Polysacharidy Xinjiang Cistanche Deserticola majú antioxidačné účinky
Aug 30, 2023
abstraktné
Bola študovaná antioxidačná aktivita polysacharidu Cistanche deserticola in vitro. Použitie kyseliny askorbovej ako kontroly, Fentonova reakcia na produkciu hydroxylových radikálov, autooxidačná reakcia dopamínu za vzniku superoxidových aniónových radikálov, reakcia chlórnanu sodného s peroxidom vodíka za vzniku singletového kyslíka, difenylové horké hydrazínové radikály ako experimentálny model , účinky polysacharidov Cistanche deserticola na superoxidové aniónové radikály, hydroxylové radikály DPPH · voľný radikál (difenyl horký hydrazínový radikál), zachytávací účinok singletového kyslíka. Výsledky ukázali, že polysacharidy z Cistanche deserticola mali zjavné vychytávacie účinky na vyššie uvedené voľné radikály a vychytávací účinok pozitívne koreloval s koncentráciou polysacharidov.
Kľúčové slová :Čišťanon tubulosa Polysaccharide; Voľný radikál
1. Úvod
Organizmus v procese oxidačného metabolizmu životných aktivít nepretržite produkuje rôzne reaktívne voľné radikály kyslíka (ROS), ktoré sú medziproduktom oxidačno-redukčnej reakcie aeróbneho metabolizmu.Výskum zistil, že prebytočné voľné radikály napádajú životné makromolekuly a rôzne organely, spôsobujú rôzne poškodenia na molekulárnej úrovni, úrovni buniek, tkanív a orgánov, urýchľujú proces starnutia tela a vyvolávajú choroby ako trombóza, cukrovka, ateroskleróza, nádory atď. [1]. Vzhľadom na toxicitu chemicky syntetizovaných antioxidantov pre ľudský organizmus sa hľadanie prírodných antioxidantov s vysokou účinnosťou a nízkou toxicitou, ktoré dokážu odstraňovať voľné kyslíkové radikály, stalo horúcou témou výskumu v oblasti medicíny, potravinárstva, chemického inžinierstva a ďalších odborov v posledných rokoch.
Cistanche deserticola(YCMa.)je vzácna čínska tradičná medicína a je známa ako „púštny ženšen" [2]. Cistanche deserticola mapolysacharid je jednou z hlavných bioaktívnych zložiek Cistanche deserticola, ale neexistuje žiadna správa o tom, či polysacharid Cistanche deserticola má účinok na zachytávanie voľných radikálov. V tomto článku boli pomocou spektrálnej analýzy stanovené zachytávacie účinky polysacharidu Cistanche deserticola na superoxidový aniónový radikál, hydroxylový radikál, DPPH · voľný radikál a singletový kyslík, aby sa vyhodnotila jeho antioxidačná aktivita a poskytol vedecký základ pre úplný vývoj a využitie tento prírodný zdroj.
Čínska bylina cistanche
2. Experimentálna časť
2.1 Nástroje a činidlá
UV-2401 UV-viditeľný spektrofotometer (Shimadzu, Japonsko); Ultra citlivý trubicový luminometer LumatLB9507 (Nemecko
BertholdTechnologies); Rotačná odparka RE-52CS (Shanghai Yarong Biochemical Instrument Factory); HW-SY elektronický termostatický vodný kúpeľ (Jintan Xinhang Instrument Factory); pH meter PHS-3C (Shanghai Precision Scientific Instrument Co., Ltd.); DZF-6020 vákuová sušiaca pec (Shanghai Yiheng Technology Co., Ltd.). Cistanche deserticola: zakúpené od Kuitun Pharmaceutical Corporation. Luminol (Sigma, USA), dopamín (Čínsky inštitút pre kontrolu farmaceutických a biologických produktov), FeSO4, EDTA, vitamín C, H2O2, NaClO, Na2CO3, NaHCO3, atď., to všetko sú domáce analytické činidlá. Experimentálna voda je destilovaná voda s výmenou iónov.
2.2 Experimentálna metóda
2.2.1 Spôsob extrakcieCistanche deserticolapolysacharid
Vezmite 30 g prášku Cistanche deserticola a vložte ho do 500 ml kužeľovej banky. Ponorte ho do petroléteru (60-90 stupeň), éteru a 80 % horúceho roztoku etanolu (30 stupňov) na 6 hodín a zvyšok sa odparí, aby sa vysušilo rozpúšťadlo. Namočte zvyšok filtra do vody v pomere 1 ∶ 10 na 24 hodín, zahrejte na 30 stupňov a extrahujte 100 minút. Po extrakcii centrifugujte, aby ste získali supernatant. Po zahustení supernatantu pri zníženom tlaku sa vyzráža 95 % etanolom v trojnásobnom objeme. Nechá sa stáť 24 hodín pri 4 stupňoch. Po odstredení sa zhromaždí a vyzráža. Po vákuovom sušení možno získať surový polysacharid Cistanche deserticola. Odvážte 1,00 g surového polysacharidu, rozpustite ho vo vode a vložte do 50 ml odmernej banky do pohotovostného režimu.
Kliknutím sem zobrazíte práškové produkty Cistanche
【Požiadať o viac】 E-mail:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692
2.2.2 Test schopnosti vyplachovaniaCistanche deserticolapolysacharid na O-2 · voľný radikál
Schopnosť zachytávať polysacharid Cistanche deserticola na O{{0}} · bola testovaná produkciou superoxidových voľných radikálov (O-2 ·) z autooxidácie dopamínu [3]. Pridajte 3.0ml {{10}}.1mmol/LpH=10.12 uhličitanového tlmivého roztoku, 3{16}}ml vody a {{18 }}.5 ml roztoku vzorky polysacharidu rôznych koncentrácií v sušiacej skúmavke so stupnicou. Po predhriatí vo vodnom kúpeli s teplotou 30 stupňov počas 5 minút pridajte 1.0ml 2,0 mmol/l dopamínu predhriateho vo vodnom kúpeli s teplotou 30 stupňov, ihneď premiešajte a upravte, udržujte reakciu pri 30 stupňov 5 minút a okamžite zastavte reakciu 2 kvapkami 10 mol/l HCl. Použite tlmivý roztok ako referenčný, zmerajte absorbanciu (vzorka A) pri 221 nm, nahraďte vzorku (slepý pokus A) 0,5 ml vody v slepej skupine a nahraďte vzorku 0,5 ml kyseliny askorbovej v kontrolnej skupine , zmerajte každú vzorku trikrát paralelne a vezmite priemernú hodnotu. O-2 · miera zúčtovania (%)=(prázdny údaj – vzorka)/slepý údaj × 100 %
2.2.3 Test schopnosti vyplachovaniaCistanche deserticolapolysacharid na · OH voľný radikál
Desert živá bylina cistanche -Antioxidant
Systém EDTA-Fe (Ⅱ) - metylénová modrá - H2O2 sa použil na testovanie schopnosti vychytávať polysacharid Cistanche deserticola na hydroxylovom radikále. Princíp spočíva v tom, že EDTA-Fe (Ⅱ) reaguje s peroxidom vodíka za vzniku voľných radikálov · OH, čo znižuje charakteristický absorpčný pík roztoku metylénovej modrej pri 660 nm.
Pridajte 1.0ml 5mmol/l roztoku LFeSO4, 1,2ml 5mmol/l roztoku LEDTA, 2.0ml 0.03mol/l NaH2PO{{101} {12}}tlmivý roztok Na2HPO4 (pH=7,4) a 1,3 ml 20mmol/l roztoku peroxidu vodíka do série 10ml skúmaviek so zátkami, dobre pretrepte, pridajte 0,7 ml 0,2 mmol/L roztoku metylénovej modrej a potom pridajte 1,0 ml roztoku, ktorý sa má testovať, a vitamín C1,0 rôznych koncentrácií, zrieďte na 10.{30}} ml vody, dobre premiešajte, udržiavajte pri 37 stupňoch počas 30 minút a zmerajte hodnotu absorbancie každého roztoku pri 660 nm. Slepá skupina nahradila roztok vzorky vodou. Každá vzorka sa meria trikrát paralelne a berie sa priemerná hodnota. · Miera zachytávania OH radikálov vo vzorke (%)=[(A2-A1)/(A0-A1) × Vo vzorci 100 %: A0 -- absorbancia hodnota nepoškodenej rúrky; A1 - hodnota absorbancie poškodenej trubice; A2 -- Fotometrická hodnota po pridaní vzorky.
2.2.4 Skúška DPPH · vyplachovacia schopnosťCistanche deserticolapolysacharid
Vezmite {{0}},1 ml roztoku polysacharidu Cistanche deserticola a pridajte ho do 5,0 ml LDPPH · roztoku, rýchlo premiešajte a nechajte stáť 10 minút pri izbovej teplote,
Určte jeho zmenu absorbancie pri vlnovej dĺžke 517 nm [4]. Každá vzorka sa meria trikrát paralelne a berie sa priemerná hodnota. Miera klírensu vzorky DPPH · (%)=1 - [(AB)/A0] × Vo vzorci 100%: A0 -- hodnota absorbancie DPPH · (1,9 ml LDPPH ·+0,1 ml 50 % etanolu) bez vzorky; A - hodnota absorbancie vzorky po reakcii s DPPH ·; B -- hodnota absorbancie slepej vzorky (vzorka 0,1 ml+1,9 ml 50 % etanolu).
2.2.5Cistanche deserticolatest na zachytávanie polysacharidov singletovým kyslíkom 1O2
Jednoriadkový kyslík (1O2) sa vyrába chemickou reakciou NaClO a H2O2 pri 37 stupňoch [5]. Roztok použitý na stanovenie 1O2 je 100 μL 2,8 mmol/L roztoku NaClO, 400 μL5mmol/LNaOH roztok, 300 μL10mmol/LH2O2 roztok, 50 μL1mmol/Luminol. Počas reakcie sa reakčný roztok pridáva do roztoku vzorky a chemiluminiscenčný prístroj súčasne automaticky zaznamenáva priebeh reakcie. Vezmite NaClO-H2O2-NaOH-Luminol ako slepú kontrolu. Spustite reakciu a pridajte reakčný roztok do skúmavky so vzorkou zo zásobnej fľaše chemiluminiscenčného prístroja podľa množstva nastaveného postupom. Potom sa každých 5 sekúnd zaznamenáva intenzita chemiluminiscencie reakčnej zmesi na záznamový papier, každá vzorka sa meria trikrát paralelne a berie sa priemerná hodnota.
Miera uvoľnenia sa vypočíta podľa nasledujúceho vzorca: miera uvoľnenia (%)= (kontrolná intenzita osvetlenia – intenzita osvetlenia vzorky)/kontrolná intenzita osvetlenia × 100 %
3. Výsledky a diskusia
3.1 Čistiaci účinokCistanche deserticolapolysacharid na O-2 ·
Výhody cistanche tubulosa — Antiooxidant
Chemická vlastnosť O-2 · je aktívna, vďaka čomu môžu mastné kyseliny na biofilme produkovať peroxid a následne zničiť bunky [6]. V tomto článku sa na stanovenie schopnosti zachytávania O-2 · použila dopamínová metóda. Schopnosť vychytávať Cistanche deserticola na O-2 · je znázornená na obrázku 1. Výsledky ukázali, že polysacharid Cistanche deserticola môže inhibovať O-2 · produkovaný autooxidáciou dopamínu a zvyšuje sa so zvýšením koncentrácia v rámci nameraného koncentračného rozsahu (0-8mg/ml), ale schopnosť zachytávania bola nižšia ako schopnosť kyseliny askorbovej.
3.2 Čistiaci účinokCistanche deserticolapolysacharid · OH
·OH je jedným z najaktívnejších voľných kyslíkových radikálov v aktívnych formách kyslíka. Môže reagovať s takmer akoukoľvek biologickou makromolekulou v živých bunkách a môže viesť k biochemickým procesom, ako je peroxidácia lipidov, polymerizácia proteínov a depolymerizácia, štiepenie nukleových kyselín atď. v telesnom tkanive, čo spôsobuje ochorenia tkanív a buniek, čo vedie k výskytu rôznych chorôb a urýchľovanie starnutia organizmu [7]. Schopnosť zachytávania polysacharidu Cistanche deserticola na · OH je znázornená na obrázku 2. Výsledky ukázali, že polysacharid Cistanche deserticola mal dobrý zachytávací účinok na · OH a zvyšoval sa so zvyšujúcou sa koncentráciou.
3.3 Schopnosť zachytávať polysacharid Cistanche deserticola na DPPH ·
DPPH · (difenyl horký hydrazínový radikál) je stabilný voľný radikál, ktorý je v organickom rozpúšťadle purpurový a má silnú absorpciu blízko 517 nm. Po pridaní antioxidantov dochádza k odstráneniu niektorých voľných radikálov, čím sa oslabuje absorpcia, z čoho je možné vyhodnotiť antioxidačnú aktivitu tejto látky [8]. Pozri obrázok 3 pre DPPH · vychytávaciu kapacitu polysacharidu Cistanche deserticola. Experimentálne výsledky ukázali, že schopnosť zachytávania polysacharidu Cistanche deserticola na DPPH · pozitívne korelovala s jeho koncentráciou a kapacita zachytávania bola väčšia ako kapacita kyseliny askorbovej.
3.4 Schopnosť zachytávať polysacharid Cistanche deserticola na 1O2
Jednoriadkový kyslík je excitovaný molekulárny kyslík s aktívnymi chemickými vlastnosťami. Pretože nespárované elektróny majú tendenciu párovať sa, voľné radikály vykazujú aktívnejšie chemické vlastnosti [9]. Schopnosť zachytávania polysacharidu Cistanche deserticola voči 1O2 je znázornená na obrázku 4. Experimentálne výsledky ukázali, že schopnosť zachytávania polysacharidu Cistanche deserticola bola nižšia ako kapacita kyseliny askorbovej v rozsahu 0-4.0mg /ml a schopnosť zachytávania polysacharidu Cistanche deserticola bola vyššia ako kapacita kyseliny askorbovej, keď bola koncentrácia vyššia ako 4.0mg/ml.
4. Záver
Antioxidačná aktivita polysacharidov Cistanche deserticola in vitro bola podrobne študovaná prostredníctvom rôznych reaktívnych systémov bez kyslíkových radikálov.Z experimentálnych výsledkov je možné vidieť, že v rámci experimentálneho koncentračného rozsahu má polysacharidový extrakt z Cistanche deserticola vychytávacie účinky na O-2 ·, · OH, DPPH · a 1O2 a vychytávacie účinky sú rôzne pre rôzne systémov.Ukázali to výsledkyPolysacharid Cistanche deserticola je účinný exogénny prírodný antioxidant, ktorý je hodný ďalšieho výskumu, vývoja a komplexného využitia..
Cistanche tubulosa 200 mg— Antiooxidant
