Porovnávacia štúdia vlastností a mechanizmu proti starnutiu: Resveratrol a kalorické obmedzenie Ⅱ

Účinok resveratrolu a CR na expresiu mRNA SIRT1, p53 a Foxo3a v tkanivách starnúcich potkanov

Podmienky oxidačného stresučasto indukujú expresiu a aktivitu SIRT1. SIRT1 moduluje funkcie kľúčových faktorov prežitia vrátane p53 a Foxo3a [9]. Na stanovenie účinku resveratrolu a CR na hladiny mRNA SIRT1, p53 a Foxo3a u D-Gal-indukovaných starnúcich potkanov sa uskutočnili kvantitatívne testy RT-PCR. V porovnaní so zodpovedajúcou negatívnou kontrolnou skupinou boli hladiny expresie mRNA SIRT1 a Foxo3a významne znížené, ale hladina p53 bola významne zvýšená v skupine D-Gal (P < 0.01; obrázok 9A a 9B). Okrem toho súčasná liečba resveratrolom alebo CR s D-gal u potkanov spôsobila zvýšenie hladín expresie mRNA SIRT1 a Foxo3a, ale znížila hladiny p53 v porovnaní s modelovou kontrolnou skupinou (P < 0 0,05). Avšak v porovnaní s liečbou CR bola hladina expresie mRNA SIRT1 významne zvýšená v pečeni s vysokou dávkou resveratrolu plus D-gal, hladina expresie mRNA p53 bola významne znížená v pečeni a mozgoch s vysokou dávkou resveratrolu plus D- gal skupina (P < 0,05).

Kliknite sem a získajte doplnky proti starnutiu Cistanche

Účinok resveratrolu a CR na expresiu hlavného proteínu spojeného so SIRT1-v mozgových tkanivách starnúcich potkanov

FOXO3a a p53, ktoré sú regulované SIRT1, sú downstream molekuly SIRT1. Súčasne je aktivita SIRT1 regulovaná jeho upstream molekulami, napríklad DBC1 (tiež známy ako KIAA1967), AROS (tiež známy ako RPS19BP1) a tumor supresor HuR (tiež známy ako ELAVL1) [9, 10] . Na stanovenie účinku resveratrolu a CR na hladiny proteínov p53, FOXO3a, HuR, AROS a DBC1 u starnúcich potkanov indukovaných D-Gal sa uskutočnili testy western blot. V porovnaní so zodpovedajúcou negatívnou kontrolnou skupinou boli hladiny expresie proteínov FOXO3a, AROS a HuR významne znížené, ale hladiny p53 a DBC1 boli významne zvýšené v skupine D-gal (P < 0.01 Obrázok 10). Okrem toho súčasná liečba resveratrolom alebo CR s D-gal u potkanov spôsobila zvýšenie proteínových expresií FOXO3a, AROS a HuR, ale znížila hladiny p53 a DBC1 v porovnaní s modelovou kontrolnou skupinou (P < 0,05). Avšak v porovnaní s liečbou CR bola hladina expresie proteínu HuR významne zvýšená, ale hladina DBC1 bola významne znížená v mozgoch skupiny s vysokou dávkou resveratrolu plus D-gal (P < 0,05). Medzi skupinou resveratrol plus D-gal a skupinou CR plus D-gal neboli žiadne rozdiely v hladinách expresie proteínu p53, FOXO3a a AROS (P > 0,05).

Expresie FOXO3a a p53 v tkanivách mozgu a pečene

Stav expresie FOXO3a a p53 bol stanovený v mozgových a pečeňových tkanivách imunohistochémiou. Imunohistochemická analýza FOXO3a a p53 odhalila, že expresia FOXO3a v mozgových a pečeňových tkanivách bola významne znížená a expresia p53 bola významne zvýšená v skupine D-Gal v porovnaní s negatívnou kontrolnou skupinou (P < 0.{13} }5, obrázok 11). Okrem toho súčasná liečba resveratrolom alebo CR s D-gal u potkanov spôsobila zvýšenie expresie FOXO3a, ale zníženie expresie p53 v porovnaní s modelovou kontrolnou skupinou (P < 0,05). Neboli však žiadne rozdiely medzi skupinou resveratrol plus D-gal a skupinou CR plus D-gal v expresiách p53 a FOXO3a (P > 0,05).

DISKUSIA

Základný chemický proces, ktorý je základom starnutia, bol prvýkrát rozšírený oteória voľných radikálov starnutia[11] aoxidačný stressa považuje za primárny faktor v normálnom procese starnutia.Iniciátor voľných radikálov AAPHbol zvyknutývyvolať oxidačný stresa vytvoriť model oxidáciestresom vyvolané starnutie buniekv ľudských IMR-90 bunkách [12, 13]. Výhodou tejto metódy je, že AAPH sa tepelne rozkladá navytvárať radikálybez biotransformácií alebo enzýmov a rýchlosťradikálna generáciamožno ľahko kontrolovať úpravou koncentrácie iniciátora [12]. Zistilo sa, že AAPHinhibovať množenie ľudíIMR- 90 buniek spôsobom závislým od koncentrácie a času. Výsledky ukázali, že 2 d inkubácia s AAPH (1 mM) významne zvýšila percento SA-Gal pozitívneho pomeru, populáciu apoptotických buniek, znížila expresiu mRNA SIRT1 a vyvolala zväčšenú a sploštenú morfológiu. Tieto naznačovali, že oxidačný stres spôsobený AAPH viedol bunky IMR-90 k starnutiu. Na základe tohto modelu bunkovej senescencie liečba 10 uM resveratrolom účinnejšie inhibovala starnutie a apoptózu indukovanú AAPH ako liečba CR.

Zvierací model D-gal je medzinárodne uznávaný model starnutia zvierat a je široko používaný v oblastilieky proti starnutiu. D-gal je fyziologická živina, ktorá je u zvierat normálne metabolizovaná D-galaktokinázou a galaktózo-1-fosfátom. Avšak nadmerný prísun D-gal, ktorý nie je metabolizovaný vyššie uvedenými enzýmami, ale akumuluje sa v bunkách, vedie k oxidačnému stresu a poškodeniu buniek [14]. Dlhodobé podávanie D-gal teda vyvoláva zmeny, ktoré sa podobajú prirodzenému starnutiu u zvierat, ako je skrátená dĺžka života, kognitívna dysfunkcia, neurodegenerácia, oxidačný stres, znížené imunitné reakcie a pokročilá tvorba konečného produktu glykácie (AGE) [15]. Táto štúdia naznačila úspešné vytvorenie modelu mimetického starnutia, čo dokazuje pozoruhodné zhoršenie učenia a pamäti, produkcia MDA, akumulácia lipofuscínu, pokles T-AOC a SOD a zníženie aktivity telomerázy v mozgu. Medzitým liečba resveratrolom alebo CR chránila potkany vyvolané D-gal pred oxidačným stresom zvýšením aktivity antioxidačných enzýmov, znížením hladín produktov peroxidácie lipidov a udržiavaním rovnováhy oxidačných a antioxidačných systémov. V behaviorálnych testoch a testoch telomerázovej aktivity by liečba resveratrolom alebo CR mohla zvrátiť kognitívnu poruchu vyvolanú D-gal a aktivitu telomerázy. Okrem toho starnúci model potkanov liečených vysokými dávkami resveratrolu vykazoval relatívne výraznejší účinok na správanie ako potkany liečené CR.

Obrázok 11: Imunohistochemická analýza expresie p53 (A, B) a FOXO3a (C, D) v tkanivách pečene (A, C) a mozgu (B, D) starnúcich potkanov. Zväčšenie bolo 20x. NG, negatívna kontrolná skupina; MG, modelová kontrolná skupina; RESL, skupina s nízkou dávkou resveratrolu; RESH, skupina s vysokou dávkou resveratrolu; CR, kalorická reštrikčná skupina

Štúdie ukázali, že CR, zníženie príjmu výživnej stravy o 10–40 percent, by mohlospomaľuje starnutie a predlžuje životnosť, teda jedna bežne používaná hladina CR (40-percentné zníženie príjmu potravy) bola aplikovaná v skupine potkanov CR v tejto štúdii. Niektoré výskumy však odhalili, že CR nemá priaznivý vplyv na dlhovekosť u prirodzene starých primátov [16]. Podobne, aj keď sa ukázalo, že liečba resveratrolom vyvoláva účinky podobné CRenergetický metabolizmusa metabolický profil u obéznych ľudí [17], nezlepšil metabolickú funkciu u neobéznych žien s normálnou glukózovou toleranciou [18]. Dôvod rozdielov medzi týmito štúdiami nie je jasný, ale je možné, že CR a resveratrol pracujú na obnovení homeostázy u metabolicky oslabených jedincov a menej u zdravých jedincov, čo je možnosť konzistentná so známymi funkciami SIRT1 v štúdiách na zvieratách [19]. Preto sa použili modely starnutia potkanov vyvolaných D-gal na porovnanie anti-agingových aktivít resveratrolu alebo CR , skôr ako model prirodzene starého potkana.

SIRT1, (NAD plus)-dependentná deacetyláza, si získala veľkú pozornosť kvôli svojim viacnásobným úlohám pri predlžovaní dĺžky života, odolnosti voči stresu a redukcii apoptózy [20, 21]. Hromadné štúdie silne naznačujú, že SIRT1 bol kľúčovým cieľom resveratrolu a CR [22]. Existuje obrovské množstvo downstream molekúl SIRT1, vrátane p53, Foxo1, Foxo3, Foxo4 a E2F1, ktoré sú regulované SIRT1. Súčasne je aktivita SIRT1 regulovaná jeho upstream molekulami, napríklad p53, HIC1, E2F1, DBC1, HuR a AROS. Akútne odobratie živín aktivuje transkripčný program na promótore SIRT1, ktorý je riadený transkripčnými faktormi Foxo3a a p53. Keďže p53 potláča expresiu génu SIRT1, jeho odstránenie pomocou Foxo3a aktivuje transkripciu SIRT1 [23]. DBC1 a AROS boli nedávno opísané ako priame negatívne a pozitívne regulátory aktivity SIRT1, v uvedenom poradí, HuR ukazuje účinok zníženia hladín expresie SIRT1 v starnúcich senescentných bunkách [9, 10].

CRspomaľuje starnutie a predlžuje strednú a maximálnu dĺžku životau rôznych druhov, vrátane potkanov, myší, rýb, múch, červov a kvasiniek. Takéto prísne stravovacie programy u voľne žijúcich osôb však vyvolali etické a metodologické problémy [24]. V súčasnosti môže byť zvýšenie dĺžky zdravia dôležitejšie ako jednoduché predĺženie dĺžky života. Nedávne výskumy naznačujú, že resveratrol je jedným z najsilnejších stimulátorov aktivity SIR2 spomedzi všetkých rastlinných polyfenolov [25] a ovplyvňuje dlhovekosť prostredníctvom podobných mechanizmov, ako je vidieť pri obmedzení kalórií. Tieto výsledky ukázali, že CR a resveratrol mali podobné aktivity pri obnove hladín expresie mRNA SIRT1, zvyšovaní expresie proteínov FOXO3a, AROS a HuR a znižovaní hladín p53 a DBC1. Medzitým viaceré línie presvedčivých dôkazov naznačujú priaznivé účinky resveratrolu na neurologický, pečeňový a kardiovaskulárny systém.

MATERIÁLY A METÓDY

Bunková kultúra, stres a liečba

Ľudský diploidný fibroblastový kmeň IMR-90 bol získaný z ATCC. Bunky rástli v minimálnom esenciálnom médiu (MEM) (Gibco, UK) doplnenom 10 percentným fetálnym bovinným sérom (FBS) (Gibco) pri 37 stupňoch v 5 percentách CO2. Po dosiahnutí konfluencie sa bunky naočkovali do 6-jamkových kultivačných platní. O deň neskôr boli bunky ošetrené počas 48 hodín 1 mM 2,2'-azobis (2-amidinopropán) dihydrochloridom (AAPH) (Sigma, USA) zriedeným v MEM plus 10 percent FBS. 48-hodinová inkubácia s iniciátorom voľných radikálov AAPH vytvára model bunkovej starnutia vyvolanej oxidačným stresom [12, 13]. Kontrolné bunky boli inkubované v samotnom kultivačnom médiu. Po ošetrení AAPH boli IMR-90 premyté studeným fosfátovým pufrom (PBS) pH 7,4 a inkubované s čerstvým kultivačným médiom alebo kultivačným médiom obsahujúcim resveratrol (skupina resveratrolu) alebo MEM doplnené 3 percentami FBS (skupina CR) na ďalších 48 hodín pred zberom.

Aktivita farbenia SA -gal

Skontroloval sa výskyt biomarkerov starnutia (zníženie proliferačného potenciálu a zvýšenie zafarbenia SA-gal) [26] odo dňa po liečbe. Potom sa bunky zafarbili podľa pokynov výrobcu súpravy SA-gal na farbenie (CST, USA). Po zafarbení sa skúmalo najmenej 300 buniek v niekoľkých poliach a spočítali sa bunky pozitívne na SA-gal. Tieto experimenty sa opakovali trikrát a výsledky boli prezentované ako priemerné hodnoty so štandardnými odchýlkami (SD). Aby sa predišlo nešpecifickému farbeniu, pravdepodobne v dôsledku konfluencie buniek, histochemické farbenie SA-gal sa uskutočnilo so subkonfluentnými bunkami.

Analýza rastrovacím elektrónovým mikroskopom

Bunky boli pestované na krycích sklíčkach v 6-jamkových kultivačných platniach, ako je opísané vyššie. Po ošetrení resveratrolom a CR sa z platní odstránili krycie sklíčka, potom sa bunky fixovali v 2,5 % fosfátom pufrovanom glutaraldehyde a následne fixovali v 1 % pufrovanom oxide osmičelom. Fixované vzorky boli ponorené do t-butylalkoholu po dehydratácii pomocou odstupňovanej série etanolu. Vzorky boli lyofilizované z t-butylalkoholu, potom boli naparované zlatom pomocou automatického jemného poťahovania (JFC{10}}, JEOC, Japonsko) a skúmané pomocou skenovacieho elektrónového mikroskopu (JEOL, JSM{11} }LV, Japonsko).

Apoptotická analýza

Po inkubácii s resveratrolom alebo CR sa všetky bunky zozbierali s trypsínom a dvakrát sa premyli s PBS, potom sa resuspendovali v 400 ul väzbového pufra pre Annexin V. Potom sa bunky zafarbili podľa pokynov výrobcu súpravy na detekciu apoptózy buniek Annexin V-FITC (BestBio, Čína). Na detekciu fluorescencie sa použil prietokový cytometer FACSCalibur (Becton-Dickinson, San Jose, CA) a interným softvérovým systémom FACSCalibur sa vypočítalo percento apoptotických buniek. Pre každú stopu sa analyzovalo približne 104 buniek.

Postupy na zvieratách

Samce albínskych potkanov Wistar, vážiace približne 200 ± 10 g, boli získané z Experimentálneho zvieracieho centra Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology (SCXK 2010-0009). Zvieratá sa aklimatizovali 2 týždne pred podaním dávky v experimentálnom zvieracom centre na Univerzite čínskej medicíny Hubei, pričom počas tejto doby mali voľný prístup k potrave a vode ad libitum. Po aklimatizácii sa vybralo 50 potkanov a rozdelili sa do piatich skupín po desať. Zvieratá boli chované v súlade s národnými smernicami a protokolmi schválenými Inštitucionálnou etickou komisiou pre zvieratá (IAEC).

Potkany skupiny I (negatívna kontrolná skupina) dostávali samotné vehikulum (1 ml/kg telesnej hmotnosti 0,9 percent fyziologického roztoku) počas 6 týždňov. Skupina II (modelová kontrolná skupina) potkany dostávali D-gal (200 mg/kg telesnej hmotnosti, Sigma Chemical, St. Louis, MO) počas 6 týždňov. Skupina III (skupina s nízkou dávkou resveratrolu) potkany dostávali D-gal a resveratrol (50 mg/kg telesnej hmotnosti) rozpustený v 5 percentách dimetylsulfoxidu (DMSO) počas 6 týždňov. Skupina IV (skupina s vysokou dávkou resveratrolu) potkany dostávali D-gal a resveratrol (100 mg/kg telesnej hmotnosti). Potkany skupiny V (skupina CR) dostávali D-gal a CR (kŕmené stravou, ktorá mala o 40 percent menej kalórií ako potkany kŕmené ad libitum [27]) počas 6 týždňov. D-gal boli podávané intraperitoneálne, zatiaľ čo resveratrol bol podávaný perorálne počas celého trvania experimentu. Potkany sa usmrtili v posledný deň liečby, potom sa krv, sérum a orgány okamžite odobrali na biotest alebo sa skladovali pri -80 stupňoch na neskoršie použitie.

Behaviorálne testy

Morrisov test vo vodnom bludisku bol navrhnutý tak, aby zhodnotil kapacitu priestorového učenia a pamäte potkanov po 6 týždňoch po poranení [28]. Morrisov test vo vodnom bludisku pozostával z 4-dňového učenia a tréningu pamäte a testu sondy v deň 5. Zvieratá sa trénovali v kruhovom bazéne (priemer 155 cm) s vizuálnymi podnetmi. Úniková plošina (9.0 cm v priemere) bola ponorená 1,5{9}} cm pod hladinou bazénovej vody, ktorá bola udržiavaná na 25 ± 2 stupňoch . Umiestnenie platformy zostalo v strede severozápadného kvadrantu počas 4-dňového tréningového obdobia. Každý deň boli potkany trénované na jeden ranný blok a jeden popoludňajší blok. Potkan voľne plával, kým nenašiel plošinu do 120 s. Ak zlyhal, umiestnil sa na plošinu na 10 s. Zaznamenala sa úniková latencia (nájdenie ponorenej únikovej plošiny) a rýchlosť plávania. Skúška sondy sa uskutočnila odstránením plošiny a umožnením každého potkana voľne plávať 120 s v bazéne. Počet prekročení nástupišťa v trénovanom kvadrante (kde bola plošina odstránená) sa zaznamenal pomocou počítačového video systému. Verzia vodného bludiska na viditeľnej plošine sa neuskutočnila po tom, čo bol pozorovaný významný rozdiel v rýchlosti plávania medzi potkanmi liečenými D-gal a vehikulom.

Detekcia biologických indikátorov spojených s oxidačným stresom

Hladiny MDA, SOD a T-AOC v krvi a tkanivách boli stanovené fotometricky v súlade s protokolom výrobcu s použitím komerčne dostupných súprav pre enzymatické testy (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing City, PR Čína). Všetky experimenty opísané v tejto časti sa uskutočnili trojmo, aby sa získali priemery a SD.

Hladina lipofuscínu bola stanovená Sohalovou metódou [29]. Stručne povedané, odvážili sme 200 mg mozgovej kôry, pridali 2 ml chloroform-metanolového (2:1) extraktu, homogenizovali a prefiltrovali, potom sme zvyšok premyli extraktom, spojili filtráty, pridali extrakt do 5 ml a merala sa intenzita fluorescencie na fluorescenčnom spektrometri. Emisná vlnová dĺžka bola 435 nm a excitačná vlnová dĺžka bola 365 nm. Spektrofluorometer bol štandardizovaný tak, aby poskytoval odchýlku 50 pri vyššie uvedených vlnových dĺžkach s 1 ug/ml roztoku chinínbisulfátu v 0,1 M H2S04. Výsledky boli vyjadrené ako relatívne fluorescenčné jednotky/ml chloroformu/g hmotnosti vlhkého tkaniva.

Detekcia aktivity TE

Na extrakciu telomerázou sa približne 30 mg tkaniva dvakrát premyli v ľadovo chladnom PBS a nakoniec sa homogenizovalo v približne 150 ml PBS. Aktivita TE sa merala pomocou súpravy TE ELISA podľa pokynov výrobcu (Nanjing Sen Beijia Biological Technology Co., Ltd., Nanjing, Čína). Hranice citlivosti testov boli 0,8 IU/l pre TE.

RT-PCR analýza

Hladiny expresie mRNA SIRT1, Foxo3 a p53 v tkanivách pečene a mozgu sa analyzovali pomocou analýzy RT PCR. Celková RNA bola extrahovaná pomocou Trizolu a ich množstvo a čistota boli hodnotené ultramikrospektrofotometrom (Thermo Fisher Scientific, USA) na základe merania absorbancie pri 260 a 280 nm. Po kvantifikácii bola cDNA syntetizovaná pomocou súpravy FastQuant RT (Tiangen Biotech, Peking, Čína) podľa pokynov výrobcu. Hladiny expresie mRNA SIRT1, Foxo3, p53 sa merali pomocou RT-PCR s použitím TIANGEN SuperReal PreMix Plus (Tiangen Biotech, Peking, Čína) so špecifickými primérmi (tabuľka 2). Kvantitatívna PCR v reálnom čase sa uskutočnila pomocou systému LightCycler 480 stupňového PCR (Roche, Basel, Švajčiarsko) s použitím 20 ul ako celkového objemu každej reakcie. PCR amplifikácia sa začala 15 minútovou denaturáciou pri 95 stupňoch a potom nasledovalo 40 cyklov 95 stupňov počas 10 s, 59–63 stupňov (teplota žíhania) počas 20 s a 72 stupňov počas 30 s a konečná inkubácia pri 72 stupňa počas 5 min. Získané prahové číslo cyklu každého génu (hodnota Ct) bolo normalizované na násobok relatívnych zmien podľa rovnice metódy 2-∆∆CT [30].

Tabuľka 2: Zoznam primérov

Western blot analýza

Hladiny proteínovej expresie p53, FOXO3a, HuR, RPS19BP1 a DBC1 v mozgových tkanivách sa analyzovali pomocou analýzy westernovým prenosom. Celkový proteín mozgových tkanív bol extrahovaný pomocou RIPA Lysis Buffer (Beyotime, Čína) podľa pokynov výrobcu. Koncentrácie proteínov boli stanovené pomocou súpravy BCA Protein Assay Kit (Beyotime, Čína). 5 mg proteínov bolo oddelených pomocou 12 percent SDS-polyakrylamidových gélov a prenesených na PVDF membránu (0,45 μm, Millipore, USA). Bloty boli blokované 5 percentami odtučneného mlieka v TBS, potom inkubované cez noc pri 4 stupňoch s príslušným riedením primárnych protilátok: anti-p53 (SC- 6243, Santa Cruz Biotechnology), anti-FOXO3a (#12829, Cell Signalizačná technológia), anti-HuR (#12582, Cell Signaling Technology), anti-AROS (Ab201091, abcam), anti-DBC1 (#5857, Cell Signaling Technology), anti{25}} pôsobenie (AC004, ABClonal Technology) . Po premytí membrán, aby sa odstránil nadbytok primárnych protilátok, sa membrány inkubovali 1 hodinu pri teplote miestnosti s vhodnými sekundárnymi protilátkami v riedení 1:{29}}:5000 (AC004 alebo AS003, ABClonal Technology). Membrány sa premyli 3-krát a potom sa vizualizovali použitím substrátu Pierce ECL Western blotting Substrate (Thermo Scientific). -akcia bola použitá ako vnútorná kontrola.

Imunohistochémia

Vzorky tkaniva boli fixované v 10 percentnom neutrálnom pufrovanom formalíne do 1 hodiny po chirurgickom odstránení a zaliate do parafínu pomocou štandardných postupov. Potom boli fixované vzorky zaliate v parafíne narezané na rezy s hrúbkou 5- μm, ktoré boli zbavené parafínu v xyléne, rehydratované v etanole a ošetrené mikrovlnami na získanie antigénu. Vhodne zriedená primárna protilátka, anti-p53 (SC-6243, Santa Cruz Biotechnology) a anti-FOXO3a (č. 12829, Cell Signaling Technology), boli inkubované počas 60 minút pri teplote miestnosti vo vlhkej komore. Sklíčka boli potom opláchnuté v PBS a následne inkubované so sekundárnou protilátkou proti anti-králičej protilátke a vizualizáciou HRP (koncentrácia 1:300, #074-1506, KPL). Potom sa sklíčka premyli a rezy sa vyvolali v roztoku enzým-substrát diaminobenzidín (DAB, Sigma). Obrázky imunohistochemicky zafarbených rezov boli zachytené digitálnym mikroskopom Olympus (IX-73P1F, Olympus, Japonsko).

Štatistická analýza

Výsledky boli vyjadrené ako priemer ± SD pre najmenej tri nezávislé experimenty a boli analyzované pomocou softvéru SPSS 18.0. Skupinové rozdiely v únikovej latencii a rýchlosti plávania v úlohe výcviku vo vodnom bludisku Morris boli analyzované pomocou obojsmernej analýzy rozptylu (ANOVA) s opakovanými meraniami, faktormi boli liečba a tréningový deň. Ostatné údaje sa analyzovali pomocou jednosmernej ANOVA, po ktorej nasledoval post-hoc Tukeyov test. Hodnota P menšia ako 0,05 bola považovaná za významnú.

ZÁVERY

Resveratrol a CR vykazovali podobné aktivity proti starnutiu in vitro aj in vivo, čo dokazuje ich schopnosť inhibovať starnutie a apoptózu indukovanú AAPH a obnoviť kognitívne poškodenie súvisiace s vekom spôsobené podávaním D-gal. Ich mechanizmy proti starnutiu zahŕňali up-reguláciu aktivity TE, zníženie oxidačného poškodenia a reguláciu dráhy SIRT1. Celkovo 10 μM resveratrol in vitro a vysoká dávka resveratrolu in vivo vykazovali relatívne silnejšie aktivity proti starnutiu a stimuláciu hladín SIRT1. Tieto výsledky naznačujú potenciál resveratrolu ako mimetika CR.

Skratky

AAPH, 2,2'-azobis (2-amidinopropán) dihydrochlorid; AMPK, adenozínmonofosfátom aktivovaná proteínkináza; ANOVA, analýza rozptylu; AROS, aktívny regulátor SIRT1; CR, kalorické obmedzenie; DBC1, deletovaný pri rakovine prsníka 1; D-gal, D-galaktóza; FBS, fetálne hovädzie sérum; Foxo3a, vidlicová skrinka 3a; HuR, Hu antigén R; MEM, minimálne nevyhnutné médium; PBS, fyziologický roztok s fosfátovým pufrom; PGC-1, koaktivátor receptora G aktivovaný peroxizómovým proliferátorom-1; OZE, resveratrol; SA-gal, galaktozidáza spojená so starnutím; SD, štandardné odchýlky; SIRT1, regulátor tlmenia informácií; TE, telomeráza.

Autorské príspevky

Koncepcia a dizajn výskumu: Gang Chen; získavanie, analýza a interpretácia údajov: Juan Li, Xia Chun Zhang, Yi-Mei Liu; získanie financovania a kritickej revízie rukopisu pre intelektuálny obsah: Gang Chen, Ke-Li Chen; písanie rukopisu: Juan Li. Všetci autori si prečítali a schválili vydanie tohto rukopisu. POĎAKOVANIE A FINANCOVANIE

Táto práca bola financovaná China Postdoctoral Science Foundation (2016M601237), projekt Natural Science Foundation (81373704, 30873292).

KONFLIKT ZÁUJMOV

Žiadny konflikt záujmov všetkých zúčastnených autorov.

LITERATÚRA

1. Ramis MR, Esteban S, Miralles A, Tan DX, Reiter RJ. Kalkorické obmedzenie, resveratrol a melatonín: Úloha SIRT1 a dôsledky pre starnutie a súvisiace choroby. Mech Aging Dev. 2015; 146–148:28–41.

2. Colman RJ, Beasley TM, Kemnitz JW, Johnson SC, Weindruch R, Anderson RM. Kalorické obmedzenie znižuje úmrtnosť súvisiacu s vekom a mortalitu zo všetkých príčin u opíc rhesus. Nat Commun. 2014; 5:3557.

3. Sohal RS, Weindruch R. Oxidačný stres, kalorické obmedzenie a starnutie. Veda. 1996; 273:59-63.

4. Testa G, Biasi F, Poli G, Chiarpotto E. Mimetiká na obmedzenie kalórií a obmedzenie stravovania: stratégia na zlepšenie zdravého starnutia a dlhovekosti. Curr Pharm Des. 2014; 20:2950–77.

5. Lane MA, Roth GS, Ingram DK. Kalorické reštrikčné mimetiká: nový prístup k biogerontológii. Metódy Mol Biol. 2007; 371:143–9.

6. Baur JA, Pearson KJ, Price NL, Jamieson HA, Lerin C, Kalra A, Prabhu VV, Allard JS, Lopez-Lluch G, Lewis K, Pistell PJ, Poosala S, Becker KG a kol. Resveratrol zlepšuje zdravie a prežitie myší na vysokokalorickej diéte. Príroda. 2006; 444:337-42.

7. Lagouge M, Argmann C, Gerhart-Hines Z, Meziane H, Lerin C, Daussin F, Messadeq N, Milne J, Lambert P, Elliott P, Geny B, Laakso M, Puigserver P a kol. Resveratrol zlepšuje mitochondriálne funkcie a chráni pred metabolickými ochoreniami aktiváciou SIRT1 a PGC-1alfa. Bunka. 2006; 127:1109–22.

8. Howitz KT, Bitterman KJ, Cohen HY, Lamming DW, Lavu S, Wood JG, Zipkin RE, Chung P, Kisielewski A, Zhang LL, Scherer B, Sinclair DA. Malé molekulové aktivátory sirtuínov predlžujú životnosť Saccharomyces cerevisiae. Príroda. 2003; 425:191–6.

9. Kwon HS, Ott M. Vzostupy a pády SIRT1. Trends Biochem Sci. 2008; 33:517–25.

10. Brooks CL, Gu W. Ako SIRT1 ovplyvňuje metabolizmus, starnutie a rakovinu? Nat Rev Cancer. 2009; 9:123–8.

11. Harman D. Teória voľných radikálov starnutia. Mutat Re. 1992; 275:257-66.

12. Mayo JC, Tan DX, Sainz RM, Lopez-Burillo S, Reiter RJ. Oxidačné poškodenie katalázy vyvolané peroxylovými radikálmi: funkčná ochrana melatonínom a inými antioxidantmi. Free Radic Res. 2003; 37:543–53.

13. Hubacková S, Krejčíková K, Bartek J, Hodný Z. IL1- a signalizácia TGF -Nox4, oxidačný stres a reakcia na poškodenie DNA sú spoločnými znakmi replikatívnej, onkogénmi indukovanej a liekmi indukovanej parakrinnej 'bystkej starnutia '. Starnutie (Albany NY). 2012; 4:932–51. https://doi.org/10.18632/aging.100520.

14. Cui X, Zuo P, Zhang Q, Li X, Hu Y, Long J, Packer L, Liu J. Chronická systémová expozícia D-galaktóze vyvoláva u myší stratu pamäti, neurodegeneráciu a oxidačné poškodenie: Ochranné účinky R{{ kyselina lipoová. J Neurosci Res. 2006; 84:647-54.

Požiadajte o viac:

E-mail:wallence.suen@wecistanche.com whatsapp: plus 86 15292862950