UPLC-Q-Orbitrap HRMS kombinované s molekulárnym dokovaním na skúmanie materiálového základu horkej chuti a vzťahu s príchuťou v Cistanchia Desertica
Dec 18, 2024
Abstraktný
Na základe ultra výkonnej kvapalinovej chromatografie-kvadrupólovo-elektrostatického poľa Orbitrap High-rozlíšená hmotnostná spektrometria (UPLC-Q-orbitrap HRMS) a HRMS molekulárne, horká chuť, ktorá prezentuje látky Cistanchisovho extraktu, extrakt z extraktu v oblasti výskumu, aby sa založila výskumný základ pre deb-bittering a korekciu vkusu a na ich bitovo ich vzťahu s ich bitovou chuťou. Po prvé, HRM UPLC-Q-Orbitrap sa použili na charakterizáciu zložiek C. deserticola a bolo identifikovaných 69 chemických zložiek. Molekulárne dokovanie týchto chemických komponentov s receptorom horkej chuti viedlo k skríningu 20 bitter-prezentujúcích látok, vrátane 6 fenyletanolových glykozidov, 5 flavonoidov, 3 fenolových kyselín, 2 cykloalkenyléterových terpénov, 2 alkaloidov a 2 ďalšími zložkami. Extrakty toho istého pôvodu sa odobrali z toho istého miesta pôvodu a látky na horkú prezentáciu sa skúmali molekulárnym dokovaním. Ďalšie zložky, deväť šarží čerstvých vzoriek C. púšť sa odobralo z rôznych mesiacov toho istého pôvodu, rozdelených do rôznych mesiacov a rôznych častí a kvantitatívna hodnota horkosti vzoriek bola stanovená metódou elektronického jazyka a obsahom šiestich komponentov vo vzorkách (pineonotylosid, trichothecén glykosid, tubulín A, izo-trichokyokidu, glycózový Jinshihuaosid a jingnipinosid) boli stanovené vysoko výkonnou kvapalinovou chromatografiou (HPLC) a celkové fenyletanolové glykozidy vo vzorkách boli stanovené pomocou UVVISIBILE spektrofotometrický spôsob. Fotometrická metóda na stanovenie obsahu celkových fenyletanoolových glykozidov, celkových polysacharidov, celkových alkaloidov, celkových flavonoidov a celkových fenolových kyselín vo vzorkách a bude kombinovaná s analýzou chemometrickej analýzy na analýzu Pearsona na analýzu Pearsona na overenie zložky v C. Deserticola, ktoré boli v súlade s výsledkami molekulárneho dokovania; A nakoniec, s horkými prezentovanými látkami ako predmetom štúdie.
Extrakt z púšte cistanchis
Nakoniec sa siete farmakologická predikcia a analýza uskutočňovali s horkou látkou ako cieľom a skúmalo sa vzťahy medzi cieľom horkej látky a horkou účinnosťou. Výsledky ukázali, že kľúčovými cieľmi látky B boli EGFR, PIK3CB a PTK2 a že horká látka by mohla vyvíjať horkú účinnosť prostredníctvom pôsobenia na príslušné ciele choroby, čo znamená, že horká látka C. Desertica je materiálom horkej účinnosti. In conclusion, this study showed that the phenylethanol glycosides, mainly pinealoside, mauritiana glycoside and gibbe rellin, are the material basis of the bitter taste of C. desertica, and the molecular docking technology has a guiding role in the screening of bitter substances in traditional Chinese medicine, and that the bitter substances of C. desertica have the effect of bitterness, which is a good basis for the „Vkusná účinnosť“ tradičnej čínskej medicíny v budúcnosti. Horké látky v C. Desertica majú horkú chuť a účinok, ktorá poskytne nápady a odkazy na budúci výskum v oblasti vzťahov medzi vkusom a účinkom v tradičnej čínskej medicíne
Kľúčové slová Extrakt z púšte cistanchis; UPLC-Q-Orbitrap HRMS; Network Pharmacology; molekulárne dokovanie; elektronický jazyk; horké látky;Vzťah
Cistanche Deserticola YC MA.je trvalý koreňový parazit rodiny Orobanchaceae, rod Cistanche, bežne známy ako Desert Cistache [1]. Shennong's Herbal Classic uvádza, že Cistanche chutí sladko a mierne teplé. Po odobratí však má v skutočnosti pretrvávajúcu a miernu horkú chuť. „Chuť“ piatich príchutí tradičnej čínskej medicíny bola pôvodne určená na základe skutočnej chuti lieku, keď bola ochutnaná, ale pretože chuť lieku úzko súvisí s jeho účinkom, postupne sa vyvinula na vysvetlenie a zhrnutie účinku lieku „príchuťou“ [2]. Cistanche je zaznamenaná v mnohých klasických starovekých lekárskych knihách. Má účinky výživy obličiek a doplňovania podstaty, zvlhčovania čriev a zmierňovania zápchy. Od staroveku sa používa na liečbu chorôb súvisiacich s nedostatkom obličiek vrátane sexuálnej dysfunkcie, neplodnosti žien, straty podstaty a krvi, bolestivosti pásu a kolená, suchých črev a zápchy atď. [3]. Horkosť tradičnej čínskej medicíny je jednou z piatich príchutí tradičnej teórie čínskej medicíny a je dôležitým teoretickým základom pre vedenie klinického používania tradičnej čínskej medicíny. Horkosť je jednou z piatich príchutí tradičnej čínskej medicíny. Jeho charakteristiky sú očistné, sušiace a uspokojujúce [4] a zohráva dôležitú úlohu pri vedení klinického používania tradičnej čínskej medicíny. Väčšina tradičných čínskych liekov a tradičných prípravkov čínskej medicíny má horkú chuť. Tradičná čínska medicína sa domnieva, že horké príchutia látky (ďalej len sa označujú ako horké látky) v horkých liekoch sú účinné látky [5]. Vzťah medzi horkými látkami v tradičných čínskych liekoch a ich horká účinnosť je však stále nejasný. Stále nie je nedostatok relevantného vedeckého výskumu o tom, či horké látky v horkých tradičných čínskych liekoch majú horkú účinnosť. Cistanche obsahuje rôzne chemické zložky, hlavne fenyletanolové glykozidy, cyklopentánové terpény, lignany a ich glykozidy, cukry atď. Medzi nimi sa fenyletanolové glykozidové zlúčeniny považujú za hlavné účinné zložky v cistanche [7]. Cistanche Deserticola má dve zberné obdobia: jar a jeseň. Štúdie ukázali, že obsah polysacharidu v jarnej cistanche Deserticola je nízky, obsah glykozidu fenyletanolu je vysoký a chuť je horká, ale jej antioxidačná kapacita je silná [8]. Je zrejmé, že jeho horké komponenty majú určitú koreláciu s účinnosťou lieku, ale materiálny základ horkej chuti púšte Cistache je stále nejasný, čo môže obmedziť jeho ďalší vývoj.
Za účelom preskúmania horkej základnej látkyPúšť cistanchea jeho vzťah k horkej účinnosti (vzťah medzi vkusom a účinkom), táto štúdia považovala extrakt Cistanche Deserticola ako výskumný objekt a vyšetrí horké látky v Cistanche Deserticola ultra-vysokou výkonnou kvapalinou kvapalinovou chromatografiou a kvadrupolom-elektrostatickým poľným orbitrapom technológiou; Obsah hlavných horkých liečivých komponentov bol určenýVysokoúčinná kvapalná chromatografia (HPLC), a obsah každej hlavnej kategórie horkých látok bol stanovený pomocou UV-viditeľnej spektrofotometrie. Stupeň horkosti sa hodnotil elektronickým jazykom a horké komponenty sa našli v kombinácii s chemometrikou; a sieťová farmakologická technológia sa použila na vykonanie Analýzy dráhy KEGG a GO o obohatení na cieľoch horkých látok v tradičnej čínskej medicíne a ciele horkých látok korelovali s cieľmi ich horkej účinnosti, aby sa preskúmal vzťah medzi horkou látkami a horkou účinnosťou v tradičnej čínskej medicíne. Výskumné nápady sú uvedené na obrázku 1. Táto štúdia plne využívala metódy moderných technologických výskumov na preskúmanie informácií o chuti Cistanche Deserticola, ktorá odhalila jej horkú hmotnosť a vzťah medzi chuťou Očakáva sa, že poskytne referenciu pre vedeckú analýzu materiálneho základu vkusu tradičnej čínskej medicíny a poskytne základ pre hĺbkový a presný vývoj a využitie zdrojov cistanche Deserticola, vďaka čomu je teória piatich príchutí jasnejšia, objektívnejšia a štandardizovanejšia, vedecky vysvetľujúca vedecká značka a znalosť čínskeho charakteru a prípravy čínskeho charakteru. liek.
Obr. 1 Cesta štúdie o vzťahu medzi horkými prezentačnými látkami a horkou účinnosťou extraktov z púštnych púšte Cistache
1 materiály
1.1 Liečivé materiály
Vzorky čerstvej cistanche Deserticola sa odobrali v Aksu v štáte Xinjiang od apríla do decembra 2023. Vzorky boli identifikované Li Mingjie, farmaceutka v nemocnici Shaya County People's Hospital, pretože sušená mäsiara stonky stonky s mierky listov Cistanche Deserticola v rodine Cistanche v rodine Orrobanchaceae. Vzorky poukazov boli uložené vo farmaceutickom výskumnom laboratóriu na lekárskej univerzite v Xinjiangu. Vzorky boli vyčistené z nečistôt, nakrájané na čerstvé a blanchované vo vode po dobu 5 minút podľa literatúry a potom spracované, sušené pri 60 stupňoch, rozdrvené a pretesané cez 40- sito, pozri tabuľku 1.
Vzorky tabuľky Informácie o Cistanche Deserticola
| No | Kódovať | Zber čas | Predbežné ošetrenie pred sušením | Detekcia |
|---|---|---|---|---|
| 1 | M1 | 2023-04-10 | Celé - plátky rastlín | Celá rastlina |
| 2 | M2 | 2023-05-08 | Celé - plátky rastlín | Celá rastlina |
| 3 | M3 | 2023-06-15 | Celé - plátky rastlín | Celá rastlina |
| 4 | M4 | 2023-07-10 | Celé - plátky rastlín | Celá rastlina |
| 5 | M5 | 2023-08-11 | Celé - plátky rastlín | Celá rastlina |
| 6 | M6 | 2023-09-10 | Celé - plátky rastlín | Celá rastlina |
| 7 | M7 | 2023-10-09 | Celé - plátky rastlín | Celá rastlina |
| 8 | M8 | 2023-11-14 | Celé - plátky rastlín | Celá rastlina |
| 9 | M9 | 2023-12-10 | Celé - plátky rastlín | Celá rastlina |
| 10 | P1 | 2023-08-11 | Sekcia - konkrétne plátky | Horná epiderma |
| 11 | P2 | 2023-08-11 | Sekcia - konkrétne plátky | Horná kôra |
| 12 | P3 | 2023-08-11 | Sekcia - konkrétne plátky | Horná dlažba |
| 13 | P4 | 2023-08-11 | Sekcia - konkrétne plátky | Stredná epiderma |
| 14 | P5 | 2023-08-11 | Sekcia - konkrétne plátky | Stredná kôra |
| 15 | P6 | 2023-08-11 | Sekcia - konkrétne plátky | Stredná dlaždica |
| 16 | P7 | 2023-08-11 | Sekcia - konkrétne plátky | Nižšia epiderma |
| 17 | P8 | 2023-08-11 | Sekcia - konkrétne plátky | Dolná kôra |
| 18 | P9 | 2023-08-11 | Sekcia - konkrétne plátky | Spodná dužina |
1.2 databázy a softvér
Tcmsp (https://tcmspw.com/tcmsp.php), genecards (https://www.genecards.org), omim (https://www.omim.org) (https://string-db.org), pubChem (https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/), David (https://david.ncifcrf.gov.gov/), alfafoldová proteínová štruktúra (https://alphafold.ebi.ak/), alfafold2 (https://alphafold.ebi.ac.uk/) sa použili na molekulárne dokovanie. Na Pearsonovu analýzu sa použil IBM SPSS Statistis 25. Softvér: Analýza asociácie Gray sa uskutočňovala pomocou online webovej stránky SPSSPRO (https://www.spsspro.com), ortogonálna čiastočná najmenej štvorcových diskriminačných analýz (OPLS-DA) sa uskutočnila pomocou softvéru SIMCA14.1 a sieťová farmakológia s použitím softvéru Cytooscape.
1.3 nástroje a činidlá
Vankier ultra vysoký výkonný chromatograf, Orbitrap Exploris 120 hmotnostného spektrometra s vysokým rozlíšením (ThermoFisher Scientific, USA); SA -402 B elektronický jazyk (incent, Japonsko); LC -20 vysoko výkonný kvapalný chromatograf (Shimadzu, Japonsko); UV-viditeľný spektrofotometer (Shanghai Youke Instrument Co., Ltd.); Elektronická rovnováha AUW2200 (Factory Shimadzu Filippines); Ultrazvukový čistič SK250 (Šanghaj Kedao Ultrazvuk Instrument Co., Ltd.); DHG -9246 Elektrická konštantná teplota výbuchu sušenia rúry (Shanghai Jinghong Experimental Equipment Co., Ltd.); Plusel+CHORUSL ULTRAPURE Vodný prístroj (Veolia, Francúzsko).
Referenčné látky echinakocozid (čistota väčšia alebo rovná 98%, dávkové číslo PCL-#-A003), verbascosid (čistota väčšia alebo rovná sa 98%, dávkové číslo PCL-#-M235), tubulozid A (čistota väčšia alebo rovná sa 99%, čistého čísla Batch PCL-#-T003), SKUTELLARINA (PURESSITATIONSKEJ ČÍSLO, KU PRE 99%KRECITA ALEBO KREKOVANIE PCL-#-D005) a izovalasozid (čistota väčšia alebo rovná 98%, dávkové číslo PCL-#-I236) boli zakúpené od Sichuan Puxi'ao Standard Material Technology Co., Ltd.; Referenčné látky geniposid (čistota väčšia alebo rovná 98%, dávkové číslo WP23120502), rutín (čistota väčšia alebo rovná sa 98%, dávkové číslo WP32110405), kyselina galová (čistota väčšia ako alebo rovná sa 98%, šarže WP32140706) a betaine (čistota väčšia ako alebo rovná sa 98%. WP33654874) boli zakúpené od spoločnosti Sichuan Weikeqi Biotechnology Co., Ltd.; Reinsteinova soľ, bezvodá glukóza (analytický stupeň), acetonitril, metanol (chromatografický stupeň) a kyselina fosforečná boli zakúpené od spoločnosti Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.
