v pauci-imunitnom GN a cDCI boli prítomné vo veľkom počte v periglomerulárnych a intraglomerulárnych oblastiach, čo naznačuje ich možnú úlohu pri tvorbe polmesiaca. Po štvrté, počet cDC1 koreloval s počtom CD8 plus T buniek pri lupusovej nefritíde a pauci-imunitnom GN, s mnohými cDCI lokalizovanými spolu s CD8 plus T bunkami, čo naznačuje ich možnú interakciu. To je v súlade s našimi zisteniami na zvieracích modelochobličkychorobaktoré vykazujú myšacie homológy cDC1 (Dendritické bunky typu 1)bunky prednostne aktivujú CD8t T bunky. Celkovo tieto zistenia naznačujú, že cDCI hrá dôležitú úlohu v celom radeobličkychorobyvrátane ATN, intersticiálnej fibrózy pri imunitne sprostredkovaných ochoreniach a tvorby polmesiaca a že môžu potenciálne pôsobiť prostredníctvom aktivácie CD8t T buniek.

cDC1 (Dendritické bunky typu 1)Počet korelovaný so závažnosťou ochorenia v ATN. V neseptickej ATN sme prvýkrát preukázali výrazne zvýšený počet DC (Dendritické bunky)najmä cDCI v porovnaní s cDC2. Dôležité je, že cDC1 (Dendritické bunky typu 1)číslo koreluje so závažnosťou ochorenia. Okrem toho sa zvýšil aj počet CD8 plus T buniek. ATN je zvyčajne spôsobená ischemicko-reperfúznym poškodením (IRI), nefrotoxínmi alebo sepsou. Tradične IRI a toxíny spôsobujú sterilný zápal a vrodená imunita, kde sú DC a T-bunky menej dôležité, sa považovala za dominantnú úlohu. Avšak pribúdajúce dôkazy zo štúdií na zvieratách ukázali, že cDCI aj CD8 plus T bunky sú dôležitými hráčmi. Predchádzajúce štúdie na zvieracej IRI a nefrotoxicite cisplatiny zistili, že celkový počet DC a T buniek sa zvýšil (13-17). Naše predchádzajúce štúdie ukázali, že pri adriamycínovej nefropatii sa počet cDCl výrazne zvýšil (5). Pri IRI vykazuje podskupina aktivovaných dendritických buniek zvýšenú schopnosť krížovo prezentovať antigén CD8t T bunkám (18). Pri adriamycínovej nefropatii sme tiež zistili, že cDCI vyvolávajú CD8 plus T bunkovú odpoveď vedúcu k poraneniu (5). Chýbajúca korelácia medzi cDC1 (Dendritické bunky typu 1)a CD8* T bunka v humánnej ATN na rozdiel od zistení na zvieracích modeloch môže odrážať rôzne neimunologické dráhy poškodenia v humánnej ATN v porovnaní s IRI v myších modeloch, kde cDCI hrajú významnú úlohu prostredníctvom CD8* T buniek. Okrem toho sa u hlodavcov preukázalo, že cDCl sa do tkaniva dostáva chemoatraktantom XCLl produkovaným prirodzenými zabíjačskými bunkami (19). Preto možno stojí za to si to podrobnejšie preštudovaťobličkychoroba.

cDC1 (Dendritické bunky typu 1)Počet korelovaný s intersticiálnou fibrózou sprostredkovanou imunitou. Druhým významným zistením v tejto štúdii je, že počet cDCl koreloval so závažnosťou intersticiálnej fibrózy spojenej s imunitne sprostredkovaným ochorením (IgA nefropatia a lupusová nefritída), ale nie pri neimunitnom sprostredkovanom fibrotickom ochorení (diabetická nefropatia), predchádzajúca štúdia ukázala zvýšené počty cDCI a cDC2 pri intersticiálnej fibróze(9). Prvýkrát sme ukázali, že to platí len pri imunitne sprostredkovaných ochoreniach a cDC1 (Dendritické bunky typu 1)počet vzrástol úmerne viac ako cDC2. Okrem toho sme tiež demonštrovali cDC1 (Dendritické bunky typu 1)počet koreloval s prognózou a počet CD8* T buniek sa tiež významne zvýšil pri IgA nefropatii. Podporujú to štúdie na zvieratách, ktoré ukazujú DC (Dendritické bunky)priamo prispievajú k fibróze. Napríklad amfiregulín odvodený od DC podporoval fibrózu (20). Je tiež možné, že cDCI prispeli k fibróze prostredníctvom CD8 plus T buniek, o ktorých je známe, že prispievajú k fibróze v iných orgánoch (21-23). Keďže intersticiálna fibróza je spojená s progresiou chronickejobličkychoroba, nie je prekvapujúce, že sme našli cDC1 (Dendritické bunky typu 1)ako dobrý prognostický marker pri IgA nefropatii. Iné štúdie ukázali, že CD8t T bunky korelujú s prognózou IgA nefropatie (24), ktorá môže byť výsledkom krížovej prezentácie z cDCI. Pri lupusovej nefritíde sme preukázali koreláciu medzi cDC1 (Dendritické bunky typu 1)počet a intersticiálna fibróza, ako aj počet CD8t T buniek. Predchádzajúce štúdie tiež ukázali zvýšenieobličkycDC1 (Dendritické bunky typu 1)počet pri lupusovej nefritíde (25), najmä lupusovej nefritíde triedy III a VI, so zodpovedajúcim znížením ich počtu v obehu (26). Tieto zistenia sme rozšírili tým, že sme ukázali, že korelujú aj s chronickými zmenami. Je dobre známe, že intersticiálny zápal, ktorý sa skladá z T buniek, B buniek, dendritických buniek a makrofágov, má dominantnú úlohu v progresii lupusovej nefritídy (27). cDCI môžu prispievať k progresii lupusovej nefritídy u rôznych spôsobov. Po prvé, aktivácia interferónu hrá kľúčovú úlohu v patogenéze lupusovej nefritídy (28-30) a cDCI sú prominentným producentom IFN-入.（31）Po druhé, cDC1 (Dendritické bunky typu 1)môže prispieť k progresii lupusovej nefritídy prostredníctvom CD8t T buniek (32-37) a naše zistenie korelácie medzi cDCI a CD8 plus T ďalej podporuje ich možnú interakciu. Úloha CD8 plus T buniek pri lupusovej nefritíde už bola preukázaná. CD8 plus T bunky kontrolujú autoreaktívnu imunitu uvoľňovaním cytotoxických molekúl. Zistilo sa, že CD8 plus T bunky pri lupusovej nefritíde majú tlmenú cytotoxickú funkciu, ktorá môže spustiť autoimunitu (38). Okrem toho môžu tieto bunky vytvárať aj autoantigény lupusu(39). Existuje množstvo dôkazov, že CD8* T bunky v obochobličky(32,33) a moč (34-36) korelujú s aktivitou ochorenia a histologickým poškodením pri lupusovej nefritíde. Navyše sa ukázalo, že vyčerpanie CD8* T-buniek predpovedá priaznivú prognózu(37).

cDC1 (Dendritické bunky typu 1)Počet koreluje s počtom mesiačikov v Pauci-Immune GN. V pauci-imunitnom GN sme našli cDCI agregované v periglomerulárnych a intraglomerulárnych oblastiach a ich počet koreloval s počtom mesiačikov a CD8 plus T buniek. Predchádzajúce štúdie ukázali, že DC (Dendritické bunky)sú zriedkavo prítomné vo vnútri glomerulu(3,4,9) alebo len vo veľmi malom počte(40). Na druhej strane, T bunky boli výrazné v interstíciu, periglomerulárnej a intraglomerulárnej oblasti ({{6} }). Zistili sme, že cDCI aj CD8* T bunky sú výrazné v periglomerulárnych a intraglomerulárnych oblastiach, pričom mnohé z nich sú lokalizované spoločne. Okrem toho cDC1 (Dendritické bunky typu 1)počet koreloval s počtom polmesiaca a CD8 plus T buniek. Všetky tieto zistenia naznačujú úlohu cDCI pri tvorbe polmesiaca prostredníctvom interakcie s CD8* T bunkami. Patogénna úloha CD8t T buniek v pauci-imunitnom GN a tvorbe polmesiaca už bola preukázaná na zvieracích modeloch (45, 46). V súlade s našimi zisteniami u ľudí, u zvierat crescentic GN, cDC1 (Dendritické bunky typu 1)a CD8* T bunky sa našli najmä v periglomerulárnej oblasti (47,48). Ukázalo sa, že Bowmanova kapsula poskytuje chránenú imunologickú niku tým, že bráni prístupu DC a cytotoxických CD8 plus T buniek do Bowmanovho priestoru a tým aj podocytov (45, 47). Keď však došlo k porušeniu Bowmanovej kapsuly, tieto zápalové bunky získali prístup a zničili podocyty, čo viedlo k rýchlemu progresívnemu GN (47).

Jedným z obmedzení tejto štúdie je, že technika farbenia IF umožňuje použitie iba obmedzeného počtu markerov. Bolo by prospešné rozšíriť naše zistenia pomocou technológie, ako je prietoková cytometria, ktorá môže kombinovať viacero markerov na ďalšiu analýzu fenotypu týchto DC (Dendritické bunky)a ich relevantné cytokínové a chemokínové profily. Informácie o polohe sa však stratia. Ďalšie techniky, ako je multiplexná imunohistochémia a Nanostring, sa môžu tiež zvážiť v budúcich štúdiách na ďalšie skúmanie týchto buniekobličkychoroba. Okrem toho pri farbení cDC2 pomocou CD1c, HLA-DRB1 a CD1lc môže existovať malé percento B buniek, ktoré tiež exprimujú tieto markery, čo nebolo vylúčené.

ZÁVERY

Aj keď cDC1 (Dendritické bunky typu 1)obsahuje menšiu podskupinu DC (Dendritické bunky)v homeostatických podmienkach táto štúdia demonštruje významnú koreláciu medzi touto bunkovou populáciou a klinicko-patologickými znakmi u ľudíobličkychoroba. To odráža ich pravdepodobnú dôležitosť v chorobných procesoch, ako je ATN, tvorba polmesiaca pri proliferatívnom GN a intersticiálna fibróza pri imunitne sprostredkovanej GN. Okrem toho ich spoločná lokalizácia a korelácia s CD8t T bunkami môže poskytnúť vysvetlenie ich mechanizmu účinku, čo potvrdzuje údaje zo zvieracích modelov. Tieto zistenia poskytujú impulz na skúmanie nových terapeutických cieľov, ktoré manipulujú s týmito bunkami na liečbuobličkychoroby, ako sme to urobili v štúdiách na zvieratách(6), a preskúmať ich použitie ako prognostického markera. Na preskúmanie úlohy cDC1 sú potrebné ďalšie štúdie na ľuďoch aj zvieratách (Dendritické bunky typu 1), ich mechanizmus účinku a ako ich najlepšie terapeuticky zacieliť.

LITERATÚRA

1. Pakalniskyte D, Schraml BU. Tkanivovo špecifická diverzita a funkcie konvenčných dendritických buniek. Adv Immunol(2017)134:89-135.doi:10.1016/bs.ai.2017.01.003

2. Merad M, Sathe P, Helft J, Miller J, Mortha A. Línia dendritických buniek: Ontogenéza a funkcia dendritických buniek a ich podskupín v ustálenom stave a v zapálenom prostredí. Annu Rev Immunol (2013)31:563-604.doi:10.1146/ročný imunol-020711-074950

3. Segerer S, Heller F, Lindenmeyer MT, Schmid H, Cohen CD, Draganovici D, et al. Špecifická expresia dendritických bunkových markerov pri ľudskej glomerulonefritíde.ObličkyInt (2008) 74(1):37-46.doi:10.1038/ki.2008.99

4. Woltman AM, de Fiter JW, Zuidwijk K, Vlug AG, Bajema IM, van der Kooij SW, et al. Kvantifikácia podskupín dendritických buniek v ľudskom obličkovom tkanive za normálnych a patologických podmienok.ObličkyInt (2007) 71(10):1001-8. doi: 10.1038/sj.ki.5002187

5. Cao Q, Lu J, LiQ, Wang C Wang XM, Lee VW a kol. Cd103 plus dendritické bunky vyvolávajú reakcie Cd8 plus T buniek na zrýchlenieObličkyZraneniepri adriamycínovej nefropatii. J Am Soc Nephrol (2016) 27(5):1344-60.doi: 10.1681/ASN.2015030229

6. Wang R, Chen T, Wang C, Zhang Z, Wang XM, Li Q a spol. Inhibícia Flt3 zmierňujeChronickýObličkyChorobapotlačením CD103 plus aktivácie T buniek sprostredkovanej dendritickými bunkami. Transplantácia nefrolových čísel(2019)34(11):1853-63. DOI: 10.1093/gfy385

7. Evers BD, Engel DR, Bohner AM, Tittel AP, Krause TA, Heuser C a ďalší Cd103 plusObličkyDendritické bunky chránia pred polmesiačikovým GN udržiavaním nedostatočnej{0}}produkcie regulačných T buniek. J Am Soc Nephrol (2016) 27(11):3368-82. DOI: 10.1681/ASN.2015080873

8. Kitching AR, Ooi JD. Renálne dendritické bunky: Dlhá a kľukatá cesta. J Am Soc Nephrol (2018) 29(1):4-7.doi: 10.1681/ASN.2017101145

9. Kassianos AJ, Wang X, Sampangi S, Muczynski K, Healy H, Wilkinson R. Zvýšený tubulointersticiálny nábor ľudských CD141(hi)CLEC9A(plus) a CD1c(plus)podsúborov myeloidných dendritických buniek pri renálnej fibróze a BObličkyB. Am J Physiol Renal Physiol (2013)305(10): F1391-401. doi:10.1152/adrenal.00318.2013

10. Guilliams M, Dutertre CA, Scott CL, McGovern N, Sichien D, Chakaro S, a kol. Vysokorozmerná analýza bez dozoru zarovnáva dendritické bunky medzi tkanivami a druhmi. Imunita (2016) 45(3):669-84.doi: 10.1016/j.immuni.2016.08.015

11. Villani AC, Satija R, Reynolds G, Sarkizova S, Shekhar K, Fletcher J, et al. Jednobunková RNA-seq odhaľuje nové typy ľudských krvných dendritických buniek, monocytov a progenitorov. Veda(2017)356(6335):4-6. DOI: 10.1126/science.aah4573

12. Almaani S, Meara A, Rovin BH. Aktualizácia o lupusovej nefritíde. Clin I Am Soc Nephrol (2017)12(5):825-35.doi: 10.2215/CJIN.05780616

Poznámka:vyššie uvedené nie je úplný referenčný zoznam