Metabolomika moču odhaľuje anomálnu obnovu po maximálnej námahe u pacientok s ME/CFS, časť 3

Prečo budeme unavení? Ako môžeme vyriešiť problémy s únavou?

【Kontakt】E-mail: george.deng@wecistanche.com / WhatsApp:008613632399501/Wechat:13632399501

3. Diskusia

Toto je prvýkrát, čo bol metabolóm moču pacientov s ME/CFS charakterizovaný pred a po záťažovej záťaži, keď pacienti s ME/CFS zažívajú PEM. Mnohé z týchto metabolitov sa nikdy predtým nemerali u pacientov s ME/CFS, pretože predchádzajúce štúdie metabolizmu moču u ME/CFS boli obmedzené na menej ako 50 metabolitov a súčasná štúdia namerala 1 403. Navyše, použitie sedavých zdravých kontrol Úrovne fyzickej aktivity, ktoré môžu ovplyvniť východiskové hladiny a hladiny metabolitov po cvičení, sú kľúčovou výhodou súčasného dizajnu štúdie, ktorý sa v predchádzajúcich štúdiách nevyužil. Naše výsledky ukázali rozsiahle zvýšenie hladín metabolitov v moči kontrolných osôb 24 hodín po cvičení, ktoré nebolo pozorované u pacientov s ME/CFS, pričom 110 z týchto zlúčenín malo významnú interakciu medzi stavom ochorenia (ME/CFS alebo kontrola ) a čas (základná línia vs. po cvičení) (doplnkový obrázok S2). Okrem početných analýz hladín metabolitov v moči, korelujúce hladiny metabolitov v moči a plazme poskytli ďalší dôkaz metabolickej dysregulácie u pacientov s ME/CFS po cvičení. Táto analýza poskytla ďalšie dôkazy o patofyziologických zmenách vo viacerých podcestách, ako aj dôkazy o rozdieloch v ďalších podcestách, ktoré nemali veľa významných rozdielov medzi pacientmi s ME/CFS a kontrolami pri izolácii hladín metabolitov v moči.

Cistanche môže pôsobiť ako prostriedok proti únave a výdrži a experimentálne štúdie ukázali, že odvar z Cistanche tubulosa by mohol účinne chrániť pečeňové hepatocyty a endotelové bunky poškodené u nosných plávajúcich myší, regulovať expresiu NOS3 a podporovať pečeňový glykogén. syntézy, a tým pôsobí proti únave. Extrakt z Cistanche tubulosa bohatý na fenyletanoidné glykozidy by mohol významne znížiť hladiny kreatínkinázy, laktátdehydrogenázy a laktátu v sére a zvýšiť hladiny hemoglobínu (HB) a glukózy u myší ICR, čo by mohlo hrať úlohu proti únave znížením poškodenia svalov a oneskorenie obohatenia kyselinou mliečnou na ukladanie energie u myší. Compound Cistanche Tubulosa Tablets významne predĺžil čas plávania v záťaži, zvýšil rezervu pečeňového glykogénu a znížil hladinu močoviny v sére po cvičení u myší, čo preukázalo jeho účinok proti únave. Odvar z Cistanchis môže zlepšiť vytrvalosť a urýchliť odstránenie únavy u cvičiacich myší a môže tiež znížiť zvýšenie sérovej kreatínkinázy po záťažovom cvičení a udržať ultraštruktúru kostrového svalstva myší po cvičení normálnu, čo naznačuje, že má účinky na zvýšenie fyzickej sily a proti únave. Cistanchis tiež významne predĺžil čas prežitia myší otrávených dusitanmi a zvýšil toleranciu voči hypoxii a únave.

Kliknite na to, aby ste sa neustále cítili unavení

3.1. Porovnanie s predchádzajúcimi štúdiami metabolizmu moču u pacientov s ME/CFS

Celkovo naše výsledky nie sú v súlade s niekoľkými predchádzajúcimi štúdiami, ktoré merali metabolity v moči u pacientov s ME / CFS v porovnaní s kontrolnými subjektmi bez ME / CFS. Aby sme lepšie porovnali naše výsledky s predchádzajúcimi štúdiami, ktoré merali menej metabolitov, porovnali sme východiskové výsledky pre p < 0.05 v LMM s predchádzajúcimi štúdiami. Jedinou zlúčeninou, o ktorej sa zistilo, že je významná v inej a našej štúdii, bol alanín, hoci predchádzajúca štúdia zistila, že alanín je nižší u pacientok ako u kontrol (BH-upraviť p-hodnotu < 0,05) a v v našej štúdii bola priemerná normalizovaná koncentrácia vyššia u pacientov s ME/CFS ako u kontrol [20]. Niekoľko štúdií však zistilo rozdiely na začiatku v zlúčeninách, o ktorých sme zistili, že sa u pacientov s ME/CFS a kontrolných skupín počas zotavovania po cvičení odlišne menili, vrátane fenylalanínu (nižší u pacientov s ME/CFS [23,24]) a valínu (nižší ME/CFS pacienti [20]). Fenylalanín aj valín boli tiež významne zvýšené v kontrolách sedavého pohybu po cvičení v súčasnej štúdii, takže je možné, že kontroly v iných štúdiách boli aktívnejšie a už mali vyššie hladiny fenylalanínu v moči. Žiadne iné štúdie špecificky nezahŕňali sedavé osoby bez ME/CFS, hoci jedna štúdia sa snažila zodpovedať „všeobecnému životnému štýlu“ [23]. Armstrong a spol. skúmali Pearsonove korelácie medzi močom a plazmatickými metabolitmi u pacientov s ME/CFS a kontrol na začiatku a zistili rozdiely v acetáte, laktáte a fenylalaníne s prahom |R| > 0,4 ​​v každej skupine [20]. Acetát je príliš malý na to, aby bol detekovaný v našom teste a nezistili sme rozdiely v koreláciách plazmy a moču v laktáte alebo fenylalaníne.

McGregor a kolegovia tiež skúmali zmeny v močových a plazmatických metabolómoch u pacientov s ME/CFS s PEM [19]. Použili prieskum na oddelenie pacientov s ME/CFS, ktorí v súčasnosti zažívali PEM za posledných sedem dní, a zistili, že osem z tridsiatich meraných metabolitov v moči malo výrazne nižšie koncentrácie v skupine ME/CFS v porovnaní s kontrolami. Z nich iba serín mal v našich analýzach významné rozdiely; zvýšila sa po cvičení v kontrolnej skupine (súbor doplnkových údajov S2 – výsledky LMM). Hladiny dvoch metabolitov v moči, acetátu a metylhistidínu, boli tiež významne odlišné v skupine s PEM v porovnaní so skupinou bez PEM [19]. Hladiny metylhistidínov testovaných v tejto štúdii sa v analýze LMM významne nelíšili, našli sme však rozdiely v koreláciách 1-metylhistidínu a N-acetyl-3-metylhistidínu v plazme a moči (obrázok 9). McGregor a kol. tiež zistili asociácie sedemdňových skóre PEM s niekoľkými metabolitmi v plazme a moči [19].

3.2. Zvýšenie hladín metabolitov v moči pri kontrole sedavého pohybu po cvičení je v súlade s predchádzajúcimi štúdiami

Metabolóm moču u žien 24 hodín po cvičení nebol dobre charakterizovaný. Podľa našich najlepších vedomostí žiadne štúdie nemerali metabolóm moču na začiatku v porovnaní s 24 hodinami po cvičení u žien. Jedna štúdia merala 32 metabolitov v moči pred cvičením a 24 hodín po cvičení u mužov, pričom porovnávala deväť súťažných cyklistov s ôsmimi zdravými, ale netrénovanými mužmi rovnakého veku (50–60 rokov) [48]. Zatiaľ čo sa ich štúdia zamerala na porovnanie športovcov s netrénovanými subjektmi, u kontrolných subjektov zaznamenali vysokonásobné zvýšenie hladín laktátu, acetátu a hypoxantínu po cvičení (významnejšie ako dvojnásobné). Acetát sa v našej štúdii nemeral a ani laktát, ani hypoxantín sa nelíšili od východiskovej hodnoty po výkon v našej kontrolnej skupine žien. Mukherjee a kol. našli signifikantné rozdiely medzi športovcami a kontrolnými skupinami v ôsmich meraných metabolitoch spojených s rôznymi biochemickými cestami [48]. Silnou stránkou súčasnej štúdie je preto výber sedavých zdravých kontrol na rozdiel od aktívnejších jedincov, ktorí môžu mať zmenený metabolóm moču v dôsledku pravidelného cvičenia.

Zatiaľ čo existuje nedostatok publikovanej literatúry o metabolóme moču 24 hodín po cvičení, existuje niekoľko štúdií, ktoré merajú metabolity v moči u mužov aj žien v skorších časových bodoch po cvičení (prehľad v [49]). Jedným zo zistení, ktoré boli konzistentné medzi štúdiami, je, že koncentrácia väčšiny lipidov sa zvyšuje v biokvapalinách po cvičení, vrátane moču. Najmä sa ukázalo, že koncentrácie acylkarnitínu sa zvyšujú v krvi a moči v reakcii na cvičenie. To je v súlade s výsledkami našej štúdie, v ktorej bolo niekoľko acylkarnitínových zlúčenín významne zvýšených po cvičení v moči kontrol (obrázok 7A).

Najväčšia štúdia, ktorá zahŕňala ženy (celkom 255 subjektov, 107 žien), tiež zistila rozsiahle metabolické zmeny v moči po cvičení, pričom 37 zo 47 meraných metabolitov sa významne zmenilo po korekcii FDR a 33 z nich sa zvýšilo po cvičení [50]. . To je v súlade s naším zistením rozsiahlych metabolických zmien po cvičení v moči kontrolných subjektov, pričom sa zistilo, že väčšina zlúčenín, ktoré boli zmenené, mala zvýšené koncentrácie. Táto štúdia tiež dokončila porovnávaciu analýzu rozvrstvenú podľa pohlavia, ale našla sa len dva metabolity s výrazne odlišnými pomermi po cvičení/základnom stave u žien a mužov.

V Schranner et al. V prehľade nie sú nálezy pre aminokyseliny také konzistentné ako pre lipidy, ktoré sa vo všeobecnosti zvyšujú po cvičení [49]. Niektoré nálezy v moči však boli konzistentné v najmenej dvoch štúdiách (hoci všetky časové body po cvičení sú kombinované), vrátane toho, že nasledujúce zlúčeniny sa zvýšili v moči po cvičení: alanín, O-acetyl-homoserín, 5- hydroxyindolpyruvát, xanturenát, L-metanefrín, N-acetylvanilalanín a N-(karboxyetyl)arginín. V najmenej dvoch štúdiách sa zistilo, že v moči po cvičení došlo k zníženiu nasledujúcich zlúčenín: glycín, histidín, trimetylamín-n-oxid. V porovnaní týchto výsledkov s našou štúdiou sa väčšina metabolitov buď významne nelíšila pred a po cvičení, alebo sa v našej štúdii nemerali. Zistili sme však aj významné zvýšenie hladín alanínu v kontrolách, čo je v súlade s preskúmanými štúdiami. V našej štúdii boli hladiny glycínu tiež zvýšené po cvičení u kontrol, na rozdiel od znížených. Avšak, Kistner a spol. Štúdia, ktorá zahŕňala mnoho žien, tiež zistila, že hladiny glycínu sú po cvičení významne zvýšené [50].

3.3. Rozdiely medzi sedavými kontrolami a pacientmi s ME/CFS v lipidovej superdráhe

Mnohé lipidové podcesty boli významne odlišné v moči pacientov a kontrol v tejto štúdii, vrátane metabolizmu acylkarnitínu mastných kyselín. Metabolity acylkarnitínu boli zvýšené po cvičení v moči u zdravých kontrol a zmeny vyvolané cvičením boli významne odlišné medzi kontrolami a pacientmi s ME/CFS (obrázky 3, 7 a S4). Okrem toho, aj keď nejde o acylkarnitín, deoxykarnitín v lipidovej subdráhe metabolizmu karnitínu koreloval odlišne medzi plazmou a močom u pacientov s ME/CFS v porovnaní s kontrolami (obrázok 9). Acylkarnitíny sú veľmi dôležité v energetickom metabolizme, pretože sú potrebné na transport mastných kyselín do mitochondrií na -oxidáciu. Oxidácia mastných kyselín s dlhým reťazcom je primárnym spôsobom energetického metabolizmu počas aeróbneho cvičenia. Prerušený metabolizmus acylkarnitínu počas cvičenia by mohol prispieť k intolerancii cvičenia a PEM u pacientov s ME / CFS. V ďalšej štúdii, ktorá sa zamerala iba na subjekty na začiatku a ktorá špecificky nezahŕňala sedavé kontroly, sa zistilo, že acylkarnitínová podcesta je výrazne odlišná u pacientov s ME/CFS v porovnaní s kontrolami, pričom päť z ôsmich zlúčenín má u pacientov nižšiu koncentráciu [11]. Keď boli analyzované iba základné subjekty, špecifické merania acylkarnitínu v sére ukázali, že zlúčenina bola nižšia u pacientov s ME/CFS ako u kontrol v jednej správe [51], ale v inej štúdii neboli pozorované žiadne rozdiely v hladinách v moči alebo plazme [52]. V plazme väčšej kohorty, ktorej podskupinou sú subjekty súčasnej štúdie, bol karnitínový chemický klaster tiež významne zmenený u sedavých žien počas zotavovania (definované ako rozdiel medzi 24 hodinami po cvičení a 15 minútami po cvičení ), pričom väčšina zlúčenín sa zvyšuje po cvičení [25]. Nezistilo sa, že by sa karnitínový chemický klaster významne zmenil počas zotavovania sa z cvičenia u pacientov s ME/CFS. Aj keď tento klaster zahŕňa viac ako len acylkarnitíny, acylkarnitíny sú členmi a prispievajú k jeho významu v analýze obohatenia chemickej podobnosti aj v súčasnej štúdii (doplnkový obrázok S4). Ex vivo sa tiež ukázalo, že palmitoylkarnitín, ktorý je vo svaloch prechodne zvýšený po cvičení, môže pôsobiť ako signál námahy zo svalu na podskupinu neurónov [53].

Metabolity mastných kyselín acylglycínu sú jediné zlúčeniny, ktoré sa našli v moči vo výrazne odlišných koncentráciách v ME/CFS v porovnaní s kontrolami v jednom časovom bode (24 hodín po cvičení) a iná zlúčenina acylglycínu, 3-hydroxybutyroylglycín mal signifikantnú negatívnu koreláciu u pacientov s ME/CFS pri korelácii U3/U1 s P3/P1 (obrázky 5 a 9). Okrem toho sa cis-3,{10}}metylénheptanoylglycín menil odlišne počas zotavovania sa po cvičení u pacientov s ME / CFS v porovnaní s kontrolami (LMM, doplnkový obrázok S2). Zatiaľ čo metabolizmus acylglycínu nie je jednou z poddráh, ktorá bola významne zvýšená po cvičení u samotných kontrol, bol významne odlišný u pacientov s ME/CFS v porovnaní s kontrolami v časovom bode 24 hodín po cvičení a pri analýze rozdielu. v pomeroch po cvičení/základnom stave (obrázok 3). Vylučovanie určitých acylglycínov močom je tiež zmenené poruchami spojenými s oxidáciou mastných kyselín v mitochondriách, vrátane deficitu acyl-koenzým A (CoA) dehydrogenázy (MCAD) so stredne dlhým reťazcom [54]. Naša skupina pozorovala, že oxidácia mastných kyselín sa líši v imunitných bunkách od pacientov s ME/CFS oproti kontrolám [55].

3.4. Rozdiely medzi sedavými kontrolami a pacientmi s ME/CFS v aminokyselinovej superceste

Zistili sme tiež veľa rozdielov v moči v aminokyselinách u pacientov s ME / CFS a kontrol po cvičení. Dve z týchto dráh vynikli, pretože mali významné zmeny u pacientov s ME/CFS v porovnaní s kontrolami vo všetkých našich analýzach, vrátane analýzy KEGG dráhy, a sú diskutované nižšie.

Cyklus močoviny v pečeni je dôležitou súčasťou metabolizmu pri cvičení, pretože je potrebný na odstránenie vysokých hladín amoniaku, ktoré sa tvoria počas cvičenia [56,57]. Germain a kolegovia tiež zistili, že cyklus močoviny a cesty SMPDB recyklácie amoniaku boli významne zmenené v plazme medzi pacientkami ME/CFS a kontrolami v analýze dráhy pri porovnaní rozdielu medzi hladinami metabolitov 24 hodín po CPET (P3) a 15 minút po CPET (P2) [25]. Hromadenie amoniaku bolo v minulosti spájané s neurotoxicitou a únavou vyvolanou cvičením [56,57]. Dysregulácia cyklu močoviny v moči a plazmatických metabolómoch po cvičení u pacientov s ME/CFS môže spôsobovať hromadenie amoniaku, ale 1403 zlúčenín meraných pomocou Metabolonu® v moči nezahŕňalo amoniak, pretože ide o prchavú zlúčeninu a je tiež menšia ako detekčný limit platformy Metabolon®.

Cysteín, metionín, SAM a taurín sú dôležité aminokyseliny, pretože ako jediné obsahujú síru a cysteín je jedinečný svojou schopnosťou vytvárať disulfidové väzby. Cysteín môže byť tiež premenený na glutatión a taurín. Cysteín a metionín hrajú mnohé úlohy v bunkovom metabolizme, ale sú tiež kľúčovými stavebnými kameňmi proteínov [37]. Kvôli svojej tiolovej skupine sa cysteín podieľa na katalýze mnohých enzymatických reakcií a udržiavaní redoxnej homeostázy. Zmeny v metabolizme cysteínu sa vyskytujú pri mnohých neurodegeneratívnych poruchách, vrátane Alzheimerovej choroby, Huntingtonovej choroby a Parkinsonovej choroby [58]. Zatiaľ čo metabolizmus cysteínu, metionínu, SAM a taurínu ukázal veľa rozdielov medzi pacientmi a kontrolami v našich analýzach metabolómu moču, korelácie moču a plazmy odhalili ďalšie zlúčeniny s významnými rozdielmi medzi pacientmi s ME/CFS a kontrolami, vrátane cysteínu, ktorý je vzniká, keď sú dva cysteíny oxidované za vzniku disulfidovej väzby, a cystationín, ktorý je medziproduktom pri tvorbe cysteínu v metionínovom cykle [37].

3.5. Obmedzenia

Naša štúdia má niekoľko dôležitých obmedzení. Po prvé, strava subjektov nebola kontrolovaná a príjem metabolitov v strave môže ovplyvniť ich vylučovanie močom. Po druhé, uznávame, že nedostatok zhody BMI nie je ideálny a je obmedzením tejto štúdie. Naša väčšia kohorta pacientov s ME / CFS a zdravých sedavých kontrol zodpovedá BMI, a preto, ak sa táto pilotná štúdia rozšíri, nebude to v budúcnosti problém. Po tretie, naše výsledky sú obmedzené na pacientky s ME / CFS. Aj keď je veľmi dôležité študovať obe pohlavia u ME/CFS a zisťuje sa čoraz väčší počet pohlavných rozdielov v patofyziológii [25,59,60], rozhodli sme sa zamerať našu pilotnú štúdiu na ženy z dôvodu vyššej záťaže ME. /CFS u žien (60–65 % žien) [2]. Okrem toho, pretože sme zachytili metabolóm moču iba v dvoch časových bodoch, na začiatku a 24 hodín po cvičení, nemôžeme povedať, či pacienti s ME / CFS zmenili hladiny vylučovania niektorých z týchto metabolitov skôr alebo neskôr. bod ako ovládacie prvky. Tieto zvýšenia produktov vylučovania sa môžu u pacientov vyskytnúť, ale s väčším oneskorením, podobne ako pacienti s ME/CFS vykazujú oneskorené celkové zotavenie po cvičení. Je však tiež možné, že tento nedostatok zmeneného metabolického vylučovania je súčasťou celkového nedostatku zdravej metabolickej reakcie na cvičenie.

4. Materiály a metódy

4.1. Predmety štúdia

Do tejto štúdie bolo zahrnutých osem zdravých sedavých kontrol a desať pacientov s ME/CFS. U pacientov s ME/CFS boli diagnostikované kanadské kritériá konsenzu [3]. 18 subjektov zahrnutých do tejto štúdie bolo súčasťou väčšej kohorty s celkovým počtom 173 účastníkov (ClinicalTrials.gov Identifier: NCT04026425) [61]. Pre túto pilotnú štúdiu boli všetky zahrnuté subjekty ženy. Subjekty boli vybrané podľa nasledujúcich kritérií. Všetci účastníci musia mať od 18 do 70 rokov. Subjekty boli vylúčené z ktorejkoľvek skupiny, ak boli fajčiari, tehotné alebo dojčiace, boli diabetici, konzumovali nadmerné množstvo alkoholu alebo mali ortopedické obmedzenia, ktoré im bránia vykonávať CPET. Diagnózy schizofrénie, veľkej depresívnej poruchy, bipolárnej poruchy alebo úzkostnej poruchy boli tiež vylučovacími kritériami v oboch skupinách. Okrem toho boli vylúčené zdravé sedavé kontroly, ak boli diagnostikované s akýmikoľvek autoimunitnými poruchami. Renálna funkcia bola normálna u všetkých subjektov v tejto štúdii, ako bolo hodnotené nasledujúcimi štandardnými laboratórnymi krvnými testami Quest Diagnostics: sérový kreatinín, dusík močoviny v krvi a odhadovaná rýchlosť glomerulárnej filtrácie (eGFR).

Sedemnásť subjektov vykonalo záťažové testovanie na Ithaca College v Ithace, New York a jeden subjekt vykonalo záťažové testovanie v ID Med v Torrance v Kalifornii. Všetci účastníci boli požiadaní, aby prestali užívať výživové doplnky vrátane probiotík na dva týždne pred testovaním cvičenia. Účastníci boli požiadaní, aby prestali užívať lieky proti bolesti a stimulanty na dva dni pred testovaním cvičenia. Všetci pacienti poskytli písomný informovaný súhlas a všetky protokoly schválila Ithaca College IRB #1017-12Dx2. Všetci účastníci vyplnili Bell Disability Scale [26], Short Form{3}} zdravotný prieskum [62] a vlastné dotazníky. Pacienti s ME/CFS navyše dokončili viacrozmerný inventár únavy [63].

4.2. Testovanie kardiopulmonálnej záťaže a odber vzoriek moču

CPET sa uskutočňoval na stacionárnom cyklickom ergometri s nasledujúcim protokolom: 3 minúty odpočinku nasledované nepretržitým cyklom, pri ktorom sa prírastkové pracovné zaťaženie zvyšuje o 15 wattov za minútu cvičenia až do vôľového vyčerpania (približne 8–10 minút). Respiračný výmenný pomer (RER), čo je rýchlosť produkcie oxidu uhličitého delená rýchlosťou spotreby kyslíka, sa meral, aby sa zabezpečilo, že účastníci test vykonávajú s dostatočným úsilím (RER > 1,1 označuje maximálne úsilie).

Všetky vzorky moču sa odoberali ráno: (1) 15–20 minút pred CPET a (2) 24 hodín neskôr. Moč sa odoberal uprostred prúdu do sterilných zberačov moču, rozdelil sa na alikvóty, centrifugoval sa pri 10, 000 x g počas 10 minút, aby sa odstránili zvyšky buniek, a skladoval sa pri -80 ◦C. Vzorky moču sa podrobili jednému cyklu zmrazenia/rozmrazenia na ďalšie alikvóty a alikvóty sa poslali cez noc do Metabolonu® na suchom ľade.

4.3. Metabolomický test

Metabolity sa merali pomocou globálnej metabolomickej platformy Precision Metabolomics™ s tandemovou hmotnostnou spektrometriou (LC-MS/MS) na Metabolon®. Podrobné metódy boli opísané skôr [64]. Stručne, vzorky sa extrahovali v metanole (5:1 metanol:vzorka) a potom sa odparili. Metabolity boli detegované v každej vzorke pomocou štyroch rôznych platforiem LC-MS/MS, ktoré boli optimalizované pre hydrofilné a hydrofóbne zlúčeniny a s použitím pozitívnej aj negatívnej ionizácie. Všetky chromatografie využívali Waters Acquity ultra-high performance (UP)LC a injekčný objem 5 ul (so vzorkami rekonštituovanými vo vhodných rozpúšťadlách pre každú platformu). Všetky hmotnostné spektrometrie sa uskutočňovali pomocou vysokorozlišovacích/presných hmotnostných spektrometrov ThermoScientific Q-Exactive so zdrojmi vyhrievanej elektrosprejovej ionizácie (HESI-II) a hmotnostných analyzátorov Orbitrap pracujúcich pri 35,{10}} hmotnostnom rozlíšení s rozsahom skenovania 70–1000 m/ z. Proprietárny softvér Metabolon® sa použil na porovnanie experimentálnych vzoriek s referenčnou knižnicou identifikačných štandardov Tier 1 definovaných iniciatívou Metabolomics Standards Initiative a plocha pod krivkou sa použila na kvantifikáciu vrcholu. Hodnoty sú normalizované z hľadiska počtu hrubých plôch a všetky vzorky boli spracované v jednej dávke, takže nebola potrebná žiadna korekcia dávky. Neznáme zlúčeniny nemajú štandard a čiastočne charakterizované molekuly sú tie, ktoré neboli oficiálne potvrdené na základe štandardu alebo pre ktoré štandard nie je dostupný, ale Metabolon® je primerane presvedčený o svojej identite.

4.4. Spracovanie dát

Nespracované údaje sa normalizovali osmolalitou pre každú vzorku a údaje pre každý metabolit boli stredovo centrované na 1 (nespracované údaje vrátane osmolality sú dostupné v doplnkovom súbore S1). Chýbajúce hodnoty boli pripočítané s minimálnou hodnotou, s výnimkou liekov, ktoré boli pripočítané ako 0. Údaje boli log10 transformované transformáciou stabilizujúcou rozptyl (MetaboanalystR) [65,66]. Pôvodne bolo nameraných celkovo 1403 metabolitov. Metabolity boli filtrované podľa modifikovaného pravidla 80 %: zlúčenina bola zahrnutá, ak bola detegovaná aspoň v 80 % vzoriek v skupine ME/CFS alebo v kontrolnej skupine [27]. Celkovo 1154 metabolitov spĺňalo kritériá a boli zahrnuté do následných analýz. Jediná analýza vykonaná bez filtrovania sa týkala korelácií s plazmatickými metabolitmi. Pomery po cvičení/základná línia pre každý metabolit sa vypočítali v logaritmickom základe 10 ako hodnota po cvičení mínus základná hodnota pre každý subjekt. Na vykreslenie sopečného grafu boli priemerné log násobky zmien (ME/CFS pacienti vs. kontroly) prevedené na logaritmickú bázu 2 pomocou zmeny základného vzorca.

4.5. Analýza dát a štatistika

Jednorozmerná štatistická analýza pre každý metabolit sa uskutočnila pomocou lineárneho zmiešaného modelu s fixnými účinkami stavu ochorenia, časového bodu, veku a BMI a náhodným účinkom subjektu (najinteligentnejšie [67] a priemerné [68] R balíčky). Na korekciu miery falošných objavov sa použila metóda Benjamini–Hochberg (BH), pričom q < 0.1 sa použilo ako prah významnosti. Balík EnhancedVolcano R bol použitý pre grafy sopiek [69].

ChemRICH v R sa použil na vykonanie analýzy neprekrývajúcich sa dráh s podcestami definovanými Metabolon® a poradím dráh [29]. Na uskutočnenie analýzy zhlukovania chemickej podobnosti sa použil webový nástroj ChemRICH [30]. Do tejto analýzy bolo možné zahrnúť iba zlúčeniny, ktoré mali známy kód SMILES, celkovo 516 zlúčenín. Pre obe analýzy ChemRICH sa štatistika obohatenia vykonala pomocou Kolmogorovovho-Smirnovovho testu, ktorý nepoužíva hranicu významnosti p-hodnoty, ale skôr porovnáva rozdelenie pravdepodobnosti s rozdelením pravdepodobnosti nulovej hypotézy [70]. Pre podcesty Metabolon® sa ako prah významnosti vybralo q < 0,05 a pre chemické zhluky sa vybralo q < 0,15 (korekcia BH FDR). Pre oba mali všetky klastre pod zvolenými prahmi q tiež p < ​​0,05.

Obohatenie cesty a analýza topológie sa vykonali pomocou webového nástroja Metaboanalyst 5.0 [65] pre ľudské referenčné metabolómy KEGG aj SMPDB s nasledujúcimi vybranými parametrami: globálny test pre štatistický test a centrálnosť relatívnej medzistupnosti ako miera dôležitosti uzla. Do tejto analýzy boli zahrnuté zlúčeniny, ak sa HMDB ID poskytnuté Metabolon® zhodovalo s HMDB ID v Metaboanalyst. Pre duplicitné zlúčeniny pre jeden HMDB ID bola zahrnutá iba prvá. Výsledkom bolo 453 zahrnutých zlúčenín.

Zhlukovanie subjektov pomocou štyroch zlúčenín, ktoré sa medzi pacientmi a kontrolami po cvičení významne líšili, sa uskutočnilo pomocou hierarchického zoskupovania s euklidovskou vzdialenosťou ako metrikou vzdialenosti a metódou „Ward.D2“ (balíček heatmap R [71 ]).

Pearsonove korelácie medzi močom a plazmou pre 727 metabolitov meraných v oboch biokvapalinách boli vykonané v R (hmisc package). p-hodnoty sa vypočítali pre každú koreláciu pomocou t-testu s nulovou hypotézou, že korelačný koeficient sa rovná 0, po čom nasleduje korekcia BH FDR s q < 0,15 ako prahom významnosti. Pre obrázok 8 boli zlúčeniny podrobené skríningu, aby sa odstránili tie, ktoré mali extrémne odľahlé hodnoty, použitím modifikovanej metódy z-skóre, ktorá vypočítava z-skóre pomocou mediánu a mediánu absolútnej odchýlky (odľahlé hodnoty R balík, z prah=6).

Pokiaľ nie je uvedené inak, všetky vizualizácie údajov sa uskutočnili pomocou balíka ggplot2 R. Korekcia BH FDR bola zvolená pre všetky analýzy namiesto prísnejšej Benjaminiho a Yekutieliho korekcie FDR, pretože sa zistilo, že extrémne malý počet zlúčenín je kolineárnych (0.75 % cieľov malo absolútnu hodnotu Pearsonov korelačný koeficient > { {3}}.7).

5. Závery

Celkovo existovali významné rozdiely v metabolóme moču u zdravých sedavých kontrol a pacientov s ME/CFS v reakcii na výzvu CPET vo veľkom rozsahu metabolických super a subdráh, zahŕňajúcich aminokyseliny, lipidy, sacharidy, nukleotidy, xenobiotiká a iné. neznámych. Tieto dráhy sa podieľajú na množstve fyziologických funkcií, vrátane, ale nie výlučne, energetického metabolizmu. To naznačuje, že pacienti s ME/CFS majú všeobecnú metabolickú dysreguláciu, ktorá je súčasťou ich intolerancie na cvičenie a PEM, pri ktorej je prispievajúcim faktorom zmenená metabolická exkrécia. Naše údaje naznačujú, že metabolizmus sedavých jedincov, ktorí nemajú ME / CFS, prechádza veľkými zmenami, ktoré im umožňujú zotaviť sa z námahy, zatiaľ čo pacienti s ME / CFS nedokážu robiť podobné adaptívne reakcie. Budúca práca bude zahŕňať rozšírenie tejto štúdie na oveľa väčšiu kohortu, ktorá zahŕňa obe pohlavia na overenie týchto výsledkov, preskúmanie pohlavných rozdielov v metabolóme moču a preskúmanie toho, či existujú jemnejšie rozdiely v močových metabolitoch u pacientov s ME / CFS na začiatku, ktoré by mohli potenciálne prispieť k diagnostickému testu choroby v budúcnosti.

Príspevky autora:Konceptualizácia, AG, KAG a MRH; metodika, AG, KAG, YVH a MRH; formálna analýza, KAG, AG a YVH; vyšetrovanie, KAG, AG a YVH; písanie – príprava pôvodného návrhu, KAG, AG a MRH; písanie – recenzie a úpravy, všetci autori; vizualizácia, KAG a AG; administrácia projektu, MRH; získavanie financií, MRH Všetci autori si prečítali a súhlasili s publikovanou verziou rukopisu.

Financovanie:Tento výskum podporili Národný inštitút neurologických porúch a mŕtvice (NINDS), NIH (U54NS105541) a Amar Foundation. Národné centrum pre pokrokové translačné vedy NIH poskytlo finančné prostriedky pre klinické a translačné vedecké centrum Weill Cornell Medicine (CTSC) na udržiavanie databázy REDCap prostredníctvom UL1 TR 002384.

Vyhlásenie inštitucionálnej revíznej rady:Štúdia bola vykonaná v súlade s usmerneniami Helsinskej deklarácie a schválená Inštitucionálnou revíznou radou Ithaca College, Ithaca, New York, USA (protokol 1017-12Dx2) a Inštitucionálnou revíznou radou Weill Cornell Medical College ( protokol 1708018518).

Vyhlásenie informovaného súhlasu:Informovaný súhlas bol získaný od všetkých subjektov zapojených do štúdie.

Vyhlásenie o dostupnosti údajov:Všetky údaje o metabolitoch pre každý subjekt sú dostupné v poskytnutých súboroch doplnkových údajov.

Poďakovanie:Carl Franconi spravoval databázu a biobanku na Cornell University. Vzorky krvi frakcionovali David Wang z EVMED Research s podporou Workwell Foundation a Ivan Falsztyn, Carl Franconi, Ludovic Giloteaux, Madeline McCanne, Jineet Patel, Adam O'Neal, Alexandra Mandarano, Jessica Maya, Shannon Appelquist na Cornell University. Ďakujeme nasledujúcim jednotlivcom, ktorí sa zúčastnili skríningu účastníkov, vykonávania záťažových testov a/alebo odberu krvi a moču: Betsy Keller, John Chia, Jared Stevens, Tiffany Ong a Maria Russell.

Konflikt záujmov:Autori nedeklarujú žiadny konflikt záujmov. Investori nezohrávali žiadnu úlohu pri navrhovaní štúdie; pri zbere, analýzach alebo interpretácii údajov; pri písaní rukopisu; alebo v rozhodnutí o zverejnení výsledkov.

Referencie

1. Jason, LA; Mirin, AA Aktualizácia údajov o prevalencii ME/CFS a ekonomických dopadoch Národnej akadémie medicíny s cieľom zohľadniť rast populácie a infláciu. Únava Biomed. Health Behav. 9, 9–13 2021. [CrossRef]

2. Valdez, AR; Hancock, EE; Adebayo, S.; Kiernicki, DJ; Proskauer, D.; Attewell, JR; Bateman, L.; DeMaria, A., Jr.; Lapp, CW; Rowe, PC; a kol. Odhadovanie prevalencie, demografických údajov a nákladov ME/CFS pomocou rozsiahlych údajov o zdravotných nárokoch a strojového učenia. Predné. Pediatr. 2018, 6, 412. [CrossRef] [PubMed]

3. Carruthers, BM; Jain, AK; De Meirleir, KL; Peterson, DL; Klimas, NG; Lerner, AM; Bested, AC; Flor-Henry, P.; Joshi, P.; Powles, AP; a kol. Myalgická encefalomyelitída/chronický únavový syndróm: Definícia klinického pracovného prípadu, diagnostické a liečebné protokoly. J. Chronic Fatigue Syndr. 2003, 11, 7–115. [CrossRef]

4. Chu, L.; Valencia, IJ; Garvert, DW; Montoya, JG Dekonštrukcia nevoľnosti po námahe pri myalgickej encefalomyelitíde/chronickom únavovom syndróme: prierezový prieskum zameraný na pacienta. PLoS ONE 2018, 13, e0197811. [CrossRef]

5. Stussman, B.; Williams, A.; Snow, J.; Gavin, A.; Scott, R.; Nath, A.; Walitt, B. Charakterizácia ponámahovej malátnosti u pacientov s myalgickou encefalomyelitídou/chronickým únavovým syndrómom. Predné. Neurol. 2020, 11, 1025. [CrossRef]

6. Stevens, S.; Snell, C.; Stevens, J.; Keller, B.; VanNess, JM Metodológia kardiopulmonálneho záťažového testu na hodnotenie námahovej intolerancie pri myalgickej encefalomyelitíde/chronickom únavovom syndróme. Predné. Pediatr. 2018, 6, 242. [CrossRef]

7. Vanness, JM; Snell, ČR; Stevens, SR Znížená kardiopulmonálna kapacita počas pozáťažovej nevoľnosti. J. Chronic Fatigue Syndr. 2007, 14, 77–85. [CrossRef]

8. Keller, BA; Pryor, JL; Giloteaux, L. Neschopnosť pacientov s myalgickou encefalomyelitídou/chronickým únavovým syndrómom reprodukovať vrchol VO(2) indikuje funkčné poškodenie. J. Transl. Med. 2014, 12, 104. [CrossRef]

9. Missailidis, D.; Annesley, SJ; Fisher, PR Patologické mechanizmy, ktoré sú základom myalgickej encefalomyelitídy/chronického únavového syndrómu. Diagnostika 2019, 9, 80. [CrossRef]

10. Huth, TK; Eaton-Fitch, N.; Staines, D.; Marshall-Gradisnik, S. Systematický prehľad metabolomickej dysregulácie pri chronickom únavovom syndróme/myalgickej encefalomyelitíde/systémovej intolerancii pri námahe (CFS/ME/SEID). J. Transl. Med. 2020, 18, 198. [CrossRef]

11. Germain, A.; Barupal, DK; Levine, SM; Hanson, MR Komplexná obehová metabolomika v ME/CFS odhaľuje narušený metabolizmus acyllipidov a steroidov. Metabolity 2020, 10, 34. [CrossRef]

12. Germain, A.; Ruppert, D.; Levine, SM; Hanson, MR Metabolické profilovanie kohorty objavenia myalgickej encefalomyelitídy/syndrómu chronickej únavy odhaľuje poruchy metabolizmu mastných kyselín a lipidov. Mol. Biosyst. 2017, 13, 371–379. [CrossRef]

13. Germain, A.; Ruppert, D.; Levine, SM; Hanson, MR Prospektívne biomarkery z plazmatickej metabolomiky myalgickej encefalomyelitídy/chronického únavového syndrómu implikujú redoxnú nerovnováhu v symptomatológii choroby. Metabolites 2018, 8, 90. [CrossRef]

14. Yamano, E.; Sugimoto, M.; Hirayama, A.; Kume, S.; Yamato, M.; Jin, G.; Tajima, S.; Goda, N.; Iwai, K.; Fukuda, S.; a kol. Indexové markery syndrómu chronickej únavy s dysfunkciou cyklov TCA a močoviny. Sci. Rep. 2016, 6, 34990. [CrossRef]

15. Armstrong, CW; McGregor, NR; Sheedy, JR; Buttfield, I.; Butt, HL; Gooley, PR NMR metabolické profilovanie séra identifikuje poruchy aminokyselín pri syndróme chronickej únavy. Clin. Chim. Acta 2012, 413, 1525–1531. [CrossRef]

16. Armstrong, CW; McGregor, NR; Lewis, DP; Butt, HL; Gooley, PR Asociácia fekálnej mikroflóry a metabolitov stolice, krvného séra a moču pri myalgickej encefalomyelitíde/syndróme chronickej únavy. Metabolomics 2016, 13, 8. [CrossRef]

17. Hoel, F.; Hoel, A.; Pettersen, IK; Rekeland, IG; Risa, K.; Alme, K.; Sorland, K.; Fossa, A.; Lien, K.; Herder, I.; a kol. Mapa metabolických fenotypov u pacientov s myalgickou encefalomyelitídou / syndrómom chronickej únavy. JCI Insight 2021, 6, e149217. [CrossRef]

18. Nagy-Szakal, D.; Barupal, DK; Lee, B.; Che, X.; Williams, BL; Kahn, EJR; Ukaigwe, JE; Bateman, L.; Klimas, NG; Komaroff, AL; a kol. Pohľad na fenotyp myalgickej encefalomyelitídy/syndrómu chronickej únavy prostredníctvom komplexnej metabolomiky. Sci. Rep. 2018, 8, 10056. [CrossRef]

19. McGregor, NR; Armstrong, CW; Lewis, DP; Gooley, PR pozáťažová nevoľnosť je spojená s hypermetabolizmom, hypoacetyláciou a dereguláciou metabolizmu purínov v prípadoch ME/CFS. Diagnostika 2019, 9, 70. [CrossRef]

20. Armstrong, CW; McGregor, NR; Lewis, DP; Butt, HL; Gooley, PR Metabolické profilovanie odhaľuje anomálny energetický metabolizmus a dráhy oxidačného stresu u pacientov s chronickým únavovým syndrómom. Metabolomika 2015, 11, 1626–1639. [CrossRef]

21. Fluge, O.; Mella, O.; Bruland, O.; Risa, K.; Dyrstad, SE; Alme, K.; Rekeland, IG; Saptota, D.; Rosland, GV; Fossa, A.; a kol. Metabolické profilovanie naznačuje zhoršenú funkciu pyruvátdehydrogenázy pri myalgickej encefalopatii/syndróme chronickej únavy. JCI Insight 2016, 1, e89376. [CrossRef] [PubMed]

22. Naviaux, RK; Naviaux, JC; Li, K.; Bright, AT; Alaynick, WA; Wang, L.; Baxter, A.; Nathan, N.; Anderson, W.; Gordon, E. Metabolické znaky syndrómu chronickej únavy. Proc. Natl. Akad. Sci. USA 2016, 113, E5472–E5480. [CrossRef] [PubMed]

23. Jones, MG; Cooper, E.; Amjad, S.; Goodwin, CS; Barron, JL; Chalmers, RA Organické kyseliny v moči a plazme a aminokyseliny pri chronickom únavovom syndróme. Clin. Chim. Acta 2005, 361, 150–158. [CrossRef] [PubMed]

24. Niblett, SH; King, KE; Dunstan, RH; Clifton-Bligh, P.; Hoskin, LA; Roberts, TK; Fulcher, GR; McGregor, NR; Dunsmore, JC; Butt, HL; a kol. Hematologické anomálie a anomálie vylučovania moču u pacientov s chronickým únavovým syndrómom. Exp. Biol. Med. 2007, 232, 1041–1049. [CrossRef] [PubMed]

25. Germain, A.; Giloteaux, L.; Moore, GE; Levine, SM; Chia, JK; Keller, BA; Stevens, J.; Franconi, CJ; Mao, X.; Shungu, DC; a kol. Plazmatická metabolomika odhaľuje narušenú odpoveď a zotavenie po maximálnom cvičení pri myalgickej encefalomyelitíde / syndróme chronickej únavy. JCI Insight 2022, 7, e157621. [CrossRef]

26. Bell, DS Doktorov sprievodca chronickým únavovým syndrómom. Pochopenie, liečba a život s CFIDS; Addison-Wesley Publishing Company: Reading, MA, USA, 1994.

27. Yang, J.; Zhao, X.; Lu, X.; Lin, X.; Xu, G. Stratégia predbežného spracovania údajov pre metabolomiku na zníženie maskovacieho efektu pri analýze údajov. Predné. Mol. Biosci. 2015, 2, 4. [CrossRef]

28. Benjamini, Y.; Hochberg, Y. Kontrola miery falošných objavov: Praktický a výkonný prístup k viacnásobnému testovaniu. JR Stat. Soc. Ser. B 1995, 57, 289-300. [CrossRef]

29. Barupal, DK; Fanúšikovia.; Fiehn, O. Integrácia bioinformatických prístupov pre komplexnú interpretáciu súborov metabolomických údajov. Curr. Opin. Biotechnol. 2018, 54, 1–9. [CrossRef]

30. Barupal, DK; Fiehn, O. Analýza obohatenia chemickej podobnosti (ChemRICH) ako alternatíva k mapovaniu biochemických dráh pre súbory metabolomických údajov. Sci. Rep. 2017, 7, 14567. [CrossRef]

31. Goeman, JJ; van de Geer, SA; de Kort, F.; van Houwelingen, HC Globálny test pre skupiny génov: Testovanie asociácie s klinickým výsledkom. Bioinformatika 2004, 20, 93–99. [CrossRef]

32. Rosato, A.; Tenori, L.; Cascante, M.; De Atauri Carulla, PR; Martins Dos Santos, VAP; Saccenti, E. Od korelácie k príčinnej súvislosti: Analýza metabolomických údajov pomocou prístupov systémovej biológie. Metabolomics 2018, 14, 37. [CrossRef]

33. Cardounel, AJ; Cui, H.; Samouilov, A.; Johnson, W.; Kearns, P.; Tsai, AL; Berka, V.; Zweier, JL Dôkazy o patofyziologickej úlohe endogénnych metylarginínov pri regulácii produkcie endotelového NO a vaskulárnej funkcie. J. Biol. Chem. 2007, 282, 879-887. [CrossRef]

34. Chandrasekharan, UM; Wang, Z.; Wu, Y.; Wilson Tang, WH; Hazen, SL; Wang, S.; Elaine Husni, M. Zvýšené hladiny plazmatického symetrického dimetylarginínu a zvýšená aktivita arginázy ako potenciálne indikátory kardiovaskulárnej komorbidity pri reumatoidnej artritíde. Arthritis Res. Ther. 2018, 20, 123. [CrossRef]

35. Siroen, MP; Teerlink, T.; Nijveldt, RJ; Prins, HA; Richir, MC; van Leeuwen, PA Klinický význam asymetrického dimetylarginínu. Annu. Rev. Nutr. 2006, 26, 203–228. [CrossRef]

36. Bertinat, R.; Villalobos-Labra, R.; Hofmann, L.; Blauensteiner, J.; Sepulveda, N.; Westermeier, F. Znížená produkcia NO v endotelových bunkách vystavených plazme od pacientov s ME/CFS. Vasc. Pharmacol. 2022, 143, 106953. [CrossRef]

37. Brosnan, JT; Brosnan, ME Aminokyseliny obsahujúce síru: Prehľad. J. Nutr. 2006, 136, 1636S–1640S. [CrossRef]

38. Fernández-García, JC; Martínez-Sánchez, MA; Bernal-López, MR; Muñoz-Garach, A.; Martínez-González, MA; Fitó, M.; Salas-Salvadó, J.; Tinahones, FJ; Ramos-Molina, B. Vplyv intervenčného programu životného štýlu s energeticky obmedzenou stredomorskou stravou a cvičením na sérový polyamínový metabolóm u jedincov s vysokým rizikom kardiovaskulárnych ochorení: Randomizovaná klinická štúdia. Am. J. Clin. Nutr. 2020, 111, 975–982. [CrossRef]

39. Wang, W.; Zhang, H.; Xue, G.; Zhang, L.; Zhang, W.; Wang, L.; Lu, F.; Li, H.; Bai, S.; Lin, Y.; a kol. Cvičebný tréning zachováva ischemickú predkondicionáciu u starých potkaních sŕdc obnovením polyamínového poolu myokardu. Oxid. Med. Bunka. Longev. 2014, 2014, 457429. [CrossRef]

40. Blomstrand, E.; Eliasson, J.; Karlsson, HK; Kohnke, R. Aminokyseliny s rozvetveným reťazcom aktivujú kľúčové enzýmy v syntéze bielkovín po fyzickom výkone. J. Nutr. 2006, 136, 269S–273S. [CrossRef]

41. Newsholme, P.; Stenson, L.; Sulvucci, M.; Sumayao, R.; Krause, M. 1.{2}}Metabolizmus aminokyselín. In Comprehensive Biotechnology, 2. vydanie; Moo-Young, M., Ed.; Academic Press: Burlington, ON, Kanada, 2011; s. 3–14. [CrossRef]

42. Li, S.; Gao, D.; Jiang, Y. Funkcia, detekcia a zmena metabolizmu acylkarnitínu pri hepatocelulárnom karcinóme. Metabolites 2019, 9, 36. [CrossRef]

43. Braun, TP; Marks, DL Regulácia svalovej hmoty endogénnymi glukokortikoidmi. Predné. Physiol. 2015, 6, 12. [CrossRef] [PubMed]

44. Furman, BL Mineralokortikoidy. In xPharm: The Comprehensive Pharmacology Reference; Enna, SJ, Bylund, DB, Eds.; Elsevier: New York, NY, USA, 2007; p. 1. [CrossRef]

45. Kavyani, B.; Lidbury, BA; Schloeffel, R.; Fisher, PR; Missailidis, D.; Annesley, SJ; Dehhaghi, M.; Heng, B.; Guillemin, GJ Mohla by byť kynurenínová dráha kľúčovým chýbajúcim kúskom komplexnej skladačky myalgickej encefalomyelitídy/chronického únavového syndrómu (ME/CFS)? Bunka. Mol. Life Sci. 2022, 79, 412. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Kossman, DA; Williams, NI; Domchek, SM; Kurzer, MS; Stopfer, JE; Schmitz, KH Cvičenie znižuje hladiny estrogénu a progesterónu u žien pred menopauzou s vysokým rizikom rakoviny prsníka. J. Appl. Physiol. 2011, 111, 1687–1693. [CrossRef] [PubMed]

47. De Souza, MJ; Van Heest, J.; Demers, LM; Lasley, BL Nedostatok luteálnej fázy u rekreačných bežcov: Dôkaz hypometabolického stavu. J. Clin. Endocrinol. Metab. 2003, 88, 337-346. [CrossRef]

48. Mukherjee, K.; Edgett, BA; Burrows, HW; Castro, C.; Griffin, JL; Schwertani, AG; Gurd, BJ; Funk, CD Transkriptomika plnej krvi a močová metabolomika na definovanie adaptívnych biochemických dráh vysokointenzívneho cvičenia u 50–60-ročných majstrovských športovcov. PLoS ONE 2014, 9, e92031. [CrossRef]

49. Schranner, D.; Kastenmuller, G.; Schonfelder, M.; Romisch-Margl, W.; Wackerhage, H. Zmeny koncentrácie metabolitov u ľudí po záťaži: Systematický prehľad štúdií látkovej premeny pri cvičení. Sports Med. Otvorené 2020, 6., 11. [CrossRef]

50. Kistner, S.; Rist, MJ; Doring, M.; Dorr, C.; Neumann, R.; Hartel, S.; Bub, A. Prístup založený na NMR na identifikáciu metabolitov v moči spojených s akútnym fyzickým cvičením a kardiorespiračnou zdatnosťou u zdravých ľudí – výsledky štúdie KarMeN. Metabolity 2020, 10, 212. [CrossRef]

51. Kuratsune, H.; Yamaguti, K.; Takahashi, M.; Misaki, H.; Tagawa, S.; Kitani, T. Nedostatok acylkarnitínu pri syndróme chronickej únavy. Clin. Infikovať. Dis. 1994, 18 (Suppl. 1), S62–S67. [CrossRef]

52. Jones, MG; Goodwin, CS; Amjad, S.; Chalmers, RA Plazma a močový karnitín a acylkarnitíny pri syndróme chronickej únavy. Clin. Chim. Acta 2005, 360, 173–177. [CrossRef]

53. Zhang, J.; svetlo, AR; Hoppel, CL; Campbell, C.; Chandler, CJ; Burnett, DJ; Souza, ES; Casazza, GA; Hughen, RW; Keim, NL; a kol. Acylkarnitíny ako markery rozdeľovania paliva spojeného s cvičením, xenometabolizmus a potenciálne signály do svalových aferentných neurónov. Exp. Physiol. 2017, 102, 48–69. [CrossRef]

54. Costa, CG; Guerand, WS; Struys, EA; Holwerda, U.; desať Brink, HJ; Tavares de Almeida, I.; Duran, M.; Jakobs, C. Kvantitatívna analýza močových acylglycínov na diagnostiku defektov beta-oxidácie pomocou GC-NCI-MS. J. Pharm. Biomed. Anal. 2000, 21, 1215–1224. [CrossRef]

55. Maya, J.; Leddy, SM; Gottschalk, CG; Peterson, DL; Hanson, MR Zmenená oxidácia mastných kyselín v lymfocytových populáciách myalgickej encefalomyelitídy/chronického únavového syndrómu. Int. J. Mol. Sci. 2023, 24, 2010. [CrossRef]

56. Wilkinson, DJ; Smeeton, NJ; Watt, PW Metabolizmus amoniaku, mozog a únava; opätovná návšteva odkazu. Prog. Neurobiol. 2010, 91, 200–219. [CrossRef]

57. Chen, S.; Minegishi, Y.; Hasumura, T.; Shimotoyodome, A.; Ota, N. Zapojenie metabolizmu amoniaku do zlepšenia vytrvalostného výkonu čajovými katechínmi u myší. Sci. Rep. 2020, 10, 6065. [CrossRef]

58. Pavol, BD; Sbodio, JI; Snyder, Metabolizmus cysteínu SH v neuronálnej redoxnej homeostáze. Trends Pharmacol. Sci. 2018, 39, 513–524. [CrossRef]

59. Nkiliza, A.; Parks, M.; Cseresznye, A.; Oberlin, S.; Evans, JE; Darcey, T.; Aenlle, K.; Niedospial, D.; Mullan, M.; Crawford, F.; a kol. Pohlavne špecifické profily plazmatických lipidov u pacientov s ME / CFS a ich spojenie s bolesťou, únavou a kognitívnymi symptómami. J. Transl. Med. 2021, 19, 370. [CrossRef]

60. O'Neal, AJ; sklo, KA; Emig, CJ; Vitug, AA; Henry, SJ; Shungu, DC; Mao, X.; Levine, SM; Hanson, MR Prieskum hladín anti-patogénnych protilátok pri myalgickej encefalomyelitíde/chronickom únavovom syndróme. Proteómy 2022, 10, 21. [CrossRef]

61. Analýza pozáťažovej malátnosti pomocou dvojdňového CPET u ľudí s ME/CFS.

62. Ware, JE, Jr.; Sherbourne, CD The MOS 36-položka short-form health survey (SF-36). I. Koncepčný rámec a výber položiek. Med. Starostlivosť 1992, 30, 473–483. [CrossRef]

63. Smets, EM; Garssen, B.; Bonke, B.; De Haes, JC The Multidimensional Fatigue Inventory (MFI) psychometrické vlastnosti nástroja na hodnotenie únavy. J. Psychosom. Res. 1995, 39, 315-325. [CrossRef]

64. Ford, L.; Kennedy, AD; Goodman, KD; Pappan, KL; Evans, AM; Miller, LAD; Wulff, JE; Wiggs, BR; Lennon, JJ; Elsea, S.; a kol. Presnosť platformy na profilovanie klinického metabolizmu na použitie pri identifikácii vrodených porúch metabolizmu. J. Appl. Lab. Med. 2020, 5, 342–356. [CrossRef]

65. Pang, Z.; Chong, J.; Zhou, G.; de Lima Morais, DA; Chang, L.; Barrette, M.; Gauthier, C.; Jacques, PE; Li, S.; Xia, J. MetaboAnalyst 5.0: Zúženie priepasti medzi nespracovanými spektrami a funkčnými poznatkami. Nucleic Acids Res. 2021, 49, W388 – W396. [CrossRef] [PubMed]

66. Durbin, BP; Hardin, JS; Hawkins, DM; Rocke, DM Transformácia stabilizujúca rozptyl pre dáta z mikročipov génovej expresie. Bioinformatika 2002, 18 (Suppl. 1), S105–S110. [CrossRef] [PubMed]

67. Kuznecovová, A.; Brockhoff, PB; Christensen, RHB lmerTest Package: Testy v modeloch lineárnych zmiešaných efektov. J. Stat. Softw. 2017, 82, 1–26. [CrossRef]

68. Lenth, R. Emmeans: Odhadovaný hraničný priemer, známy ako priemer najmenších štvorcov, 1.8.2; R balík. 2022.

69. Blighe, K.; Rana, S.; Lewis, M. EnhancedVolcano: Sopky pripravené na publikáciu s vylepšeným farbením a označovaním, verzia 1.16.0; R balík. 2022.

70. Smirnov, NV O odhade nesúladu medzi empirickými krivkami distribúcie pre dva nezávislé vzorky. Bull. Matematika. Univ. Moskva 1939, 2, 3–14.

71. Kolde, R. Featmap: Pretty Heatmaps, 1.0.12; R balík. 2019.

Vyhlásenie/Poznámka vydavateľa:Vyhlásenia, názory a údaje obsiahnuté vo všetkých publikáciách sú výlučne vyjadreniami jednotlivých autorov a prispievateľov a nie MDPI a/alebo editorov. MDPI a/alebo editor(i) sa zriekajú zodpovednosti za akékoľvek zranenie osôb alebo majetku vyplývajúce z akýchkoľvek nápadov, metód, pokynov alebo produktov uvedených v obsahu.

【Kontakt】E-mail: george.deng@wecistanche.com / WhatsApp:008613632399501/Wechat:13632399501