Izolácia fenolových kompozícií zo steny Anneslea Fragrans riadená aktivitami. A ich cytoprotektívny účinok proti oxidačnému stresu indukovanému peroxidom vodíka v bunkách HepG2, časť 2

Prosím kontaktujteoscar.xiao@wecistanche.comPre viac informácií

2.7. Inhibičný účinok na intracelulárnu tvorbu ROS

Oxidačný stres je druh nerovnováhy medzi oxidáciou a antioxidáciou v organizme [28]. Nadmerná akumulácia ROS môže viesť k oxidačnému stresu, ktorý môže spôsobiť poškodenie buniek a tkanív, ako sú lipidy, membrány a DNA [29]. Antioxidanty vrátane polyfenolov a flavonoidov môžu pomôcť telu znížiť tieto škody spôsobené ROS. Vo všeobecnosti sa H, O široko používa na vyvolanie intracelulárnej neusporiadanej produkcie ROS a narušenie antioxidačnej obrany buniek [30]. V našej súčasnej štúdii bol H2O2 vybraný na vyvolanie abnormálnej akumulácie intracelulárnych ROS a narušenie antioxidačnej obrany buniek. Na vyhodnotenie inhibičného účinku na tvorbu intracelulárnych ROS v bunkách HepG2 indukovaných H, O2- boli hladiny intracelulárnych ROS testované prietokovou cytometriou. V stručnosti, bunky HepG2 sa kultivovali na 6-jamkovej doštičke (1 x 10 stupňov buniek/jamku). Po 24-hodinovej inkubácii 50 ug/ml rôznych extraktov alebo 8 ug/ml Vc (pozitívna skupina) boli všetky skupiny okrem kontrolnej skupiny indukované H202 počas 6 hodín. Testovali sa intracelulárne hladiny ROS každej zlúčeniny (obrázok 3). Pomer tvorby ROS sa významne zvýšil na 215,64 ± 9,80 percent v H2O, liečená skupina v porovnaní s kontrolnou skupinou (100 percent). V porovnaní so skupinou ošetrenou H, O, zlúčeniny 2, 5 a 6 pozoruhodne potlačili intracelulárnu produkciu ROS (p<0.05), and="" their="" inhibitory="" effect="" was="" equal="" to="" the="" vc="" group="" (figure="" 3).="" many="" phenolics="" have="" been="" proven="" to="" have="" a="" protective="" effect="" against="" intracellular="" ros="" by="" h2o2="" induction[31].="" additionally,="" compound="" 6="" displayed="" the="" strongest="" suppressive="" effect="" on="" intracellular="" ros="" production,="" which="" suggests="" that="" flavonoid="" compounds="" play="" a="" crucial="" role="" in="" inhibiting="" intracellular="" ros="">

2.8. Cytoprotektívny účinok proti H2O2-indukovanej bunkovej apoptóze

Apoptóza je základným biologickým fenoménom buniek, ktorý zohráva významnú úlohu v regulačnom mechanizme proliferácie, rastu a mutácie buniek a stabilite vnútorného prostredia. Apoptóza, odlišná od nekrózy, je špeciálnym typom bunkovej smrti. Porucha apoptotického procesu má na organizmus zlé účinky a spôsobuje mnohé ochorenia [32]. H2O2 ako dôležitá signálna molekula reguluje proces bunkovej proliferácie, rastu a apoptózy [5]. Táto štúdia merala apoptózu buniek HepG2 indukovaných H, O a hodnotila cytoprotektívne účinky zlúčenín 2, 5 a 6. Po ošetrení buniek HepG2 1.0 mM H202 sa pomer apoptózy pozoruhodne zvýšil ( 57,20±1,97 percenta) v porovnaní s kontrolnou skupinou (9,10±0,62 percenta, p<0.05)(figure 4).="" the="" ratios="" of="" apoptotic="" cells="" in="" the="" treated="" groups="" of="" compounds="" 2,="" 5,="" and="" 6="" significantly="" decreased="" compared="" with="" the="" h2o2-treated="" group="" (model="" group,=""><0.05)(figure 4).="" moreover,="" compound="" 6="" had="" significant="" efficiency="" in="" protecting="" hepa-2="" cells="" from="" h2o2="" toxicity,="" and="" the="" cell="" apoptosis="" ratio="" of="" 6(10.56±1.15%)was="" lower="" than="" that="" of="" the="" vc="" group="" (positive="" control),="" which="" was="" equal="" to="" that="" of="" the="" control="" group(figure="" 4).="" meanwhile,="" compounds="" 2="" and="" 5="" showed="" a="" moderate="" cytoprotective="" effect="" with="" cell="" apoptosis="" ratios="" of="" 2(26.76±2.60%)="" and="" 5(27.64±0.83%).="" the="" differences="" in="" antioxidant="" capacity="" may="" be="" attributed="" to="" the="" number="" of="" phenolic="" hydroxyl="" moieties="" and="" the="" link="">

3. Materiály a metódy

3.1. Chemikálie a činidlá

Metanol, acetonitril a kyselina mravčia pre vysokoúčinnú kvapalinovú chromatografiu (HPLC) boli čistoty pre HPLC a boli zakúpené od spoločnosti Merck (Darmstadt, Nemecko). Rozpúšťadlá na extrakciu vzoriek vrátane etanolu, dichlórmetánu a n-butanolu boli analytickej kvality. Deionizovaná voda bola čistená pomocou systému ultračistej vody Milli-Q (Millipore, Bedford, Massachusetts, MA, USA) a použitá vo všetkých experimentoch. Fenolové štandardné zlúčeniny kyseliny galovej, rutínu, Troloxu a vitamínu C boli zakúpené od Chengdu Must Bio-Technology Co., Ltd. (Chengdu, Čína). Metyltiazol-2-yl-25-difenyltetrazoliumbromid (MTT), Folin-Ciocalteuovo činidlo, 2,2'-a-bis(3-etylbenzén-tiazolín-6-sulfónová kyselina)( ABTS),2,2-difenyl-1-pikrylhydrazylradikál (DPPH), 1,3,5-tri(2-pyridyl)-2,4,{{23 }}triazín (TPTZ), 2',7'-dichlórfluoresceín diacetát (DCFH-DA) a FeSO4-7HO boli zakúpené od Sigma-Aldrich (Shanghai, Čína). NMR spektrá sa získali pomocou spektrometrov Bruker AV-400 a/alebo DRX-500. ESIMS spektrá boli zaznamenané na spektrometri An Agilent 1290 UPLC/6540 Q-TOF.

Ak chcete vedieť viac, kliknite sem

3.2. Príprava vzorky

Anneslea fragrans Stena. listy boli zozbierané z mesta Lincang v Číne 2. júla020. Listy sa sušili v tienenej miestnosti do konštantnej hmotnosti a potom sa rozdrvili na prášok pomocou elektrického mlynčeka. Extrakcia a frakcionácia sa uskutočnili ako naša predtým uvedená metóda s miernou modifikáciou [33]. Prášková vzorka (10}0 g) sa zmiešala s 1000 ml 80-percentného vodného etanolového rozpúšťadla a trikrát sa podrobila ultrazvuku v ultrazvukovom čistiacom kúpeli pri 200 W (vždy 0,5 hodiny). Potom sa sonikovaná kaša zozbierala a 10 minút centrifugovala pri 1500 x g pomocou centrifúgy Eppendorf (TGL-20B, Shanghai Anting Scientific Instrument Factory, Shanghai, Čína). Spojený supernatant sa skoncentroval pri 50 stupňoch na rotačnej odparke (Hei-VAP, Heidolph, Nemecko) a ďalej sa sušil pomocou vákuového sušiaceho lyofilizátora (Alpha 1-2 LD plus, Christ, Nemecko). Surový etanolový extrakt (CE, 30 g) sa resuspendoval vo vode a postupne sa trikrát rozdelil medzi dichlórmetán, etylacetát a n-butanol. Po zahustení a lyofilizácii sa získali dichlórmetánová frakcia (DF), etylacetátová frakcia (EAF), n-butanolová frakcia (BF) a zvyšková vodná frakcia (RWF) s hmotnosťou 3,2 g, 6,3 g, 7,2 g a 8,2 g. , resp. Podľa antioxidačných aktivít rôznych frakcií sa BF chromatografoval na sklenených kolónach (30 mm x 400 mm) za mokra naplnených 20 g (suchá živica) vybranej hydratovanej živice D101. Objem lôžka (BV) živice bol približne 40 ml. Po dosiahnutí adsorpčnej saturácie sa kolóna najskôr premyla destilovanou vodou s 4x BV a potom sa eluovala zmesou etanol-voda (0:100,20:80,50:50,80:20,100:0,obj./rok, každý 4x BV), čím sa získa päť subfrakcií (BF-A až E). Každá časť desorpčných roztokov sa zahustila do sucha vo vákuu. CE, štyri frakcie (DF, EAF, BF a RWF) a päť podfrakcií (BF-A až E) sa skladovali v chladničke (-20 stupeň) na ďalšie experimentovanie.

3.3. Biologicky riadená izolácia aktívnych zložiek

Pod vedením antioxidačných testov a HPLC analýzy sa antioxidačná frakcia ďalej chromatografovala na izoláciu čistých zlúčenín. Stručne povedané, BF sa podrobil kolóne s hydratovanou živicou D101, čím sa získalo päť subfrakcií (BF-A až E). BF-C (1,5 g) sa podrobil silikagélovej kolóne s elúciou zmesou DCM/MeOH (15:1) a potom sa oddelil pomocou preparatívnej TLC (DCM/MeOH, 10:1), čím sa získali zlúčeniny 6 (118 mg a 7 (10 mg). BF-D (1,1 g) sa podrobil silikagélovej kolóne (CHCl3/MeOH 10:1, 5:1), čím sa získali zlúčeniny 1 (129 mg) a 4 (15 mg). BF-E (1,2 g) sa podrobil silikagélová kolóna (CHCl3/MeOH, 30:1, 10:1, 5:1), čím sa získajú zlúčeniny 1 (216 mg), 2 (135 mg) a zmes. Tá sa čistí na silikagélovej kolóne (CHCl3/MeOH 12:1), čím sa získajú zlúčeniny 3 (19 mg) a 5 (15 mg) (obrázok 5).

3.4. Objasnenie štruktúry zlúčenín 1-7

Podľa antioxidačných aktivít rôznych frakcií boli tri podfrakcie, BF-C až E, podrobené stĺpcovej chromatografii. Týmto spôsobom viedla frakcionácia BF-C na E riadená bioaktivitou k izolácii siedmich jednotlivých fenolových zlúčenín. Ich štruktúry boli identifikované ako konfusozid(1)[34], vakcinolín (2)[34],1-[4-(-D-glukopyranozyloxy)-2-hydroxyfenyl]-3- (4-hydroxy-3-metoxyfenyl)-1-propanón (3) [35], (S)-naringenín-7-O- -D-glukopyranozid (4)[ 22],2',3,4,4'-tetrahydroxydihydrochalkón (5)[26], (epi)-katechín (6)[26] a kornozid (7)[36] (obrázok 1B) analýzou 1D -NMR a ESI-MS dáta a porovnanie s predtým uvedenými zlúčeninami v literatúre. Medzi nimi zlúčeniny 3, 4 a 7 boli prvýkrát izolované z tejto rastliny.

Cistanche môže zlepšiť imunitu

Confusoside (1). Molekulový vzorec bol označený ako C21H240 a separáciou sa získalo 129 mg svetložltých ihličiek. 'H NMR (500 MHz, DMSO-d6) a ESI-MS (m/z 421 [M plus H]) dáta boli identické s predtým uvedenou zlúčeninou v literatúre [34]. Identifikácia bola ďalej podporovaná 13C NMR（125 MHz,DMSO-dg）∶δ204,4（s,C=O),163,5(s,C-2'),163,3(s,C -4'),155,5(s,C-4),132,6(d,C-6'),130,9(s,C-1),129,2(d, C -2, 6),115,0(d,C-3/C-5),114,4(s, C-1'),108,3(d, C{{45} }'),103,4(d,C-1“),99,6(d,C-3'),77,1(d, C-5}),76,4(d, C{{ 57}“),73,1(d,C-2}),69,5(d, C4'),60,5(t,C-6'),39,8(t,C-),28,9( t, C-6).

Vakcíniifolin (2) sa získal vo forme žltého amorfného prášku (153 mg) a bol mu priradený molekulový vzorec C2H24O1o.'H NMR (50}0 MHz, DMSO-dg) a ESI-MS (m/z 437 [M plus H]) údaje boli rovnaké ako predchádzajúce uvádzané údaje [34]. Identifikácia bola ďalej podporovaná 13CNMR（125 MHz,DMSO-de）∶δ204,4（s, C=O）,163,5（s, C-2'）,163,3 (s, C{ {21}}), 145,0 (s, C-3), 143,3 (s, C-4), 132,6 (d, C-6), 131,7 (s, C{{33 }}), 118,9(d, C-6), 115,8(d, C-2),115,4(d, C-5),114,4(s, C-1 '), 108,3 (d, C-5'), 103,4 (d, C-1'), 99,6 (d,C-3'), 77,1 (d, C{{57 }}"),76,4(d,C-3'),73,1(d,C-2"),69,5(d,C-4'),60,5(t,C{ {69}}'), 39,4 (t, Ca), 29,1 (t, C-6).

{{0}}[4-(-D-glukopyranozyloxy)-2-hydroxyfenyl]-3-(4-hydroxy-3-metoxyfenyl){{8 }}propanón (3). Zlúčenina sa získala vo forme bezfarebných ihličiek (19 mg) a molekulový vzorec sa určil ako C22H2010.'H NMR (400 MHz, DMSO-d6) a ESI-MS (m/z451 [M plus H]* ) údaje súhlasili s literatúrou [35]. Identifikácia bola ďalej podporovaná 13CNMR（100 MHz,DMSO-d）∶δ204,5（s,C=O）,163,5（s,C-2'）,163,3（s,C{ {31}}'）,147,4（s,C-3),144,6(s,C-4),132,6(d,C-6),131,6(s,C{{ 43}}),120,4(d,C-6),115,2 (d,C-5),114,5(s,C-1'), 112,6(d,C{{55} }}),108,3(d,C-5'), 103,3 (d,C-1“),99,5 (d, C-3'),77,0(d,C{{ 67}}'), 76,3(d, C-3}), 73,0(d,C-2}), 69,5(d,C-4}), 60,5(t,C -6'),55,5(q,C-OCH3), 39,5(t,C-),29,4(t,C-6).

(S)-Naringenín-7-O- -D-glukopyranozid (4) mal molekulový vzorec C21H2.O10, ktorý sa získal ako 15 mg bieleho prášku. Údaje 1H NMR (500 MHz, DMSO-dg) a ESI-MS (m/z 435 [M plus H] plus) boli v súlade s predchádzajúcou prácou[22]. Identifikácia bola ďalej podporovaná13C NMR（125 MHz,DMSO-d）∶δ197,2（s, C-4）,165,3（s, C-7）,165,2 (s, C{{25 }}), 162,9 (s, C-9), 157,9 (s, C-4'), 128,6 (s, C-1'), 128,4 (d, C{{37 }}',6'),115,2 (d, C-3'/C-5'),1{{110}}3,2 (s,C-10 ),99,6(d,C-1'),96,5(d,C-6),95,4(d,C-8),78,7(d,C-2) ,77.0(d, C{{6{{240}}}}“),76,3 (d,C-3'),73,0(d,C{{ 66}“), 69,5 (d,C-4'), 60,5(t,C-6'),42,0(t,C-3). 2'3,4,A'-Tetrahydroxydihydrochalkón (5) mal molekulový vzorec ako C15H4O5 a separoval sa (15 mg) ako biely prášok.'H NMR (400 MHz, DMSO-dg) a ESI-MS (m/z 275 [ Údaje M plus H] plus ) boli v súlade s údajmi uvedenými v literatúre [26]. Identifikácia bola ďalej podporovaná 13C NMR（125 MHz, DMSO-d6）∶8203,9（s, C=O）,164,7(s,C-2'),164,2(s,C -4'),144,9(s, C-3),143,3(s,C-4),133,0(d,C-6),131,8(s,C{ {114}}), 118,9 (d,C-6),115,7(d,C-2),115,4(d,C-5),112,5 (s,C{126 }}), 108,2 (d,C-5'), 102,4(d,C-3'),39,5(t, C-a2), 29,2 (t, CB). (Epi)-katechín(6) sa izoloval ako biely prášok (118 mg) a stanovil molekulový vzorec ako CHO4.1H NMR (400 MHz, DMSO-dg) a ESI-MS (m/z 291 [M plus H] plus )údaje dobre súhlasili s údajmi uvádzanými v literatúre [26]. Identifikácia bola ďalej podporená13C NMR （125 MHz,DMSO-d6）∶δ156,4（s,C-7）,156,1（s, C-5）,155,3（s,C{{162 }}）,144,8(s,C-3'),144,8(s,C-4'),130,5(s,C-1'),118,4(d,C{{ 174}}'), 115,0(d,C-5'),114,4(d,C-2'), 99,0(s,C-10),95,1(d,C{ {186}}), 93,8 (d, C-8), 80,9 (d, C-2), 66,2 (d, C-3), 27,8 (t, C{198 }}). Kornosid (7) sa získal ako amorfná pevná látka (10 mg) a určil molekulový vzorec ako C1H20O8.'H NMR (500 MHz, DMSO-dg) a ESI-MS (m/z317 [M plus H] plus) údaje zodpovedali zverejnené údaje [36]. Identifikácia bola ďalej podporovaná 13CNMR（100 MHz,DMSO-dg）∶δ185,3（s, C-4）,153,3（d,C-2）,153,2（d,C{{220 }}）,126,4（d, C-3）,126,4(d,C-5),102,8(d,C-1'),76,8(d,C{{232} }'),76,6(d,C-3'),73,3(d,C-2'),70,0(d,C-4),67,3(s, C{244 }}), 63,8 (t, C-8), 61,0 (t, C-6'), 39,7 (t, C-7).

3.5. Stanovenie celkového obsahu fenolových látok (TPC) a celkového obsahu flavonoidov (TFC)

TPC a TFC štyroch frakcií (DF, EAE, BF a RWF) a piatich subfrakcií (BF-A až E) sa merali podľa našej predtým publikovanej metódy [37]. Pre TFC sa 1.0 ml každej vzorky (s koncentráciou 1,{5}} mg/ml) rozpustenej v metanole zmiešalo s 0,5 ml Folin-Ciocalteuovho činidla v centrifugačnej skúmavke a inkubujte 1 min. Potom sa do skúmavky pridali 20 percentný roztok Na2C03 (m/o) (1,5 ml) a deionizovaná voda (7,0 ml) a zmes sa udržiavala pri teplote 70 stupňov vo vodnom kúpeli počas 10 minút. Po ochladení na teplotu miestnosti sa 200 ul roztoku prenieslo na 96-jamkovú mikroplatničku a absorbancia sa stanovila pri 765 nm pomocou čítačky mikrodoštičiek SpectraMax M5 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA).

Pre TFC sa 1,2 ml roztokov vzoriek (s koncentráciou 1,{3}}mg/ml) zmiešalo s 0,3 ml NaNO (5 % m/o) a 3,8 ml 7 0-percentný vodný etanol a inkubované 8 minút. Následne sa do zmesi pridalo0,3 ml 10-percentného vodného Al(NO3), 4 ml 4-percentného vodného NaOH a 0,4 ml 70-percentného vodného etanolu a nechal sa reagovať pri teplote miestnosti počas 30 minút. Potom sa 200 ul roztoku prenieslo na 96-jamkovú mikroplatničku, ktorej absorbancia sa merala pri 510 nm pomocou čítačky mikrodoštičiek. TFC a TPC boli vyjadrené ako miligramy ekvivalentov kyseliny galovej (mg GAE/gextrakt) a ekvivalenty rutínu na gram extraktu (mg RE/g extraktu).

3.6. Stanovenie antioxidačnej aktivity

Antioxidačná aktivita štyroch frakcií (DF, EAF, BF a RWF) a piatich podfrakcií (BF-A až E) sa hodnotila v kombinácii testov na zachytávanie radikálov DPPH a ABTS a testu FRAP na základe metódy opísanej v našej predchádzajúcej štúdii [33]. Pre test DPPH sa 50μl roztoku vzorky （50,100,200 ug/ml）zmiešalo s 0,2 ml roztoku DPPH (0,1 mmol/ L) v 96-jamkovej platni a ponechané inkubovať 30 minút. Absorbancia sa merala pri 517 nm pomocou čítačky mikrodoštičiek SpectraMax M5 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA). Zmes sa udržiavala v tme 6 minút a potom sa zaznamenala absorbancia pri 734 nm. Pre FRAP sa 20 μl roztoku vzorky (50,100,200 ug/ml) zmiešalo s 0,18 ml činidla FRAP (7 mmol/l). L). Po inkubácii počas 10 minút v tme pri 37 stupňoch sa stanovila absorbancia pri 593 nm. Všetky testy sa uskutočňovali trojmo. Výsledky hodnôt DPPH, ABTS a FRAP boli vyjadrené ako ekvivalenty umol Trolox na gram extrakt （μmol TE/g extraktu）.

3.7. HPLC analýza

BF a zlúčeniny {{0}}} sa analyzovali na systéme Agilent 1260 HPLC spojenom s detektorom diódového poľa. Pred analýzou sa čerstvo pripravený roztok vzorky prefiltroval cez 0 0,45 um nylonovú membránu. Separácia sa uskutočnila s použitím kolóny Reprosil-Pur Basic C18 （5 μm, 4,6 x 250 mm, Nemecko) udržiavanej pri 35 stupňoch. Injekčný objem bol 5,0 ul, prietoková rýchlosť bola 1,0 ml/min a detekčná vlnová dĺžka bola nastavená na 280 nm. Mobilnými fázami bola okyslená voda s 0,1 % kyselinou mravčou (fáza A) a acetonitril (fáza B), lineárna gradientová elúcia sa uskutočnila nasledovne:{18}} min, 20 percent B;3-10 min, 40 percent B;10-15 min, 60 percent B;15-20 min, 100 percent B.

3.8. Bunková kultúra a životaschopnosť buniek

Ľudské bunky rakoviny pečene HepG2 boli zakúpené od Kunming Cell Bank (Kunming, Čína). Bunky HepG2 sa pestovali v DME doplnenom 1 percentom penicilín-streptomycínu a 10 percentami fetálneho hovädzieho séra v atmosfére 5 percent CO,/95 percent vzduchu pri 37 stupňoch. Keď sa bunky inkubovali na vhodnú hustotu (približne 80 percent), boli ošetrené pozitívnou kontrolou (Vc) a izolovanými zlúčeninami pre ďalšie experimenty.

Životaschopnosť buniek bola stanovená testom MTT na vyhodnotenie cytotoxicity každej vzorky [29]. Bunky s hustotou 1 x 104 buniek na jamku sa naočkovali na 96-jamkovú doštičku a nechali sa inkubovať 24 hodín. Každá zlúčenina (pripravená ako štyri dávky od 50 do 200 ug/ml） sa pridala do každej jamky na 20 hodín. Potom sa bunky ošetrili použitím roztoku MTT s konečnou koncentráciou 4 hodiny. Médium s MTT sa odstránilo a Na rozpustenie formazanu sa pridal ul DMSO. Absorbancia sa zaznamenávala pri 570 nm pomocou čítačky mikrodoštičiek. Výsledky ukázali, že každá zlúčenina bola netoxická pre bunky HepG2 v testovaných koncentráciách.

3.9. Inhibícia tvorby ROS v H2O2-indukovaných bunkách HepG2

Bunky HepG2 indukované H,O sa použili na stanovenie inhibičného účinku na produkciu ROS [3]. Bunky HepG2 (1.0×10 stupeň buniek na jamku) sa vysiali na 6-jamkovú doštičku a kultivovali sa spoločne s izolovanými zlúčeninami s 50 ug/ml a Vc（8 ug/ ml). Po inkubácii počas 20 hodín sa médium odstránilo a do každej jamky sa na ďalších 6 hodín pridali 2 ul H, O, (0,5 mM). Na konci experimentu boli bunky označené 2 ul DCFH-DA (10 mM) v tme pri 37 stupňoch počas 20 minút. Absorbancia bola zaznamenaná prietokovou cytometriou (Guava easy yet 6-2L, Millipore, Billerica, Massachusetts, MA, USA).

3.10. Stanovenie bunkovej apoptózy

Ochranný účinok každej zlúčeniny na H2O2-indukovanú apoptózu buniek HepG2 sa stanovil pomocou súpravy na apoptózu ľudského anexínu VFITC/PI [38]. Bunky HepG2 boli vopred ošetrené izolovanými zlúčeninami alebo bez nich počas 48 hodín. Po inkubácii sa k bunkám pridalo 100 μl väzbového pufra a bunky reagovali v tme s 10 μl anexínu V-FITC počas 5 minút pri teplote miestnosti a s 10 μl propídium jodidu (PI) v ľadovom kúpeli počas 5 minút. min, postupne. Bunková apoptóza sa okamžite analyzovala pomocou prietokovej cytometrie.

3.11. Štatistická analýza

Všetky experimenty sa uskutočnili trojmo. Všetky hodnoty sú vyjadrené ako priemer ± štandardná odchýlka (SD). Rozdiely v rámci skupín a medzi nimi sa analyzovali pomocou jednosmernej analýzy rozptylu (ANOVA), po ktorej nasledoval Tukeyho test. Rozdiel bol považovaný za štatisticky významný u p<0.05. all="" analyses="" were="" performed="" using="" origin="" 2019b="" software="" (originlab,="" northampton,="" ma,="">

4. Závery

V tejto štúdii sa frakcionovali rôzne frakcie z listov A.fragrans a analyzovali sa ich TPC a TFC. Pri izolácii riadenej antioxidačnou aktivitou boli zlúčeniny 1-7 vrátane štyroch flavonoidových glykozidov (1-4) a dvoch flavonoidov (5 a 6) izolované a identifikované z listov A. fragrans, čo naznačuje, že tento druh je bohatý vo flavonoidných zlúčeninách. Zlúčeniny 2, 5 a 6 vykazovali významnú antioxidačnú aktivitu v testoch DPPH, ABTS radikálov a FRAP. Okrem toho viditeľne zabránili poškodeniu oxidatívnym stresom prostredníctvom zníženia obsahu ROS a bunkovej apoptózy v H2O2-indukovaných bunkách HepG2. Podľa týchto výsledkov majú polyfenolové zlúčeniny, najmä flavonoidy, značnú antioxidačnú kapacitu vďaka svojim fenolickým hydroxylovým skupinám. Okrem toho, zlúčenina 2, obsahujúca glykozidovú časť a tri fenolické hydroxylové skupiny, bola hlavnou antioxidačnou zložkou s najvyšším obsahom z listov A. fragrans. Zlúčenina 6 vykazovala najlepšiu antioxidačnú aktivitu, čo môže byť hlavným príspevkom k aktivite A. fragrans. Okrem toho by extrakty z A.fragrans mohli slúžiť ako realizovateľný prírodný zdroj antioxidantov v sľubných nápojoch pre zdravie. Štúdia o zlúčeninách z listov A. fragrans naznačuje, že by sa mohli podávať ako antioxidačný zdravý čaj na liečbu poškodenia buniek vyvolaného oxidačným stresom a mohli by slúžiť ako výživové doplnky používané v potravinárskom a zdravotníckom priemysle.

Tento článok je extrahovaný z Molecules 2021, 26, 3690. https://doi.org/10.3390/molecules26123690 https://www.mdpi.com/journal/molecules