Kyselina askorbová reguluje imunitu, antioxidáciu a apoptózu u Abalone Haliotis Discus Hannai Ino Part 1

Abstraktné: Táto štúdia bola vykonaná s cieľom preskúmať úlohu kyseliny askorbovej (AA) v imunitnej odpovedi, antioxidácii a apoptóze u mušlí (Haliotis discus hannai Ino). Sedem poločistej stravy s odstupňovanými hladinami AA (0, 50, 100, 200, 500, 1 000 a 5 000 mg/kg) bolo kŕmených ušami (počiatočné hmotnosť: 12,01 ± 0,001 g, počiatočná dĺžka škrupiny: 48,44 ± 0,069 mm) počas 100 dní. Prežitie, rýchlosť prírastku hmotnosti a denný prírastok dĺžky škrupiny neboli ovplyvnené stravou AA. Obsah AA v žiabrách, svaloch a tráviacich žľazách mušlí sa významne zvýšil pomocou AA v potrave. Pokiaľ ide o imunitu, diétna AA významne zlepšila celkový počet hemocytov, respiračné vzplanutie a fagocytárnu aktivitu v hemolymfe a aktivitu lyzozýmov v bezbunkovej hemolymfe (CFH). V tráviacej žľaze boli TLR-MyD88-závislé a TLR-MyD88-nezávislé signálne dráhy potlačené suplementáciou AA v strave. Hladiny mRNA -defenzínu a arginázy-I v tráviacej žľaze boli významne zvýšené potravou AA. V žiabre bola iba TLR-MyD88-závislá signálna dráha potlačená diétnym AA, aby sa znížil zápal u mušlí. Úroveň vytvárania mýtov 6 v žiabre bola významne zvýšená prostredníctvom diétneho AA. Po infekcii Vibrio parahaemolyticus bola signálna dráha TLR v tráviacej žľaze potlačená diétnym AA, čo znížilo zápal u mušlí. Čo sa týka antioxidácie, aktivity superoxiddismutázy, glutatiónperoxidázy a katalázy, ako aj celková antioxidačná kapacita a znížený obsah glutatiónu v CFH, boli všetky významne upregulované. Obsah malondialdehydu bol významne znížený diétou AA. Antioxidačná kapacita sa zlepšila spustením dráhy Keap1-Nrf2 v mušľách. Pokiaľ ide o apoptózu, diétna AA by mohla zvýšiť antiapoptóznu schopnosť prostredníctvom signálnej kaskády JNK-Bcl-2/Bax v mušľach. Na záver, diétna AA sa podieľala na regulácii imunity, antioxidácie a apoptózy u mušlí.

Glykozid cistanche môže tiež zvýšiť aktivitu SOD v tkanivách srdca a pečene a výrazne znížiť obsah lipofuscínu a MDA v každom tkanive, účinne zachytáva rôzne reaktívne kyslíkové radikály (OH-, H₂O₂ atď.) a chráni pred poškodením DNA. OH-radikálmi. Cystanche fenyletanoidové glykozidy majú silnú schopnosť zachytávať voľné radikály, vyššiu redukčnú schopnosť ako vitamín C, zlepšujú aktivitu SOD v suspenzii spermií, znižujú obsah MDA a majú určitý ochranný účinok na funkciu membrány spermií. Polysacharidy Cistanche môžu zvýšiť aktivitu SOD a GSH-Px v erytrocytoch a pľúcnych tkanivách experimentálne starnúcich myší spôsobenú D-galaktózou, ako aj znížiť obsah MDA a kolagénu v pľúcach a plazme a zvýšiť obsah elastínu. dobrý čistiaci účinok na DPPH, predĺženie doby hypoxie u starnúcich myší, zlepšenie aktivity SOD v sére a oddialenie fyziologickej degenerácie pľúc u experimentálne starnúcich myší Experimenty ukázali, že pri bunkovej morfologickej degenerácii má Cistanche dobrú antioxidačnú schopnosť a má potenciál byť liekom na prevenciu a liečbu chorôb starnutia kože. Zároveň má echinakozid v Cistanche významnú schopnosť vychytávať voľné radikály DPPH a má schopnosť vychytávať reaktívne formy kyslíka a zabraňovať degradácii kolagénu vyvolanej voľnými radikálmi a tiež má dobrý reparačný účinok pri poškodení aniónom voľných radikálov tymínu.

Kliknite na Cistanche Tubulosa

【Ďalšie informácie:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:{0}}】

Kľúčové slová: mušle; kyselina askorbová; imúnna; antioxidačné; apoptóza

1. Úvod

Kyselina askorbová (AA), tiež známa ako vitamín C, je známa ako esenciálna mikroživina, ktorá slúži ako kofaktor spojený so zvyšovaním aktivity viacerých ľudských enzýmov a prispieva k imunitnej odpovedi a rozvoju nervového systému u ľudí [1,2 ]. Vzhľadom na obmedzenú schopnosť AA uchovať sa v organizme je nevyhnutný pravidelný a dostatočný príjem, aby sa predišlo nedostatku AA. AA je potrebná v stopových množstvách z exogénnych zdrojov pre priemerný rast, fyziologické aktivity, reprodukciu a zdravie u väčšiny cicavcov [3–5]. Čo sa týka imunitných funkcií, AA prispieva k udržaniu integrity imunitnej bariéry a hojeniu rán [1]. Môže posilniť funkciu fagocytov, ako je zlepšenie ich motility, chemotaxie, fagocytózy a mikrobiálneho zabíjania [6–9]. Predchádzajúce štúdie uvádzali rôzne imunitné účinky AA na B-bunky, T-bunky a NK bunky u cicavcov [10–12]. Medzitým je AA tiež spojená s apoptózou. Inhibuje apoptózu myokardu tým, že bráni Bax (proteín X spojený s BCL{11}}) a zvyšuje schopnosť Bcl-2 (regulátor apoptózy bcl-2) inhibovať uvoľňovanie cytochrómu-C z mitochondrií do cytoplazmy a následne redukuje kaspázu-3, ktorá iniciuje apoptózu [13]. Ako prírodný antioxidant AA redukuje reaktívne formy kyslíka (ROS) a reaktívne formy dusíka (RNS) tým, že im dodáva elektróny a bráni oxidácii iných zlúčenín [14–17]. AA môže tiež umožniť iným antioxidačným molekulám, ako je glutatión (GSH), -karotén, urát a -tokoferol, aby sa regenerovali z ich príslušných voľných radikálov [18,19].

Na rozdiel od suchozemských živočíchov existuje relatívne málo správ o imunitnej odpovedi a apoptóze u vodných živočíchov. Diétne vhodné množstvá AA môžu optimalizovať rast, zdravie a odolnosť voči stresu u vodných živočíchov [20]. Väčšina štúdií o AA u vodných živočíchov sa zameriava na odhad minimálnych požiadaviek na AA pre maximálny rast a zostavenie stravy s najnižšími nákladmi. Požiadavky AA sa líšia medzi druhmi, veľkosťou, stravou a podmienkami chovu. Odporúčané množstvo AA v strave sa pohybuje od 10 do 10,000 mg/kg [21]. Minimálna požiadavka AA na podporu maximálnej rýchlosti rastu (WG) bola 53 – 186 mg/kg u tilapie nílskej (Oreochromis niloticus), 1 200 mg/kg u tuniaka modroplutvého (Thunnus orientalis) a 5 000 – 1 000 mg/kg u krevety kuruma (Marsupenaeus japonicas) [22–24]. Avšak WG alebo špecifická rýchlosť rastu (SGR) neboli významne ovplyvnené diétnym AA u niektorých druhov rýb, ako je jeseter sibírsky (Acipenser baerii), pražma červená (Pagrus major) a japonský úhor (Anguilla japonica) [25–27 ].

Ukázalo sa, že suplementácia AA v strave zvyšuje imunitné funkcie, ako je fagocytóza a aktivita lyzozýmov u mnohých druhov rýb [28–30]. Zvýšené prežívanie vystaveniu patogénom (napr. baktériám a parazitom) bolo hlásené u tilapie nílskej, sumca ázijského (Clarias batrachus) a tichomorskej bielej krevety (Litopenaeus vannamei) po príjme AA v strave [31–34]. Nedostatok AA znížil aktivitu lyzozýmu (LZM), komplementovú zložku 3 (C3) a obsah C4 v amurovi (Ctenopharyngodon idella) [35]. Môže tiež znížiť hladiny antimikrobiálnych peptidov, ako sú -defenzín a hepcidín, a protizápalových cytokínov vrátane interleukínu (IL) 4/13A, IL-10 a transformujúceho rastového faktora (TGF) 1/2; pri upregulácii prozápalových cytokínov, vrátane IL-1 a jadrového faktora κB (NF-κB) u amurov [35]. Okrem toho nedostatok AA upreguloval aktivačný faktor apoptotickej proteázy-1, kaspázu{20}} a kaspázu-7–9, čím sa zhoršila bunková apoptóza u amura [35,36].

Abalone je jedným z najdôležitejších komerčných druhov v rade mäkkýšov Archaeogastropoda. Je dôležitým modelovým živočíchom pre štúdium ekologickej a vývojovej biológie ulitníkov (Mollusca) [37,38]. Spomedzi chovaných druhov mušlí je v Číne najpreferovanejším chovaným druhom mušľa tichomorská (H. discus hannai Ino). Mai uvádza, že suplementácia AA od 0 do 8 000 mg/kg významne neovplyvnila SGR alebo mieru prežitia (SR) juvenilných mušlí [39]. Wu a kol. uviedli, že diétna AA ovplyvnila expresiu génov súvisiacich s antioxidačnými reakciami v tráviacej žľaze mušľa, aby sa zlepšila jej odolnosť voči stresu [40]. Okrem toho by prepuknutie chorôb mohlo spôsobiť obrovské ekonomické straty v odvetví chovu ušeňovitých [41,42]. Mäkkýšom chýba adaptívna imunita a spoliehajú sa na vrodenú imunitu [43]. Preto sa táto štúdia zamerala na skúmanie úloh AA pri regulácii imunity, antioxidácie a apoptózy u mušlí H. discus hannai a poskytne vedecké inštrukcie pre zdravú reguláciu formulácie stravy u mušlí.

2. Materiály a metódy

2.1. Etické vyhlásenie

Všetky postupy starostlivosti o zvieratá a manipulácie s nimi vykonávané v tejto štúdii boli schválené Výborom pre starostlivosť o zvieratá Čínskej oceánskej univerzity (číslo schválenia SPXY2020012).

2.2. Experimentálna diéta

Základná diéta (AA{{{{1{19}}}}}}) bola zostavená z purifikovaných zložiek tak, aby obsahovala približne 30 percent diétnych bielkovín a 3,5 percent diétnych lipidov (tabuľka 1). Ako zdroje bielkovín sa použili kazeín (bez vitamínov) a želatína a ako zdroje lipidov sójový olej a rybí olej menhaden (1:1), čo by mohlo stačiť na udržanie optimálneho rastu H. discus hannai [44–46 ]. Odstupňované hladiny AA (0, 50, 100, 200, 500, 1000 a 5000 mg/kg) sa pridali k základnej strave, aby sa vytvorilo sedem experimentálnych diét. AA sa pridávala do stravy vo forme L-askorbyl-2-monofosfátu. Tieto diéty boli označené ako AA0, AA50, AA100, AA200, AA500, AA1000 a AA5000. Analyzované obsahy AA v strave boli 0,00, 47,31, 78,25, 189,05, 451,73, 919,99 a 4821,17 mg/kg. Na analýzu obsahu AA v strave bola použitá metóda vysokoúčinnej kvapalinovej chromatografie [40]. Surový proteín v strave, surový lipid a popol sa merali podľa štandardných metód Asociácie analytických chemikov [47].

2.3. Vylúhovací test

Vylúhovanie AA z potravy bolo prezentované ako retenčná účinnosť (RE). Experimentálna strava s tromi replikátmi bola ponorená do morskej vody pri 23.0 ± 0,5 ◦C. Ponorené diéty boli vybraté v určenom čase (1, 3, 6 a 12 hodín, v danom poradí) a boli lyofilizované na analýzu obsahu AA.

RE ( percentá )=(AA zadržaná v strave po ponorení)/(AA obsiahnutá v strave pred ponorením) × 100.

2.4. Skúška kŕmenia

Mláďatá mušle boli získané z rybárskej spoločnosti vo Fuzhou (Fujian, Čína) a boli aklimatizované na laboratórne podmienky počas dvoch týždňov s bazálnou stravou v recirkulačnom vodnom systéme s nádržami (10{{1{{21 }}}} × 50 × 40 cm). Potom boli mušky podobnej veľkosti (počiatočná hmotnosť: 12,01 ± 0.{16}}1 g, počiatočná dĺžka plášťa: 48,44 ± 0,069 mm) náhodne pridelené do 21 nádrží (45 uší na nádrž). Každé tri nádrže sa považovali za jedno ošetrenie. Všetky nádrže boli udržiavané v slabom svetle s čiernymi plastovými závesmi. Mušle boli ručne kŕmené raz denne o 17:{18}}. Výkaly a nezjedená strava boli odstránené každé ráno o 8:00. Počas 100-dňového pokusu o kŕmenie bola teplota vody 23,0 ± 0,5 ◦C, slanosť 30–33‰, pH 7,4–7,9 a rozpustený kyslík vyšší alebo rovný 7,0 mg/l.

2.5. Vibrio Parahaemolyticus Challenge Test

Po pokuse s kŕmením sa pätnásť mušlí z každej nádrže použilo na provokačný test s patogénnym V. parahaemolyticus. Abalóny boli stimulované 100 ul V. parahaemolyticus (1,2 x 106 cfu/ml) svalovou injekciou in vivo. Tráviaca žľaza sa odobrala po 0, 6, 12, 24, 48 a 72 hodinách a skladovala sa pri -80 °C na analýzu qPCR.

2.6. Zbierka vzoriek

Na konci pokusu o kŕmenie sa mušle tri dni hladovali a potom sa spočítali a zvážili. Všetky mušle boli pred odberom anestetizované 5 percentami etylalkoholu. Hemolymfa bola odobratá zo štyroch mušlí v každej nádrži na analýzu celkového počtu hemocytov (THC), respiračného vzplanutia (RB) a fagocytárnej aktivity (PA). Na analýzu aktivity enzýmu v bezbunkovej hemolymfe (CFH) sa hemolymfa zozbierala z ďalších desiatich mušlí v každej nádrži a centrifugovala sa (3000 x g pri 4 °C) počas 10 minút; CFH sa až do použitia skladoval pri -80 ◦C. Tráviaca žľaza, žiabre, sval a plášť boli odobraté z desiatich mušlí odobratých z hemolymfy na nádrž a až do použitia boli uskladnené pri -80 ◦C.

2.7. Obsah kyseliny askorbovej

Obsah AA v CFH, svale, plášti, žiabre a tráviacej žľaze sa detegoval pomocou testovacej súpravy na askorbát redukujúci železo (BioVision, Milpitas, CA, USA). CFH možno použiť priamo na meranie obsahu AA podľa pokynov výrobcu. 0,1 g vzorky svaloviny, plášťa, žiabrov a tráviacej žľazy sa homogenizovali v 1 ml vopred vychladenej destilovanej vody. Obsah AA sa meral pomocou absorbancie pri 593 nm.

2.8. Imunitné parametre hemolymfy

Hemolymfa sa dôkladne premiešala s použitím rovnakého objemu vopred vychladeného antikoagulantu (100 mmol/l EDTA Na2, 450 mmol/l NaCl, 10 mmol/l KCl, 10 mmol/l HEPES, pH 7,3, 850 mOs mol/kg). zriediť hemolymfu.

THC sa počítalo pomocou hemocytometra pod mikroskopom (CX31, OLYMPUS, Tokio, Japonsko).

Redukcia nitrotetrazolia (NBT) v hemocytoch, ktorá môže byť vyjadrená aktivitou RB, bola meraná podľa metód Andersona et al., s určitými modifikáciami [48]. Stručne, hemolymfa sa upravila na 5 x 106 buniek/ml pomocou antikoagulantu a centrifugovala sa pri 3000 x g pri 4 °C počas 10 minút. Bunková zrazenina bola zafarbená 100 ul 1 ug/ml PMA (forbolmyristát acetát, Sigma-Aldrich, Saint Louis, MO, USA) rozpusteným v DMSO (dimetylsulfoxid, Solarbio, Peking, Čína) a inkubovaná pri 37 °C počas 30 min. Po inkubácii sa k bunkám pridalo 100 ul 0,3 percentného NBT rozpusteného v Hankovom vyváženom soľnom roztoku (Solarbio, Peking, Čína) a inkubovali sa pri 37 °C počas 30 minút pred centrifugáciou (560 x g pri 4 °C počas 10 minút). . Supernatant sa jemne odstránil a reakcia sa ukončila použitím 200 ul metanolu počas 10 minút. Potom sa cela trikrát premyla 70 % (obj./obj.) metanolom a potom sa vysušila na vzduchu. Kryštál formazánovej modrej sa rozpustil s použitím 120 ul 2 M KOH a 140 ul DMSO. Optická hustota (OD) sa odčítala na spektrofotometri pri 630 nm oproti slepému pokusu KOH/DMSO.

PA hemolymfy bola stanovená podľa skôr opísaných metód Xue et al. [49]. Stručne, 50 ul zriedenej hemolymfy sa umiestnilo na sklíčko a inkubovalo sa pri 25 °C počas 20 minút, aby sa podporila adhézia. Potom sa do monovrstvy hemocytov pred inkubáciou (25 °C počas 30 minút) pridalo 50 ul kvasiniek (Saccharomyces cerevisiae) s 1 x 106 buniek/ml. Sklíčko sa dvakrát jemne premylo sterilizovaným fosfátovým tlmivým roztokom (PBS) a fixovalo sa metanolom počas 5 minút. Potom sa sklíčko farbilo roztokom Giemsa počas 20 minút. Bunky boli spočítané pod olejovou imerznou šošovkou. Fagocytárna rýchlosť indikovala fagocytárnu aktivitu.

2.9. Biochemické parametre v CFH

Antioxidačné enzýmové aktivity (ako je SOD, kataláza (CAT) a glutatiónperoxidáza (GPX)), celková antioxidačná kapacita (T-AOC) a obsah malondialdehydu (MDA) a GSH v CFH boli stanovené pomocou komerčné testovacie súpravy (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, katalóg: T-AOC, A015-2-1; SOD, A001-3-2; CAT, A007- 1-1; GSH, A006-2-1; GPX , A005-1-2; MDA, A003-1-2). T-AOC bol založený na generovaní zelených ABTS (2, 20 -azino-bis (3-etylbenzotiazolín-6-sulfónová kyselina)) radikálov, keď bol ABTS oxidovaný. SOD, GSH a GPX sa merali pomocou absorbancií pri 450 nm, 405 nm a 421 nm, v danom poradí, s použitím ultrafialového spektrofotometra (Ultrospec 2100 pro, Biochrom, Holliston, MA, USA). CAT a MDA boli stanovené pomocou molybdénanu amónneho a metódy TBA (kyselina tiobarbiturová) [50,51].

Aktivita LZM a obsah C3 a C4 v CFH sa merali pomocou komerčných testovacích súprav (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, Čína. Katalóg: LZM, A050-1-1; C3, E032-1-1; C4 , E033-1-1). LZM sa merala pomocou transmitancie pri 530 nm. C3 a C4 boli stanovené pri 340 nm.

2.10. Celková extrakcia RNA a kvantitatívna PCR v reálnom čase

Celková RNA z tráviacej žľazy a žiabrov sa extrahovala pomocou súpravy na izoláciu tkanivovej celkovej RNA (Vazyme, Nanjing, Čína) a činidla TRIzol (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) podľa pokynov výrobcu. Koncentrácia a čistota extrahovanej celkovej RNA sa stanovili pomocou Nanodrop 2000 (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA). Komplementárna DNA (cDNA) bola syntetizovaná pomocou súpravy na reverznú transkripciu (PrimeScript® RT reagent Kit s gDNA Eraser, Takara, Japonsko).

Všetky priméry boli navrhnuté pomocou Primer Premier 6.{1}} (doplnková tabuľka S1) a syntetizované spoločnosťou Sangon Biotech (Shanghai, Čína). Amplifikačná reakcia sa uskutočnila v celkovom objeme 25 ul, obsahujúcom 0,5 ul forwardových a reverzných primerov, 12,5 ul 2 x SYBR Green Realtime Master Mix (Vazyme), 1 ul cDNA a 10,5 ul sterilizovanej ddH20. Na stanovenie profilov expresie pre každý gén sa použili nasledujúce podmienky termocyklovania: 95 °C počas 30 s; 40 cyklov 95 ◦C počas 10 s a 60 ◦C počas 30 s; s následnými inkubáciami pri 95 ◦C počas 15 s, 60 ◦C počas 1 minúty a 95 ◦C počas 1 s na detekciu fluorescencie. Hladiny expresie cieľového génu boli normalizované na hladiny kombinácie dvoch najstabilnejších referenčných génov (-aktín a gapdh), ktoré boli validované pomocou geNorm a NormFinder [52,53]. Relatívne génové expresie boli vypočítané pomocou metódy 2−∆∆CT [54].

2.11. Western Blot

Celkový proteín tráviacej žľazy a žiabrov bol extrahovaný metódou RIPA (Solarbio) [55] s kokteilmi inhibítorov proteázy a fosfatázy (Roche, Basel, Švajčiarsko). Podľa manuálu bol jadrový proteín tráviacej žľazy a žiabrov extrahovaný pomocou súpravy na extrakciu jadrového a cytoplazmatického proteínu (Beyotime, Shanghai, Čína). Koncentrácia proteínu sa merala pomocou súpravy BCA Protein Quantification Kit (Vazyme, Nanjing, Čína) a všetky vzorky proteínov sa zriedili na ekvivalentnú koncentráciu 1,5 ug/ul pomocou činidla RIPA. Vzorky proteínov z tráviacej žľazy a žiabrov boli oddelené pomocou SDS-PAGE a následne prenesené na 0.45 um PVDF membránu. PVDF bol blokovaný s použitím 5 percent odtučneného sušeného mlieka (Beyotime, Shanghai, Čína) pri príprave na TBST pri izbovej teplote počas 1 hodiny. Membrána bola premytá trikrát TBST pred inkubáciou s použitím primárnej protilátky cez noc pri 4 °C pri 60 ot./min. Potom sa inkubovaná membrána trikrát premyla TBST a inkubovala sa s kozou anti-králičou chrenovou peroxidázou konjugovanou sekundárnou protilátkou (Beyotime, Shanghai, Čína) počas 1 hodiny pri teplote miestnosti. PVDF membrána bola vizualizovaná pomocou chemiluminiscenčnej súpravy ECL (Vazyme, Nanjing, Čína). Ako referenčné proteíny boli použité GAPDH (1:500, AB-P-R001, Goodhere Biotechnology, Hangzhou, Čína) a Lamin B (1:500, WL01775, Wanleibio, Shenyang, Čína). Primárnymi cieľovými protilátkami boli myeloidná diferenciačná primárna odpoveď 88 (MyD88, 1:500, WL02494, Wanleibio, Shenyang, Čína), c-Jun N-terminálna kináza (JNK, 1:500, WL01295, Wanleibio, Shenyang, Čína), zrelá -IL-1 (1:500, WL00891, Wanleibio, Shenyang, Čína), NF-κB p65 (1:500, WL01980, Wanleibio, Shenyang, Čína), kelch-like ECH asociačný proteín 1 (Keap1, 1 :1000, WL03285, Wanleibio, Shenyang, Čína) a štiepená kaspáza3 (1:500, WL02117, Wanleibio, Shenyang, Čína). Kvantifikácia Western blotu bola vypočítaná pomocou ImageJ (verzia 1.53, Wayne Rasband a prispievatelia, National Institute of Health, Bethesda, MD, USA).

2.12. Výpočty a štatistická analýza

Na štatistické analýzy bol použitý softvér SPSS 24 (IBM, Armonk, NY, USA). Na zistenie štatistických rozdielov medzi týmito skupinami na hladine významnosti 0,05 sa použila jednosmerná ANOVA s Tukeyho testom s viacerými rozsahmi. Všetky údaje boli vyjadrené ako priemer ± SE (štandardná chyba).

SR, WGR (miera prírastku hmotnosti) a DISL (denný prírastok dĺžky škrupiny) sa vypočítali takto:

SR ( percentá )=(počet prežitých ušníc/počet počiatočných ušníc) × 100;

WGR ( percentá )=[(konečná hmotnosť (g) − počiatočná hmotnosť (g))/počiatočná hmotnosť (g)] × 100;

DISL (µm/deň)=[konečná dĺžka obalu (mm) − počiatočná dĺžka obalu (mm)]/dni × 1000.

3. Výsledky

3.1. Retenčná účinnosť kyseliny askorbovej v strave

RE diétnej AA v rôznych intervaloch ponorených do morskej vody je znázornená na doplnkovom obrázku S1. Vo všeobecnosti sa RE AA v strave znižovalo s trvaním ponorenia do morskej vody. Počas experimentu s kŕmením zostala strava v morskej vode približne 12 hodín. Preto pokus vylúhovania trval 12 hodín v morskej vode za rovnakých podmienok kŕmenia. Po 3 hodinách ponorenia sa RE AA v strave pohybovala od 95,25 percenta do 97,43 percenta. RE AA bola udržiavaná na viac ako 95 percent počas 6-hodinového ponorenia. Po ponorení na 12 hodín bol RE AA v AA50, AA100, AA200, AA500, AA1000 a AA5000 89,78 percenta, 90,88 percenta, 89,38 percenta, 91,03 percenta, 87,47 percent, v uvedenom poradí, {78 percent, 87,47 percent

3.2. Výkon rastu a distribúcia kyseliny askorbovej v tkanivách

The SR and growth performance of abalone-fed gradient levels of AA supplementation are shown in Table 2. The SR (%), WGR (%), and DISL (µm/day) were not significantly affected by dietary AA levels (p>0.05). SR sa pohybovala medzi 80,74 percenta a 88,15 percenta a WGR a DISL sa pohybovali od 29,32 percenta do 31,52 percenta a 17,92 až 20,01 µm/deň, v uvedenom poradí.

The AA distribution in tissues, including CFH, muscle, mantle, gill, and digestive gland, is shown in Figure 1. No significant differences in AA content in CFH and mantle of abalone after dietary AA were observed (p>0.05). Obsah AA v CFH a plášti sa pohyboval od 2,89 ug/ml do 4,52 ug/ml a 81,63 ug/g do 103,08 ug/g, v danom poradí. Obsah AA vo svale, žiabre a tráviacej žľaze bol významne zvýšený (str<0.05) and reached their peak at the AA5000 group. The AA content in the muscle, gill, and digestive gland was 64.88–128.20 µg/g, 308.98–382.19 µg/g, and 130.08–206.09 µg/g, respectively.

3.3. Imunitné parametre hemolymfy

THC, RB a PA hemolymfy sú uvedené v tabuľke 3. THC sa významne zvýšilo so zvýšením AA v strave, v rozmedzí od 1,07 × 107 – 1,65 × 107 buniek/ml, a dosiahlo svoj vrchol v skupine AA1000.

RB v hemocyte mušlí sa výrazne zvýšilo a svoju najvyššiu úroveň dosiahla v skupine AA10{{10}}{{20}} (0 .35 OD630/107 buniek·ml-1). Keď sa suplementácia AA v strave zvýšila z 189,05 mg/kg na 919,99 mg/kg, RB sa významne zvýšilo z 0,20 OD630/107 buniek.ml-1 na 0,35 OD630/107 buniek.ml-1 (p < 0,05). Diétna AA by mohla ovplyvniť PA v hemocytoch abalone (p < 0,05). PA mušlí v skupine AA1000 a AA5000 bola významne vyššia ako v skupinách AA0, AA50 a AA100 a dosiahla svoje maximum (48,92 percent) v skupine AA5000.

Imunitne súvisiace parametre v CFH mušlí, vrátane obsahu LZM, C3 a C4, sú uvedené v tabuľke 4. Aktivita LZM bola významne zvýšená (p < 0.{{10}} }5) a najvyššie hladiny dosiahla v skupine AA1000, kde jej aktivita bola 56,25 U/ml. Údaje neodhalili žiadne významné účinky na obsah C3 medzi všetkými liečbami (p > 0,05); obsah C3 sa však stále zvyšoval so suplementáciou AA v strave. Obsah C4 nebol významne ovplyvnený diétnym AA (p > 0,05).

3.4. Antioxidačné parametre v CFH

Antioxidačné enzýmové aktivity v CFH mušlí s obsahom SOD, CAT a GPX, ako aj T-AOC kapacita a obsah MDA a GSH sú uvedené v tabuľke 5. Diétna AA významne ovplyvnila aktivity SOD, CAT, a GPX a T-AOC a obsah GSH a MDA. Aktivity SOD, CAT a GPX a obsah T-AOC a GSH boli výrazne upregulované (p < 0.05), zatiaľ čo obsah MDA bol výrazne znížený v ušeňoch (p < 0,05 ). Medzi skupinami AA1000 a AA5000 neboli pozorované žiadne významné rozdiely v týchto antioxidačných parametroch v CFH mušle.

【Ďalšie informácie:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:{0}}】