Mapa metabolických fenotypov u pacientov s myalgickou encefalomyelitídou/chronickým únavovým syndrómom Ⅱ

Lipidómy ME/CFS

Komplexná analýza komplexných lipidov bola vykonaná v sére z rovnakej kohorty štúdie. zzahŕňalo 892 druhov lipidov, 153 vykazovalo významne odlišné sérové ​​koncentrácie v ME/CFSskupina v porovnaní so skupinou HC, z ktorých 34 malo nižšie hladiny a 119 malo vyššie hladiny (obrázok 6A; doplnkovéSúbor údajov 2, listy 2 a 4). Súhrnné koncentrácie lipidových tried indikovali zvýšenie diacylglycerolov(DAG), TAG a dihydroceramid (DCER) a zníženie lyzofosfatidylcholínov (LPC) vSkupina ME/CFS v porovnaní so skupinou HC (súbor doplnkových údajov 2, hárok 3). Avšak, zreteľné rozdielyv lipidovom profile boli evidentné pri podskupinách podľa navrhovaných metabotypov ME/CFS.Celkovo existovala rozsiahla koherencia medzi účinkami súvisiacimi s lipidmi pozorovanými na globálnu metabolomiku(HD4) a lipidomické platformy (komplexná lipidomická platforma [CLP]). Nasleduje zhrnutiejednotné a metabotypovo špecifické zmeny v sérových lipidoch u pacientov s ME/CFS v porovnaní s pacientmi s HC.Rovnomerné lipidomové účinky v skupine ME/CFS.Iba 16 z 892 druhov lipidov vykazovalo jednotné účinkyv podsúboroch ME-M1 a ME-M2 vzhľadom na skupinu HC (súbor doplnkových údajov 2, list 5). Z nich,13 zlúčenín malo nižšie koncentrácie v sére u pacientov s ME/CFS a všetky z nich boli odvodené od fosfolipidovlátky fosfatidylcholínu (PC) a fosfatidyletanolamínu (PE), vrátane LPC a lyzofosforytidyletanolamín (LPE). To zahŕňalo niekoľko PE plazmalogénových zlúčenín, ktoré predstavujú chemickya biologicky unikátna fosfolipidová podtrieda (49). Desať z 13 rovnomerne znížených druhov fosfolipidovobsahuje aspoň jednu acylovú časť 18:2, ktorá predstavuje kyselinu linolovú, esenciálnu mastnú kyselinu a arachidónprekurzor kyseliny icovej (20:4). Celkovo mala hladina kyseliny linolovej tendenciu byť nízka v podtriedach fosfolipidov(PC, PE, fosfatidylinozitol [PI], LPC a LPE; obrázok 6B). Iba 3 jednotlivé druhy lipidov boli jednotnézvýšené – sfingolipidy, CER(18:1), SM(18:0) a SM(18:1) – ešte ďalšie sfingolipidy sa ukázalipodobné trendy. Čo sa týka účinkov na celkový obsah mastných kyselín v sére (tj esterifikovaných a neesterifikovaných),jedinou významnou jednotnou zmenou v podskupinách ME-M1 a ME-M2 bola znížená úroveň 14:0 (obrázok 6B).Metabotyp ME-M1 lipidóm.Táto podskupina mala významne zvýšenú koncentráciu v sére 23 z 892a znížená hladina 227 z 892 lipidových metabolitov v porovnaní so skupinou HC (obrázok 6; doplnkovéSúbor údajov 2, hárok 6). Väčšina zvýšených metabolitov boli NEFA (18 z 25 meraných voľných mastných kyselín;Obrázok 6A), čo prispieva k vyššej celkovej koncentrácii NEFA. Zvyšných 5 zvýšených zlúčenín vpodskupina ME-M1 boli všetky sfingolipidy obsahujúce 18:0 alebo 18:1 (CER[18:0], CER[18:1], DCER[18:0],SM[18:0], SM[18:1]). 227 znížených metabolitov zahŕňalo prevažne druhy glycerolipidov (138TAG, 5 DAG, 2 monoacylglyceroly [MAG]) a fosfolipidy (79, vrátane 16 lyzofosfolipidov),okrem SM(14:1), SM(22;1) a CE(14:1). Hoci celková koncentrácia TAG nebola signifikantnáznížené v porovnaní so skupinou HC, znížené hladiny viacerých jednotlivých TAG sú v súlade s

Obrázok 6. Prehľad tried lipidov.Súbor údajov o sérových lipidómoch sa analyzoval na celkové porovnanie skupiny ME/CFS (ME/All) a 3 podsúborov metabotypov(M1–M3) vzhľadom na skupinu HC. (A) Grafy sopky poskytujú všeobecný prehľad všetkých molekúl lipidov v danej triede s –log10zP-hodnotanay os a log2 zložiť zmenu naxos. Každá bodka predstavuje metabolit a je zafarbená podľa smeru zmeny a úrovne významnosti vo vzťahu k HC asuvedené (P < 0.05,="" 2-tailed="" welch's="" test;="">q < 0.05,="" adjusted="">Phodnota). Číslo v každom kvadrante poskytuje príslušné počtyq- významné metabolitya ďalšiep-významné metabolity sú uvedené v zátvorkách. (B) Relatívne množstvo špecifických mastných kyselín (MK, prvý stĺpec) v rôznych lipidochtriedy (názov stĺpca) v celkovej skupine ME/CFS (dolné označenie, A) a podľa podsúborov metabotypov (M1–M3). Farba buniek tepelnej mapy zobrazujelog2 násobok zmeny vzhľadom na HC, ako je uvedené. *P< 0.05,="" 2-sledovaný="" welchov="" test;="">q< 0.05, upravenéP-hodnota. Total, celkový súčet mastných kyselín vo všetkých triedach lipidov;CE, ester cholesterolu; CER, ceramid; DAG, diacylglycerol; DCER, dihydroceramid; FFA, voľná mastná kyselina (synonymum pre neesterifikovanú mastnú kyselinu, NEFA); HCER,hexozylceramid; LCER, laktozylceramid; LPC, lyzofosfatidylcholín; LPE, lyzofosfatidyletanolamín; LPL, lyzofosfolipid; MAG, monoacylglycerol;PC, fosfatidylcholín; PE, fosfatidyletanolamín; PI, fosfatidylinozitol; PL, fosfolipidy, SM, sfingomyelín; SP, sfingolipidy; TAG, triacylglycerol.

pri laboratórnych meraniach bola pozorovaná relatívne nízka celková koncentrácia TAG v sére (obrázok 3D). Ďalejdošlo k významnému alebo trendovému poklesu v sumárnych koncentráciách fosfolipidov (PC, PI, trendpre PE) a lyzofosfolipidy (LPC, LPE) (súbor doplnkových údajov 2, list 3). Nebolo tam žiadne významnévplyv na celkové hladiny sfingolipidových podtried, ale bol tu trend nižšej celkovej hladiny DCER. Vfrakcie NEFA, došlo k určitému relatívnemu obohateniu (molárne percentá) mastných kyselín 16:1, 18:1 a 18:2.kyseliny, zatiaľ čo frakcia TAG mala výrazne nižší obsah mastných kyselín C12 a C14 (doplnokSúbor údajov 2, list 10).

Zistenia sú kompatibilné so zvýšenou mobilizáciou a oxidáciou tukovkyseliny, ako naznačujú zvýšené koncentrácie voľných mastných kyselín, glycerolu a ketolátok. Pozorovanézmeny v podskupine ME-M1 môžu napodobňovať metabolické adaptácie, o ktorých je známe, že sa vyskytujú v reakcii na energiuzáťaž vyvolaná hladovaním alebo cvičením (50, 51). Teoreticky by takáto reakcia mohla byť spôsobená aberantomregulácia katabolizmu glukózy, chronický vysoký dopyt po ATP alebo odpojenie mitochondriálneho dýchaniačo vedie k nadmernému oxidačnému toku a neefektívnej produkcii ATP.Metabotyp ME-M2 lipidóm.Táto podskupina mala vyššie koncentrácie 538 z 892 lipidových zlúčenín anižšie koncentrácie 27 z 892 v porovnaní so skupinou HC (obrázok 6; súbor doplnkových údajov 2, list7). Prevažná väčšina zvýšených zlúčenín boli rôzne druhy buď TAG (454 druhov) alebo DAG(43 druhov; obrázok 6); v súlade s tým boli významne vyššie celkové sérové ​​koncentrácie týchto 2 lipidovtriedy. Vyskytli sa aj vyššie hladiny niektorých jednotlivých druhov – a celková triedna koncentrácia – cholesteroluestery. Viacnásobné jednotlivé fosfolipidy (25 druhov PC, PE a PI) a sfingolipidy (8 druhov SM,CER, DCER a HCER) boli zvýšené, ale hlavne celkové koncentrácie týchto tried zlúčenínneovplyvnené, okrem triedy PI, ktorá predstavuje významný nárast v porovnaní so skupinou HC (doplnkovéSúbor údajov 2, list 3).

Podobne ako v podskupine ME-M1 sa nezistil žiadny významný vplyv na celkové hladiny sphinpodtriedy golipidov. Niekoľko jednotlivých NEFA (10 druhov) malo nižšie koncentrácie v sére v podskupine ME-M2v porovnaní so skupinou HC, čo prispieva k nižšej celkovej úrovni NEFA. Čo sa týka prítomnosti fosfolipidovnižších úrovniach boli účinky v podstate v súlade so zmenami, ktoré už boli v ME/skupina CFS. Zvýšená koncentrácia TAG v sére a znížená koncentrácia NEFA v podskupine ME-M2v porovnaní so skupinou HC boli potvrdené v doplnkových laboratórnych analýzach (tabuľka 2 a obrázok 3D).V súlade s vyššími hladinami TAG a DAG došlo k všeobecnému zvýšeniu esterifikovaných mastných kyselíntieto glycerolipidy v celom spektre mastných kyselín (obrázok 6B). Stručne povedané, metabolický fenotyp tohtopodskupina bola charakterizovaná najmä vysokou sérovou koncentráciou TAG (ženy) a nízkou NEFA (obepohlavia). Zvýšený transport TAG a DAG v krvi je často spojený s metabolickou nerovnováhou, nadmernýmperiférna akumulácia lipidov a indukcia bunkových a mitochondriálnych stresových reakcií. Takéto účinky majúboli opísané ako následky rôznych chronických ochorení, ktoré zahŕňajú aj kontexty zápalu (34).Metabotyp ME-M3 lipidóm.Táto malá podskupina mala vyššie koncentrácie 22 z 892 lipidov a nízkekoncentrácie 5 z 892 lipidov v porovnaní so skupinou HC (obrázok 6A; súbor doplnkových údajov2, list 8). Zvýšenie bolo primárne pozorované pre určité estery cholesterolu (7 druhov) a fosfolipidy (12druhy). Pozoruhodné je, že hladina 6 PE plazmogénov v sére bola vyššia v tejto podskupine, čo kontrastovaloúčinky na túto fosfolipidovú podtriedu v 2 ďalších podskupinách ME/CFS. Niekoľko lipidov predstavuje nižšie sérumkoncentrácia v podskupine ME-M3 v porovnaní so skupinou HC zahŕňala 2 druhy NEFA (FFA[14:0],FFA[20:4]) a 3 deriváty PC (LPC[20:2], PC[16:0/22:4], PC[18:1/20:2]). Táto podmnožina sa zobrazila vyššiecelková hladina SM a trendy vyšších hladín esterov celkového cholesterolu a PE v porovnaní so skupinou HC.Zistilo sa relatívne málo účinkov týkajúcich sa zloženia mastných kyselín rôznych tried lipidov (obrázok 6B).Zdalo sa, že niekoľko ovplyvnených jednotlivých znakov bolo jedinečných pre túto podskupinu v porovnaní s ostatnými,ale možné dôsledky sa ťažko hodnotia kvôli nízkemu počtu subjektov. Prezeranie kombinézytendencie sa zdá, že podskupina ME-M3 je viac podobná podskupine ME-M2 ako podskupina ME-M1,ako naznačuje trendové zvýšenie TAG.Hormonálne znaky metabolického stresuSkúmali sme cirkulujúce hladiny vybraných hormónov riadiacich energetickú homeostázu v kontextefyziologického napätia, zápalu a patogenézy (obrázok 7). V porovnaní so skupinou HC sa ME/Skupina CFS mala mierne zvýšené priemerné hladiny inzulínu a leptínu v sére, ako aj nižšiu vysokú molekulovú hmotnosť(HMW) adiponektín (obrázok 7, A–C). Bolo to však primárne spôsobené podskupinou ME-M2, pretože nie je významnéalebo trendový efekt bol pozorovaný u ostatných. V súlade so zvýšeným inzulínom mala podskupina ME-M2 tiež anzvýšená stredná koncentrácia C-peptidu (obrázok 7D). Tieto špecifické účinky na hladiny hormónov podporujú rôzneregulačných kontextoch v podsúboroch ME-M1 a ME-M2 a zistenia sú v súlade s pozorovanýmimetabolické fenotypy naznačujúce znížené využitie glukózy (ME-M1) a nadmernú akumuláciu lipidov (MEM2). Okrem toho boli v skupine ME/CFS zvýšené sérové ​​koncentrácie FABP4 a FGF21v porovnaní so skupinou HC (obrázok 7, E a F). Tieto faktory sa považujú za signály energetického napätia aboli spojené s metabolickými ochoreniami, ako aj s cvičením (52, 53). Významný bol iba podskupina ME-M2zvýšenie FGF21. Bola tu malá skupina pacientov s obzvlášť vysokou hladinou FGF21 vPodskupina ME-M2 a máme podozrenie, že to môže naznačovať nadmerné zaťaženie metabolickým stresom pečene. Nadmorská výškakoncentrácia FABP4 v sére bola podobná v podskupinách ME-M1 a ME-M2. Pozorované endokrinnépodpisy sú v súlade s deregulovaným metabolizmom a zvýšeným energetickým napätím u pacientov s ME/CFS,as prepojeniami na regulačné siete, ktoré môžu vysvetliť reakcie závislé od kontextu.

Obrázok 7. Zmeny v sérových signálnych faktoroch sú spojené s energetickým metabolizmom. 

Vybrané hormóny potenciálne spojené s energetickou záťažou a deregulovanémetabolizmus sa meral v sére pacientov s ME/CFS a HC pomocou metód založených na imunite. (A–F) Koncentrácia v sére bolamerané u 83 pacientov s ME/CFS a 30 HC subjektov na inzulín (pg/ml) (A), leptín (ng/ml) (B), HMW adiponektín (μg/ml) (C), C-peptid (pM) (D),  FGF-21 (pg/ml) (Ea FABP4 (ng/ml) (F). Je uvedený priemer skupiny ± IQR. ZobrazenéPhodnoty (vpravo hore) sú pre 4-skupinové porovnanie HC, M1,M2 a M3 pomocou 1-spôsobu Kruskal-Wallis ANOVA. *P <0.05, mann-whitney="">Utest; **q < 0.05,="" adjusted="">P-hodnota

Diskusia

Táto exploračná metabolomická štúdia odhalila mapu bežných a variabilných metabolických fenotypov ME/CFS. Pozorované metabolické zmeny zapadajú najmä do paradigmy priamych a nepriamych účinkov energiekmeň. Fyziologický význam podporili asociácie s endokrinnými a klinickými charakteristikami.Prostredníctvom nasledujúcej diskusie navrhujeme, že energetické napätie môže byť výsledkom hypoxie tkaniva citlivého na námahua vedie k systémovým vzorcom metabolickej adaptácie a kompenzácie.Bežným metabolickým zmenám v skupine ME/CFS dominoval relatívne malý početcesty s dôveryhodným vplyvom na energetickú homeostázu. Zvýšený cirkulujúci glycerol naznačuje, že lipolýza jevyvolané, a to sa bežne pozoruje počas hladovania a cvičenia (35, 48). Okrem toho niekoľko zistenísúhlasia so zmenenou utilizáciou aminokyselín u pacientov s ME/CFS, vrátane BCAA, tryptofánu,a ďalšie. Nárast produktov rozkladu purínových nukleotidov, ako je adenozín a xantozínsa tiež objavil ako možný podpis energetického napätia, ktoré normálne odráža zvýšené nároky na ATP azmenený metabolizmus aminokyselín vo svaloch (36). Systémový metabolický stres bol podporený zvýšeným FABP4a FGF21, ktoré môžu signalizovať kompenzačné programy, ako aj tkanivovo špecifické reakcie (54, 55). CorticoZdá sa, že steroidy neboli zahrnuté, pretože záviseli od veku a BMI namiesto skóre fyzických funkcií(doplnkové údaje 3) a nezistili sme zmeny v rannom kortizole a ACTH v porovnaní s ME / CFSs HC. Došlo najmä k strate niektorých fosfolipidov obsahujúcich kyselinu linolovú (18:2). Táto mastná kyselina jeesenciálny prekurzor kyseliny arachidónovej, centrálna mediátorová molekula spojená so zápalom a cievamidilatácia. Zníženie množstva derivátov kyseliny arachidónovej, ako sú 12-HETE a 12-HHTrE, ďalej naznačuježe môžu byť ovplyvnené auto- a parakrinné procesy. Ako je ďalej uvedené nižšie, niektoré z týchto účinkov môžu byťspojené s mechanizmami, ktoré sa pravdepodobne podieľajú na symptómoch ME/CFS.

Účinky, ktoré boli heterogénne v skupine ME/CFS, vyjadrovali špecifické fenotypy deregulácieenergetický metabolizmus v podskupinách pacientov. 2 najvýraznejšie metabotypy ME/CFS, ME-M1 a ME-M2,v súlade so známymi fenotypmi chronických ochorení s imunometabolickými projekciami (34, 37, 38). totreba mať na pamäti, že žiadny z pacientov našej štúdie nemal klinickú prediabetickú alebo diabetickú diagnózu. ThePodskupina ME-M1 vykazovala zvýšené sérové ​​hladiny voľných mastných kyselín (tj NEFA) a ketolátok, napriek normálnymglukózy a inzulínu. To môže pripomínať kontext s fyziologickými koreláciami s hladovaním glukózy a námahoucise (33, 35). V podskupine ME-M2 bol odlišný metabolický profil vyjadrený zvýšeným sérovým TAG apriemerné hladiny inzulínu, ale hladina glukózy v krvi nebola ovplyvnená. To môže odrážať príznaky nízkej kvality lipidov indukovanej insulínová rezistencia spojená s ektopickou periférnou akumuláciou lipidov a zápalovými odpoveďami (56). Obajaautoregulácia prietoku krvi bola zistená u osôb s nevysvetliteľnou námahou intoleranciou, možno cezmechanizmy účinku endotelovej a mikrocirkulačnej dysfunkcie na cievny endotel (66, 76, 77, 79,80). V súhrne sme zistili, že metabolické zmeny u pacientov s ME/CFS sú kompatibilné s narušenýmenergetika vynútená tkanivovou hypoxiou pri námahe. Na tento účel by sa mali vykonať ďalšie vyšetreniateóriu a identifikovať možné podporné stratégie pre zlepšenie klinickej starostlivosti.Možné obmedzenia štúdie zahŕňali stabilitu metabolitov a obmedzenú presnosť globálneho nezacieleniametabolomika (81). Obmedzenia výberu jednorozmerných funkcií na účely klastrovania a identifikácieV štatistickej komunite sú dobre známe problémy s podtypmi pacientov vo vysokorozmerných súboroch údajov (82, 83)(Doplnkové údaje 1). Naše komplexné vyhodnotenie možných zmätkov ako je pohlavie, BMI, vek, strava, prípmedikácia nenaznačovala, že by to boli hlavné hnacie sily fenotypov ME/CFS, ale môžu prispieťk individuálnej variácii (doplnkové údaje 1). Silnou stránkou štúdie bolo, že štatistické analýzy boli silnély a nezávisle podporované viacerými vrstvami biochemických nálezov a zdôvodnením.Stručne povedané, štúdia poskytuje mapu metabolických zmien vyskytujúcich sa u pacientov s ME/CFS.Zistili sme, že pozorované zmeny sú kompatibilné so zvýšeným energetickým zaťažením, napríklad spôsobeným tkanivomhypoxia pri námahe. Potenciálne úlohy špecifických ciest budú musieť byť overené a ďalej preskúmanécielené štúdie.

Metódy

Pacienti s ME/CFSa HC. Celkovo 83 pacientov s ME/CFSa 35 HC.Všetci pacienti splnili kanadské konsenzuálne kritériá pre ME/CFS (1). Boli odobraté vzorky krvipred intervenciou (základná hodnota) v 2 samostatných klinických štúdiách vedených Univerzitnou nemocnicou Haukeland, „RituxME“ (ClinicalTrials.gov NCT02229942, 2014–2017; ref. 45) a „CycloME“ (ClinicalTrials.govNCT02444091, 2015–2020; ref. 12). Vzorky HC boli odobraté (od roku 2015 do roku 2017) od subjektov sžiadne chronické ochorenie ani chronická medikácia – predovšetkým od personálu na oddelení onkológie v HaukelandeUniverzitná nemocnica a Katedra biomedicíny Univerzity v Bergene. Bola vybraná skupina HCaby približne zodpovedali vekovej a pohlavnej distribúcii skupiny ME/CFS. Biometrické charakteristiky pre HCsubjekty a pacienti s ME/CFS sú zhrnuté v tabuľke 1, ktorá obsahuje aj údaje pre podskupinypacientov s ME/CFS anotovaných na 3 rôzne metabotypy vyvinuté v tejto štúdii.Vzorky krvi sa odoberali venóznou punkciou, spracovali sa podľa štandardizovaného postupu biobankyako je opísané v skúšobných protokoloch a uložené pri teplote –80 stupňov (12, 45). Všetci pacienti s HC a 71 pacientov s ME/CFS,neboli pri odbere vzoriek pôstne. Zvyšných 12 vzoriek ME/CFS sa odobralo po nočnom hladovanía boli zahrnuté na uľahčenie hodnotenia možného vplyvu postprandiálneho stavu. Klinická krv a sérumanalýzy sa uskutočnili podľa štandardných laboratórnych postupov v nemocnici.Globálna metabolomika a lipidomika.Pre analýzy metabolitov sme zahrnuli vzorky séra zo všetkých 83pacientov a 35 pacientov s HC. Analýzy boli uskutočnené spoločnosťou Metabolon Inc. s použitím ich štandardných metód. Údaje boli získané použitím 2 analytických platforiem založených na hmotnostnej spektrometrii, jedného globálneho metabolituplatforma (HD4) poskytujúca meranie a identifikáciu 882 zlúčenín pokrývajúcich široké spektrum molekúla jeden CLP, ktorý posudzoval 1005 rôznych molekulárnych druhov 14 tried lipidov. Vzorky bolianalyzované v denných blokoch s niekoľkými úrovňami kontroly kvality vzoriek a údajov, ako sú medzidenné variáciekorekcia pred normalizáciou údajov.Analýzy metabolických hormónov.Pre analýzy metabolických hormónov sme zahrnuli rovnaké vzorky, okrem 5 HC,kde bolo nedostatočné množstvo séra. Vzorky séra sa zriedili a uskutočnili sa testypodľa pokynov výrobcu. Súpravy založené na technológii Luminex multiplex bead immunoassay(prístroj Luminex 100, Luminex Corp.) sa použili na detekciu FABP4, inzulínu, HMW adiponektínu a leptínu(katalóg LXSAMH, R&D systémy). ELISA sa použila na meranie FGF21 (katalóg DF2100, R&D Systems) aC-peptid (katalóg DICP00, R&D systémy). Merania sa uskutočňovali pomocou čítačky mikrodoštičiek Spark(Tecan Trading AG). Analýza údajov bola vykonaná v programoch Excel, GraphPad Prism a R.Štatistiky.Všetky analýzy údajov sa uskutočnili v prostredí R studio (84) pomocou programovania Rjazyk (85). Najprv sme z údajov odstránili xenobiotiká a metabolity s viac ako 25-percentnými chýbajúcimi hodnotamisúbor a vzor chýbajúcich hodnôt bol hodnotený podľaχ2 a Fisherov exaktný test pre skupinové a sexuálne porovnania. Chýbajúce hodnoty boli pripočítané pomocou metódy polovičného minima (86). Imputované údaje boli kvantilne normalizované, log2 transformované a automaticky škálované. Zložiť zmeny,Phodnoty (2-sledovaný Welchov test) a upravenéPhodnoty(Benjamini-Hochbergova úprava) boli vypočítané pomocou základných funkcií v R. Autoscaled dáta boli filtrovanéna základe neupravených významných metabolitov (P< 0.05)="" na="" zníženie="" rozmerov="" v="" údajoch.="" po="" riadkoch="" a="">k-priemery boli vykonané na významných znakoch na zoskupenie metabolitov a vzoriek a vybrali sme oddielyzhlukov riadených súčtom štvorcov v rámci klastra (wss), štatistikou medzery a metódou siluety. Toto bolo vizualizovanév tepelnej mape pomocou balíka ComplexHeatmaps (87) a výsledné zhluky boli extrahované aHC organizovaný do samostatného klastra HC. Tieto klastre boli použité ako vizualizačné prekrytie na nezávislomPCA a graf zaťaženia sa použil na vizualizáciu zaťaženia z PC1 a PC2 pomocou ggplot2 (88).

Univariantanalýza sa uskutočnila na extrahovaných zhlukoch z viacrozmernej analýzy. Metabolity boli organizovanédo dráh podľa anotácií poskytnutých Metabolon Inc. Záhyb sa mení,Phodnoty a upravenéP hodnoty z metabolitov v každej príslušnej dráhe boli vizualizované pomocou ggplot2. Vybrané biometrické údaje bolikorelovali s metabolitmi, ktoré vykazovali rovnomerné zmeny medzi klastrami pomocou Spearmanovej metódy aP<0.05 bola nastavená ako hranica. Toto bolo vizualizované pomocou balíka ggplot.Údaje z platformy CLP boli predspracované odstránením premenných, v ktorých chýbalo viac ako 10 percenthodnoty v súbore údajov a boli imputované použitím minimálnej pozorovanej hodnoty pre každý metabolit. Vzorkyboli usporiadané do príslušných zhlukov získaných zo skoršej analýzy HD4 a násobných zmien,P hodnoty (Welchov test) a upravenéPhodnoty (FDR) boli vypočítané pomocou základných funkcií v rámci R. Associatedmetaúdaje týkajúce sa lipidových tried boli získané od Metabolon Inc. a R package Lipidr (89).

Thevýsledné dáta boli vizualizované pomocou ggplot2. Opisná štatistika bola vykonaná pomocou 2-tailed Welch'stest na normálne rozložené dáta, Mann-WhitneyUtesty na premenné so šikmým rozdelením aχ2 aFisherove exaktné testy pre kategorické premenné (GraphPad Prism). Uskutočnilo sa porovnanie 3 alebo viacerých skupínpomocou 1-testu ANOVA.Schválenie štúdie.Klinické skúšky, z ktorých boli získané vzorky biobanky, vrátane vzoriek zzdravé kontroly, boli schválené regionálnou etickou komisiou (Tromsø, Nórsko; č. 2010/1318-4, č.2014/365, a č. 2014/1672). Všetci pacienti poskytli písomný informovaný súhlas.

NÁJDETE NAJLEPŠIU BOTANICKÚ CELOSTNÚ STAROSTLIVOSŤ NA OBNOVENIE ÚNAVY Z OCHORENÍ

Naša starostlivo ručne vyrobená receptúra ​​Neuro Regen obsahuje najlepšie preskúmané bylinky. Každý z nich ukazuje úžasný potenciál na zvládanie bolesti nervov, plus celkovú podporu nervov a neurónov.

Zahŕňa:

Cistanche- 

Cistanche je najbežnejšie používaná bylina v receptoch tradičnej čínskej medicínyzmiernenie fyzickej únavy. V skutočnosti je Cistanche druh potravinového materiálu. Na teoretickom základe tradičnej medicíny, moderná medicína tiež vykonala veľa výskumov oúčinok proti únavezCistanche. Experimenty dokázali, žeúčinok proti únavez Cistanche je kvôli zlepšeniu telesných orgánov oCistanche. Cistanchemôže zlepšiť funkcie obličiek a pečene, čím sa dosiahne anúčinok proti únave. Nasleduje prehľad toho, ako Cistanche dokážezmierniť únavu.

4 Charakteristika glykozidov Cistanche

S rozvojom spoločnosti je život ľudí stále rýchlejší. Od chvíle, keď vyjde slnko, sa ako súčasť „živého stroja“ musí každý ponáhľať na svoje stanoviská. Či už ste technik stojaci v dielni, obchodník s cennými papiermi sediaci pred počítačom alebo dokonca študent hrajúci sa na ihrisku...musíte čeliť nespočetným tlakom. Práca ľudí je rôzna, no všetky majú jeden spoločný problém – únavu. Únava je ako šváb, ktorý sa skrýva v rohu kuchyne. Nemá žiadnu podstatnú škodu, ale vždy trápila ľudí.

Ak niečomu nerozumiete, neváhajte a povedzte mi:wallence.suen@wecistanche.com