4. Materiály a metódy

4.1. Rastlinný materiál

Semená afrických S. aurea použité na túto štúdiu boli získané zo špecializovaného obchodu v Taliansku. Sadenice boli pestované v Laboratóriu biológie rastlín a farmaceutickej botaniky Univerzity v Cagliari (UNICA). Po 5 týždňoch boli umiestnené do skleníka "Planta Medica" podľa ekofyziologických potrieb druhu. Rastliny sa potom zbierali po dvoch rokoch rastu v období kvitnutia. Nadzemné diely sa ihneď umiestnili do vzduchom nútenej ventilačnej pece (FD 115, BINDER) až do úplného vysušenia (keď nedosiahli konštantnú hmotnosť). Vzor poukazu bol uložený v Herbarium Karalitanum (CAG) Univerzity v Cagliari v Taliansku s číslom poukazu (6/23.8/V1).

Glykozid cistanche môže tiež zvýšiť aktivitu SOD v tkanivách srdca a pečene a výrazne znížiť obsah lipofuscínu a MDA v každom tkanive, účinne zachytáva rôzne reaktívne kyslíkové radikály (OH-, H₂O₂ atď.) a chráni pred poškodením DNA. OH-radikálmi. Cystanche fenyletanoidové glykozidy majú silnú schopnosť zachytávať voľné radikály, vyššiu redukčnú schopnosť ako vitamín C, zlepšujú aktivitu SOD v suspenzii spermií, znižujú obsah MDA a majú určitý ochranný účinok na funkciu membrány spermií. Polysacharidy Cistanche môžu zvýšiť aktivitu SOD a GSH-Px v erytrocytoch a pľúcnych tkanivách experimentálne starnúcich myší spôsobenú D-galaktózou, ako aj znížiť obsah MDA a kolagénu v pľúcach a plazme a zvýšiť obsah elastínu. dobrý čistiaci účinok na DPPH, predĺženie doby hypoxie u starnúcich myší, zlepšenie aktivity SOD v sére a oddialenie fyziologickej degenerácie pľúc u experimentálne starnúcich myší Experimenty ukázali, že pri bunkovej morfologickej degenerácii má Cistanche dobrú antioxidačnú schopnosť a má potenciál byť liekom na prevenciu a liečbu chorôb starnutia kože. Zároveň má echinakozid v Cistanche významnú schopnosť vychytávať voľné radikály DPPH a má schopnosť vychytávať reaktívne formy kyslíka a zabraňovať degradácii kolagénu vyvolanej voľnými radikálmi a tiež má dobrý reparačný účinok pri poškodení aniónom voľných radikálov tymínu.

Kliknite na doplnok Cistanche Tubulosa

【Ďalšie informácie: david.deng@wecistanche.com / WhatApp:{0}}】

4.2. Analýza esenciálnych olejov

Esenciálny olej sa získal 3-hodinovou hydrodestiláciou s použitím prístroja typu Clevenger podľa smerníc Európskeho liekopisu [89]. Následná analýza plynovou chromatografiou s plameňovou ionizačnou detekciou (GC-FID) a plynovou chromatografiou/hmotnostnou spektrometriou (GC-MS) bola vykonaná podľa [13]. Stručne povedané, na GC analýzu sa použila kapilárna kolóna HP 5 s experimentálnym postupom 82 minút pri rôznych teplotách, respektíve od 60 ◦C do 246 ◦C pri rýchlosti 3 ◦C/min, ktorá sa potom udržiavala na 246 ◦C počas 20 min. Hélium (čistota väčšia alebo rovná 99,9999 percent) sa použilo ako nosný plyn s prietokovou rýchlosťou 1 ml/min. Celkom 1 ul zriedenej vzorky (1:100 v n-hexáne, w/w) bol vstreknutý automatickým vzorkovačom s pomerom delenia 1:20. Čo sa týka MS podmienok, použila sa prenosová linka 240 ◦C, EI iónový zdroj 200 ◦C a kvadrupólová teplota 150 ◦C, s ionizačnou energiou 70 eV a 3,2 skenu s-1 pri m/z skenovania rozsah (od 30 do 480). Na správu a spracovanie chromatogramov a hmotnostných spektier sa použil softvér MSD ChemStation (Agilent, rev. E.01.00.237, Santa Clara, CA, USA). Nakoniec boli získané zlúčeniny identifikované porovnaním NIST02 a Adamsových knižníc [37,38]. Výsledky sa ďalej krížovo skontrolovali porovnaním experimentálneho retenčného indexu (RI) zlúčenín so semipolárnymi fázami, ktoré RI uvádza v literatúre. Experimentálne RI boli stanovené s použitím dvoch štandardných zmesí n-alkánov ako referencií (C8–C20 a C21–C40) s lineárnou interpoláciou [90]. Percentá uvádzaných zložiek sa vypočítali na plochách píkov GC bez korekcie faktora odozvy FID.

4.3. Antifungálna aktivita

Sedem kmeňov dermatofytov bolo testovaných na antimykotickú aktivitu S. aurea EO. Z izolácie nechtov a kože sa získali tri klinické kmene: Epidermophyton floccosum FF9, Trichophyton mentagrophytes FF7 a Microsporum canis FF1. Zatiaľ čo zvyšné štyri kmene dermatofytov patrili do Colección Espanõla de Cultivos Tipo (CECT): T. mentagrophytes var. interdigital CECT 2958, T. rubrum CECT 2794, T. verrucosum CECT 2992 a M. gypseum CECT 2908. Všetky kmene boli pred každým testom kultivované v Sabouraudovom dextrózovom agare (SDA) alebo zemiakovom dextrózovom agare (PDA), aby sa zabezpečila čistota a životaschopnosť.

Minimálne inhibičné koncentrácie (MIC) a minimálna letálna koncentrácia (MLC) EO boli stanovené podľa modifikácií navrhnutých protokolom CLSI pre mikroriedenie [91]. Stručne, EO sa zriedil v DMSO (5–0,32 ul/ml) a potom sa pridal do sterilných skúmaviek. Inokulum sa pripravilo úpravou zákalu na 0,5 McFarland a potom sa zriedilo v RPMI-1640 bez glutamínu a s 3-(N-morfolino)propánsulfónovou kyselinou (MOPS) pH 7.{101} {10}} na koncentráciu 1–2 x 104 CFU/ml, ktorá sa potom pridala do skúmaviek obsahujúcich EO. Skúmavky sa potom inkubovali 7 dní pri 30 °C. Potom sa skúmavky hodnotili na rast húb a najnižšia koncentrácia, pri ktorej nebol pozorovaný žiadny rast, sa považovala za minimálnu inhibičnú koncentráciu (MIC). Najnižšia koncentrácia, pri ktorej nebol pozorovaný žiadny rast po umiestnení negatívnych skúmaviek do SDA počas 7 dní pri 30 °C, sa považovala za minimálnu letálnu koncentráciu (MLC). Na kontrolu citlivosti testovaných mikroorganizmov sa použila referenčná antifungálna zlúčenina, flukonazol (Pfizer). Výsledky boli získané z troch nezávislých experimentov uskutočnených v duplikáte a výsledky boli vyjadrené ako priemer. Zahrnuté boli aj negatívne a pozitívne kontroly, reprezentované neočkovaným médiom a inokulovaným médiom s maximálnou koncentráciou DMSO (1 percento).

4.4. Protizápalová aktivita

4.4.1. Bunková kultúra

Myšia leukemická makrofágová bunková línia RAW 264.7, ktorá patrila do American Type Culture Collection (ATCC TIB-71), bola kultivovaná, ako už bolo uvedené v našej skupine [92].

4.4.2. Výroba oxidu dusnatého

Produkcia NO bola hodnotená hodnotením koncentrácie dusičnanov v kultivačných supernatantoch pomocou Griessovho činidla [93]. Bunky (0,6 x 106 buniek/jamka) sa kultivovali v 48-jamkových kultivačných platniach. Makrofágy boli stabilizované cez noc, potom boli vopred ošetrené počas 1 hodiny s EO (0,08–1,25 ul/ml) zriedeným v DMSO a následne aktivované 50 ng/ml LPS počas 24 hodín. LPS-stimulované makrofágy a neošetrené makrofágy sa použili ako pozitívne a negatívne kontroly. Griessova reakcia sa uskutočnila tak, ako už bolo opísané v našej skupine [92]. Naša skupina už preukázala, že DMSO v najvyššej použitej koncentrácii (0,4 percenta) nemá protizápalovú alebo cytotoxickú aktivitu (údaje nie sú uvedené).

4.4.3. Expresia prozápalových proteínov, iNOS a COX-2 

Bunky RAW 264.7 (1,2 x 106 buniek/jamka) boli kultivované v 6-jamkových doštičkách a stabilizované cez noc. Potom sa tieto bunky podrobili 1 hodinovej inkubácii s EO pri koncentrácii 1,25 ul/ml, po ktorej nasledovala 24 hodinová aktivácia LPS (50 ng/ml). Negatívna kontrola bola tvorená neošetrenými bunkami a pozitívna kontrola bola tvorená len bunkami ošetrenými LPS. Príprava bunkových lyzátov prebiehala podľa protokolu, ktorý predtým vykonali Zuzarte et al. [92]

Obsah indukovateľnej syntázy oxidu dusnatého (iNOS) a cyklooxygenázy {{0}} (COX-2) bol hodnotený analýzou Western blot, ako už bolo opísané [13]. Na separáciu proteínov sa uskutočnil elektroforetický beh s 10 % (v/v) SDS-polyakrylamidovými gélmi pri 130 V počas 1,5 hodiny. Proteínové línie boli následne blotované na polyvinylidénfluoridové membrány (vopred aktivované metanolom) pri 400 mA počas 3 hodín. Membrány sa potom inkubovali 1 hodinu pri teplote miestnosti s nešpecifickými IgG s 5 % (w/v) odstredeného mlieka v TBS-T. Ďalej boli inkubované cez noc pri 4 °C so špecifickými anti-iNOS (1:500; R & D Systems) alebo anti-COX-2 (1:5000; Abcam, Cambridge, UK) protilátkami . Nakoniec boli premyté 30 minút TBS-T (10 minút, 3-krát) a inkubované 1 hodinu pri teplote miestnosti so sekundárnymi protilátkami (1:40,000; Santa Cruz Biotechnology, Dallas, TX, USA ) konjugovaný s chrenovou peroxidázou. Detekcia imunokomplexov bola uskutočnená pomocou chemiluminiscenčného skenera (Image Quant LAS 500, GE, Boston, MA, USA). Protilátky proti tubulínu (1:20 000; Sigma, St. Louis, MO, USA) sa použili ako kontrola nanášania. Na kvantifikáciu proteínov sa použil softvér ImageLab verzie 6.1.0 (Bio-Rad Laboratories Inc., Hercules, CA, USA).

4.5. Bunková migrácia

Bunková línia myších embryonálnych fibroblastov NIH 3T3 (ATCC CRL-1658) bola kultivovaná, ako už bolo opísané v [6].

4.5.2. Test bunkovej migrácie

Bunková migrácia sa uskutočňovala použitím testu škrabancov podľa Martinottiho et al. [94] s miernymi úpravami, ako už bolo uvedené [13]. Stručne, fibroblasty NIH 3T3 sa naočkovali v množstve 2,5 x 105 buniek/ml a nechali sa dosiahnuť konfluenciu. Potom bola rana spôsobená špičkou 200 ul pipety a neadherentné bunky boli odstránené premytím PBS pH 7,4. DMEM s 2 percentami FBS s alebo bez pridania EO (1,25 ul/ml). Obrázky sa získali 0, 12 a 18 hodín po poškriabaní pomocou mikroskopu s fázovým kontrastom a oblasť rany sa merala pomocou softvéru ImageJ/Fiji. Prezentované výsledky boli získané pomocou nasledujúcej rovnice:

4.6. Životaschopnosť buniek

Vplyv rôznych koncentrácií EO na životaschopnosť makrofágov a fibroblastov bol hodnotený pomocou testu redukcie resazurínu, ako už bolo uvedené [6].

4.7. Senescencia indukovaná etopozidmi

Starnutie bolo hodnotené pomocou etopozidu ako induktora starnutia, ako sa uvádza inde [95], s určitými modifikáciami. Stručne, po 24 hodinách etopozidu sa bunky ďalej inkubovali počas 72 hodín v prítomnosti alebo neprítomnosti (CT) S. aurea EO. Beta-galaktozidáza sa hodnotila pomocou komerčne dostupnej súpravy podľa protokolu výrobcu (č. 9860, Cell Signaling Technology Inc., Danvers, MA, USA). Výrazné modré sfarbenie indikuje aktivitu beta-galaktozidázy. Po vyvolaní farieb sa jamky odfotografovali na následnú obrazovú analýzu. Softvér ImageJ sa použil na kvantitatívnu analýzu vyhodnotením percenta starnúcich buniek.

4.8. Štatistická analýza 

Experimenty sa uskutočňovali aspoň v duplikáte pre tri nezávislé experimenty. Priemerné hodnoty ± SEM (štandardná chyba priemeru) sú uvedené vo výsledkoch. Štatistická významnosť protizápalových testov, testov bunkovej životaschopnosti a starnutia bola hodnotená jednosmernou analýzou rozptylu (ANOVA) a Dunnettovým post hoc testom s použitím GraphPad Prism verzie 9.3.0 (GraphPad Software, San Diego, CA , USA). Zatiaľ čo štatistická významnosť pre testy bunkovej migrácie bola hodnotená pomocou dvojcestnej ANOVA, po ktorej nasledovali Sydákove viacnásobné porovnávacie testy, hodnoty p < 0,05 boli akceptované ako štatisticky významné.

5. Závery

Táto práca posilňuje priaznivé účinky, ktoré sa zvyčajne pripisujú Salvia spp. overením niektorých tradičných použití pripisovaných S. aurea. Okrem toho bolo opísané jedinečné chemické zloženie s 1,8 cineolom, -pinénom, cis-tujónom, gáforom, (E)-karyofylén, trans-tujón, -pinén, kamfén a -humulén ako hlavné zlúčeniny. Tu uvádzame, že EO má protiplesňové, protizápalové účinky a účinky na hojenie rán, čím sa potvrdzuje tradičné použitie spojené s týmto druhom na liečbu kožných infekcií, chorôb súvisiacich so zápalom a rán.

Okrem toho táto štúdia po prvýkrát uvádza, že tento druh bol schopný prejavovať antisenescenčné účinky, čím ďalej podporuje záujem o tento druh. Preto tieto výsledky zdôrazňujú úlohu S. aurea pri zmierňovaní zápalu a infekcií spojených s kožou, čím posilňujú záujem o dermokozmetiku. Aj keď táto štúdia ukázala, že produkciu vysokohodnotných metabolitov s relevantnými biologickými aktivitami možno podporiť kultiváciou, presná chemická analýza pestovanej rastliny je nevyhnutná vzhľadom na extrémnu variabilitu chemického profilu v dôsledku genetických a environmentálnych faktorov. (stres, vlastnosti pôdy, obdobie zberu).

Príspevky autora:LS a AM; validácia, DM, EC, MJG, MTC a SP; formálna analýza, JMA-S., MJG a AP; vyšetrovanie, JMA-S., AM a AP; zdroje, AM, MTC a LS; spravovanie údajov, AP; písanie – príprava pôvodného návrhu, EC, DM, JMA-S., AP a AM; písanie – recenzie a úpravy, EC, DM, MTC, LS a AM; vizualizácia, JMA-S.; supervízia, LS a AM; administrácia projektov, LS; získavanie financií, LS a MTC Všetci autori si prečítali publikovanú verziu rukopisu a súhlasili s ňou.

Financovanie: Táto práca bola financovaná z operačného programu COMPETE 2020 – Operačný program pre konkurencieschopnosť a internacionalizáciu a portugalských národných fondov prostredníctvom FCT – Fundação para a Ciência ea Tecnologia v rámci projektov UIDB/04539/2020, UIDP/04539/2020 a LA/P8 2020.

Poďakovanie: Autori vďačne oceňujú vzácny príspevok Daniely Standen, The International Study and Language Institute (The University of Reading, Spojené kráľovstvo, d.standen@reading.ac.uk) za technickú podporu.

Referencie

1. Kaur, N.; Ahmed, T. Bioaktívne sekundárne metabolity liečivých a aromatických rastlín a ich vlastnosti v boji proti chorobám. V liečivých a aromatických rastlinách; Springer Nature: Basingstoke, Spojené kráľovstvo, 2021; s. 113–142. ISBN 978-3-030-58974-5.

2. Pinto, E.; Pina-Vaz, C.; Salgueiro, L.; Gonçalves, MJ; Costa-De-Oliveira, S.; Cavaleiro, C.; Palmeira, A.; Rodrigues, A.; Martinez-De-Oliveira, J. Antifungálna aktivita esenciálneho oleja Thymus pulegioides na druhy Candida, Aspergillus a dermatofyty. J. Med. Microbiol. 2006, 55, 1367–1373. [CrossRef]

3. Santos, EL; Freitas, PR; Araújo, ACJ; Almeida, RS; Tintino, SR; Paulo, CLR; Silva, ACA; Silva, LE; do Amaral, W.; Deschamps, C.; a kol. Antibakteriálny účinok antibiotík zosilnený esenciálnym olejom z Aloysia gratissima (Gillies & Hook.) Tronc. a jeho hlavná zložka beta-karyofylén. Phytomedicine Plus 2021, 1, 100100. [CrossRef]

4. Edris, AE Farmaceutický a terapeutický potenciál esenciálnych olejov a ich prchavých zložiek: Prehľad. Phytother. Res. 2007, 21, 308-323. [CrossRef]

5. Ghorbani, A.; Esmaeilizadeh, M. Farmakologické vlastnosti Salvia Officinalis a jej zložiek. J. Tradit. Doplniť. Med. 2017, 7, 433–440. [CrossRef]

6. Piras, A.; Maccioni, A.; Falconieri, D.; Porcedda, S.; Gonçalves, MJ; Alves-Silva, JM; Silva, A.; Cruz, MT; Salgueiro, L.; Maxia, A. Chemické zloženie a biologická aktivita silice Teucrium sodium L. subsp. kardioidy (Schreb.) Arcang. (Lamiaceae) z ostrova Sardínia (Taliansko). Nat. Prod. Res. 2022, 36, 5828–5835. [CrossRef]

7. Maccioni, A.; Falconieri, D.; Porcedda, S.; Piras, A.; Gonçalves, MJ; Alves-Silva, JM; Salgueiro, L.; Maxia, A. Antifungálna aktivita a chemické zloženie silice z nadzemných častí dvoch nových chemotypov Teucrium capitatum L. z ostrova Sardínia v Taliansku. Nat. Prod. Res. 2020, 35, 6007–6013. [CrossRef]

8. Piras, A.; Porcedda, S.; Falconieri, D.; Maxia, A.; Gonçalves, M.; Cavaleiro, C.; Gonc¸alves, MJ; Salgueiro, L. Protiplesňová aktivita esenciálneho oleja z Mentha spicata L. a Mentha pulegium L. voľne rastúcich na ostrove Sardínia (Taliansko). Nat. Prod. Res. 2021, 35, 993–999. [CrossRef]

9. Walker, JB; Sytsma, KJ Staminálna evolúcia v rode Salvia (Lamiaceae): Molekulárny fylogenetický dôkaz pre viacnásobný pôvod staminovej páky. Ann. Bot. 2007, 100, 375–391. [CrossRef]

10. Waller, SB; Cleff, MB; Serra, EF; Silva, AL; dos Reis Gomes, A.; de Mello, JRB; de Faria, RO; Meireles, MCA Rastliny z čeľade Lamiaceae ako zdroj antifungálnych molekúl v humánnej a veterinárnej medicíne. Microb. Patog. 2017, 104, 232–237. [CrossRef]

11. Cocco, E.; Maccioni, D.; Sanjust, E.; Falconieri, D.; Farris, E.; Maxia, A. Etnofarmakobotanika a diverzita stredomorských endemických rastlín v subregióne Marmilla, Sardínia, Taliansko. Rastliny 2022, 11, 3165. [CrossRef]

12. Afonso, AF; Pereira, OR; Fernandes, A.; Calhelha, RC; Silva, AMS; Ferreira, RCF; Cardoso, SM Fytochemické zloženie a bioaktívne účinky vodných extraktov Salvia africana, Salvia Officinalis "Icterina" a Salvia mexicana. Molekuly 2019, 24, 4327. [CrossRef]

13. Alves-Silva, JM; Cocco, E.; Piras, A.; Gonçalves, MJ; Silva, A.; Falconieri, D.; Porcedda, S.; Cruz, MT; Maxia, A.; Salgueiro, L. Odhalenie chemického zloženia a biologických vlastností Salvia cacaliifolia Benth. esenciálny olej. Rastliny 2023, 12, 359. [CrossRef]

14. Nkomo, MM; Katerere, DD; Vismer, HH; Cruz, TT; Balayssac, SS; Malet-Martino, MM; Makunga, NN Inhibícia Fusarium divokými populáciami liečivej rastliny Salvia africana-lutea L. spojená s metabolomickým profilovaním. Doplnok BMC. Altern. Med. 2014, 14, 99. [CrossRef]

15. Treska, LE Flóra južnej Afriky: Časť. 4 Lamiaceae; Botanický výskumný ústav: Pretória, Južná Afrika, 1985; Zväzok 28, ISBN 0621082686.

16. Makunga, NP; Van Staden, J. Efektívny systém na produkciu klonálnych rastliniek medicínsky významnej aromatickej rastliny: Salvia africana-lutea L. Plant Cell Tissue Organ Cult. 2007, 92, 63–72. [CrossRef]

17. Aston Philander, L. Etnobotanika Rasta bush medicíny Západného Kapska. J. Ethnopharmacol. 2011, 138, 578–594. [CrossRef]

18. Watt, JM; Breyer-Brandwijk, MG Liečivé a jedovaté rastliny južnej a východnej Afriky: Súhrn ich liečivého a iného použitia, chemického zloženia, farmakologických účinkov a toxikológie u človeka a zvierat; E. & S. Livingstone: Edinburgh, Spojené kráľovstvo, 1962.

19. Gupta, AK; Cooper, EA Aktualizácia v antifungálnej terapii dermatofytózy. Mycopathologia 2008, 166, 353–367. [CrossRef]

20. Matiz, C.; Friedlander, SF Infekcie a abscesy podkožného tkaniva. In Princípy a prax detských infekčných chorôb; Elsevier: Amsterdam, Holandsko, 2012; s. 454–462.e2. [CrossRef]

21. De Oliveira, CB; Vasconcellos, C.; Sakai-Valente, NY; Sotto, MN; Luiz, FG; Belda Júnior, W.; Sousa, M. da GT de; Benard, G.; Criado, PR Toll-like receptors (TLR) 2 a 4 expresie keratinocytov od pacientov s lokalizovanou a diseminovanou dermatofytózou. Rev. Inst. Med. Trop. Sao Paulo 2015, 57, 57–61. [CrossRef]

22. Celestrino, GA; Reis, APC; Criado, PR; Benard, G.; Sousa, MGT Trichophyton rubrum vyvoláva fagocytárne a prozápalové reakcie v ľudských monocytoch prostredníctvom Toll-like receptora 2. Predná strana. Microbiol. 2019, 10, 2589. [CrossRef]

23. Sun, S.-C. Nekanonická dráha NF-B v imunite a zápale. Nat. Rev. Immunol. 2017, 17, 545–558. [CrossRef]

24. Rao, KMK Molekulárne mechanizmy regulujúce expresiu inos v rôznych typoch buniek. J. Toxicol. Environ. Zdravie časť B 2000, 3, 27–58. [CrossRef]

25. Minghetti, L. Cyklooxygenáza-2 (COX-2) pri zápalových a degeneratívnych ochoreniach mozgu. J. Neuropathol. Exp. Neurol. 2004, 63, 901-910. [CrossRef]

26. Sharma, A.; Gupta, S. Ochranný prejav herbonanoceutík ako antimykotík: Možný kandidát na liečivo pre dermatofytickú infekciu. Health Sci. Rep. 2022, 5, e775. [CrossRef]

27. Guo, S.; DiPietro, LA Faktory ovplyvňujúce hojenie rán. J. Dent. Res. 2010, 89, 219–229. [CrossRef]

28. Zuzarte, M.; Gonçalves, MJ; Cavaleiro, C.; Canhoto, J.; Vale-Silva, L.; Silva, MJ; Pinto, E.; Salgueiro, L. Chemické zloženie a protiplesňová aktivita éterických olejov Lavandula viridis LHér. J. Med. Microbiol. 2011, 60, 612–618. [CrossRef]

29. Martinez-Rossi, NM; Bitencourt, TA; Peres, NTA; Lang, EAS; Gomes, EV; Quaresemin, NR; Martins, poslanec; Lopes, L.; Rossi, A. Odolnosť dermatofytov voči antifungálnym liekom: Mechanizmy a prospekt. Predné. Microbiol. 2018, 9, 1108. [CrossRef]

30. Mourad, A.; Perfektné, JR Vojna proti kryptokokóze: Prehľad antifungálneho arzenálu. Mem. Inst. Oswaldo Cruz 2018, 113, 7. [CrossRef]

31. Vonkeman, ON; van de Laar, MAFJ Nesteroidné protizápalové lieky: Nežiaduce účinky a ich prevencia. Semin. Arthritis Rheum. 2010, 39, 294–312. [CrossRef]

32. Kamatou, GPP; van Zyl, RL; van Vuuren, SF; Figueiredo, AC; Barroso, JG; Pedro, LG; Viljoen, AM Sezónne variácie v zložení esenciálnych olejov, toxicite oleja a biologickej aktivite rozpúšťadlových extraktov troch druhov šalvie juhoafrickej. S. Afr. J. Bot. 2008, 74, 230–237. [CrossRef]

33. Kamatou, GPP; van Zyl, RL; van Vuuren, SF; Viljoen, AM; Figueiredo, AC; Barroso, JG; Pedro, LG; Tilney, PM; Barroso, JG Chemické zloženie, typy listových trichómov a biologické aktivity esenciálnych olejov štyroch príbuzných druhov šalvie pochádzajúcich z južnej Afriky. J. Essent. Oil Res. 2006, 18, 72–79. [CrossRef]

34. Najar, B.; Mecacci, G.; Nardi, V.; Cervelli, C.; Nardoni, S.; Mancini, F.; Ebani, VV; Giannecchini, S.; Pistelli, L. Prchavé látky a antifungálna-antibakteriálna-antivírusová aktivita juhoafrickej šalvie spp. éterické oleje pestované v jednotných podmienkach. Molekuly 2021, 26, 2826. [CrossRef]

35. Cowling, RM; Rundel, PW; Lamont, BB; Arroyo, MK; Arianoutsou, M. Rozmanitosť rastlín v stredomorských klimatických oblastiach. Trends Ecol. Evol. 1996, 11, 362-366. [CrossRef]

36. Médail, F. Ekosystémy: Stredomorie. In Encyklopédia ekológie, zväzok 3; Elservier Inc.: Oxford, Spojené kráľovstvo, 2008; 5. zväzok, s. 2296–2308.

37. Adams, RP Identification of Essential Oil Components by Gas Chromatography/Quadrupol Mass Spectrometry, 4. vydanie; Allured Publishing Corporation: Carol Stream, IL, USA, 2007.

38. Knižnica hmotnostného spektra Národného inštitútu pre štandardy a technológie (NIST/EPA/NIH).

39. Guijarro-Muñoz, I.; Compte, M.; Álvarez-Cienfuegos, A.; Álvarez-Vallina, L.; Sanz, L. Lipopolysacharid aktivuje signálnu dráhu NF-KB sprostredkovanú Toll-like Receptor 4 (TLR4) a prozápalovú odpoveď v ľudských pericytoch. J. Biol. Chem. 2014, 289, 2457–2468. [CrossRef]

40. Manning, J.; Goldblatt, P. Rastliny floristickej oblasti Veľkého Kapska. 1: The Core Cape Flora; Juhoafrický národný inštitút pre biodiverzitu: Pretória, Južná Afrika, 2012; ISBN 1919976744.

41. Lim Ah Tock, MJ; Kamatou, GPP; Combrinck, S.; Sandasi, M.; Viljoen, AM Chemometrické hodnotenie variácií esenciálnych olejov troch druhov šalvie pochádzajúcich z Južnej Afriky. Fytochémia 2020, 172, 112249. [CrossRef]

42. Fokou, JBH; Dongmo, PMJ; Boyom, FF; Fokou, JBH; Dongmo, PMJ; Boyom, FF Chemické zloženie a farmakologické vlastnosti esenciálneho oleja. In Esenciálne oleje — Oleje prírody; El-Shemy, H., Ed.; IntechOpen: Londýn, Spojené kráľovstvo, 2020; s. 13–36. ISBN 978-1-78984-641-6.

43. Figueiredo, AC; Barroso, JG; Pedro, LG; Scheffer, JJC Faktory ovplyvňujúce produkciu sekundárnych metabolitov v rastlinách: Prchavé zložky a esenciálne oleje. Príchuť. Fragr. J. 2008, 23, 213-226. [CrossRef]

44. van Vuuren, S.; Ramburrun, S.; Kamatou, G.; Viljoen, A. Domorodé juhoafrické esenciálne oleje ako potenciálne antimikrobiálne látky na liečbu zápachu nôh (bromodóza). S. Afr. J. Bot. 2019, 126, 354–361. [CrossRef]

45. Scott, G.; Springfield, EP; Coldrey, N. Farmakognostická štúdia 26 juhoafrických druhov rastlín používaných ako tradičné lieky. Pharm Biol. 2004, 42, 186-213. [CrossRef]

46. ​​Oosthuizen, CB; Gasa, N.; Hamilton, CJ; Lall, N. Inhibícia mykotioldisulfidreduktázy a mykobakteriálneho biofilmu vybranými juhoafrickými rastlinami. S. Afr. J. Bot. 2019, 120, 291–297. [CrossRef]

47. Alves, M.; Gonçalves, MJ; Zuzarte, M.; Alves-Silva, JM; Cavaleiro, C.; Cruz, MT; Salgueiro, L. Odhalenie protiplesňového potenciálu dvoch esenciálnych olejov tymiánu iberského: Účinok na zárodky C. albicans a vykonané biofilmy. Predné. Pharmacol. 2019, 10, 446. [CrossRef]

48. Shukla, R.; Singh, P.; Prakash, B.; Dubey, NK Antifungálna látka, inhibícia aflatoxínu a antioxidačná aktivita esenciálneho oleja Callistemon lanceolatus (Sm.) Sweet a jeho hlavná zložka 1,8-cineol proti hubovým izolátom zo semien cíceru. Kontrola potravín 2012, 25, 27–33. [CrossRef]

49. Yu, D.; Wang, J.; Shao, X.; Xu, F.; Wang, H. Antifungálne spôsoby účinku oleja z čajovníka a jeho dvoch charakteristických zložiek proti Botrytis cinerea. J. Appl. Microbiol. 2015, 119, 1253–1262. [CrossRef]

50. Morcia, C.; Malnati, M.; Terzi, V. In vitro antifungálna aktivita terpinén{1}}olu, eugenolu, karvónu, 1,{3}}cineolu (eukalyptolu) a tymolu proti mykotoxigénnym rastlinným patogénom. Potravinový doplnok. Contam. Časť A 2011, 29, 415–422. [CrossRef]

51. Kim, H.-M.; Kwon, H.; Kim, K.; Lee, S.-E. Antifungálne a anti-aflatoxigénne aktivity 1,8-cineolu a t-cinnamaldehydu na Aspergillus afflatus. Appl. Sci. 2018, 8, 1655. [CrossRef]

52. da Silva, AČR; Lopes, PM; de Azevedo, MMB; Costa, DCM; Alviano, CS; Alviano, DS Biologické aktivity a-pinénových a -pinénových enantiomérov. Molekuly 2012, 17, 6305–6316. [CrossRef]

53. Jang, S.-K.; Lee, S.-Y.; Kim, S.-H.; Hong, C.-Y.; Park, M.-J.; Choi, I.-G. Protiplesňové účinky esenciálnych olejov zo šiestich ihličnanov proti Aspergillus fumigatus. J. Korean Wood Sci. Technol. 2012, 40, 133–140. [CrossRef]

54. de Macêdo Andrade, AC; Rosalen, PL; Freires, IA; Scotti, L.; Scotti, MT; Aquino, SG; de Castro, RD Antifungálna aktivita, spôsob účinku, predpoveď dokovania a antibiofilmové účinky (plus)- -pinénových enantiomérov proti Candida spp. Curr. Hore. Med. Chem. 2018, 18, 2481–2490. [CrossRef]

55. Shin, S. Antifungálne aktivity esenciálnych olejov z Glehnia littoralis samotných a v kombinácii s ketokonazolom. Nat. Prod. Sci. 2005, 11, 92–96.

56. Iraji, A.; Yazdanpanah, S.; Alizadeh, F.; Mirzamohammadi, S.; Ghasemi, Y.; Pakshir, K.; Yang, Y.; Zomorodian, K. Skríning antifungálnych aktivít monoterpénov a ich izomérov proti druhom Candida. J. Appl. Microbiol. 2020, 129, 1541–1551. [CrossRef]

57. Jaafar, M.; Mitri, S.; Na'was, T. Inhibícia rastu gramnegatívnych baktérií a tvorby biofilmu alfa thujónom. IOSR J. Pharm. Biol. Sci. 2018, 13, 2. [CrossRef]

58. Teker, T.; Sefer, Ö.; Gazda ˘glı, A.; Yörük, E.; Varol, G.˙I.; Albayrak, G. -thujon vykazuje antifungálnu aktivitu proti F. graminearum indukciou oxidačného stresu, apoptózy, epigenetických zmien a zníženej syntézy toxínov. Eur. J. Plant Pathol. 2021, 160, 611–622. [CrossRef]

59. Huo, H.; Gu, Y.; Cao, Y.; Liu, N.; Jia, P.; Kong, W. Antifungálna aktivita gáforu proti štyrom fytopatogénom Fusarium. S. Afr. J. Bot. 2022, 148, 437–445. [CrossRef]

60. Wu, K.; Lin, Y.; Chai, X.; Duan, X.; Zhao, X.; Chun, C. Mechanizmy antibakteriálneho pôsobenia esenciálneho oleja z Cinnamomum camphora var. linaloofera Fujita proti Escherichia coli. Food Sci. Nutr. 2019, 7, 2546–2555. [CrossRef]

61. Magiatis, P.; Skaltsounis, A.-L.; Chinou, I.; Haroutounian, SA Chemické zloženie a in-vitro antimikrobiálna aktivita esenciálnych olejov troch gréckych druhov Achillea. Z. Für Nat. C 2002, 57, 287-290. [CrossRef] [PubMed]

62. Dahham, S.; Tabana, Y.; Iqbal, M.; Ahamed, M.; Ezzat, M.; Majid, A.; Majid, A. Protirakovinové, antioxidačné a antimikrobiálne vlastnosti seskviterpén-karyofylén z esenciálneho oleja Aquilaria crassna. Molekuly 2015, 20, 11808–11829. [CrossRef]

63. Pieri, FA; de Castro Souza, MC; Vermelho, LLR; Vermelho, MLR; Perciano, PG; Vargas, FS; Borges, APB; da Veiga-Junior, VF; Moreira, MAS Použitie -karyofylénu na boj proti tvorbe bakteriálneho zubného povlaku u psov. BMC Vet. Res. 2016, 12, 216. [CrossRef]

64. Goren, AC; Piozzi, F.; Akciček, E.; Kılıç, T.; Çarıkçı, S.; Mozio ˘glu, E.; Setzer, WN Zloženie esenciálnych olejov dvadsiatich dvoch druhov Stachys (horský čaj) a ich biologické aktivity. Phytochem. Lett. 2011, 4, 448–453. [CrossRef]

65. Yadav, N.; Chandra, H. Potlačenie zápalových a infekčných reakcií v pľúcnych makrofágoch eukalyptovým olejom a jeho zložkou 1,8-cineol: Úloha receptorov rozpoznávania vzoru TREM-1 a NLRP3, regulátora MAP kinázy MKP{{5 }} a NFκB. PLoS ONE 2017, 12, e0188232. [CrossRef]

66. Pivo, AM; Zagorčev, P.; Filipová, DM; Lukanov, J. Účinky 1,8-cineolu na aktivitu cyklooxygenázy a izoforiem cyklooxygenázy 1 a cyklooxygenázy 2. Nat. Prod. Chem. Res. 2017, 5, 1000253. [CrossRef]

67. Bastos, VPD; Gomes, AS; Lima, FJB; Brito, TS; Soares, PMG; Pinho, JPM; Silva, CS; Santos, AA; Souza, MHLP; Magalhães, PJC inhaloval 1,{2}}cineol znižuje zápalové parametre v dýchacích cestách morčiat infikovaných ovalbumínom. Základné. Clin. Pharmacol. Toxicol. 2011, 108, 34–39. [CrossRef]

68. Juergens, LJ; Racké, K.; Tuleta, I.; Stoeber, M.; Juergens, UR Protizápalové účinky 1,8-cineolu (eukalyptolu) zlepšujú účinky glukokortikoidov in vitro: Nový prístup k prídavnej liečbe CHOCHP a astmy, ktorá nešetrí steroidy? Synergia 2017, 5, 1–8. [CrossRef]

69. Santos, FA; Rao, VSN Protizápalové a antinociceptívne účinky 1,{2}}cineolu, terpenoidného oxidu prítomného v mnohých rastlinných esenciálnych olejoch. Phytother. Res. 2000, 14, 240–244. [CrossRef]

70. Mohammed, HA; Mohammed, SAA; Khan, O.; Ali, HM Topická eukalyptolová masť urýchľuje hojenie rán a má antioxidačné a protizápalové účinky pri modeli popálenia kože u potkanov. J. Oleo Sci. 2022, 71, ess22214. [CrossRef]

71. Juergens, UR; Dethlefsen, U.; Steinkamp, ​​G.; Gillissen, A.; Regges, R.; Vetter, H. Protizápalová aktivita 1.8-cineolu (eukalyptolu) pri bronchiálnej astme: dvojito zaslepená placebom kontrolovaná štúdia. Respir. Med. 2003, 97, 250-256. [CrossRef]

72. Lima, PR; de Melo, TS; Carvalho, KMMB; de Oliveira, Í.B.; Arruda, BR; de Castro Brito, GA; Rao, VS; Santos, FA 1,8-cineol (eukalyptol) zlepšuje akútnu pankreatitídu vyvolanú ceruleínom prostredníctvom modulácie cytokínov, oxidačného stresu a aktivity NF-KB u myší. Life Sci. 2013, 92, 1195–1201. [CrossRef]

73. Coté, H.; Boucher, M.-A.; Pichette, A.; Legault, J. Protizápalové, antioxidačné, antibiotické a cytotoxické aktivity Tanacetum vulgare l. esenciálny olej a jeho zložky. Lieky 2017, 4, 34. [CrossRef]

74. Rufino, AT; Ribeiro, M.; Judáš, F.; Salgueiro, L.; Lopes, MC; Cavaleiro, C.; Mendes, AF Protizápalová a chondroprotektívna aktivita (plus)- -pinénu: Štrukturálna a enantiomérna selektivita. J. Nat. Prod. 2014, 77, 264–269. [CrossRef]

75. Schepetkin, IA; Kushnarenko, SV; Özek, G.; Kirpotina, LN; Utegenová, GA; Kotukhov, YA; Danilová, AN; Özek, T.; Bašer, KHC; Quinn, MT Inhibícia ľudských neutrofilných reakcií esenciálnym olejom Artemisia kotuchovii a jeho zložkami. J. Agric. Food Chem. 2015, 63, 4999–5007. [CrossRef]

76. dos Santos, E.; Leitão, MM; Aguero Ito, CN; Silva-Filho, SE; Arena, AC; de Souza Silva-Comar, FM; Nakamura Cuman, RK; Oliveira, RJ; Nazari Formagio, AS; Leite Kassuya, CA Analgetické a protizápalové účinky esenciálneho oleja a gáfru izolovaného z listov Ocimum kilimandscharicum Gürke. J. Ethnopharmacol. 2021, 269, 113697. [CrossRef]

77. Adhikari, A.; Bhandari, S.; Pandey, DP Protizápalové zlúčeniny gáfor a metylsalicylát z tradične používanej rastliny na liečbu bolesti Equisetum arvense LJ Nepal Chem. Soc. 2019, 40, 1–4. [CrossRef]

78. Silva-Filho, S.; de Souza Silva-Comar, F.; Wiirzler, L.; do Pinho, R.; Greenspan, R.; Bersani-Amado, C.; Cuman, R. Vplyv gáforu na správanie leukocytov in vitro a in vivo pri akútnej zápalovej odpovedi. Trop. J. Pharm. Res. 2015, 13, 2031. [CrossRef]

79. Cho, JY; Chang, H.-J.; Lee, S.-K.; Kim, H.-J.; Hwang, J.-K.; Chun, HS Zlepšenie kolitídy vyvolanej dextránsulfátom sodným u myší perorálnym podaním -karyofylénu, seskviterpénu. Life Sci. 2007, 80, 932-939. [CrossRef]

80. Gushiken, LFS; Beserra, FP; Hussni, MF; Gonzaga, MT; Ribeiro, viceprezident; de Souza, PF; Campos, JCL; Massaro, TNC; Hussni, CA; Takahira, RK; a kol. Beta-karyofylén ako antioxidant, protizápalová a reepitelizačná aktivita v modeli excízie kožných poranení potkanov. Oxid. Med. Cell Longev. 2022, 2022, 1.–21. [CrossRef]

81. Brito, LF; Oliveira, HBM; Neves Seliš, N.; Souza, CLS; Júnior, MNS; Souza, EP; da Silva, LSC; Souza Nascimento, F.; Amorim, AT; Campos, GB; a kol. Protizápalová aktivita -karyofylénu kombinovaná s kyselinou dokosahexaénovou v modeli sepsy vyvolanej Staphylococcus aureus u myší. J. Sci. Food Agric. 2019, 99, 5870–5880. [CrossRef]

82. Sousa, LFB; Oliveira, HBM; das Neves Selis, N.; Morbeck, LLB; Santos, TC; da Silva, LSC; Viana, JCS; Reis, MM; Sam patio, BA; Campos, GB; a kol. -karyofylén a kyselina dokozahexaénová, izolované alebo spojené, majú potenciálne antinociceptívne a protizápalové účinky in vitro a in vivo. Sci. Rep. 2022, 12, 19199. [CrossRef]

83. Scandiffio, R.; Geddo, F.; Cottone, E.; Querio, G.; Antoniotti, S.; Gallo, poslanec; Maffei, ME; Bovolin, P. Ochranné účinky (e)- -karyofylénu (bcp) pri chronickom zápale. Živiny 2020, 12, 3273. [CrossRef]

84. Salas-Oropeza, J.; Jimenez-Estrada, M.; Perez-Torres, A.; Castell-Rodriguez, AE; Becerril-Millan, R.; Rodriguez-Monroy, MA; Jarquin-Yañez, K.; Canales-Martinez, MM Aktivita -pinénu a -felandrénu pri hojení rán. Molekuly 2021, 26, 2488. [CrossRef]

85. Rocha Caldas, GF; da Silva Oliveira, AR; Araújo, AV; Lafayette, SSL; Albuquerque, GS; da Costa Silva-Neto, J.; Costa-Silva, JH; Ferreira, F.; da Costa, JGM; Wanderley, AG Gastroprotektívne mechanizmy monoterpénu 1,8-cineolu (eukalyptolu). PLoS ONE 2015, 10, e0134558. [CrossRef]

86. Chabane, S.; Boudjelal, A.; Napoli, E.; Benkhaled, A.; Ruberto, G. Fytochemické zloženie, antioxidačné a hojivé aktivity rán Teucrium polium subsp. capitatum (L.) Briq. esenciálny olej. J. Essent. Oil Res. 2021, 33, 143–151. [CrossRef]

87. Tran, TA; Ho, MT; Pieseň, YW; Cho, M.; Cho, SK Camphor indukuje proliferatívne a anti-senescenčné aktivity v ľudských primárnych dermálnych fibroblastoch a inhibuje tvorbu vrások vyvolanú UV žiarením v koži myší. Phytother. Res. 2015, 29, 1917–1925. [CrossRef]

88. Rodenak-Kladniew, B.; Castro, A.; Stärkel, P.; Galle, M.; Crespo, R. 1,8-Cineole podporuje zastavenie bunkového cyklu G0/G1 a starnutie indukované oxidačným stresom v bunkách HepG2 a senzibilizuje bunky na lieky proti starnutiu. Life Sci. 2020, 243, 117271. [CrossRef]

89. Riaditeľstvo pre kvalitu liekov a zdravotnú starostlivosť Rady Európy. Európsky liekopis; EDQM: Štrasburg, Francúzsko, 2010; ISBN 978-92-871-6700-2.

90. Van den Dool, H.; Kratz, PD Zovšeobecnenie systému retenčného indexu vrátane lineárnej teplotne programovanej deliacej chromatografie plyn-kvapalina. J. Chromatogr. 1963, 11, 463–471. [CrossRef]

91. Ústav klinických a laboratórnych noriem CLSI. Referenčná metóda pre testovanie antifungálnej citlivosti vláknitých húb na riedenie bujónu. CLSI dokument M38-A2, schválená norma, 2. vydanie; Inštitút pre klinické a laboratórne štandardy: Wayne, PA, USA, 2008; Zväzok 28, ISBN 1-56238-668-9.

92. Zuzarte, M.; Alves-Silva, JM; Alves, M.; Cavaleiro, C.; Salgueiro, L.; Cruz, MT Nové poznatky o protizápalovom potenciáli a bezpečnostnom profile esenciálnych olejov Thymus carnosus a Thymus camphoratus a ich hlavných zlúčenín. J. Ethnopharmacol. 2018, 225, 10–17. [CrossRef]

93. Green, LC; Wagner, DA; Glogowski, J.; kapitán, PL; Wishnok, JS; Tannenbaum, SR Analýza dusičnanov, dusitanov a [15N] dusičnanov v biologických tekutinách. Anal. Biochem. 1982, 126, 131–138. [CrossRef]

94. Martinotti, S.; Ranzato, E. Test hojenia rán po poškriabaní. In Epidermal Cells: Methods in Molecular Biology; Turksen, K., Ed.; Humana: New York, NY, USA, 2019; Ročník 2109, s. 225–229. [CrossRef]

95. Moreira, P.; Sousa, FJ; Maťoš, P.; Brites, GS; Gonçalves, MJ; Cavaleiro, C.; Figueirinha, A.; Salgueiro, L.; Batista, MT; Branco, PC; a kol. Chemické zloženie a účinok proti kožným zmenám bioaktívnych extraktov získaných hydrodestiláciou listov Eucalyptus globulus. Pharmaceutics 2022, 14, 561. [CrossRef]

【Ďalšie informácie: david.deng@wecistanche.com / WhatApp:{0}}】