Antimelanogenézne účinky extraktu z listov a fytochemikálií z cejlónskej olivy (Elaeocarpus Serratus) v modeli Zebrafish
Mar 23, 2022
Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791
Chi-Ya Huang 1, I-Hsuan Liu 2, Xiang-Zhe Huang 1, Hui-Jen Chen 1, Shang-Tzen Chang 1, Mei-Ling Chang 3, Yu-Tung Ho 1 a Hui-Ting Chang 1,*
Abstrakt:Themelanogenézainhibičný účinok u zebričiek (Danio rerio) aantityrozinázaaktivita etanoluextrakta jej fytochemikálie z listov cejlónskej olivy (Elaeocarpus serratus Linn.) boli skúmané v tejto štúdii. Spomedzi extraktu z listov a štyroch rozpustných frakcií vykazuje frakcia rozpustná v etylacetáte najlepšiu antityrozinázu aantimelanogenézačinnosti. Jedna fenolová kyselina, kyselina galová a dva flavonoidy, myricetín a znamená cín, sa izolujú z aktívnych subfrakcií pomocou izolácie riadenej biotestom; ich štruktúry sú objasnené na základe 1D a 2D NMR, FTIR, UV a MS spektroskopických analýz. Tieto zlúčeniny majú významnéantityrozinázaaktivitu, či už s použitím L-tyrozínu alebo L-DOPA ako substrátu; mearnsentin vykazuje optimálnu aktivitu. V enzýmovom kinetickom výskume sú kyselina galová aj mearnsetín kompetitívnymi inhibítormi proti hubovej tyrozináze a myricetín pôsobí ako zmiešaný typtyrozinázainhibítor. Listextrakta rozpustná frakcia v etylacetáte vykazujú účinnú účinnosť pri inhibícii tvorby melanínu v embryách zebričiek. Mearnsetin má tiež sľubný antimelanogenézny účinok, ktorý je lepší ako pozitívna kontrola,arbutín. Výsledky ukazujú, že extrakt z listov cejlonského olivovníka a jeho fytochemikálie, najmä mearnsetín, majú potenciál byť použité akoantimelanogenézaa zložky na bielenie pokožky.
Kľúčové slová: antimelanogenézny účinok; Elaeocarpus serratus; melanín; inhibítor tyrozinázy; zebrička
Herba cistanchesinhibuje aktivitu tyrozinázy.
1. Úvod
Melanín hrá zásadnú úlohu v mnohých biochemických funkciách; poskytuje ochranu pokožky pred poškodením ultrafialovým (UV) žiarením, elimináciou reaktívnych foriem kyslíka (ROS) a inými biochemickými reakciami [1–3]. Nadmerné hromadenie melanínu spôsobuje aj hyperpigmentáciu, melazmu, starecké škvrny, stmavnutie pokožky a pod. [4,5]. Vo východnom svete sa ľudia zaujímajú o problematiku bieliaceho účinku na pokožku; kozmetický priemysel sa venuje vývoju kozmetiky na bielenie pokožky proti melanogenéze. Existuje niekoľko mechanizmov, naprtyrozinázainhibičná aktivita, odstránenie melanocytov a interferencia so syntézou melanínu, aby sa prejavila inhibičná aktivita na melanogenézu. Sľubné činidlá inhibujúce melanogenézu sa skúmali od 40. rokov 20. storočia [2,4,6,7]. Avšak, časťmelanogenézainhibítory majú niektoré vedľajšie účinky; napr. hydrochinón môže spôsobiť exogénnu ochronózu a trvalú hypomelanózu [5,8]. Nadmerné množstvo kyseliny kojovej môže viesť k alergii a nádorom štítnej žľazy [9,10].
Nedávno sa výskumníci venovali hľadaniu sľubných melanogénnych činidiel so žiadnymi/miernymi vedľajšími účinkami z rastlinných prírodných produktov [11–13]. Prirodzenétyrozinázaboli hlásené inhibítory z rastlinných zdrojov, vrátane jednoduchých fenolov, fenolových kyselín, stilbénov, flavonoidov, lignanov, terpenoidov, chinoidov atď. [2,14–16]. Solano a kol. uviedol, že fenolové zlúčeniny a ďalšie prírodné zlúčeniny majú veľký potenciál inhibície formylanínu, napr. arbutín (fenolglukozid nachádzajúci sa v Arctostaphylos uva-ursi), extrakt zo zeleného čaju, alfa hydroxylová kyselina (AHA), kyselina askorbová atď. ].Arbutinje široko používaný ako kľúčová zložka komerčných bieliacich produktov na trhu [4,17]. Gallokatechín-3-O-galát (GCG), epigalokatechín-3-O-galát (EGCG) a epikatechín {{6 }}O-galát (EKG) boli identifikované v zelenom čajiextrakt; tieto zlúčeniny majú dobrú inhibičnú účinnosť proti tyrozináze [17]. Arctigenín, lignan izolovaný z extraktu Fructus arctica, by mohol znížiť obsah melanínu v embryách zebrafish (Danio rerio) [18]. Lee et al. uviedli, že ginsenosidy z listov a bobúľ ženšenu Panax inhibujúmelanogenézaembrya zebrafish; aktívnymi ginsenozidmi sú ginsenozid Rh6, vina-ginsenozid R4, vina-ginsenozid R13, ginsenozid Rh23 a floralginsenosid A [19–21].
Elaeocarpus serratus Linn. (Tiliaceae), bežne nazývaná cejlónska oliva, je rozšírená v Afrike, Austrálii a juhovýchodnej Ázii. Nálev vyrobený z jedlých plodov cejlónskej olivy je na Srí Lanke bežný [22]. Na Srí Lanke sa tradične používa na prevenciu vši a lupín. Bioaktivity extraktu E. serratus boli hodnotené v súvisiacich štúdiách [22,23]. Extrakt z listov E.serratus mal antibakteriálnu aktivitu proti Plesiomonas, Salmonella typhi a Proteus spp. pri koncentrácii 400 ug/ml testom difúzie platňa-diera [23].E. extrakt z listov serratus mal potenciál byť protinádorovým, antimikrobiálnym a pesticídnym činidlom pri skúmaní cytotoxicity pri teste letality žiabronôžky (Artemia salina); LC50 listuextraktbola 40 µg/ml proti žiabronôžke [23]. Antioxidačné flavonolglykozidy, vrátane myricitrínu, mearnsetínu 3-O- -D-glukopyranozidu, mearnsitrínu a tamarixetínu 3-O- -L-ramnopyranozidu, boli izolované a identifikované z extraktu E. serratusleaf [22].
Cieľom tejto štúdie je vyhodnotiť účinky listu E. serratusextrakta jeho zlomky naantityrozinázaaktivitu (in vitro) amelanogenézainhibičná aktivita inzebrafish (in vivo). Uskutočnili sa frakcionačné a izolačné techniky riadené biotestom, aby sa našli sľubné zlúčeniny ako potenciálne antimelanogenetické zložky. Vývoj účinných antimelanogenéznych zložiek môže zvýšiť optimálne využitie rastlinných prírodných produktov vo farmaceutickom a kozmetickom priemysle.
2. Materiály a metódy
2.1. Rastlinný materiál a ťažba
Cejlónska oliva (Elaeocarpus serratus), asi 50-ročná, listy boli zozbierané z National Taiwan University, Taipei, Taiwan v septembri. Čerstvé listy (3,95 kg) sa extrahovali 95 percentným etanolom počas 7 dní pri teplote miestnosti. Filtrovanéextraktbola sušená za zníženého tlaku na rotačnej odparke s teplotou kúpeľa 50 ◦C [24]. Výťažok extraktu z listov (0,32 kg) bol 12,0 percent (hmotn./hmotn. suchej hmotnosti).
cistancheextrakt
2.2. Rozdelenie kvapalina-kvapalina
Theextraktbol podrobený následnej extrakcii organickým rozpúšťadlom v poradí zvyšujúcej sa polarity rozdeľovaním kvapalina-kvapalina [24,25]. Extrakt listov bol frakcionovaný frakciou rozpustnou v hexáne (HF, 9,1 percenta), frakciou rozpustnou v etylacetáte (EF, 11,3 percenta), frakciou rozpustnou v n-butanole (BF, 17,3 percenta) a frakciou rozpustnou vo vode (WF, 31.{101} {13}} percent).
2.3. Stĺpcová chromatografia a tenkovrstvová chromatografia
Bioaktívna frakcia rozpustná v etylacetáte sa ďalej frakcionovala stĺpcovou chromatografiou na silikagéli (CC). Chromatografia na otvorenej kolóne sa uskutočnila postupnou elúciou s rôznym pomerom n-hexánu a etylacetátu [26]. Tenkovrstvovou chromatografiou (TLC) sa získalo devätnásť subfrakcií (E1–E19) [27]. Výťažky subfrakcií boli E1(1.05 percent), E2 (8,21 percent), E3 (1,64 percent), E4 (0,74 percent), E5 (1,52 percent), E6 ({ {59}}.86 percent ), E7 (1,51 percenta), E8 (9,50 percenta), E9 (7,78 percenta), E10 (3,97 percenta), E11 (2,65 percenta), E12 (8,49 percenta), E13 (5,58 percenta), E14 (4,43 percenta), E15 (5,31 percenta), E16 (1,14 percenta), E17 (1,87 percenta), E18 (0,76 percenta) a E19 (2,96 percenta).
2.4. Vysokovýkonná kvapalinová chromatografia
Aktívne podfrakcie rozpustnej frakcie v etylacetáte sa analyzovali a izolovali pomocou vysokoúčinnej kvapalinovej chromatografie (HPLC, L-2130, Hitachi, Tokio, Japonsko) vybavenej preparatívnou RP-18 kolónou (Purospher®, STAR RP{{ 3}} s koncovkou, 250 × 10 mm, 5 µm). Gradientná mobilná fáza pozostávala z vody (A) a acetonitrilu (B). Prietok bol 3 ml/min. Elučný program zahŕňal lineárny gradient od 30 do 35 percent B v A počas 0–15 minút, 35 až 100 percent B v A po 15–25 minútach a nasledovalo 5 minút rovnováhy so 100 percentami B. Eluované píky boli detekované UV detektorom pri 254 nm [25,28].
2.5. Identifikácia izolovaných zlúčenín
Štruktúry izolovaných zlúčenín boli určené a charakterizované pomocou spektrálnych analýz, vrátane ultrafialovo-viditeľnej spektroskopie (UV/VIS, V-550, Jasco, Tokio, Japonsko), infračervenej spektroskopie s Fourierovou transformáciou (FTIR, FTS{{2} }, Bio-rad, Hercules, CA, USA) a hmotnostná spektroskopia (MS, MAT-958, Finnigan, MA, USA). Nukleárna magnetická rezonančná spektroskopia (NMR), vrátane 1D (1H-NMR, 500 MHz; 13C-NMR, 125 MHz) a 2D NMR (HSQC a HMBC), boli zaznamenané NMR spektrometrom Bruker AVIII (Bruker Avance, Rheinstetten, Nemecko) [ 29 – 32].
2.6. Antityrozinázový test a enzýmová kinetická štúdia
In vitroantityrozinázatest bola spektrofotometrická analýza založená na metódach opísaných skôr [33–35]. Ako substrát bol použitý L-DOPA (3,4-dihydroxyfenylalanín) a L-tyrozín. V 96-jamkových mikroplatniach sa zmiešalo 40 µl roztoku vzorky a 70 µl tlmivého roztoku fosforečnanu draselného (0,1 M, pH 6,8), po čom nasledovalo pridanie 50 µl 200 jednotiek/ml hubovej tyrozinázy ( EC1.14.18.1) po inkubácii pri 25 °C počas 10 minút. Potom sme do jamky pridali 40 ul 2,5 mM substrátu (L-tyrozín/L-DOPA) a zmes sa inkubovala 10 minút. Po inkubácii sa merala absorbancia pri 475 nm každej jamky čítačkou ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) (SPECTROstar Nano, BMG LABTECH, Offenburg, Nemecko). Pozitívna kontrola bolaarbutína počet replikácií bol tri. Percento inhibícietyrozinázaaktivita sa vypočítala podľa nasledujúcej rovnice: Inhibícia ( percentá )=[(Akontrola – slepý pokus Akontroly)–(vzorka – slepý pokus vzorky)/(Akontrola – slepý pokus Akontroly)] × 100. Potom bola polovičná maximálna inhibičná koncentrácia ( IC50) vzorky sa vypočítala z krivky odozvy na koncentráciu.
Štúdia kinetiky enzýmu sa analyzuje pomocou Lineweaver-Burk recipročného grafu rýchlosti reakcie a koncentrácie substrátu na vyhodnotenie účinku vzorky na afinitu substrátu a enzýmu. Koncentráciatyrozinázasa udržiavala konštantná na 200 jednotkách/ml, zatiaľ čo koncentrácia substrátu (L-tyrozín/L-DOPA) sa menila na 0,5, 0,75,1,0 1,25 a 1,5 mM. Reakcia bola podobná ako pri antityrozinázovom teste, ako je opísané vyššie; zmiešalo sa 40 ul roztoku vzorky a 70 ul tlmivého roztoku fosforečnanu draselného (0,1 M, pH 6,8), po čom nasledovalo pridanie 50 ul 200 jednotiek/ml tyrozinázy po inkubácii pri 25 °C. C počas 10 min. Potom sme do jamky pridali 40 ul substrátu a dôkladne premiešali a okamžite sa merali kinetické merania roztoku po dobu 3 minút pri detekovanej vlnovej dĺžke (475 nm). Oba kinetické parametre, Michaelisova–Mentenova konštanta (Km) a maximálna rýchlosť (Vmax), boli vypočítané z Lineweaverovej–Burkovej lineárnej rovnice [36–38].
2.7. Hodnotenie účinku antimelanogenézy u Zebrafish
Zebrafish (Danio rerio) divokého typu kmeňa AB sa udržiaval v zdravom vodnom prostredí pri 26–30 ◦C s cyklom svetlo-tma 14:10 h. Po 9 hodinách po oplodnení (hpf) boli embryá umiestnené do 24-jamkovej platne (3 embryá na jamku), ošetrené rôznymi konečnými koncentráciami vzoriek rozpustených v 1% DMSO a inkubované pri 28 ◦C počas 48 hodín (pri 57 hpf). Digitálny obraz živého embrya zebričky bol urobený cez stereomikroskop (Olympus SZ61, Tokio, Japonsko) pri celkovom zväčšení 40x; potom sa obsah melanínu v embryu zebrafish analyzoval softvérom ImageJ. Boli pozitívne kontrolyarbutín(komerčná zložka na bielenie pokožky) a 1-fenyl-2-tiomočovina (PTU, inhibítor syntézy melanínu). Počet replikácií bol šesť [21,39,40].
2.8. Štatistická analýza
Údaje získané v štúdii boli analyzované systémom štatistickej analýzy (SAS) v 9.2 (Cary, NC, USA) s Scheffeho testom, čo je post hoc metóda viacnásobného porovnávania. Interval spoľahlivosti bol nastavený na 95 percent.
dr vita OPC vbielenie kože
3. Výsledky a diskusia
3.1. Antityrozinázová aktivita extraktu z listov E. serratus a jeho frakcií
Schematický diagram extrakcie, izolácie, identifikácie,antityrozinázačinnosť aantimelanogenézaúčinok listu E. serratusextraktje znázornený na obrázku 1. Extrakt z listov sa ďalej frakcionoval na frakciu rozpustnú v n-hexáne (HF), frakciu rozpustnú v etylacetáte (EF), frakciu rozpustnú v n-butanole (BF) a frakciu rozpustnú vo vode (WF) kvapalinou -rozdelenie kvapaliny.
Tyrozináza, produkovaná bunkami melanocytov, hrá kľúčovú úlohu pri katalýze komplikovanej syntézy melanínu; prieskumtyrozinázainhibítor je jedným z popredných spôsobov spomaleniamelanogenéza[2,5,41]. Tyrozinázové inhibičné aktivity listovextrakta štyri frakcie sú znázornené na obrázku 2. Pri použití L-tyrozínu ako substrátu mala iba frakcia rozpustná v etylacetáte inhibičný účinok proti tyrozináze v koncentrácii 400 ug/ml. Listový extrakt, frakcia rozpustná v etylacetáte a frakcia rozpustná v n-butanole vykazovali antityrozinázovú aktivitu pri zmene L-DOPA ako substrátu. Spomedzi listového extraktu a štyroch frakcií sa najlepšie prejavila frakcia rozpustná v etylacetáteantityrozinázaaktivita s hodnotami IC50 279,38 a 166,95 ug/ml pri použití L-tyrozínu a L-DOPA ako substrátu (tabuľka 1).
Tabuľka 1. Hodnoty IC50 aktívnych subfrakcií proti hubovej tyrozináze.
Frakcia rozpustná v etylacetáte sa podrobila frakcionácii riadenej biotestom pomocou preparatívnej kolónovej chromatografie a tenkovrstvovej chromatografie a získalo sa devätnásť subfrakcií (E1 – E19). Medzi týmito podfrakciami subfrakcie E7–E10 vykazovali vyšší inhibičný účinok na tyrozinázu v oboch substrátových testoch (L-tyrozín a L-DOPA). Hodnoty polovičnej maximálnej inhibičnej koncentrácie (IC50) aktívnych subfrakcií protityrozinázasú uvedené v tabuľke 1. Hodnoty IC50 všetkých podfrakcií E7–E10 boli pod 200 µg/ml; Podfrakcie E7 a E9 dokonca vykazovali lepší výkon v porovnaní sarbutín, čo je komerčná bieliaca zložka.
3.2. Izolácia a identifikácia zlúčenín z bioaktívnych subfrakcií
Tri zlúčeniny (ES1–3) boli izolované z bioaktívnych subfrakcií (E7–E10) pomocou vysokoúčinnej kvapalinovej chromatografie. Kyselina galová (ES1): biely prášok; teplota topenia 257 stupňov; UV (MeOH) Amax (loge) 215,5 (3,94), 268.0 (3,46) nm; IR (KBr) vmax 3495, 3416, 3285, 1647, 1542 a 122 0 cm-1; EI-MS m/z 171 [M plus H] plus, v súlade s molekulovým vzorcom C7H6O5. Myricetín (ES2): žltá ihla; teplota topenia 358 stupňov; UV (MeOH) Amax (loge) 252,5 (4,43) a 374,0 (4,50) nm; IR (KBr) vmax 3421, 1663, 1596, 1520, 1229, 1202 a 1171 cm-1; EI-MS m/z 319,36 [M plus H] plus, molekulový vzorec C15H10O8. Mearnsetin (4'-O-metyl myricetín, ES3): žltý prášok; teplota topenia 184 stupňov; UV (MeOH) Amax (loge) 259,5 (4,21) a 364,5 (4,26) nm; IR (KBr) vmax 3409, 2960, 2927, 2853, 1661, 1599, 1507, 1208 a 1163 cm-1; EI-MS m/z 333,0 [M plus H] plus, molekulový vzorec C16H12O8. NMR údaje týchto zlúčenín sú zhrnuté v tabuľke 2. Chemické štruktúry identifikovaných zlúčenín sú uvedené na obrázku 3.
Tabuľka 2. 1H, 13C a HMBC NMR dáta zlúčenín.
Medzi týmito zlúčeninami je kyselina galová kyselina fenolová; myricetín a mearnsetín patria medzi flavonoidy. Obsah každej zlúčeniny vo frakcii rozpustnej v etylacetáte a podfrakcie E7–E10 sú uvedené v tabuľke 3. Podfrakcia E7 bola bohatá na mearnsetín (433,38 mg/g); subfrakcia E8 primárna obsahovala kyselinu galovú (417,64 mg/g). Hlavnou zložkou podfrakcií E9 a E10 bol myricetín (406,41 a 336,41 mg/g). Obsahy troch zlúčenín vo frakcii rozpustnej v etylacetáte boli 59,72 mg/g (kyselina galová), 45,21 mg/g (myricetín) a 22,66 mg/g (mearnsetin).
3.3. Antityrozinázová aktivita a enzýmová kinetická štúdia izolovaných zlúčenín
Antityrozinázaaktivita týchto zlúčenín z aktívnych podfrakcií je uvedená v tabuľke 4. Pri použití L-tyrozínu ako substrátu bolo poradie antityrozinázovej aktivity skúmaných zlúčenín mearnsetín > myricetín > kyselina galová > arbutín; mearnsetin mal najlepší inhibičný účinok s hodnotou IC50 56,57 ug/ml (0,17 mM). Podobné výsledky boli pozorované pri L-DOPA použitom ako substrát; účinnosť troch fytochemikálií bola lepšia ako účinnosťarbutín.
Skutočný inhibítor enzýmu obsahuje štyri spôsoby inhibície, vrátane kompetitívneho, nekompetitívneho, zmiešaného typu (kompetitívneho aj nekompetitívneho) a nekompetitívneho [12]. Kinetické konštanty, Km a Vmax, sú určené počiatočnou rýchlosťou enzýmu pri rôznom substráte. koncentrácie v Lineweaver-Burk grafe; pretínajú sa na osi y je ekvivalentné 1/Vmax a pretínajú sa na osi x je -1/Km. V enzýmovej kinetickej štúdii terpenoidných zlúčenín z esenciálneho oleja citrusovej kôry protityrozinázacitralaktoval ako nekompetitívny inhibítor a myrcén bol kompetitívny inhibítor [36]. Mechanizmus inhibície 3,7-dioleylquercetínu proti hubovej tyrozináze spočíval v modeli kompetitívnej inhibície na potlačenie produkcie melanínu [42].
Tabuľka 4. Hodnoty IC50 zlúčenín proti hubovej tyrozináze
Typ inhibície tyrozinázy troch fytochemikálií bol objasnený in vitro enzýmovou kinetickou štúdiou. Obrázok 4 ukazuje Lineweaver-Burk graf (dvojitý recipročný graf) mearnsetínu. Pri analýzach oboch substrátov, L-tyrozínu a L-Dopa, mala lineárna regresná línia rôznych koncentrácií mearnsetínu rovnaký priesečník na osi y a rastúci sklon. Kinetické parametre kyseliny galovej, myricetínu a mearnsetínu sú zhrnuté v tabuľke 5. V prítomnosti kyseliny galovej alebo mearnsetínu sa pozorovalo zvýšenie Km a konštanta Vmax, čo naznačuje, že kyselina galová aj mearnsetín boli kompetitívnym inhibítorom tyrozinázy. Naznačovalo to, že kyselina galová a mearnsetín sa môžu viazať voľnetyrozinázas vysokou afinitou a zabraňujú naviazaniu substrátu (L-tyrozín alebo L-DOPA) na aktívne miesto tyrozinázy. Zistilo sa, že myricetín je inhibítor zmiešaného typu, ktorý obsahuje kompetitívnu a nekompetitívnu inhibíciu, pretože Km sa zvýšilo a Vmax sa znížilo. Nekompetitívna inhibícia preukázala, že zlúčeniny sa viažu na komplex tyrozináza-substrát, ale nie na voľnú tyrozinázu.
3.4. Antimelanogenézne účinky extraktu, frakcií a izolovaných fytochemikálií
Zebrafish (Danio rerio) je nový a platný modelový organizmus pre výskum melanogenézy v nedávnych štúdiách [18–21,40]. Theantimelanogenézaúčinky extraktu z listov a štyroch frakcií v in vivo teste na zebrafish sú znázornené na obrázku 5. Listextrakta frakcia rozpustná v etylacetáte vykazovala dobrú účinnosť pri inhibícii tvorby melanínu u embryí zubáčov. Pri koncentrácii 200 ug/ml extrakt z listov a frakcia rozpustná v etylacetáte inhibovali 27,72 percent a 35,60 percent produkcie melanínu embryí zebričiek. Všetky liečby neovplyvnili rast embryí zebričiek s mierou prežitia 100 percent.
Obrázok 6 predstavuje účinky zlúčenín a pozitívnych kontrol, PTU a arbutínu, namelanogenézazebrafish v koncentrácii 50 uM. PTU je silnýtyrozinázainhibítor na zabránenie produkcie melanínu, pričomarbutínje komerčný prostriedok na bielenie kože; obe pozitívne kontroly by mohli znížiť tvorbu melanínu u zebričiek. Spomedzi troch fytochemikálií vykazoval myricetín mierny inhibičný účinok na melanín, zatiaľ čo mearnsetín mal lepšiu inhibičnú aktivitu na melanogenézu u zebričiek.
Účinné koncentráciemelanogenéza inhibition activity in zebrafish of compounds are listed in Table 6. IC50 values of PTU and arbutin were 26.29 µM and 323.69 µM, respectively. The order of antimelanogenesis activity of examined compounds was PTU >mearnsetin >arbutína myricetín > kyselina galová. Mearnsetin vykazoval najlepšiu účinnosť s hodnotou IC50 121,01 uM spomedzi skúmaných fytochemikálií.
Pre viac informácií kliknite prosím na obrázok.
4. Závery
Themelanogenézainhibičný účinok aantityrozinázaV tejto štúdii sa hodnotila aktivita listového extraktu z olív cejlónskej (E. serratus). Medzi listamiextrakta jeho štyroch frakcií mala najlepšie frakcia rozpustná v etylacetáteantityrozinázačinnosť. Fytochemikálie, vrátane kyseliny galovej, myricetínu a mearnsetínu, sa izolovali a identifikovali z aktívnych subfrakcií chromatografiou riadenou biotestom a spektrálnymi analýzami. Poradie antityrozinázovej aktivity týchto zlúčenín bolo mearnsetín > myricetín > kyselina galová. Štúdia kinetiky enzýmu in vitro odhalila, že kyselina galová a mearnsetín boli kompetitívnymi inhibítormi tyrozinázy a myricetín bol inhibítor zmiešaného typu. Výsledky testu zebrafish in vivo ukázali, že frakcia rozpustná v etylacetáte a tri fytochemikálie vykazovali významnémelanogenézainhibičné účinky. Antimelanogenézny účinok mearnsetínu bol lepší ako účinok pozitívnej kontroly,arbutín, u zebričiek.
