Porovnávacia štúdia účinkov kurkumínu a jeho nanočastíc na rast, imunitu a odolnosť proti tepelnému stresu tilapie nílskej (Oreochromis Niloticus)

Táto štúdia hodnotila účinky doplnkov stravy s voľným alebo nanokurkumínom na rastový výkon, imunitný stav a odolnosť proti tepelnému stresu tilapie nílskej (Oreochromis niloticus). Pripravilo sa sedem izodusíkových (28 percent bielkovín) a izokalorických (445 kcal/10}0 g sušiny) diét. Šesť diét bolo doplnených tromi hladinami nanokurkumínu (50 (CN50), 100 (CN100), 200 (CN200) mg kg-1 diéta) alebo voľného kurkumínu (50 (C50), 100 (C100), 200 (C200 ) mg kg-1 diéty) a kontrolná diéta bola ponechaná bez aditíva (CON). Ryby (13,54 ± 0,32 g) (priemer ± SD) boli kŕmené experimentálnou stravou počas 65 dní.

Po pokuse s kŕmením boli ryby vystavené akútnemu tepelnému stresu postupným zvyšovaním teploty vody z 25 na 40 stupňov v priebehu 3 hodín. Ryba bola potom vystavená teplote 40 stupňov počas 4 hodín. Výsledky odhalili nadradenosť nano-kurkumínu nad jeho voľnou formou pri zvyšovaní výkonnosti rastu, pričom najvyššie výsledky sa dosiahli pri CN100, nasledované CN200. Iba tepelný stres, nie experimentálne diéty, zvýšil počet krvných doštičiek, stredný korpuskulárny objem (MCV), stredný korpuskulárny hemoglobín (MCH), počet leukocytov a neutrofilov, zatiaľ čo počet lymfocytov sa znížil.

Medzi odolnosťou voči tepelnému stresu a imunitou existuje úzky vzťah. Tepelný stres môže telu spôsobiť veľa problémov, ako je vysoká teplota, nízka teplota, hlad a hypoxia. Tieto výzvy môžu viesť k zmenám v intracelulárnom a extracelulárnom prostredí, ktoré spúšťajú stresovú reakciu tela. Po dlhom období adaptácie si telo dokáže vyvinúť silnejšiu odolnosť voči tepelnému stresu. Tepelný stres môže zároveň ovplyvniť imunitu. Po dlhšom tepelnom strese sa imunitný systém organizmu do určitej miery poškodí. Imunitný šok spôsobený tepelným stresom zvyšuje riziko infekcie u pacientov a znižuje funkciu imunitných buniek. Avšak mierny tepelný stres môže posilniť imunitu, pretože aktivuje samoliečiaci a imunitný systém tela. Preto mierny tepelný stres môže posilniť odolnosť a imunitu tela a zlepšiť adaptabilitu a mieru prežitia organizmov v zložitých prostrediach. Okrem biológie by sme sa my ľudia mali venovať aj zlepšovaniu imunity. Cistanche má výrazný vplyv na zlepšenie imunity. Cistanche je bohatá na množstvo rôznych antioxidačných látok, ako je vitamín C, vitamín C, karotenoidy atď. Tieto zložky dokážu zachytávať voľné radikály, znižovať oxidačný stres a zlepšovať odolnosť imunitného systému.

Kliknite na doplnok cistanche deserticola

Skupiny CN50 a CN100 vykazovali nižšiu aktivitu pečeňových enzýmov (alanínaminotransferáza (ALT) a aspartátaminotransferáza (AST)) ako iné liečby, zatiaľ čo C200 vykazovalo najvyššiu aktivitu týchto enzýmov. Najvyššie hladiny imunoglobulínu (IgM) boli zistené v CN100, CN200, C100 a C200, po ktorých nasledoval CN50. Skupina C200 vykazovala vyššie hladiny komplementu 3 a komplementu 4 (C3 a C4, v uvedenom poradí) ako iné liečby. Skupiny C50 a CON poskytli najnižšie hodnoty IgM, C3 a C4. Hladiny kortizolu boli významne nižšie v skupinách CN50 a CN100 v porovnaní s ostatnými skupinami. Po tepelnom strese sa zvýšili ALT, AST, IgM, C3, C4, kortizol a glukóza. Nanokurkumín je teda účinnejší ako jeho voľná forma pri zvyšovaní odolnosti voči tepelnému stresu, navodzovaní vrodenej imunity, znižovaní stresových indikátorov a pri podpore rastu tilapie nílskej s najlepšou koncentráciou pri 100 mg kg-1 stravy.

Druhým celosvetovo najbežnejším druhom Fsh produkovaným po kaprovi je tilapia nílska (Oreochromis niloticus) 1,2. Tilapia sa v súčasnosti pestuje vo viac ako 120 krajinách sveta2. Celosvetová produkcia tilapie sa odrazila z menej ako 0,5 milióna metrických ton (MMT) na začiatku 90. rokov na 6,03 MMT v roku 2018 s priemernou ročnou mierou rastu 13,5 percenta 2. Intenzívna kultúra tilapie ju však robí citlivou na rôzne stresové faktory, ako je tepelný stres (HS), hlavný dôsledok globálneho otepľovania3. Hoci tilapia nílska znesie široký rozsah teplôt (optimálny teplotný rozsah je 25–28 stupňov), teploty vody nad optimálnym rozsahom môžu potlačiť imunitný systém a poškodiť jeho antioxidačnú odpoveď4,5. HS potláča imunitný systém prostredníctvom bunkami sprostredkovaných a humorálnych imunitných reakcií6. Napríklad sa zistilo, že HS znižuje hladinu imunoglobulínov (IgG a IgM)7.

Primárne indikátory imunitnej odpovede (biele krvinky, červené krvinky, hemoglobín a glukóza) sú tiež ovplyvnené počas HS8. Pražma tuponosá (Megalobrama amblycephala Yih) po vystavení tepelnému stresu počas 6 hodín vykazovala zvýšený lyzozým, alternatívne aktivity komplementu, celkové proteíny a hladiny Ig M, preto sa tieto parametre znížili9. V dôsledku toho môže tepelný stres nepriaznivo ovplyvniť zdravie rýb, čo vedie k regresii rastu a vysokej úmrtnosti Fsh10. Posilnenie obranných mechanizmov rýb podávaním imunostimulantov v potrave sa stalo prioritou kontroly stresových faktorov v akvakultúre11. Medzi rôznymi imunostimulantmi liečivé byliny obsahujú chemické zložky, ktoré zvyšujú imunitu špecifickými alebo nešpecifickými cestami, vďaka čomu je zviera odolnejšie voči vonkajším stresorom12.

Kurkumín je oranžovo-žltá, hydrofóbna, bioaktívna rastlinná zložka a polyfenolová zlúčenina extrahovaná z kurkumy (Curcuma longa). Hlavnými aktívnymi zložkami kurkumínu sú diferuloylmetán (77 percent), demetoxykurkumín (17 percent) a bisdemetoxykurkumín (6 percent)13. Kurkumín má prekvapivo antivírusové, protiplesňové, protizápalové, antioxidačné a protirakovinové vlastnosti14–17. Kurkumín teda môže stimulovať vrodený imunitný systém v fsh18,19. Niekoľko štúdií preukázalo priaznivé účinky kurkumínu ako potenciálneho imunostimulačného a antioxidačného kandidáta v strave rôznych druhov rýb20–26. Zlá rozpustnosť vo vode a biologická dostupnosť však obmedzujú praktické aplikácie kurkumínu13.

Nedávno bol vyvinutý nanokurkumín, aby sa predišlo zlým dodávacím vlastnostiam kurkumínu a zvýšili sa jeho terapeutické účinky27. Na rozdiel od kurkumínu, ktorý tvorí zhluky kvôli svojej nízkej rozpustnosti vo vode, sa nanokurkumín úplne rozpúšťa vo vodnom prostredí a nevytvára žiadne zhluky kvôli prítomnosti zeta potenciálu27. V porovnaní s voľným kurkumínom vykazoval nanokurkumín vyššiu permeabilitu, dlhšiu cirkuláciu a lepšiu systémovú biologickú dostupnosť v plazme a tkanivách28–30

Podľa Jiang et al.31 kurkumín naplnený v nanosférach stimuloval jeho antioxidačné a imunologické aktivity. Tieto účinky môžu súvisieť s redukciou častíc na nanometrické meradlo, čo zabezpečuje udržateľné uvoľňovanie aktívnych materiálov a zvyšuje biologickú dostupnosť a úrovne molekulárnej disperzie31. Hoci neboli vykonané žiadne štúdie na porovnanie účinku nanokurkumínu s účinkom jeho voľnej formy na fsh, nedávno bol testovaný na vtákoch, ako je prepelica japonská (Coturnix japonica)32. Marchiori et al.32 zistili, že nano-zapuzdrený kurkumín zlepšil výkonnosť japonských prepelíc (Coturnix japonica) pri trojnásobne nižšej dávke ako voľný kurkumín, čo naznačuje potenciál nanomateriálov zlepšiť produkciu zvierat.

Doteraz nebol nanokurkumín testovaný v rybej strave. Preto sa táto štúdia zamerala na vyhodnotenie účinkov doplnkov stravy s voľnou alebo nano-formou kurkumínu na zlepšenie rastu, imunitného stavu a odolnosti proti tepelnému stresu u tilapie nílskej.

Materiály a metódy Experimentálne diéty.

Zloženie a chemická analýza experimentálnych diét sú uvedené v tabuľke 1. Pripravilo sa sedem izodusíkových (28 percent bielkovín) a izokalorických (445 kcal/100 g sušiny) diét. Šesť diét bolo doplnených tromi hladinami nanokurkumínu (50 (CN50), 100 (CN100), 200 (CN200) mg kg-1 diéta) alebo voľného kurkumínu (50 (C50), 100 (C100), 200 (C200 ) mg kg-1 diéty) a kontrolná diéta bola ponechaná bez aditíva (CON). Suché a jemne mleté ​​prísady boli dôkladne premiešané ručne pri pridávaní olejov. Potom sa všetky ingrediencie miesili postupným pridávaním teplej vody. Cesto sa peletizovalo pomocou mlynčeka na mäso s vhodným priemerom. Strava bola sušená na slnku a skladovaná pri -20 stupňoch v plastových nádobách.

Ryby a experimentálne zariadenia.

Mláďatá tilapie nílskej (Oreochromis niloticus) boli získané z komerčnej farmy neďaleko Alexandrie a chované v nádrži zo sklenených vlákien (1 m3) v laboratóriu na chov rýb v Národnom inštitúte pre oceánografiu a rybolov, pobočka Alexandria, Egypt. Stošesťdesiatosem fsh (13,54±{5}},32 g) bolo zarybnených do 21 sklenených akvárií (70 l akvárium-1) s hustotou 8 rýb na akvárium. Každé ošetrenie pozostávalo z 3 opakovaní (A, B a C). Ryby sa aklimatizovali na akváriá počas 2 týždňov a kŕmili sa kontrolnou stravou, aby sa prispôsobili experimentálnej strave. Ryby boli kŕmené experimentálnou stravou trikrát denne až do nasýtenia počas 65 dní. Dechlórovaná voda z vodovodu bola dodávaná do každého akvária s nepretržitým prevzdušňovaním. Množstvo krmiva spotrebovaného pri každom ošetrení sa vypočítalo týždenne z rozdielu v hmotnosti nádob na jedlo pred a po kŕmení. Fotoperióda bola nastavená na 12 h: 12 h svetlo: tma, resp. Parametre kvality vody boli monitorované každý týždeň počas trvania experimentu pomocou Hanna Aquaculture Multiparameter Photometer, HI83303. Teplota vody, rozpustený kyslík, amoniak-N a pH boli zaznamenané nasledovne; 25 ± 2,1 stupňa, 6,4 mg L-1, 0,05 mg L-1, respektíve 7,7. Po vystavení tepelnému stresu (40 stupňov) bol rozpustený kyslík a amoniak-N v akváriu 2,1 mg L-1, respektíve 0,62 mg L-1. Dve hodiny po kŕmení boli výkaly odstránené sifónom.

Etické vyhlásenie.

Experimenty sa uskutočňovali podľa pokynov načrtnutých a schválených Výborom Národného inštitútu pre oceánografiu a rybolov pre inštitucionálnu starostlivosť o vodné organizmy a experimentálne zvieratá (NIOF-IACUC), Egypt.

Prípravok kurkumín a nanokurkumín.

Kurkumín a nanokurkumín pripravilo výskumné oddelenie NanoTech Egypt pre fotoelektroniku a nanotechnológiu. Nanokurkumín bol pripravený redukčnou metódou, ako je opísané v Dhivya et al.33. Absorpčné spektrá UV-Vis sa získali na spektrofotometri Ocean Optics USB2000 plus VIS-NIR s vláknovou optikou. Na štúdium povrchovej morfológie a veľkosti nanočastíc sa použil transmisný elektrónový mikroskop s vysokým rozlíšením (TEM), JEOL JEM-2100. TEM zobrazovanie odhalilo takmer guľovitý tvar, hladký povrch a rovnomernú distribúciu veľkosti takmer 50 ± 5,5 nm nanokurkumínu (obr. 1). Distribúcia veľkosti častíc a zeta potenciál častíc nanokurkumínu boli stanovené prístrojom Zetasizer Malvern (Malvern, UK), verzia 7.13, sériové číslo: MAL 1203718. Zeta potenciál (mV) a odchýlka Zeta (mV) boli -25 0,0 a 4,16 (obr. 2).

Produktívny výkon.

Všetky ryby v každej nádrži sa zhromaždili a zvážili pred začatím a na konci pokusu s kŕmením. Rast, využitie krmiva a ďalšie biometrické indexy sa vypočítali podľa nasledujúcich rovníc:

Chemické zloženie tela.

Pred začiatkom pokusu o kŕmenie sa náhodne odobrali vzorky 10 rýb, ktoré sa zmrazili na -20 stupeň na biochemickú analýzu celého tela. Na konci pokusu s kŕmením sa na celotelovú biochemickú analýzu odobrali vzorky šiestich rýb na ošetrenie. Všetky vzorky boli okamžite zmrazené na -20 stupňov až do analýzy. Na vyhodnotenie obsahu surového proteínu, lipidu, vlhkosti a popola vo všetkých vzorkách sa použili metódy AOAC34.

Odber krvi.

Po experimente s kŕmením sa na analýzu krvi odobrali vzorky šiestich rýb na každé ošetrenie. Na anestéziu rýb sa použil klinčekový olej (0,1 ml L−1). Vzorky krvi (1 ml) sa odobrali z rybej chvostovej žily do plastových mikroskúmaviek obsahujúcich antikoagulant (kyselina etyléndiamíntetraoctová dvojdraselná, EDTA) na uchovanie vzoriek na použitie v hematologickom teste. Jeden ml krvi z každej vzorky sa odobral do mikroskúmaviek bez antikoagulantu a centrifugoval sa 10 minút pri 2500 x g, aby sa oddelilo sérum, ktoré bolo určené na biochemický test.

Hematologický test.

Erytrocyty, hematokrit (HCT), hemoglobín (HGB), stredný korpuskulárny objem (MCV), stredný korpuskulárny hemoglobín (MCH), stredná korpuskulárna koncentrácia hemoglobínu (MCHC), krvné doštičky (PLT), leukocyty a diferenciálne počty (neutrofily (NEUT), lymfocyty (LYMPH)), monocyty (MON), eozinofily (EO), bazofily (BAS) a nezrelé granulocyty (IG) sa spočítali pomocou automatického hemocytometra XE 2100 (Advia 2120 & Sysmex, Siemens). Všetky uvedené indexy boli hodnotené pred a po tepelnom strese.

Biochémia séra.

V sére vzoriek krvi sa analyzovali sérová alanínaminotransferáza (ALT), sérová aspartátaminotransferáza (AST), imunoglobulín M (IgM), komplementy 3 a 4 (C3 a C4, v uvedenom poradí), koncentrácie kortizolu a glukózy. Glukóza sa analyzovala podľa hexokinázovej metódy35 s použitím balenia Cobas (referenčné číslo, 04404483 190) prostredníctvom analyzátora Cobas-c 311, ID systému 0768316. Kortizol sa testoval na základe metódy tvorby príslušného imunitného komplexu36 prostredníctvom balenia elektrochemiluminiscenčného imunotestu "ECLIA" (referenčné číslo, 11875116 122) s použitím analyzátora imunoanalýzy Cobas-e. Analýza ALT sa uskutočnila pomocou Cobas C pack (referenčné číslo, 207649q57 322), analyzátora Cobas-C 311, ID systému 0,764,957. ALT sa detegovala podľa Bergmeyera a kol.37 a ECCLS38. ALT katalyzoval reakciu medzi L-alanínom a 2-oxoglutarátom. Te-formovaný pyruvát je redukovaný NADH v reakcii katalyzovanej laktátdehydrogenázou (LDH) za vzniku L-laktátu a NAD. Rýchlosť oxidácie NADH je priamo úmerná katalytickej aktivite ALT.

Stanovuje sa meraním poklesu absorbancie. AST vo vzorke katalyzoval prenos aminoskupiny medzi L-aspartátom a 2-oxoglutarátom za vzniku oxaloacetátu a L-glutamátu. Oxalacetát potom reagoval s NADH v prítomnosti malátdehydrogenázy (MDH) za vzniku NAD. Tento test sa riadil odporúčaniami IFCC, ale bol optimalizovaný podľa Bergmeyera a kol.37 a ECCLS38 s použitím Cobas c pack (referenčné číslo, 20764949322) prostredníctvom analyzátora Cobas-C 311. Systémové číslo 076494I. IgM bol stanovený na princípe imunologickej aglutinácie39 prostredníctvom Cobas c 311, systém ID 0767883 s použitím Cobas c pack (referenčné číslo, 03507190). IgM protilátky a antigény vo vzorke navzájom reagovali a vytvorili komplex antigén/protilátka. Po aglutinácii sa to meralo turbidimetricky pri sub/hlavnej vlnovej dĺžke: 700/340. C3 a C4 boli stanovené vytvorením zrazeniny pridaním špecifického antiséra a potom boli stanovené turbidimetricky pri sub/hlavnej vlnovej dĺžke: 700/34039. C3 sa meral pomocou Cobas c 311, systém ID 0765600 s použitím Cobas c pack (referenčné číslo, 03001938322). C4 sa analyzoval pomocou Cobas c 311, systém ID 0765619 s použitím Cobas c pack (referenčné číslo, 03001962322).

Tepelný stres.

Po ukončení experimentu s kŕmením bolo z experimentálneho skleneného akvária odobraných päť rýb z každého replikátu a prenesené do 0.{1}}tonovej nádrže zo sklenených vlákien obsahujúcej 7 vedľajších chovných jednotiek (7-). L perforované plastové valcové nádoby). Každá nádoba predstavuje repliku každého ošetrenia. Repliky A, B a C každého ošetrenia boli vystavené tepelnému stresu v prvý, druhý a tretí deň. Výzva tepelného stresu sa teda opakovala trikrát počas troch po sebe nasledujúcich dní. Teplota vody sa postupne zvýšila z 25 na 40 stupňov v priebehu 3 hodín. Teplota vody bola riadená umelým termostatom. Po vystavení 40 stupňom počas 4 hodín sa fsh z každej jednotky anestetizoval pomocou klinčekového oleja. Vzorky krvi sa odobrali na stanovenie ALT, AST, IgM, C3 a C4, hladín glukózy a kortizolu, ako aj hematologického počtu rýb.

Štatistická analýza.

Údaje o rastovej výkonnosti a využití krmiva boli spracované pomocou jednosmernej analýzy rozptylu (ANOVA). Na vyhodnotenie účinku tepelného stresu a experimentálnej stravy na ryby sa použila dvojcestná ANOVA. Na zoradenie prostriedkov sa použil Duncanov post hoc test. P Menšie alebo rovné 0.05 sa považovalo za štatisticky významné. Všetky štatistiky boli spracované pomocou balíka SPSS (verzia 23.0).

Vyhlásenie.

Všetky metódy sú uvedené v pokynoch ARRIVE 2.0.

Výsledky

Výkon rastu a využitie krmiva.

Výsledky rastu a využitia krmiva rýb kŕmených experimentálnou stravou sú uvedené v tabuľke 2. Najvyššia konečná hmotnosť (FW) a hmotnostný prírastok (WG) boli dosiahnuté u fsh kŕmených CN100, po ktorých nasledovali CN200 (P Menšie alebo rovné 0.05). Ryby kŕmené CN50 mali strednú FW a WG a boli podobné rybám kŕmeným C100 (P Väčšie alebo rovné 0.0 5). Najnižšie výsledky WG boli zaznamenané u fsh kŕmených CON, C50 alebo C200 (P menšie alebo rovné 0,05). Ryby kŕmené CN100 a CN200 vykazovali najvyššiu špecifickú rýchlosť rastu (SGR), po ktorej nasledovali CN50 a C100 (P menšie alebo rovné 0,05). SGR v CN200 kŕmených fsh sa však významne nelíšil od CN50 alebo C100 (P väčšie alebo rovné 0,05). Skupiny rýb CON, C50 a C200 produkovali najnižšiu SGR (P menšie alebo rovné 0,05). Najvyšší výsledok priemerného denného prírastku (ADG) bol zaznamenaný v skupine CN100, nasledovali skupiny CN200 a potom CN50 a C100 (P menšie alebo rovné 0,05). Skupiny CON, C50 a C200 vykazovali najnižšie hodnoty ADG (P menšie alebo rovné 0,05). Najvyšší príjem krmiva (FI) bol zaznamenaný v skupinách CN50, CN100, CN200 a C100, po ktorých nasledovali skupiny CON, C50 a C200 (P menšie alebo rovné 0,05). Najnižšia FCR bola detegovaná v CN100 a CN200, nasledovali CN50 a C100, zatiaľ čo najvyššie hodnoty FCR boli pozorované v CON, C50 a C200 (P menšie alebo rovné 0,05). Skupiny CN100 a CN200 poskytli najvyššie hodnoty pomeru proteínovej účinnosti (PER), nasledované CN50 a C100, zatiaľ čo najnižšie hodnoty boli produkované v CON, C50 a C200 (P menšie alebo rovné 0,05).

Chemické zloženie tela.

Výsledky približného chemického zloženia tilapie nílskej kŕmenej experimentálnym krmivom sú uvedené v tabuľke 3. Medzi rôznymi skupinami neboli žiadne významné rozdiely v sušine (P Väčšie alebo rovné 0.05 ). Najvyššie hodnoty surového proteínu (CP) boli získané v CN50, CN100, CN200 a C100, po ktorých nasledovali CON, C50 a C200 (P menšie alebo rovné do 0,05); avšak C50 sa významne nelíšil od CN50, CN100 a C100 (P väčšie alebo rovné 0,05). Všetky ošetrenia mali vyšší pomer surových lipidov ako CON (P menšie alebo rovné 0,05). Najvyššie výsledky popola boli zaznamenané v CON a C200, nasledovali C50 a najnižšie výsledky boli pozorované v CN50, CN100, CN200 a C100 (P menšie alebo rovné 0,05).

Hematologický rozbor.

Tabuľka 4 ukazuje hematologickú analýzu rýb po experimente s kŕmením pri 25 stupňoch a po tepelnom strese pri 40 stupňoch. Výsledky ukázali, že experimentálne diéty a tepelný stres významne ovplyvnili niektoré hematologické parametre (P menšie alebo rovné 0.05). Experimentálne diéty neovplyvnili hematologické počty (P Väčšie alebo rovné {{10} 0,05) s výnimkou C200, ktorá poskytla vyšší počet leukocytov a nižší počet neutrofilov v porovnaní s inými experimentálnymi diétami (P Menšia ako alebo rovný 0,05). Po tepelnom strese sa však zistil nárast počtu krvných doštičiek, MCV, MCH, leukocytov a neutrofilov, zatiaľ čo počet lymfocytov bol znížený (P < 0,05 alebo rovný 0,05) a nemal žiadny vplyv na ostatné hematologické parametre (P Väčšie alebo rovné 0,05).

Biochemická analýza krvi.

Výsledky biochemickej analýzy krvi pred a po tepelnom strese nílskej tilapie kŕmenej experimentálnymi diétami sú uvedené v tabuľke 5. Existuje výrazný vplyv diét a tepelného stresu na biochemické krvné parametre fsh (P menšie alebo rovnaké do 0.05). ALT vykázala najvyššiu aktivitu v C200, nasledovali CON a C100 a potom C50 a CN200, zatiaľ čo najnižšie hodnoty boli získané pri liečbe CN50 a CN100 (P menšie alebo rovné 0,05) . Najvyššia aktivita AST bola daná v C200, po ktorej nasledovali C100 a CON, nasledované C50, zatiaľ čo najnižšia aktivita bola zistená pri CN50, CN100 a CN200 ošetreniach (P menšie alebo rovné 0,05). Hodnota AST v CN200 sa však významne nelíšila od C50 (P väčšia alebo rovná 0,05).

Najvyššie hladiny IgM boli dosiahnuté v C200, C100, CN100 a CN20 0 nasledované CN50, zatiaľ čo C50 a CON poskytli najnižšie hodnoty (P menšie alebo rovné 0,05). C200 vykazoval najvyššiu hladinu C3, po ktorej nasledoval CN50 (P menšie alebo rovné 0,05), zatiaľ čo C100, CN100 a CN200 sa významne nelíšili od C200 alebo CN50 (P väčšie alebo rovné 0,05). C50 a CON poskytli najnižšie hodnoty pre C3 (P menšie alebo rovné 0,05). Najvyššie hodnoty C4 boli zistené v C200 a CN200, nasledovali CN50 a potom CN100 a C100, zatiaľ čo C50 a CON poskytli najnižšie výsledky (P menšie alebo rovné 0,05). C200 poskytla najvyššiu hodnotu kortizolu, nasledoval CON, nasledoval C100 a potom CN200 a C50 (P menšie alebo rovné 0,05). Najnižšie výsledky kortizolu boli zaznamenané pre CN50 a CN100 (P menšie alebo rovné 0,05). Glukóza získaná v C200 a CON bola vyššia ako pri iných ošetreniach (P menšie alebo rovné 0,05). Po tepelnom strese bolo pozorované zvýšenie ALT, AST, IgM, C3, C4, kortizolu a glukózy (P menšie alebo rovné 0,05).

Diskusia

V súčasnej štúdii viedlo kŕmenie tilapie nílskej na diétach obsahujúcich kurkumín k výrazne lepším výsledkom rastu v porovnaní s kontrolnou diétou. Okrem toho táto štúdia pozoruhodne odhaľuje nadradenosť nano-kurkumínu nad jeho voľnou formou pri zlepšovaní rastu tilapie nílskej. V súčasnej štúdii sa najlepší rastový výkon (WG, SGR a ADG) a využitie krmiva (FCR a PER) tilapie nílskej dosiahli pri dávke 100 mg kg-1, po ktorej nasledovala diéta 200 mg kg-1 nanokurkumínu. . To je v zhode s Mahmoudom a kol.23, ktorí zistili, že kŕmenie tilapie nílskej (Oreochromis niloticus) 50 alebo 100 mg kg-1 stravy kurkumínu zvýšilo rastový výkon a využitie krmiva. Toto zlepšenie rastu a využitia krmiva spájali so zlepšenými aktivitami tráviacich enzýmov (amyláza, proteáza, trypsín a lipáza)22,40. Okrem toho môže kurkumín posilniť ďalšie enzýmy (Na plus /K plus -ATPáza, črevná alkalická fosfatáza, gama-glutamyltranspeptidáza a kreatínkináza), ktoré sú zodpovedné za degradáciu a asimiláciu živín22. Okrem toho môže kurkumín pôsobiť ako prebiotikum, podporovať črevné fóra a zlepšovať trávenie a vstrebávanie čriev, čo vedie k zlepšeniu celkového zdravia a rastu fsh40. Pozitívne účinky suplementácie kurkumínu v potrave boli odhalené u rôznych druhov rýb, ako je amur (Ctenopharyngodon ideas)41, karas (Carassius auratus)22, veľký žltý chrapkáč (Pseudosciaene crocea)42, pstruh dúhový (Oncorhynchus a ázijský mykiss)17 morský vlk (Lates calcarifer)43.

Ako už bolo spomenuté, táto štúdia je lepšia pre nanočastice kurkumínu oproti voľnému kurkumínu pri zvyšovaní rýchlosti rastu tilapie nílskej. Inými slovami, nižšia dávka nanokurkumínu môže zvýšiť rastový výkon tilapie nílskej a poskytnúť rovnaké účinky ako vyššia dávka voľného kurkumínu. Napríklad diéta 50 mg kg-1 nano-kurkumínu mala rovnaké účinky ako diéta 100 mg kg-1 voľného kurkumínu. Na podporu nanokurkumínu sa ukázal 60-násobný nárast biologického polčasu v porovnaní s voľným kurkumínom na modeloch potkanov44. Okrem toho nanokurkumín vykazuje vyššiu systémovú biologickú dostupnosť v plazme a tkanivách v porovnaní s voľným kurkumínom30. Môže to byť spôsobené nízkou rozpustnosťou voľného kurkumínu vo vode; preto tvorí agregáty a je náchylný na opsonizáciu, zatiaľ čo nanokurkumín sa vďaka svojmu zeta potenciálu úplne rozpúšťa vo vode bez agregácií27.

Pridanie voľného kurkumínu a nanokurkumínu na najvyššej úrovni (200 mg kg-1 stravy) v súčasnej štúdii znížilo rastový výkon a využitie krmiva v porovnaní s CON. V skutočnosti je kurkumín polyfenol. Uvádza sa, že nízke dávky polyfenolov sa môžu bioakumulovať v telesných tkanivách, kde nie sú úplne absorbované v čreve45. Polyfenoly vo vysokých hladinách môžu spôsobiť regresiu rastu46. Tento účinok bol nižší pri liečbe nanokurkumínom, čo naznačuje, že nanokurkumín môže byť bezpečnejší ako jeho voľná forma. Na podporu Lee a kol.47 odhalili biologickú bezpečnosť využívania nanokurkumínu.

V tejto štúdii kurkumín a nanokurkumín zvýšili obsah hrubých bielkovín a lipidov v tele rýb. Podobne doplnok stravy s kurkumínom na úrovniach 50–200 mg kg-1 stravy významne zlepšil ukladanie hrubých lipidov a bielkovín vo svaloch nílskej tilapie23. Mohlo by to súvisieť s reguláciou črevnej mikrobioty, ktorá zvýšila efektívne využitie živín23. Ďalším vysvetlením by boli priaznivé účinky kurkumínu na aktivitu tráviacich enzýmov rýb vrátane trypsínu, lipázy a amylázy22. Navyše negatívne nabité častice, ako je nanokurkumín, spomaľujú rýchlosť adsorpcie sérových proteínov, čo vedie k dlhším polčasom cirkulácie ako kladne nabité častice48. To by mohlo vysvetliť, prečo strava kŕmená rybami obsahujúca nanokurkumín mala vyšší obsah hrubých bielkovín ako strava kŕmená rybami s voľným kurkumínom.

Akékoľvek zvýšenie aktivity pečeňových enzýmov, ako je ALT a AST, je biologickým markerom poškodenia pečene49,50. V tejto štúdii boli hladiny ALT a AST znížené v skupinách s nanokurkumínom buď pred alebo po tepelnom strese a do určitej miery v skupinách s voľným kurkumínom, čo dokazuje výhody nanokurkumínu (toto bolo odôvodnené skôr v tejto diskusii ). Podobne môže kurkumín zabrániť hepatotoxicite u potkanov vyvolanej peroxidom vodíka a znížiť hladiny enzýmov ALT a AST51. Okrem toho experimentálne výsledky na myšiach s fibrózou spôsobenou tetrachlórmetánom (CCl4) ukázali, že nanokurkumín významne znížil hladiny ALT a AST 52. Schopnosť kurkumínu znižovať niektoré krvné markery (ako sú ALT a AST) teda naznačuje jeho schopnosť pôsobiť proti -zápalové činidlo pri poškodení pečene53.

Napriek ochranným účinkom kurkumínu proti poškodeniu pečene v tejto štúdii pri strednej koncentrácii (100 mg kg-1 diéta), nepriaznivé účinky sa objavili pri vyššej koncentrácii (200 mg kg-1 diéta). Podľa rovnakého vzoru kurkumín tiež vykazoval účinok závislý od koncentrácie u obrovského kapra (Cyprinus carpio), ktorý trpel poškodením pečene vyvolaným CCl54. Podobne sa zistilo, že kurkumín má dvojaké účinky na alkoholické poškodenie pečene u samcov potkanov v závislosti od koncentrácie, pretože jeho ochranný účinok sa dosiahol len pri nízkej koncentrácii, ale zrýchlenie poškodenia pečene bolo pozorované pri vyššej koncentrácii 55. Ďalšia štúdia v r. potkany naznačili, že vysoká koncentrácia pri dlhodobom príjme kurkumínu môže znížiť telesnú hmotnosť, urýchliť oxidačný stres a zápal a stimulovať poškodenie pečene pri súčasnom zvýšení hladín AST a -GGT56.

Dvojitý účinok kurkumínu môže súvisieť s jeho schopnosťou stimulovať hemoxygenázu-1 (HO-1) v netoxických a toxických koncentráciách a indukcia HO-1 je spojená s produkciou reaktívne formy kyslíka (ROS), čo naznačuje kauzálny vzťah57. Podobne Cao et al.58 zistili, že pri nižších koncentráciách má kurkumín priaznivé účinky tým, že vyvoláva antioxidačné aktivity; vyššie koncentrácie však zvyšujú bunkové hladiny ROS, čo vedie k oxidačnému poškodeniu DNA v bunkách ľudského hepatómu G2.

Tepelný stres zvyšuje ukazovatele stresu, ako sú hladiny kortizolu a glukózy. V súčasnej štúdii zahrnutie kurkumínu (okrem vysokej dávky 200 mg kg-1 diéty) alebo nano-kurkumínu do stravy s tilapiou znížilo glukózu aj kortizol buď pred alebo po tepelnom strese. Najlepšie hladiny kortizolu boli zistené pri CN50 a CN100. To je pravdepodobne odôvodnené povahou kurkumínu ako polyfenolu. Ukázalo sa, že polyfenoly zlepšujú indikátory stresu kortizol a glukózu59,60). Tieto účinky možno pripísať aj antioxidačným vlastnostiam kurkumínu, o ktorom sa zistilo, že odstraňuje lipidové radikály v bunkovej membráne a stáva sa fenoxylovým radikálom14,61. Okrem toho kurkumín znižuje hladiny glukózy v pečeni zvýšením vychytávania glukózy prostredníctvom upregulácie génových expresií GLUT2, GLUT3 a GLUT462. Na podporu, Wei et al.63 odhalili, že kurkumín v potrave významne znížil stresom vyvolaný kortizol o jednu tretinu u ošípaných.

V tejto štúdii však vyššia koncentrácia kurkumínu (diéta 200 mg kg-1) viedla k vyššej hladine kortizolu v porovnaní s inými liečbami, vrátane kontrolnej skupiny. Súčasne C200 produkoval vyššiu hladinu glukózy podobnú tej, ktorú získala kontrolná skupina. Rovnaký účinok bol zaznamenaný u nosníc, kde vyššie dávky kurkumínu neznížili kortizol v porovnaní s nižšími koncentráciami, ktoré znižovali hladiny kortizolu pred alebo po vystavení vysokej teplote 64. Autori spojili tento účinok s potenciálom dvojakého účinku kurkumínu, pretože môže pôsobiť ako antioxidant a/alebo oxidant v závislosti od jeho dávky65. Vysoká koncentrácia peroxidov zvyšuje uvoľňovanie ROS, ktoré poškodzuje bunky a tkanivá65.

V tejto štúdii experimentálne diéty neovplyvnili hematologické počty, s výnimkou C200, ktorá poskytla vyššie leukocyty a nižšie neutrofily v porovnaní s inými experimentálnymi diétami. Zvýšený počet leukocytov pri vysokej hladine kurkumínu (200 mg/kg stravy) môže zdôrazniť stresový stav rýb pri tejto koncentrácii. Leukocytóza je priamo úmerná závažnosti stresu, ako aj poškodeniu zo stresu, ktoré následne spúšťa imunitný obranný systém 66,67.

Teplota ovplyvňuje hematologické parametre vo fsh68. V tomto ohľade sa po tepelnom strese zvýšil počet krvných doštičiek, MCV, MCH, leukocytov a neutrofilov, zatiaľ čo počet lymfocytov sa znížil, a v súčasnej štúdii nebol žiadny vplyv na iné krvné parametre. Na podporu toho Grzelak et al.69 uviedli významnú lymfopéniu a neutrofíliu u akútne stresovaných zebričiek (Danio rerio) v porovnaní s nestresovanými alebo kontrolnými fsh. Okrem toho tepelný stres vedie k hypoxii alebo anoxii70, 71 a tento účinok bol uvedený v tejto štúdii. Na druhej strane sa zistilo, že hypoxia zvyšuje počet leukocytov, krvných doštičiek a neutrofilov a znižuje počet lymfocytov v červenej tilapii 72. To môže súvisieť so zvýšenou hladinou kortizolu 72. Neutrofília a lymfopénia boli zjavné po liečbe kortizolom u kaprov (C. carpio L.)73. Karas (Carassius carassius) po vystavení stresu produkoval vysoký pomer neutrofilov k lymfocytom v krvi, čo úzko súvisí so zvýšenými hladinami glukokortikoidov 74.

Imunoglobulín M a komplementy (C3 a C4) sú hlavnými zložkami vrodeného imunitného systému rýb a patria medzi prvé línie obrany imunitného systému a zohrávajú kľúčovú úlohu pri ochrane zdravia rýb75–78. IgM a komplementy hrajú dôležitú úlohu pri ochrane zvieracieho tela pred infekciou počas stresu, ako aj pri podpore pohltenia apoptotických a poškodených buniek79–82. V skutočnosti pred a po tepelnom strese v tejto štúdii sa hladiny IgM, C3 a C4 zvýšili so zaradením kurkumínu do stravy. Navyše, nanokurkumín vykázal lepšie zlepšenie v týchto ukazovateľoch ako voľný kurkumín. Tu prezentované výsledky pre IgM, C3 a C4 zdôrazňujú dva fakty: nízka dávka kurkumínu je lepšia a nanoformulácia je účinnejšia (čo bolo odôvodnené skôr v tejto diskusii). Na podporu kurkumínu indukovala vrodenú imunitnú odpoveď nílskej tilapie v dávke 50 mg kg-1 stravy, ale rast bol inhibovaný na vyšších úrovniach23. Táto štúdia zistila, že hladiny IgM, C3 a C4 sa zvyšovali so zvýšenou teplotou, čo odhalilo stimuláciu produkcie protizápalových látok na zníženie poškodenia tkaniva. Toto je podporené výsledkami sérových pečeňových enzýmov (ALT a AST) v tejto štúdii. Je známe, že tepelný stres spôsobuje poškodenie tkaniva a oxidačný stres u rýb; teda vedie k apoptóze a bunkovej smrti83–85. Krátkodobý akútny tepelný stres vedie k up-regulácii C3 a C486. Okrem toho nedostatok komplementového systému zvýšil vaskulárne poškodenie, vaskulárnu permeabilitu a angioedém 87.

Postupné zvyšovanie plazmatických hladín IgM bolo pozorované so zvyšujúcou sa teplotou (18, 23, 28, 33 stupňov) pri nílskej tilapii s výnimkou najvyššej teploty10. Podobne chov morského ostrieža (Dicentrarchus labrax) pri vysokej teplote (23 stupňov) zvýšil ich hladiny IgM v porovnaní s chovom rýb pri teplote 17 stupňov 88. Naopak, iné štúdie odhalili, že HS znížilo hladiny IgM, C3 a C4 v fsh89– 91. Tento nesúlad môže byť odôvodnený trvaním tepelného stresu, kde sa hladiny IgM, C3 a C4 zvyšujú pri akútnom strese, ale znižujú sa pri chronickom strese9,10. Pražma tupá (Megalobrama amblycephala Yih) vykazovala zvýšenie aktivít alternatívneho komplementu a hladín IgM po 6 hodinách vystavenia tepelnému stresu, ktoré sa znížili po 12 hodinách9.

Záverom možno povedať, že nanokurkumín má prevahu nad voľným kurkumínom pri zlepšovaní výkonnosti rastu, stresových indikátorov, nešpecifickej imunity a odolnosti proti tepelnému stresu tilapie nílskej. Výživový doplnok nanokurkumínu na úrovni 50 alebo 100 mg kg-1 stravy bol účinný pri zlepšovaní výkonnosti a zmierňovaní negatívnych účinkov tepelného stresu, zatiaľ čo dávky 100 alebo 200 mg kg-1 diéty zlepšovali rastový výkon tilapie nílskej. . Dávka 100 mg kg-1 stravy bola teda účinná pre rastový výkon aj tepelnú odolnosť.

Dostupnosť údajov

Všetky údaje generované alebo analyzované počas tejto štúdie sú zahrnuté v tomto publikovanom článku.

Referencie

1. Wang, M. & Lu, M. Tilapia polykultúra: Globálny prehľad. Aquacult. Res. 47, 2363 – 2374 (2016).

2. FAO (Organizácia OSN pre výživu a poľnohospodárstvo). 2020. Globálna produkcia akvakultúry 1950–2020.

3. Bao, JW a kol. Reakcie biochémie krvi, zloženia mastných kyselín a expresie mikroRNA na tepelný stres v geneticky vylepšenej chovanej tilapii (Oreochromis niloticus). J. Termín. Biol. 73, 91 – 97 (2018).

4. El-Sayed, AFM Tilapia Culture 2nd end, 348 (Elsevier/Academic Press, 2020).

5. Dawood, MAO, Eweedah, NM & Elbialy, ZIA Diétny butyrát sodný zlepšil biomarkery krvného stresu, proteíny tepelného šoku a imunitnú odpoveď tilapie nílskej (Oreochromis niloticus) vystavenej tepelnému stresu. J. Termín. Biol. 88, 102 500 (2020).

6. Bagath, M. a kol. Vplyv tepelného stresu na imunitný systém dojného dobytka. Rev. Res. Vet. Sci. 126, 94 – 102 (2019).

7. Chu, GM & Song, YM Rastová výkonnosť, krvné charakteristiky a imunitné reakcie ošípaných vo výkrme v rôznych ročných obdobiach. Ázijčan J. Anim. Vet. Adv. 8(5), 691-702 (2013).

8. Das, R. a kol. Vplyv tepelného stresu na zdravie a úžitkovosť dojných zvierat: Prehľad. Vet. Svet. 9, 260 – 268 (2016).

9. Zhang, C.-N. a kol. Účinky fruktooligosacharidu na imunitnú odpoveď, antioxidačnú schopnosť a expresiu HSP70 a HSP90 u pleskáča tupého (Megalobrama amblycephala Yih) pri vysokom tepelnom strese. Akvakultúra 433, 458–466 (2014).

10. Dominguez, M., Takemura, A., Tsuchiya, M. a Nakamura, S. Vplyv rôznych environmentálnych faktorov na hladiny cirkulujúceho imunoglobulínu v nílskej tilapii, Oreochromis niloticus. Aquaculture 241, 491e500 (2004).

11. Galina, J., Yin, G., Ardo, L. & Jeney, Z. Použitie imunostimulačných bylín u rýb: Prehľad výskumu. Fish Physiol, Biochem. 35, 669-676 (2009).

12. Vallejos-Vidal, E., Reyes-López, F., Teles, M. & MacKenzie, S. Odozva fsh na imunostimulačné diéty. Fish Shellfish Immunol. 56, 34 – 69 (2016).

13. Lee, WH a kol. Kurkumín a jeho deriváty: ich využitie v neurofarmakológii a neurovede v 21. storočí. Curr. Neuropharmacol. 11, 338 – 378 (2013). 14. Ak, T. Antioxidačné a radikálové zachytávacie vlastnosti kurkumínu. Chem. Biol. Interagujte. 174, 27-37 (2008).

15. Aggarwal, BB & Harikumar, KB Potenciálne terapeutické účinky kurkumínu, protizápalového činidla, proti neurodegeneratívnym, kardiovaskulárnym, pľúcnym, metabolickým, autoimunitným a neoplastickým ochoreniam. Int. J. Biochem. Cell Biol. 41, 40-59 (2009).

16. Yuan, J., Liu, R., Ma, Y., Zhang, Z. & Xie, Z. Kurkumín zmierňuje zápal dýchacích ciest a pretváranie dýchacích ciest inhibíciou signalizácie NF-kB a COX-2 v cigaretovom dyme- u myší s indukovanou CHOCHP. Zápal 41, 1804–1814 (2018).

17. Yonar, EM, Yonar, SM, İspir, Ü., Ural, M. & Ş.,. Účinky kurkumínu na hematologické hodnoty, imunitu, antioxidačný stav a odolnosť pstruha dúhového (Oncorhynchus mykiss) proti Aeromonas salmonicida subsp. achromogény. Fish Shellfish Immunol. 89, 83 – 90 (2019).

18. Leya, T. a kol. Účinky stravy doplnenej kurkumínom na rast a nešpecifické imunitné parametre Cirrhinus mrigala proti infekcii Edwardsiella tarda. Int. J. Curr. Microbiol. 6, 1230 – 1243 (2017).

19. Negi, PS, Jayaprakasha, GK, Rao, LJM & Sakariah, KK Antibakteriálna aktivita kurkumového oleja: Vedľajší produkt pri výrobe kurkumínu. J. Agric. Food Chem. 47, 4297-4300 (1999).

20. Mandal, MNA a kol. Kurkumín chráni bunky sietnice pred bunkovou smrťou vyvolanou svetlom a oxidačným stresom. Voľný Rad. Biol. Med. 46, 672-679 (2009).

21. Prasad, S., Gupta, SC, Tyagi, AK & Aggarwal, BB Kurkumín, zložka zlatého korenia: od postele k lavičke a späť. Biotechnol. Adv. 32, 1053 – 1064 (2014).

22. Jiang, J. a kol. Účinky doplnkového kurkumínu v potrave na rastový výkon, aktivity črevných tráviacich enzýmov a antioxidačnú kapacitu karasa Carassius auratus. Akvakultúra 463, 174–180 (2016).

23. Mahmoud, HK, Al-Sagheer, AA, Reda, FM, Mahgoub, SA & Ayyat, MS Výživový doplnok kurkumínu ovplyvňuje rast, imunitu, antioxidačný stav a odolnosť voči Aeromonas hydrophila u Oreochromis niloticus. Akvakultúra 475, 16–23 (2017).

24. Umamaheswari, M. & Krishnamurthy, R. Imunomodulačné účinky kurkumínu (Curcuma longa) na sladkovodné jedlé ryby Catla catla (Hamilton-Buchanan). Int. J. Adv. Sci. Res. Manag. 3, 115 – 118 (2018).

25. García-Pérez, OD a kol. Účinky konjugovanej kyseliny linolovej a kurkumínu na rastový výkon a enzýmy oxidačného stresu v krmive pre juvenilné tichomorské biele krevety (Litopenaeus vannamei) s aflatoxínmi. Aquacult. Res. 51, 1051 – 1060 (2020).

26. Li, L., Zhang, Z. & Huang, Y. Integračná transkriptómová analýza a objav signálnych dráh zapojených do ochranných účinkov kurkumínu proti oxidačnému stresu v hepatocytoch tilapie. Aquat. Toxicol. 224, 105516 (2020).

27. Muller, RH & Keck, CM Výzvy a riešenia pre dodávanie biotechnologických liekov – prehľad technológie nanokryštálov liekov a lipidových nanočastíc. J. Biotechnol. 113, 151-170 (2004).

28. Mythri, RB, Jagatha, B., Pradhan, N., Andersen, J. & Bharath, MS Inhibícia mitochondriálneho komplexu I pri Parkinsonovej chorobe: ako môže kurkumín chrániť mitochondrie? Antiox. redoxný signál. 9, 399-408 (2007).

29. Sahni, JK, Baboota, S. & Ali, J. Sľubná úloha nanofarmák pri dodávaní liekov. Pharm. Times. 43, 16-18 (2011).

30. Zou, P., Helson, L., Maitra, A., Stern, ST & McNeil, SE Farmakokinetika a metabolizmus polymérnych nanočastíc kurkumínu u potkanov s kanylou do žlčovodu. Mol. Pharmaceut. 10, 1977 – 1987 (2013).

31. Jiang, Y., Chekuri, S., Fang, RH & Zhang, L. Inžinierske biologické interakcie na nanoúrovni. Curr. Opin. Biotechnol. 55, 1 – 8 (2019).

32. Marchiori, MS a kol. Kurkumín v strave prepelíc pri strese z chladu zlepšuje výkonnosť a kvalitu vajec. Anim. Feed Sci. Technol. 254, 114 – 192 (2019).

33. Dhivya, R., Rajendran, J. & Rajasekaran, M. PH responzívny kurkumín/ZnO nanokompozit na dodávanie liečiv. Adv. Mater. Lett. 6, 505 – 512 (2015).

34. AOAC (Asociácia oficiálnych analytických chemikov). Oficiálne metódy analýzy. AOAC, Arlington, Virgínia (1990).

35. Vrecia, DB sacharidy. In: Tietz NW (ed) Základy klinickej chémie. 4. vydanie WB Saunders, Philadelphia, str. 351–374 (1996).

36. Rosalki, S. Biochemické testovanie adrenokortikálnej funkcie. Int. J. Clin. Prax. 52, 189-191 (1998).

37. Bergmeyer, HU, Horder, N. & Rej, R. Schválené odporúčanie k metódam IFCC na meranie katalytickej koncentrácie enzýmov. Časť 2. Metóda IFCC pre aspartátaminotransferázu. J. Clin. Chem. Clin. Biochem. 24, 497-510 (1986).

38. ECCLS. Stanovenie koncentrácie katalytickej aktivity v sére L:aspartátaminotransferázy (EC 2.6.1.1, ASAT). Klin. Chem. Miti. 20, 198-204 (1989).

39. Tiez, NW, ed. Klinická príručka laboratórnych testov, 3. vydanie. Philadelphia: WB Saunders Company 354 – 357 (1995).

40. Midhun, SJ a kol. Modulácia tráviacich enzýmov, GH, IGF-1 a IGF{2}} génov v teleoste, Tilapia (Oreochromis mossambicus) diétnym kurkumínom. Aquacult. Int. 24, 1277 – 1286 (2016).

For more information:1950477648nn@gmail.com