Predné bazolaterálne neuróny amygdaly obsahujú engram pamäte vzdialeného strachu, časť 1

Úvod:

Ohrozujúce environmentálne podnety často vytvárajú trvalé spomienky na strach, ale ako sa tieto tvoria a uchovávajú, zostáva aktívne skúmané.

Pamäť strachu je formou pamäte v našom mozgu. Je to veľmi špeciálna forma pamäte, ktorá v nás často vyvoláva strach, strach a nervozitu. Ale vzťah medzi touto spomienkou na strach a našou pamäťou je veľmi zložitý.

Po prvé, spomienky na strach nemajú nič spoločné s našou krátkodobou pamäťou. Väčšina spomienok na strach je uložená v našich dlhodobých pamäťových bankách. To je dôvod, prečo sa nám niekedy v mysliach vznášajú spomienky z dávnych čias.

Po druhé, spomienky na strach nemusia nevyhnutne ovplyvňovať našu pamäť. Aj keď môže spôsobiť zmeny v našej pozornosti a nálade, neexistuje žiadny dôkaz, že spôsobuje stratu pamäti. Mnoho ľudí môže mať stále veľmi silné spomienky po tom, čo zažili nejaké hrozné veci.

Nakoniec by sme nemali dovoliť, aby sa strašné spomienky stali témou našich životov. Musíme prijať pozitívne opatrenia na spracovanie týchto spomienok a posunúť sa pozitívnejším smerom. To zahŕňa terapiu, byť sociálne aktívny, cvičiť svoje telo a mozog a udržiavať pozitívne myslenie a duševné zdravie.

Takže aj keď nám strašné spomienky môžu spôsobiť veľa stresu a nepohodlia, musíme veriť vo svoje schopnosti a úsilie. Môžeme čeliť týmto strašným spomienkam, posilniť svoju pamäť, rásť a stať sa lepšími a sebavedomejšími ľuďmi. Je vidieť, že si musíme zlepšiť pamäť. Cistanche deserticola môže výrazne zlepšiť pamäť, pretože Cistanche deserticola je tradičný čínsky liečivý materiál s mnohými jedinečnými účinkami, z ktorých jedným je zlepšenie pamäte. Účinnosť mletého mäsa pochádza z rôznych aktívnych zložiek, ktoré obsahuje, vrátane kyselín, polysacharidov, flavonoidov atď. Tieto zložky môžu podporovať zdravie mozgu rôznymi spôsobmi.

Kliknite na položku Poznať krátkodobú pamäť, ako sa zlepšiť

Predpokladá sa, že spomienka na nedávnu pamäť strachu odráža reaktiváciu neurónov vo viacerých oblastiach mozgu, aktivovaných počas formovania pamäte, čo naznačuje, že anatomicky distribuované a prepojené neurónové súbory obsahujú engramy pamäte strachu.

Rozsah, v akom anatomicky špecifické aktivačné reaktivačné engramy pretrvávajú počas dlhodobého vybavovania si pamäte strachu, však zostáva do značnej miery nepreskúmaný. Predpokladali sme, že hlavné neuróny v prednej bazolaterálnej amygdale (BLA), ktoré kódujú negatívnu valenciu, sa akútne reaktivujú počas vzdialeného vybavovania pamäte strachu, aby riadili správanie strachu.

Metódy:

Pomocou dospelých potomkov myší TRAP2 a Ai14 sa trvalá expresia tdTomato použila na "TRAP" neurónov aBLA, ktoré podstúpili aktiváciu Fos počas kontextového podmieňovania strachu (elektrické šoky) alebo iba kontextového podmieňovania (bez šokov) (n=5/skupina) . O tri týždne neskôr boli myši znovu vystavené rovnakým kontextovým podnetom na vyvolanie vzdialenej pamäte a potom boli obetované na fosimunohistochémiu.

Výsledky:

TRAPed (tdTomato +), Fos + a reaktivované (dvojito označené) neurónové súbory boli väčšie v strachu ako kontextovo podmienené myši, pričom stredná podoblasť a stredné/kaudálne dorzomediálne kvadranty aBLA vykazovali najväčšie hustoty všetkých troch populácií súborov.

Zatiaľ čo súbory paradajky + boli dominantne glutamátergické v kontexte a skupinách strachu, správanie zmrazenia počas vzdialeného vyvolávania pamäte nekorelovalo s veľkosťou súborov v žiadnej skupine.

Diskusia:

Dospeli sme k záveru, že hoci sa formuje a pretrváva pamäťový engram strachu obsahujúci aBLA a pretrváva vo vzdialenom časovom bode, plasticita ovplyvňujúca elektrofyziologické reakcie engramových neurónov, nie ich veľkosť populácie, kóduje pamäť strachu a riadi behaviorálne prejavy dlhodobého vybavovania si pamäte strachu.

Úvod

Podnety vyvolávajúce strach často vytvárajú silné a trvalé asociatívne spomienky, ktoré spájajú environmentálne podnety s ohrozujúcimi životnými udalosťami.

Následné stretnutia s podobne vnímanými hrozbami majú za následok silnejšie ochranné správanie, ktoré odráža pamäť strachu. Chyby v spracovaní asociácie strachu môžu viesť k psychiatrickým výsledkom s negatívnou valenciou, vrátane úzkosti a posttraumatickej stresovej poruchy (PTSD) (Tovote et al., 2015).

Pochopenie úplnej zložitosti mechanizmov, ktoré sú základom pamäte strachu, je nevyhnutné na identifikáciu abnormalít funkčných okruhov, ktoré podporujú psychiatrické ochorenia súvisiace so strachom a navrhujú nové terapeutické ciele na obnovenie normálneho spracovania strachu.

Počas niekoľkých posledných desaťročí sa výskum pamäte strachu vo veľkej miere zameral na vytváranie, ukladanie a vybavovanie krátkodobej pamäte (Kimand Jung, 2006; Kim a Cho, 2020; Lee a kol., 2021).

Štúdie preukázali, že široko distribuované prepojené neurónové zoskupenia CNS sú zodpovedné za tvorbu a ukladanie pamäte strachu (Ramirez a kol., 2013; Liu a kol., 2014; Roy a kol., 2022). Aktivácia týchto súborov vnímanými hrozbami vedie k zosilnenému synaptickému prenosu, ktorý predstavuje pretrvávajúci fyzický odtlačok známy ako pamäťový engram (Yuan et al., 2011; Miyawaki a Mizuseki, 2022).

Predpokladá sa, že vyvolanie krátkodobej pamäte odráža reaktiváciu rovnakých neurónových súborov, ktoré boli aktivované pôvodne počas formovania pamäte, pričom dôkazy naznačujú, že aj čiastočná aktivácia jedného neurónového súboru môže vyvolať správanie súvisiace so strachom, čo svedčí o vybavovaní pamäte (Roy et al., 2022 ). Zatiaľ čo stanatomaticky stabilné potencované obvodové engramy môžu vysvetliť krátkodobú pamäť strachu, rozsah, v akom sa podieľajú na dlhodobej pamäti strachu, zostáva nejasný.

Hoci sa predpokladá, že konsolidácia dlhodobej pamäte strachu závisí od progresívneho alebo sporadického posilňovania krátkodobej pamäte, niekoľko nedávnych štúdií naznačuje, že neurónové súbory s krátkodobou pamäťou strachu podliehajú časovo závislej reorganizácii, čo vedie k migrácii uloženej pamäte do iného súboru neurónov buď v rámci rovnakú oblasť mozgu (DeNardo et al., 2019) alebo celkom odlišné oblasti mozgu (Frankland a Bontempi, 2005; Do Monte et al., 2016).

Bazolaterálna amygdala (BLA) je oblasť mozgu, ktorá je integrálnou súčasťou pamäte strachu a podieľa sa na nedávnej aj vzdialenej pamäti strachu (Maren a kol., 1996; Gale a kol., 2004; Kitamura a kol., 2017; Liu a kol. ., 2022).

Je pozoruhodné, že správy popisujú špecifický krátkodobý engram strachu-pamäti v BLA, ktorý je (1) aktivovaný počas formovania pamäte, (2) reaktivovaný počas vybavovania pamäte a (3) schopný riadiť správanie podobné strachu v kontextoch bez strachu ( Royet al., 2022; Zaki a kol., 2022). Avšak rozsah, v akom sa neurónový súbor aBLA aktivovaný počas tvorby pamäte reaktivuje počas vzdialeného vyvolávania pamäte, zostáva nejasný.

V tejto štúdii sme testovali hypotézu, že reaktivácia súboru pamäte BLAfear sa pozoruje vo vzdialenom časovom bode 3 týždne po kondicionovaní strachu. Mimoriadne dôležité je, že obvody v BLA prispievajú k averzívnemu správaniu aj k správaniu hľadajúcemu odmenu (Hu, 2016), pričom neuróny negatívnej valencie reagujú na strachové stimuly lokalizované špecificky na predné BLA (aBLA) (Goosensand Maren, 2001; Kim et al., 2016, 2017; Zhang a kol., 2020).

So zameraním na aBLA sme použili druhú generáciu cielenej rekombinácie u transgénnych myší s aktivovanými populáciami (TRAP2) (DeNardo et al., 2019), v ktorých je aktivita Cre-rekombinázy viazaná na c-fos bezprostredné skoré prvky zosilňovača génov prostredníctvom vylepšeného Cre. - komplex estrogénových receptorov (ER). Neuróny exprimujúce tento komplex môžu podstúpiť perzistentnú Cre rekombináciu, tj môžu byť "TRAPované" podávaním ER agonistatamoxifénu alebo jeho kratšie pôsobiaceho analógu 4-hydroxytamoxifénu (4-OHT), čo umožňuje pretrvávajúcu expresiu Cre -závislé efektorové reportérové ​​molekuly.

Tu sme krížili myši TRAP2 a reportérovú líniu tdTomato závislú od Cre Ai14 (Madisen et al., 2010) a kvantifikovali sme, do akej miery sú neuróny aBLA TRAPed (tdTomatopozitívne) počas kontextového kondicionovania strachu reaktivované (vyjadrujú imunoreaktívny proteín Fos) počas vzdialeného vybavovania pamäte. 3 týždne neskôr.

Rovnako ako v krátkodobej pamäti strachu, naše zistenia podporujú prítomnosť dlhodobých glutamátergických neuronálnych súborov s pamäťou strachu v aBLA.

Predovšetkým však veľkosť neurónových súborov aBLA, či už sú aktivované počas kondicionovania alebo vzdialeného vybavovania pamäte alebo oboch, nesúvisela so správaním strachu, čo naznačuje, že povaha plasticity spojenej s učením strachu a jej prípadný vplyv na elektrofyziologické reakcie súborových neurónov spojené s vybavovaním pamäte strachu. , nie veľkosť populácie súboru, primárne poháňa správanie vzdialeného strachu.

Materiály a metódy

Etické schválenie

Experimentálne postupy boli schválené Inštitucionálnym výborom pre starostlivosť o zvieratá a ich používanie na University of Texas Health SanAntonio a boli v súlade s pokynmi Národnej rady pre výskum pre starostlivosť a používanie laboratórnych zvierat.

Zvieratá

Chovné páry homozygotných myší Fos2A-iCreER/2A-iCreER knockin (TRAP2, #030323) a R26Ai14/+ (Ai14, #007914) myší (Jackson Laboratories) boli skrížené, aby sa vytvorili samce hemizygotnéhoTRAP2:Ai14 potomstvo (obr.A14). Po odstavení boli myši zoskupené a umiestnené v plastových klietkach (29 × 18 × 13 cm) s podstielkou pre hlodavce (Sani-chips; Harlan Teklad, Madison, WI, USA). Vivárium bolo kontrolované teplotou (24 °C) s :10 cyklov svetlo-tma (svetlá sa rozsvietia o 06:00). Jedlo a voda boli dostupné ad libitum. Experimenty sa začali, keď myši dosiahli vek 3 mesiacov.

Behaviorálny návyk

Rovnako ako v predtým publikovaných štúdiách (DeNardo et al., 2019), myši podstúpili päť po sebe nasledujúcich dní habituačného tréningu bezprostredne pred kontextovým podmieňovaním strachu, aby sa minimalizovala indukcia cfos v reakcii na experimentálne podmienky, ktoré nie sú podhodnotené (napr. manipulácia, skúmanie nového kontextu atď.)( Obrázok 1B).

Každé denné privykanie trvalo 3 minúty a pozostávalo z vystavenia kondicionačnej komore (HabitestModular System, Coulbourn Instruments). Senzorické podnety v komore pozostávajúce z (1) 70 % etanolu (čuchové podnety), (2) kovovej mriežkovej podlahy (haptické podnety), (3) vzorovaného pozadia (vizuálne podnety) a (4) viditeľného svetla (vizuálne podnety).

Okrem toho boli všetky myši držané v ruke jednu minútu pred umiestnením do kondicionačnej komory a po opustení komory boli jemne "drbané" počas 10 sekúnd. Habituačné sedenia boli navrhnuté tak, aby napodobňovali manipuláciu, ktorú by myši zažili v deň kondicionovania, okrem toho, že sa neuskutočnili žiadne intraperitoneálne (IP) injekcie.

Kontextové podmieňovanie strachu

Myši boli následne náhodne rozdelené do skupín podmienených strachom (šok) a kontextovo podmienených (bez šoku/iba kontextu) . Kondicionovanie sa začalo v deň 0 a pozostávalo z myší, ktoré sa umiestnili do kondicionačnej komory a nechali sa 2 skúmať. min. Počas nasledujúcich 4 minút dostali strachom podmienené myši sériu päťstopých šokov s trvaním 1 s a intenzitou 0.75 mA.

Šoky boli myšiam dodávané v nepredvídateľných intervaloch, ale medzi myšami konzistentné. Kontextovo podmienené myši podstúpili identický protokol s výnimkou šokov do nôh (obrázok 1C). Po ukončení úlohy každá myš dostala injekciu 4-hydroxytamoxifénu (4-OHT, 100 mg/kg, IP) rozpusteného v 4:1 kokteile slnečnicového a ricínového oleja pripraveného tak, ako bolo opísané vyššie (DeNardo et al., 2019).

Myši boli potom vrátené do svojich domovských klietok, kde boli ponechané nerušené v miestnosti susediacej so súborom správania najmenej 72 hodín pred obnovením normálneho umiestnenia.

Tri týždne po kondicionovaní strachom (deň 21) sa myši podrobili testovaniu na vzdialenú pamäť (obrázok 1D), ktoré pozostávalo z opätovného vystavenia testovacej komore so zmyslovými podnetmi identickými s tými, ktoré sú prítomné počas kondicionovania. Myšiam bolo umožnené skúmať komoru počas 5 minút, počas ktorých bolo hodnotené strachové správanie (posturálne zmrazenie) pomocou softvéru na sledovanie videa FreezeFrame 4 (ActiMetrics, Wilmette IL, USA).

Fixácia mozgu a histológia

Deväťdesiat minút po testovaní vyvolania pamäte boli myši hlboko anestetizované izofluránom (5 % v kyslíku) a potom podstúpili transkardiálnu perfúziu s 3 0 ml heparinizovaného (100 U/ml) izotonického fyziologického roztoku a následne 100 ml 4 % paraformaldehydu (PFA v 0,1 M fosfátovom pufri.

Mozgy boli odstránené, následne fixované v 4% PFA počas 6 hodín pri teplote miestnosti (~22°C) a kryoprotektované v 30% sacharóze{5}} 0,01 M fyziologickom roztoku s tlmivým fosfátom (PBS) počas aspoň 2 dní.

Mozgy boli potom narezané na koronálne rezy s hrúbkou 30 um na mraziacom mikrotóme (Leica Microsystems, Wetzlar, Nemecko) a rezy obsahujúce aBLA (Paxinos a Franklin, 2019), boli uložené v polyvinylpyrolidónovom (PVP) kryoprotektore pri -20 °C.

Imunohistochémia

Imunofarbenie sa uskutočnilo tak, ako už bolo opísané (Mitchell a kol., 2018; Maruyama a kol., 2019).

Stručne, rezy sa premyli v PBS, aby sa odstránil PVP kryoprotektant a inkubovali sa 30 min v PBS obsahujúcom borohydrid sodný (0,5 %), aby sa odstránili autofluorescenčné aldehydy generované počas fixácie. Po ďalších premytiach PBS sa rezy inkubovali v blokovacom pufri (3 % kozie sérum, 0,05 % Triton-X-100 v PBS) počas 2 hodín pri -22 °C, po čom nasledovala inkubácia pri 4 °C v blokovacom pufri obsahujúcom apolyklonálny králik c -Primárna protilátka Fos (Ab) počas 72 hodín (1:1 500, synaptické systémy #226 003) alebo monoklonálna myšacia primárna protilátka CaMKII počas 24 hodín (1:500, Enzo Life Sciences, #ADI-KAM-CA002).

Po ďalšom premytí boli rezy Fos a CaMKII oddelene inkubované počas 2 hodín pri -22 °C v biotinylovanej kozej sekundárnej protilátke proti králičiemu IgG (1:250 EMD Millipore #AP132B), po čom nasledovalo sériové premytie v 0. 05 M tris-pufrovaný fyziologický roztok (TBS) a 0,1 M octan sodný sa potom vystavili pôsobeniu streptavidín-Alexa Fluor 488 (1:250, Invitrogen #S11223) počas 1 hodiny v blokovacom roztoku na báze TBS.

Nakoniec boli rezy premyté v Tris pufri a pripevnené na sklíčka pomocou Fluoromount-G (Invitrogen, #00-4958-02).

Zobrazovanie a analýza

A{{0}}bitová trubica fotonásobiča prepojená s laserovým skenovacím konfokálnym mikroskopom Zeiss LSM710, vybaveným príslušnými laserovými čiarami, sa použila na zachytenie obrazov aBLA pomocou objektívu 20× (NA 0,8) a veľkosti dierky skenovacej hlavy 47,5 um. Pre každý obrázok sa použil softvér ImageJ (NIH, Bethesda, MD) na vytvorenie samostatných pixelových máp fluorescencie tdTomato (tj TRAPed, červená) a Alexa-488 (Fos, zelená).

Prahová intenzita pixelov a detekcia prekrývania vlnových dĺžok pre duálne značenie sa určili porovnaním tkanivových rezov spracovaných s primárnou Ab Fo a bez Fo's, ako bolo opísané vyššie (Mitchell a kol., 2018; Maruyama a kol., 2019). Údaje o počítaní buniek a spoločnej lokalizácii sa získali pomocou tietomi autonómny doplnok ImageJ EzColocalization (Stauffer et al., 2018).

Obrázky aBLA boli rozdelené do troch rostro-kaudálnych podoblastí takmer rovnakej veľkosti, pričom každá podoblasť bola definovaná špecifickým rozsahom rostrálno-kaudálnych stereotaxických súradníc vo vzťahu k tobregme: rostrálna, −0.8 až −1.1 mm; stredná, -1,2 až -1,5 mm; a kaudálne, -1,6 až -1,9 mm (Paxinos a Franklin, 2019). Manažér regiónu záujmu (ROI) v ImageJ sa potom použil na rozdelenie theaBLA pozdĺž jeho dorzálno-ventrálnych a mediálno-laterálnych kvadrantov vzhľadom na jeho obvod. Táto šablóna bola následne aplikovaná na všetky snímky v každej špecifikovanej rostrálno-kaudálnej podoblasti.

Vymedzenie perimetra aBLA sa použilo s doplnkom ImageJ EzColocalizationplug-in na vytvorenie 2-D priestorového grafu všetkých počtov neurónov v každom obrázku. Priestorové grafy v rámci rostrálnych, stredných a kaudálnych podoblastí boli potom oddelene prekryté. Výsledkom bolo 10 grafov strachu a 10 kontextových grafov pre rostrálnu podoblasť, 10 grafov strachu a 13 kontextových grafov pre strednú podoblasť a 12 grafov strachu a 13 kontextových grafov pre kaudálnu podoblasť.

Ak chcete opraviť väčší počet obrázkov podoblastí v kontextovej skupine, opravné faktory 1.0(10/10), 0,77 (10/13) a 0,92 (12/13) boli aplikované na rostrálne, stredné a kaudálne podoblasti kontextovej skupiny. Aby sa predišlo ovplyvneniu topografickej distribúcie počtov v kontextových údajoch, použil sa generátor náhodných čísel v programe MS Excel na identifikáciu toho, ktoré konkrétne počty sa majú vylúčiť z každej podregiónu aBLA.

Ďalej sme ďalej rozdelili podoblasti aBLA na kvadranty označené 1–4 (pozri obrázok 2D). Na tento účel bola v programe MS-Excel určená súradnica priesečníka (0, 0) ako bod v rovine 2-D, v ktorom sa plocha každého kvadrantu približne rovná jednej štvrtine z celkovej plochy každej rostrálno-kaudálnej podoblasti. Kvadrantové osi a xy súradnice každého počtu boli určené a otočené o 30° v smere hodinových ručičiek, čím boli zarovnané s anatomickou osou aBLA.

Aby sa zohľadnili malé odchýlky vo veľkosti podoblastí a ich kvadrantov, údaje o počte sa normalizovali na plochu povrchu (počet/mm2), takže uvádzané hodnoty predstavujú hustotu počtov na podoblasť alebo kvadrant.

Na posúdenie excitačného fenotypu neurónov zachytených naším systémom TRAP2 sa kvantifikovala spoločná lokalizácia kondicionovanej TRAPed tdTomatoexpresie s vápnikovo-kalmodulín-dependentnou proteínkinázou II (CaMKII), zavedeným markerom glutamátergických neurónov (McDonald et al., 2002). obrázky aspoň troch rezov aBLA na myš pomocou doplnku ImageJ cell counter.

Štatistiky

Štatistické testovanie sa uskutočnilo pomocou softvéru Prism 9.5.1 (GraphPad, San Diego, CA, USA) a zahŕňalo testovanie normálnej distribúcie všetkých súborov údajov pomocou Shapiro-Wilkovho testu. Skupinové porovnania pre spojité údaje sa uskutočnili s dvojstrannými nepárovými študentskými t-testy alebo dvoj- alebo trojcestnou ANOVA nasledovanou Sidakovým a Tukeyho viacnásobným porovnávacím testom pre párové porovnania po významných interakciách ANOVA.

Na stanovenie Pearsonovho r-koeficientu a zodpovedajúcej P-hodnoty bola vykonaná korelačná analýza v rámci skupiny. Korelácie sa porovnávali medzi skupinami pomocou transformácie Fisher'sZ (doplnková tabuľka 1). Skupinové údaje sú vyjadrené ako priemer ± SEM. Štatistická významnosť bola stanovená na P < 0,05.

Výsledky

Kondicionovanie strachu vyvoláva engram vzdialenej pamäte strachu

Aby sa zistilo, do akej miery sú neuróny aBLA aktivované počas vytvárania pamäte strachu reaktivované počas vzdialeného vyvolania pamäte, myši podstúpili podmieňovanie strachu (n=5) alebo kontextu (n=5), po ktorom nasledovala injekcia 4-OHT (Obrázky 1A–C).

Skúmaním formovania pamäte strachu (tj učenia strachu), významnej interakcie liečby (šok vs. žiadny šok) a časového intervalu (30 s interval po každom šoku) na správanie pri mrazení [two-wayANOVA, F(5, 40)=6.733, P=0.0001]. Strachom podmienené myši vykazovali zvýšený čas tuhnutia v porovnaní s východiskovou hodnotou po šoku 3 (275 ± 68 % BL, P=0 0,0203), 4 (486 ± 76 % BL, P < 0,0001) a 5 (402 ± 26 % BL, P < 0,0001) a relatívne ku kontextovo kondicionovaným myšiam po šoku 4 (251 ± 38 % kontextu, p < 0,0001) a 5 (375 ± 25 % kontextu, p < 0,0001).

Ako sa očakávalo, opätovné vystavenie kondicionačnej komore na vyvolanie vzdialenej pamäte 21. dňa po kondicionovaní odhalilo, že myši kondicionované strachom vykazovali výrazne viac času stráveného zmrazením v porovnaní s kontextovými kontrolami [346 ± 18%, nepárový t-test, t(8) {{7} }.16, P < 0.0001] (obrázok 1D).
Súhrnne údaje na obrázku 1 naznačujú, že náš protokol podmieňovania strachu spôsobil silnú tvorbu pamäte strachu a vzdialené vyvolanie pamäte strachu.

Strachové učenie indukuje robustnú aBLA špecifickú pre subregión pre súbor

Analýza počtov TRAPed (tdTomato +) odhalila významne väčšiu fos-aktivovanú populáciu aBLA u myší podmienených strachom (110 ± 6,2) ako kontextovo podmienených (77 ± 3,1) myší [nepárový t-test, t(8)=4 .782, P=0.0014] (tabuľka 1). Ako sa očakávalo, ~ 70 % kontextových a ~ 80 % neurónov zachytených strachom (n=6 aBLA sekcií/skupina) boli CaMKII + (doplnkové obrázky 1A, B), čo naznačuje, že to boli primárne neuróny glutamátergickej projekcie.

Podobne ako v predchádzajúcich správach (Kim et al., 2016) sme rozdelili theaBLA do troch rostrokaudálnych podoblastí: rostrálnej, strednej a kaudálnej (obrázky 2A–C) a porovnali sme hustoty počtu TRAPed (počet/mm2) v podoblastiach v rámci a medzi liečebnými skupinami (obrázok 2D). Dvojcestná ANOVA odhalila významnú interakciu medzi subregiónom a liečbou [F(2,24)=7.7099,P=0.0038].

Analýzy v rámci skupiny odhalili, že hustota TRAPed bola väčšia v strednej podoblasti aBLA v skupinách so strachom (239 ± 9) a kontextom (144 ± 12) v porovnaní s rostrálnou (strach: 86 ± 6,P < { {8}}.0001; kontext: 81 ± 9, P=0,0035) a kaudálny (strach: 123 ± 15, P < 0,0001; kontext: 90 ± 12, P {{20 }}.0132) podoblasti.

Analýza medzi skupinami odhalila, že hustota počtu TRAPed bola významne vyššia v strednej podoblasti myší podmienených strachom (P < 0 0,0001).

Aby sme ďalej vymedzili umiestnenie TRAPed neurónov, rozdelili sme rostrálne, stredné a kaudálne podoblasti aBLA do štyroch kvadrantov (obrázok 2E). V strednej podoblasti sa pozoroval hlavný účinok liečby na hustotu počtu [trojcestná ANOVA, F(1,32)=17.44, P=0.0002] s vyššia hustota TRAPedcount v skupine strachu ako kontext v kvadrantoch 3 (218 ± 29 vs. 107 ± 17, P=0,0031) a 4 (240 ± 16 vs. 101 ± 12, P < 0,0001).

Ďalej sme hodnotili hustotu počtu TRAPed v rámci skupiny a v rámci kvadrantu v rámci subregiónov aBLA (obrázok 2E a doplnková tabuľka 2). Je pozoruhodné, že v porovnaní s rostrálnou podoblasťou (59 ± 8), kvadrant 2 skupiny strachu mal vyššiu hustotu TRAPed v strednej (245 ± 21, P < 0,0001) aj kaudálnej (172 ± 23, P=0.0040) podoblasť.

Ďalej sme vyhodnotili vzťah medzi mrazivým správaním a veľkosťou súboru neurónov TRAPed v celej aBLA, v jej strednej podoblasti a v kvadrantoch stredných a kaudálnych podoblastí, kde sa hustoty počtu súborov líšili medzi kontextom a skupinami podmienenými strachom. Neboli pozorované žiadne významné korelácie ani v skupine strachu, ani v kontexte (obrázok 2F), čo naznačuje, že správanie strachu neodráža veľkosť fosílneho učenia strachu v subregiónoch aBLA.

Súhrnne zistenia na obrázku 2 naznačujú, že kondicionovanie strachu malo za následok väčší súbor fos v aBLA ako kontextové kondicionovanie. Súborové neuróny boli najhustejšie lokalizované v strednej podoblasti aBLA, ale správanie strachu nekorelovalo s veľkosťou populácie súboru.

For more information:1950477648nn@gmail.com