Cistanche Tubulosa chráni dopaminergné neuróny prostredníctvom regulácie apoptózy a neurotrofického faktora odvodeného z gliových buniek: in vivo a in vitro

Parkinsonova choroba (PD) je neurodegeneratívne ochorenie s patologickým znakom zníženého nigrostriatálneho dopamínu. V klinickej praxi tradičnej čínskej medicíny (TCM) má nanoprášok z Cistanche tubulosa terapeutické účinky na PD. Aby sa identifikoval terapeutický mechanizmus, táto štúdia testovala ochranný účinok rôznych dávok toxicity vyvolanej MPP plus v bunkách MES23.5 pomocou testu MTT a v 1-metyl-4-fenyl-1 ,2,3,6-tetrahydropyridínom (MPTP) indukované PD myši (vehikulá). Imunohistochémia sa použila na hodnotenie cytomorfológie a expresie tyrozínhydroxylázy (TH). Na detekciu expresie TH, neurotrofického faktora odvodeného od gliálnej bunkovej línie (GDNF) a jeho receptorov sa použili behaviorálne testy vo vehikuloch, testy vysokoúčinnej kvapalinovej chromatografie (HPLC) v dopamíne, imunohistochémia a analýza Western blot. Naše výsledky ukázali, že nanoprášok cistanche tubulosa zlepšil životaschopnosť buniek ošetrených MPP plus, zvýšil expresiu TH a znížil počet apoptotických buniek. Tiež zvýšil expresiu proteínu Bcl2 a potlačil expresiu proteínu Bax v bunkách ošetrených MPP plus spôsobom závislým od dávky.

Navyše,cistanchenanoprášok tubulosa zlepšil behaviorálne deficity u myší s vehikulom, skrátil stacionárne trvanie plávania, zvýšil schopnosť spontánnej aktivity a zvýšil expresiu GDNF, receptora alfa rodiny GDNF (GFR 1) a Ret v bunkách substantia nigra ( SN).

Okrem toho sa proteínová expresia GDNF, GFR1 a Ret zvýšila po liečbe rôznymi dávkamicistanchetubulosa nanoprášok, s významným rozdielom medzi skupinami s vysokou dávkou a vehikulom. Proteínová expresia Bcl2 a Bax bola podobná in vivo a in vitro, čo nasvedčovalo tomucistanchenanoprášok tubulosa má antiapoptotické účinky v neurónoch.

Kliknite na produkt cistanche violacea

Úvod

Parkinsonova choroba (PD) je bežné neurodegeneratívne ochorenie vyskytujúce sa u starších ľudí s patologickými prejavmi straty dopaminergných neurónov v substantia nigra (SN) v dôsledku degenerácie. Závažnosť ochorenia koreluje so stratou dopamínových (DA) neurónových buniek v SN, čo je v súlade s názorom, že neurodegeneratívny proces prebieha mnoho rokov predtým, ako sa objavia akékoľvek symptómy (Sawle a Myers, 1993). Progresívna povaha ochorenia naznačuje zaujímavé možnosti terapeutického zásahu blokovaním základného neurodegeneratívneho procesu. Hľadanie terapiou indukovaných silných a špecifických účinkov neurotrofických faktorov na prežitie DA neurónov je preto veľmi zaujímavé.

Neurotrofické faktory sú esenciálne proteíny, vrátane nervového rastového faktora (NGF), neurotrofického faktora odvodeného z mozgu (BDNF) a neurotrofického faktora odvodeného od gliálnych buniek (GDNF), ktoré podporujú rast nervov, neurologický vývoj, axonálne vedenie a funkciu neurónov. Spomedzi všetkých neurotrofických faktorov, ktoré chránia a podporujú opravu dopaminergných neurónov, má GDNF najsilnejšie účinky (Hong a kol., 2008; Rangasamy a kol., 2010; Allen a kol., 2013). Ukázalo sa, že GDNF má silné neurotrofické účinky na DA neuróny in vitro (Lin a kol., 1993) a má neuroprotektívne účinky in vivo. Ukázalo sa, že GDNF zachraňuje nigrálne DA neuróny pred bunkovou smrťou vyvolanou léziami po chirurgickej alebo toxínom indukovanej axotómii u potkanov (Beck a kol., 1995; Kearns a Gash, 1995; Sauer a kol., 1995) a čiastočne aj po systémové podávanie N-metyl-4-fenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridínu (MPTP) myšiam (Tomac et al., 1995). Zvýšený výskyt neuronálnej apoptózy a znížené ochranné účinky neurotrofických faktorov, potenciálne spúšťané rôznymi patologickými faktormi, sú základom degenerácie dopamínergných neurónov (Holden et al., 2006).

cistanchetubulosa je bylinný liek pochádzajúci z niekoľkých rastlín rodu Cistanche. Je to hlavná terapeutická možnosť pre syndróm obličkovej nedostatočnosti, ktorý úzko súvisí s androgénnymi hormónmi v tradičnej čínskej medicíne (TCM). K dnešnému dňu existuje veľa klinických a základných výskumovcistanchetubulosa preukázali aktivity neurodegeneratívnych ochorení. Identifikácia receptov TCM na tonizáciu obličiek pri liečbe PD tak môže poskytnúť alternatívnu klinickú liečbu PD. Echinakozid (ECH) je hlavnou bioaktívnou zložkou, ktorá sa nachádza v liečivej bylinecistanchetubulosa. Štúdie preukázali terapeutické účinky glykozidov Cistanche a ECH, verbascozidu (VER) a icariínu (ICA) na Alzheimerovu chorobu (AD), PD a iných pacientov s vaskulárnou demenciou (Urano a Tohda, 2010; Wang et al., 2013 Wu a kol., 2014). Wu a kol. (2014) navrhol, že cistanche. extrakty tubulosa, ktoré obsahovali dostatok ECH a akteozidu, zlepšili kognitívnu dysfunkciu spôsobenú A -42 blokovaním depozície amyloidu a zvrátením cholinergnej a hipokampálnej dopaminergnej neuronálnej funkcie. Tao a kol. (2015) zistili, že fenyletanoidové glykozidy z cistanche tubulosa (Ph Gs-Ct) zabránili vysokohorskému edému mozgu znížením expresie proteínu a mRNA AQP4 v mozgovom tkanive modelov potkanov.

Predchádzajúce štúdie ukázali, že čínske bylinné zlúčeniny, vrátane troch zložiekcistanchetubulosa, epimedium a rhizoma polygonal zmiernili poškodenie dopaminergných neurónov a zvýšili hladiny dopamínu reguláciou expresie neurotrofických faktorov (Wu et al., 2013).

Zatiaľ teda nie je známe, čicistancheneuroprotektívne účinky vyvolané tubulózou sú dlhodobé a do akej miery môže záchrana nigrálnych DA neurónov podaním GDNF poskytnúť významné zachovanie motorického správania relevantného pre symptomatológiu PD zvierat. Táto štúdia použila recept TCM na tonizáciu obličiek,cistanchenanoprášok tubulosa, ktorý získal národný patent (číslo patentu: 2011103028541) v Číne a už predtým preukázal určitý terapeutický účinok pri PD. Táto štúdia bola preto navrhnutá tak, aby preskúmala neuroprotektívne a regeneračné účinkycistanchetubulosa a skúmať apoptózu na MES23.5 bunkách a behaviorálne definitívnych potkanoch a reguláciu GDNF, ako bolo merané batériou cieľových testov.

Materiály a metódy

Materiály, činidlá a vybavenie

cistanchetubulosa bola zakúpená od Beijing Tong Ren Tang Group, Co., Ltd., Peking, Čína. ECH, VER a ICA pochádzajú z Národného inštitútu pre kontrolu potravín a liečiv v Číne. Dopamínergná neurónová bunková línia MES23.5 bola darom od profesora Biao Chena, Laboratórium neurobiológie, Capital Medical University, Peking, Čína. Päťdesiat samcov myší C57BL/6 (každý s hmotnosťou 20 až 25 g) bolo zakúpených od spoločnosti Shanghai SLAC Laboratory Animal Co., Ltd. (číslo licencie: SCXK2012-0002), Šanghaj, Čína.

MPP plus, MTT a glutamín boli zakúpené od Sigma-Aldrich (Carlsbad, CA, USA); DMEM/F12 médium a fetálne bovinné sérum boli zakúpené od Gibco Co. (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA); a štandard MPTP, DA a štandard kyseliny homovanilovej (HVA) boli zakúpené od Sigma-Aldrich (Carlsbad, CA, USA). -aktín, Bax, Bcl2, GDNF, GDNF rodina receptora alfa (GFR 1) a protilátky Ret boli zakúpené od Cell Signaling Technology, Inc. (Beverly, MA, USA); Súprava 3,3'-diaminobenzidínu (DAB) farbiaceho činidla bola zakúpená od Fuzhou Maixin Biotech., Ltd. (Fujian, Čína); a súprava na prípravu vzorky gélu SDS-PAGE, súprava na detekciu ultrasenzitívnej zosilnenej chemiluminiscencie (ECL) a test s kyselinou bicinchonínovou (BCA) boli zakúpené od Beyotime Institute of Biotechnology (Peking, Čína).

V tejto štúdii sa použili nasledujúce prístroje: čítačka mikrodoštičiek ELX800 (Bio Tek Winooski, VT, USA); CO2 inkubátor (Heraeus, Hanau, Nemecko); Gél DOC 2000 systém na analýzu gélového zobrazenia, elektroforéza a elektroforéza nádrž (Bio-Rad, Hercules, CA, USA); DU-650 proteínový analyzátor (Beckman Coulter, Inc., Fullerton, CA, USA); 5417R vysokorýchlostná chladená odstredivka (Eppendorf, Hamburg, Nemecko); SXQM duálny planétový guľový mlyn (Changsha, Tencan Powder Technology Co., Ltd, Hunan, Čína); MM400 miešací mlyn (Retsch GmbH, Haan, Nemecko); Agilent 1200 vysokoúčinná kvapalinová chromatografia (HPLC; Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA); Elektroforéza PowerPac Basic, systém transmembránového prenosu PowerPac Basic, chemiluminiscenčný zobrazovač Universal Hood II, systém reverznej transkripcie RNA S1000 Thermal Cycler (Bio-Rad); Systém analýzy obrazu tkaniva a buniek Motic Med 6.0 (Motic China Group, Co., Ltd, Xiamen, Čína).

Prípravacistanchetubulosa nanoprášok

cistanchetubulosa bola odvážená, potom purifikovaná a dehydratovaná. Po konvenčnom rozdrvení na prášokcistanchejemný prášok tubulosa prešiel cez 200-sito a lyofilizoval sa. Na prípravu bol použitý vákuový a vysokoenergetický guľový mlyn s riadenou teplotoucistanchetubulosa nanoprášok. Po prvé, surovécistanchenanoprášok tubulosa bol umiestnený do vákuovej guľovej mlecej nádrže, ktorá bola naplnená karbidovými mlecími guľami. Pomer medzi mlecími guličkami a nanopráškom cistanche tubulosa sa pohyboval od 15:1 do 5:1. Na získanie jemného prášku sa rýchlosť a trvanie vysokoenergetického guľového mlyna nastavili na 300 otáčok za minútu a 20 minút. Jemný prášok bol odvážený na spracovanie materiálov nanorozmerov a spracovaný v miešacom mlyne s frekvenciou 25/s a osciláciou 20s na tri opakovania. PBS sa použil na rozpustenie a prípravu 25 mg/ml zásobného roztoku, po čom nasledovala 30 minútová ultrasonikácia, autoklávovanie a nakoniec skladovanie pri -20 stupňoch.

Kontrola kvality aktívnych zložiekcistanchetubulosa pomocou HPLC

ECH a VER obsahovali gradientovú elúciu s oktadecylsilánom viazaným oxidom kremičitým ako plnivom, metanolom ako mobilnou fázou A a 0,1 % roztokom kyseliny mravčej ako mobilnou fázou B. Detekčná vlnová dĺžka bola 330 nm. ICA obsahovala gradientovú elúciu s oktadecylsilánom viazaným oxidom kremičitým ako plnivom a zmesou acetonitril-voda (30:70) ako mobilnou fázou. Detekčná vlnová dĺžka bola 270 nm. Vzorka, kontrola a negatívna kontrola boli namerané po 10 ul pre test.

Bunková kultúra a MTT test na meranie životaschopnosti buniek ošetrených MPP plus

Bunky MES23.5 sa naočkovali 5 percentným fetálnym teľacím sérom, 1 percentom glutamínu, 2 percentami 50x Satoho roztoku a médiom DMEM/F12 s 2 percentami penicilínu/streptomycínu. Boli inkubované pri 37 stupňoch v 5% CO2 inkubátore s nasýtenou vlhkosťou. Bunky sa izolovali a pasážovali s 0,25 percentami trypsínu a bunková suspenzia sa zozbierala v logaritmickej rastovej fáze. Izolované bunky s hustotou 1 × 105 sa naočkovali do polylyzínom potiahnutých 96-jamkových platní, po ktorých nasledovalo pridanie rôznych konečných koncentrácií (6,25, 12,5, 25, 50, 100, 200, 400 a 800 μmol/ L) média MPP plus. Bunky MES23.5, ktoré sa inkubovali s normálnym kultivačným médiom počas 24 hodín a 48 hodín, sa použili ako negatívne kontroly v experimentoch in vitro. Bunky z rôznych liečebných skupín sa inkubovali s MTT činidlom počas 4 hodín. Roztok v jamkách sa následne zlikvidoval a pridalo sa 150 ul DMSO a oscilovalo sa 10 minút. Absorbancia každej vzorky pri vlnovej dĺžke 570 nm sa merala pomocou automatickej čítačky mikrodoštičiek. Percento bunkovej životaschopnosti (percento)=priemerná absorbancia experimentálnej skupiny/priemerná absorbancia negatívnej kontrolnej skupiny × 100 percent.

Relevantné koncentrácie MPP plus média sa pridali na 24-hodinové ošetrenie v bunkách MES23.5 použitím rovnakého prístupu ako v prípade in vitro kultúry. Po ošetrení bol roztok v jamke zlikvidovaný. Médiá obsahujúce rôzne koncentrácie (10, 50, 100, 200, 250, 500 a 1000 ug/ml)cistanchenanoprášok tubulosa sa pridal k bunkám MES23.5 v rôznych jamkách a nechal sa inkubovať 24 hodín a 48 hodín. Bunky MES23.5, ktoré sa inkubovali s normálnym kultivačným médiom počas 24 hodín a 48 hodín, sa použili ako negatívne kontroly. Ako vehikulum sa použili bunky MES23.5, ktoré boli inkubované s MPP plus médiom. Merania sa uskutočňovali trojmo pre každú vzorku. Merala sa absorbancia zodpovedajúcich liečených a kontrolných skupín, aby sa vypočítala životaschopnosť buniek.

Expresia TH meraná imunocytochémiou

Kedycistanchetubulosa nanoprášok bol v 100, 200 a 250 ug/ml, miera prežitia buniek sa výrazne zvýšila (obrázok 2G). V nasledujúcich experimentoch sme teda testovali tri koncentrácie: skupiny s nízkou dávkou, strednou dávkou a vysokou dávkou. Pre každú z nich boli testované tri replikáciecistanchetubulózne skupiny. Sterilizované krycie sklíčka potiahnuté polylyzínom sa umiestnili do 6-jamkových platní. Ďalej sa do každej jamky naočkovalo 5 x 104 buniek a inkubovalo sa 24 hodín. Bežné čerstvé médium sa nahradilo v normálnej kontrolnej skupine a konečná koncentrácia 100 μmol/l MPP plus médium sa nahradilo v zostávajúcich liečebných skupinách, aby sa inkubovali 24 hodín. Konvenčné čerstvé médiá sa potom nahradili v normálnych kontrolných skupinách a skupinách s vehikulom a konečné koncentrácie 100, 200 a 250 ug/mlcistanchetubulosa nanoprášok sa inkuboval s bunkami počas 24 hodín v nízkej, strednej a vysokej dávkecistancheskupiny liečené tubulózou, resp. Bunky MES23.5 v rôznych skupinách sa trikrát premyli v PBS, aby sa odstránil supernatant a ďalej sa fixovali v 4 percentách paraformaldehydu počas 15 minút. Po premytí PBS sa bunky inkubovali s blokátorom peroxidázy pri 37 stupňoch počas 3 0 min a potom sa znova premyli PBS. Na permeabilizáciu buniek počas 10 minút sa použil 0,2 percentný roztok Triton X-100, po čom nasledovalo premytie PBS.

Do každej vzorky sa pridalo normálne kozie sérum a inkubovalo sa pri teplote miestnosti 30 minút. Normálne kozie sérum sa potom odstránilo a do každej vzorky sa pridala primárna protilátka zriedená v pomere 1:400 v PBS a inkubovala sa cez noc pri 4 stupňoch. Bunky v negatívnej kontrolnej skupine boli cez noc inkubované s PBS pri 4 stupňoch. Po premytí PBS sa bunky inkubovali so sekundárnymi protilátkami značenými biotínom vo vlhkej komore pri 37 stupňoch počas 20 minút. Každá vzorka sa potom premyla v PBS a označila konjugátmi chrenovej peroxidázy-streptavidínu (pracovný roztok C) pri 37 stupňoch počas 20 minút. Po premytí PBS boli bunky zafarbené DAB činidlom v tme približne 1-10 minút a vývoj hnedej farby bol sledovaný pod svetelnou mikroskopiou.

Každá vzorka sa potom dvakrát premyla v destilovanej vode 1–2 minúty a jadrá sa kontrastne farbili roztokom hematoxylínu počas 0,5–1 minúty. Po dôkladnom opláchnutí každej vzorky vo vode sa bunky ponorili do 1% kyseliny chlorovodíkovej na diferenciáciu a 1% vodného amoniaku, potom sa bunky dôkladne premyli vodou. Bunky z každej vzorky sa potom dehydratovali v 70 percentách etanolu počas 2 minút, 80 percentách etanolu počas 2 minút, 90 percentách etanolu počas 2 minút dvakrát, 95 percentách etanolu počas 2 minút dvakrát a 100 percentách etanolu počas 2 minút dvakrát. Bunky sa potom dvakrát ponorili do roztoku xylénu na 2 minúty a umiestnili sa na podložné sklíčko s neutrálnymi živicami. Pod svetelnou mikroskopiou sa každá vzorka podrobila zachyteniu obrazu a náhodnému výberu 5–10 efektívnych vizuálnych polí na určenie expresie vybraných proteínov v dopamínergných neurónoch indikovaných intenzitou hnedých častíc a na semikvantifikáciu obsahu proteínu jeho priemernou sivou hodnotou. .

Rýchlosť apoptózy buniek MES23.5 meraná prietokovou cytometriou

Adherentné bunky sa raz premyli PBS. Na izoláciu buniek sa pri teplote miestnosti pridalo vhodné množstvo roztoku trypsínu bez EDTA a roztok sa jemne odpipetoval, aby sa umožnilo oddelenie adherentných buniek. Potom sa pridalo médium bunkovej kultúry, aby sa zastavila trypsinizácia. Zmes sa preniesla do novej centrifugačnej skúmavky a potom sa 5 minút centrifugovala pri 1500 otáčkach za minútu, aby sa zozbierali izolované bunky. Po odstránení supernatantu sa bunková peleta jemne resuspendovala s použitím PBS a bunky sa spočítali. Približne 1 x 105 až 5 x 105 resuspendovaných buniek sa 5 minút centrifugovalo pri 1500 ot./min. a supernatant sa zlikvidoval. K bunkovej pelete sa pridalo päť mikrolitrov viažuceho roztoku Annexin V-FITC, aby sa bunky jemne resuspendovali. Pridalo sa ďalších 5 ul Annexinu V-FITC a dôkladne sa premiešalo. Päť mikrolitrov roztoku propídiumjodidu sa použilo na farbenie buniek inkubáciou pri teplote miestnosti počas 10 minút krátko pred prietokovou cytometriou.

Analýza Western Blot pre in vitro

Bunky boli rozdelené do normálnej skupiny, MPP plus liečebná skupina, s nízkou dávkoucistancheskupina liečená tubulózou, stredná dávkacistancheskupina liečená tubulózou a vysoká dávkacistancheskupina liečená tubulózou. Expresia Bcl2 a Bax sa merala v každom z nich. Celkovo 1 x 1{12}}5 buniek na jamku v 6-jamkovej doštičke sa použilo na modelovanie a ošetrenie v každej skupine pred zberom buniek. Pridal sa zmiešaný lyzát obsahujúci RIPA pufor, inhibítor proteázy a inhibítor fosfatázy na lýzu buniek počas 30 minút na ľade. Po odstredení sa supernatant použil na analýzu proteínov. Celkový proteín bol kvantifikovaný pomocou BCA testu a separovaný 10% SDS-PAGE. Oddelené proteíny sa preniesli na membránu a inkubovali sa s 5 percentným tlmivým roztokom blokujúcim odstredené mlieko pri teplote miestnosti počas 2 hodín. Membrána sa potom inkubovala v primárnej protilátke (Bcl-2 0 0,34 mg/ml, Bax 0,11 mg/ml, riedenie 1:200) pri 4 stupňoch cez noc. Po premývacom kroku sa membrána inkubovala v sekundárnej protilátke (0,5 mg/ml, riedenie 1:5000) pri 4 stupňoch počas 1 hodiny a potom vo vývojke ECL počas 2 minút na konvenčné vyvíjanie. Množstvo Jeden softvér sa použil na semikvantitatívnu analýzu expresie proteínu.

Experimentálne zvieracie modelovanie a administrácia liečiv

Päťdesiat týždňových samcov myší bez špecifických patogénov bolo náhodne rozdelených do piatich skupín: normálna skupina, skupina liečená MPTP (vozidlo), s nízkou dávkoucistancheskupina liečená tubulózou, stredná dávkacistancheskupina liečená tubulózou a vysoká dávkacistancheskupina liečená tubulózou. Zvieratá boli umiestnené pri teplote 20–22 stupňov s voľným prístupom k potrave a vode. Myšiam v normálnej skupine sa intraperitoneálne injikoval rovnaký objem normálneho fyziologického roztoku počas siedmich po sebe nasledujúcich dní. Myšiam v iných liečebných skupinách sa intraperitoneálne injikoval MPTP (30 mg/kg/d) počas siedmich po sebe nasledujúcich dní, aby sa vytvorili vehikulá.

Počas modelovania PD boli myši v nízkej dávke, strednej dávke a vysokej dávkecistancheSkupinám liečeným tubulózou sa intragastricky podávali ekvivalentné klinické objemy 4 g/kg/deň, 8 g/kg/deň a 16 g/kg/deňcistanchetubulosa nanoprášok počas 14 po sebe nasledujúcich dní. Myšiam v kontrolnej skupine a skupine s vehikulom sa intragastricky podávali ekvivalentné objemy normálneho fyziologického roztoku počas 14 po sebe nasledujúcich dní. Všetky experimentálne postupy boli schválené etickou komisiou Fujianskej univerzity TCM a boli vykonávané podľa medzinárodne uznávaných zásad pre použitie a starostlivosť o laboratórne zvieratá. V tejto štúdii sa vynaložilo všetko úsilie na minimalizáciu utrpenia zvierat.

Behaviorálne testy

Test plávania (Zhu et al., 2014)

Koordinácia pohybu tela u myší bola meraná pomocou testu plávania. Myši boli jednotlivo umiestnené do vodnej nádrže (25 cm na výšku a 10 cm v priemere) obsahujúcej 10 cm vody a testované v tichom prostredí, aby sa zaznamenalo ich stacionárne trvanie počas 5 minút.

Test v otvorenom poli (Kawai a kol., 1998)

Lokomotorická aktivita sa merala použitím testu otvoreného poľa. Myši boli testované v tichom a slabo osvetlenom prostredí a jednotlivo umiestnené v priehľadnej akrylovej nádobe s rozmermi 30 cm × 30 cm × 15 cm so separačnou mriežkou 6 cm × 6 cm na dne. Myšiam bolo poskytnutých 10 minút, aby sa prispôsobili prostrediu, a potom sa päťkrát za sebou merala prechádzka číslom mriežky a frekvencia chovu jednotlivých myší, aby sa získali stredné hodnoty.

Odber vzoriek mozgového tkaniva

Pred odberom vzoriek tkaniva boli myši kŕmené adlibitom s voľným prístupom k vode a dostávali liekovú intervenciu počas 14 po sebe nasledujúcich dní. Štyri myši v každej skupine boli vybrané a rýchlo dekapitované. SN (Bregma: -2,75 mm -2,92 mm) z každého zvieraťa sa izoloval a umiestnil na ľad. Mozgové tkanivá sa prepláchli 0,9 percentným ľadovo studeným roztokom chloridu sodného, ​​aby sa odstránila všetka krv, a pred uskladnením pri -80 stupňoch sa vysušili na filtračnom papieri. Štyri myši z každej skupiny boli intraperitoneálne anestetizované a ich hrudníky boli otvorené. Do ľavej komory každého zvieraťa sa potom vložila infúzna ihla. Na odstránenie krvi v obehovom systéme sa odrezal prívesok pravej predsiene a zvieraťu sa infúziou podával 4-stupňový normálny fyziologický roztok, až kým pečeň nezbledla, aby sa zabezpečila následná perfúzia. Akonáhle sa výtok z pravej predsiene vyčistil, každé zviera bolo perfundované 4 percentným fixatívom paraformaldehydu. Po perfúzii sa mozgové tkanivo každého zvieraťa opatrne rozrezalo a následne sa fixovalo v 4 percentnom paraformaldehyde počas 24 hodín. Fixované mozgové tkanivá sa potom opláchli pod tečúcou vodou, dehydratovali sa v odstupňovanej sérii etanolových roztokov a vyčistili sa v xylénovom roztoku. Nasledovalo ponorenie do parafínu a zaliatie.

Zmeny množstva DA merané pomocou HPLC

Nanoprášok SN z každej skupiny sa umiestnil do ľadového kúpeľa obsahujúceho 0,9 % roztok chloridu sodného (pomer 1:9). Mozgové tkanivo sa homogenizovalo s použitím ultrazvukového rozrušovača buniek a centrifugovalo sa pri 1200 ot./min počas 20 minút pri 4 stupňoch, aby sa získal supernatant. Na HPLC sa použila kolóna Hypersil AA-ODS (2,1 mm x 200 mm, 5 um) pri teplote kolóny 30 stupňov. Fluorescenčná detekcia sa uskutočnila pri 280 nm λex a 340 nm λem. Objem injekcie bol 10 ul.

Expresia TH, GDNF, GFR 1 a Ret detekovaná imunohistochémiou

Z každého zvieraťa sa izolovali parafínové rezy (hrúbka 5 μm) jednotlivého mozgového tkaniva a umiestnili sa do 40 stupňov teplého vodného kúpeľa, aby sa sploštili a prilepili na sklenené sklíčka. Všetky tkanivové sklíčka sa inkubovali v 60-stupňovej peci počas 3 až 6 hodín, nasledovalo odparafínovanie xylénom, dehydratácia gradientom etanolu a získanie antigénu inkubáciou v tlmivom roztoku kyseliny citrónovej a zahrievaním v mikrovlnnej rúre počas 20 minút. Tkanivové sklíčka sa potom inkubovali v 3% roztoku H202 pri teplote miestnosti počas 10 minút. Po trojnásobnom premytí v PBS sa tkanivové sklíčka inkubovali s normálnym sérom v uzavretej komore pri teplote miestnosti počas 20 minút. Imunohistochemické farbenie sa uskutočnilo podľa pokynov výrobcu. Na výpočet hodnoty integrovanej optickej hustoty v pozitívne zafarbených bunkách sa použil analyzátor obrazu Motic Med 6.0.

Western Blot analýza v mozgových tkanivách myší

Táto štúdia hodnotila proteínovú expresiu tyrozínhydroxylázy (TH), GDNF, GFR 1, Ret, Bcl2 a Bax. Mozgový lyzát z každej skupiny bol homogenizovaný počas 3{{10}} min na ľade, nasledovala centrifugácia pri nízkej teplote, 20,000 otáčky za minútu, pri 4 stupňoch počas 5 min na zber supernatantu. Proteínové vzorky boli oddelené za konštantného tlaku s použitím 10 percentného SDS-PAGE gélu, ako je opísané vyššie. Koncentrácia primárnej protilátky: TH 0,15 mg/ml, GDNF 0,5 mg/ml, GFR 1 0,8 mg/ml, Ret 0,63 mg/ml, Bcl-2 0,34 mg/ml a Bax 0,11 mg/ml. Postup bol rovnaký ako vyššie.

Štatistická analýza

V tejto štúdii sa na spracovanie a analýzu údajov použil štatistický softvér SPSS 20.0. Hodnoty parametrov boli vyjadrené ako priemer ± štandardná odchýlka (x¯

± S). ANOVA sa použila na jednofaktorovú analýzu údajov. Na porovnanie skupín bol použitý LSD alebo Games-Howellov test. P < 0.05 (alebo P < 0,01) sa považovalo za štatisticky významný rozdiel.

Výsledky

Aktívne zložkycistanchetubulosa nanoprášok

V rozsahu skenovania 200–400 nm je ECH incistanchetubulosa a VER v 330 nm mali maximálny absorpčný pík, ktorý sa objavil do 20 min. ICA mala maximálne absorpčné píky pri 270 nm a objavila sa po 20 minútach (obrázok 1A). Výsledky ukázali, že negatívne vzorky neinterferovali s detekciou (obrázok 1B). Vzorky a kontrola mali rovnaké chromatografické píky a negatívna vzorka nemala žiadne. To ukázalo, že ostatné zložky vo vzorke neinterferujú s meranou zložkou. Okrem toho tri zložky a susedné píky môžu dosiahnuť základnú líniu separácie a stupeň separácie bol vyšší ako 1,5.

cistanchetubulosa Nanopowder Znížená MPP plus - indukovaná cytotoxicita v MES23.5 bunkách

Životaschopnosť buniek MES23.5 bola významne znížená so zvyšujúcimi sa koncentráciami MPP plus. Obrázok 2F ukazuje významnú cytotoxicitu rôznych koncentrácií MPP plus.

cistanchenanoprášok tubulosa znížil cytotoxicitu indukovanú MPP plus a zvýšil životaschopnosť buniek MES23.5. To ukazuje obrázok 2GcistancheDávky nanoprášku tubulosa 10 až 250 ug / ml mali ochranné účinky závislé od dávky na bunky MES23.5 ošetrené MPP plus.

Cytomorfologický účinokcistanchetubulosa nanoprášok

Normálne bunky MES23.5 mali dobrú bunkovú adhéziu a mali vretenovitý tvar s jasnými hranicami buniek a synapsiami. MPP plus - poškodené MES23.5 bunky vykazovali slabú bunkovú adhéziu a zmršťovanie a mnohé boli suspendované v médiu so stiahnutými synapsiami. Tieto bunky boli agregované, scvrknuté a okrúhle s vakuolami vo vnútri a jadrá sa rozpadli alebo zrútili.cistanchenanoprášok tubulosa v rôznych dávkach zlepšil cytomorfológiu buniek MES23.5 v rôznych stupňoch zlepšením bunkovej adhézie a synaptického klírensu skupiny vehikula. MES23.5 bunky vo vysokej dávkecistancheskupina liečená tubulózou vykazovala morfológiu, ktorá bola podobná normálnej kontrolnej skupine (obrázky 2A–E).

Účinokcistanchetubulosa nanoprášok na expresiu TH a apoptózu v bunkách

Obrázok 3 ukazuje významné zníženie expresie TH proteínu v skupine s vehikulom. Expresia TH proteínu sa zvýšila rozdielne v skupinách liečených rôznymi dávkamicistanchetubulosa. Test LSD však ukázal, že medzi tromi liečenými skupinami nebol žiadny významný rozdiel.

Obrázok 4 ukazuje výsledky hodnotenia apoptózy pomocou prietokovej cytometrie. Rýchlosť apoptózy v skupine s vehikulom bola významne vyššia ako v iných skupinách. Bunky ošetrené rôznymi dávkamicistanchenanoprášok tubulosa vykazoval rôzne stupne poklesu rýchlosti apoptózy v porovnaní so skupinou s vehikulom. Bunky v strednej a vysokej dávkecistancheskupina liečená tubulózou mala najvýznamnejšie zlepšenie rýchlosti apoptózy v porovnaní s druhoucistancheskupiny liečené tubulózou. Test LSD ukázal, že medzi týmito dvoma liečenými skupinami nebol žiadny významný rozdiel, ale medzi nimi bol významný rozdiel medzi skupinou s nízkou dávkou.

Účinokcistanchetubulosa nanoprášok na expresiu proteínu Bcl2/Bax v bunkách

Obrázok 5 ukazuje, že expresia Bcl2 proteínu v bunkách skupiny s vehikulom bola významne nižšia v porovnaní s normálnou kontrolnou skupinou. Naproti tomu expresia Bax proteínu v bunkách skupiny s vehikulom bola významne vyššia ako v normálnej kontrolnej skupine.cistancheskupiny liečené tubulózou vykazovali zvýšenú expresiu proteínu Bcl2 a zníženú expresiu proteínu Bax v bunkách MES23.5 ošetrených MPP plus. Medzi tromi liečenými skupinami boli v teste LSD významné rozdiely. Tieto účinky boli závislé od dávky.

Behaviorálne testy

Výsledky testu plávania naznačili, že myši v skupine s vehikulom mali relatívne dlhé stacionárne trvanie, ktoré sa časom predlžovalo. Na 14. deň mali myši v skupine s vehikulom významne dlhšie trvanie stacionárneho stavu ako myši v normálnej kontrolnej skupine. Stacionárne trvanie myší v nízkej dávkecistancheskupina liečená tubulózou sa významne nelíšila od skupiny myší v skupine s vehikulom. Avšak, stacionárne trvanie myší vo vysokej dávkecistancheskupina liečená tubulózou bola významne nižšia ako u myší v skupine s vehikulom.

Výsledky testu v otvorenom poli naznačujú, že po MPTP-indukovanom poškodení u myší, myši v skupine s vehikulom preukázali významný pokles ich schopnosti spontánnej aktivity, ako ukazuje frekvencia chovu. Po 14-dňovom spravovanícistanchetubulosa nanoprášku mali myši v skupinách so strednou a vysokou dávkou významne vyššie frekvencie chovu v porovnaní s myšami v skupine s vehikulom (obrázky 6A, B).

Účinokcistanchetubulosa Nanopowder na obsahu DA u myší

Zmeny v obsahu DA v SN boli stanovené pomocou HPLC. Zistilo sa, že obsah DA v mozgu skupiny s vehikulom bol významne znížený. Obsah DA v mozgu PD myší v nízkej dávkecistancheskupina liečená tubulózou sa významne nelíšila od myší v skupine s vehikulom. všakcistancheliečba tubulosa zvýšila hladiny DA v mozgoch PD myší spôsobom závislým od dávky. Mozgy PD myší liečených vysokou dávkoucistanchetubulosa mala významne vyšší obsah DA ako mozgy myší v skupine s vehikulom (obrázok 6C).

Účinokcistanchetubulosa nanopowder na expresiu TH u myší

Počet TH-pozitívnych buniek a hladina expresie TH proteínu v SN MPTP-indukovaných PD myší boli nižšie v porovnaní s myšami v kontrolnej skupine. Pocistancheliečbe tubulózou sa zvýšil počet TH-pozitívnych buniek a hladina expresie TH proteínu v SN myší s PD indukovanou MPTP, s významným rozdielom medzi vysokými dávkamicistancheskupina liečená tubulózou a skupina s vehikulom testom LSD; a medzi tromi liečenými skupinami boli významné rozdiely (obrázok 7).

Účinokcistanchetubulosa nanoprášok o proteínovej expresii GDNF a jeho receptorov, GFR 1 a Ret u myší

Proteínová expresia GDNF a jeho receptorov, GFR 1 a Ret, v pozitívne zafarbených bunkách, sa hodnotila pomocou imunohistochémie. Na vyhodnotenie hladín expresie proteínov v SN rôznych skupín myší sa použila analýza Western blot. Zistenia pre rôzne skupiny boli podobné pri použití dvoch metód detekcie. Expresia GDNF a jeho receptorových proteínov, GFR 1 a Ret, v pozitívne zafarbených bunkách v SN myší v skupine s vehikulom bola významne nižšia ako u myší v normálnej kontrolnej skupine. Rôzne dávkycistancheliečba tubulózou zvýšila počet GDNF-, GFR 1- a Ret-pozitívnych buniek (obrázky 8A–S).

Proteínová expresia GDNF, GFR 1 a Ret v SN myší v skupine s vehikulom bola významne nižšia ako u myší v kontrolnej skupine. Zvýšenie liečebných koncentráciícistanchenanoprášok tubulosa výrazne zvýšil expresiu týchto proteínov. Proteínová expresia GDNF, GFR 1 a Ret v SN myší vo vysokej dávkecistancheskupina liečená tubulózou bola významne vyššia ako u myší v skupine s vehikulom (P < 0,01; obrázky 8T, U).

Účinokcistanchetubulosa nanoprášok na proteínovú expresiu Bcl2/Bax u myší

Expresia proteínu Bcl2 bola významne znížená a expresia proteínu Bax bola významne zvýšená v SN myší v skupine s vehikulom (P < 0.01) v porovnaní s myšami v normálnej kontrolnej skupine. Vysoká dávkacistancheliečba tubulosa významne zvýšila expresiu proteínu Bcl2 a významne znížila expresiu proteínu Bax v mozgoch myší s vehikulom (P < 0,01; obrázok 9). Test LSD ukázal, že neexistuje žiadny významný rozdiel medzi skupinami so strednou dávkou a skupinou s vysokou dávkou, ale významný rozdiel medzi skupinou s nízkou dávkou.

Diskusia

PD a apoptóza

PD je neurodegeneratívna porucha. Podľa Zhang et al. (2005), prevalencia je 10,7 percenta u čínskej populácie vo veku nad 55 rokov a 1,67 percenta u ľudí vo veku nad 65 rokov. Počet pacientov s PD sa každoročne zvyšuje s akceleráciou globálneho starnutia, čo predstavuje veľkú finančnú záťaž pre rodiny pacientov a spoločnosť ako celok.

V mozgu sa dopamínergné neuróny podieľajú hlavne na syntéze a sekrécii DA. Sú široko distribuované v centrálnom nervovom systéme a lokalizované predovšetkým v SN (80 percent). TH je kľúčový enzým obmedzujúci rýchlosť pre syntézu DA.

Inhibícia aktivity TH teda znižuje syntézu DA (Huot a Parent, 2007). Hlavnými patologickými a biochemickými zmenami PD sú apoptóza dopaminergných neurónov v SN, významné zníženie nigrostriatálneho DA a tvorba Lewyho teliesok v dopaminergných neurónoch (Dexter a Jenner, 2013). Etiológia PD zahŕňa pridružené genetické faktory, environmentálne faktory a starnutie nervového systému (Allam et al., 2005). Patogenéza PD zostáva v modernej medicíne nejasná. Od konca 60. rokov 20. storočia sa substitučná liečba levodopou úspešne používa na liečbu PD a bola uznaná ako hlavný zlom v liečbe PD. Dlhodobá aplikácia tejto terapie však spôsobuje vedľajšie účinky a terapia nelieči základné príčiny PD (Del Sorbo a Albanese, 2008). Preto je pre liečbu PD rozhodujúci aktívny výskum nových liekov alebo liečebných metód zameraných na ochranu dopaminergných neurónov.

V skorších štúdiách aplikácia koncového značenia dUTP nick end sprostredkovaného terminálnou deoxynukleotidyltransferázou ukázala, že 0,6 percent – ​​4,8 percent dopamínergných neurónov v SN pacientov s PD vykazovalo apoptózu (Mochizuki et al., 1996). Elektrónová mikroskopia ukázala apoptotické znaky, vrátane chromatickej kondenzácie a apoptotických teliesok v dopaminergných bunkách (Anglade et al., 1997). Tompkins a kol. (1997) vykonali ultraštrukturálnu analýzu pitiev mozgového tkaniva od pacientov s PD, AD a difúznou chorobou Lewyho teliesok (DLBD). Našli apoptotické telieska v hustej vrstve SN u pacientov s PD a DLBD, čo poskytuje presvedčivý dôkaz o neuronálnej apoptóze pri PD a súvisiacich ochoreniach. Preto je zníženie alebo potlačenie apoptózy v dopaminergných neurónoch základom liečby PD.

Predchádzajúce štúdie ukázali, že MPTP vyvolal symptómy podobné PD. MPTP prechádza hematoencefalickou bariérou a je metabolizovaný monoaminooxidázami typu B v astrocytoch. Následne sa premieňa na toxický MPP plus, ktorý sa hromadí v mitochondriách dopaminergných neurónov prostredníctvom príjmu proteínov DA transportéra. Vytvára tak nadbytok voľných kyslíkových radikálov, ktoré inhibujú aktivitu komplexu I mitochondriálneho dýchacieho reťazca a syntézu ATP. Tieto udalosti ďalej podporujú tvorbu voľných radikálov a reakcie oxidačného stresu a nakoniec vedú k degenerácii a smrti dopamínergných neurónov.

Táto štúdia teda použila MPP plus na vytvorenie vehikula in vitro v dopaminergných neurónoch MES23.5 a MPTP na vyvolanie vehikula myši na vzájomné overenie. Podľa výsledkov testu MTT MPP plus významne znížil životaschopnosť buniek MES23.5, čo naznačuje, že MPP plus bol cytotoxický pre dopaminergné neuróny. Dokázali to aj výsledkycistanchetubulosa účinne zosilnila expresiu antiapoptotických proteínov a inhibovala zvýšenie apoptózy indukovanej MPP plus.

D a GDNF

GDNF je neurotrofný faktor, ktorý ako prvý izolovali Lin et al. (1993). Lin a kol. (1993) tiež ukázali, že GDNF má špecifické nutričné ​​účinky na dopaminergné neuróny v strednom mozgu potkanov. GDNF, neurturín (NTN), percepcia (PSP) a artemín (ART) tvoria rodinu GDNF. Sú to štruktúrne podobné a funkčne príbuzné sekrečné proteíny (Kotzbauer a kol., 1996; Baloh a kol., 1998; Milbrandt a kol., 1998; Woodbury a kol., 1998).

GDNF receptor pozostáva z dvoch zložiek. Prvá zložka, GFR, je fixovaná na vonkajšiu membránu glykozylfosfatidylinozitolu (GPI) a ukotvená na povrchu konexínu. Druhou zložkou je proteín Ret. Výskum ukázal, že existujú štyri rôzne typy GFR: GFR 1, GFR 2, GFR 3 a GFR 4. GFR 1 je vysokoafinitný receptor GDNF (Onochie a kol., 2000; Chen a kol., 2001; Lindahl a kol., 2001). Proteín Ret je funkčným receptorom GDNF. Homodimérna molekula GDNF sa priamo viaže na GFR 1 za vzniku komplexov a interaguje s Ret, čo vedie k dimerizácii a aktivácii Ret. Vďaka autofosforylácii Ret aktivuje Ret niekoľko bežných TH signálnych dráh. V neprítomnosti proteínu Ret spôsobuje GDNF okrem expresie mRNA a funkčnej aktivity C-fos prostredníctvom jeho receptorového proteínu GFR 1 proteínovú fosforyláciu MAPK, PI-3 a PLC- (He et al., 2008).

Štúdie preukázali, že GDNF má najsilnejší ochranný účinok na dopaminergné neuróny (Rangasamy a kol., 2010; Campos a kol., 2012). Vo vehikuloch, ktoré používajú MPTP a 6-hydroxydopamín (6-OHDA) na vyvolanie poškodenia dopamínergných neurónov, GDNF chráni dopaminergné neuróny znížením apoptózy a podporou axonálneho rastu na vyvolanie diferenciácie kmeňových buniek (Lucas et al., 2012; Littrell a kol., 2013). Lin a kol. (1993) ukázali, že GDNF špecificky podporoval životaschopnosť, diferenciáciu a axonálny rast dopaminergných neurónov, aby podporil príjem DA v neurónoch. Štúdia tiež ukázala, že GDNF nielenže zabránil akútnej toxicite, ale tiež zmiernil dlhodobú toxicitu MPP plus alebo 6-OHDA v dopaminergných neurónoch, čím navyše zabránil bunkovej smrti v stresovaných alebo poškodených bunkách (Yu et al., 2010). Okrem toho GDNF podporoval proliferáciu a diferenciáciu nervových kmeňových buniek smerom k dopaminergným neurónom v strednom mozgu (Lindsay, 1995), aby zachránil dopaminergné neuróny pred retrográdnou degeneráciou (Hong-Juan et al., 2011).

Štúdie ukázali, že expresia GDNF v SN bola významne znížená vo vehikuloch pre zvieratá (Yang et al., 2010). To naznačuje, že to môže byť jeden z mechanizmov patogenézy u PD potkanov. Injekcia 5 až 15 ug/d GDNF do laterálnej komory alebo striata zvieraťa s nosičom indukovaným MPTP počas troch po sebe nasledujúcich mesiacov podporila nigrostriatálnu opravu dopaminergného systému u zvieraťa s nosičom (Grondin et al., 2002). Štúdie liečby PD GDNF vo zvieracích vehikuloch ukázali, že intracerebrálna injekcia GDNF do rôznych oblastí mozgu, ako je SN, nucleus caudate a laterálna komora, zlepšila poruchy pohybu spojené s PD zvieracími modelmi, vrátane zníženej motorickej aktivity, svalovej rigidity a tremor (Grondin et al., 2002).

GDNF však nemôže priamo prechádzať cez hematoencefalickú bariéru. Preto lokálna cerebrálna injekcia GDNF predstavuje značné riziko a ťažkosti pri klinickej aplikácii. Aplikácie na zavedenie exogénneho GDNF prostredníctvom mikroguľôčok s riadeným uvoľňovaním, kapsúl s predĺženým uvoľňovaním a vírusových génov sa stále študujú (Liang a kol., 2010; Yang a kol., 2010; Qiao a kol., 2012). Vzhľadom na obmedzenia rôznych techník zavedenia exogénneho GDNF do mozgu sú pre klinické použitie významné neuroprotektívne činidlá, ktoré podporujú uvoľňovanie endogénneho GDNF.

PD acistanchetubulosa nanoprášok

PD je bežnejšia u dospelých v strednom veku a starších ľudí. Teória TČM predpokladá, že PD sa primárne nachádza v mozgu a je spôsobená najmä nedostatkom pečene a obličiek, okrem vitálnej energie a nedostatku krvi. Podľa tejto teórie by sa teda liečba PD mala zamerať na oživenie obličiek a kostnej drene. Yang a kol. (2010) použili randomizované, dvojito zaslepené a placebom kontrolované klinické štúdie a zistili, že kombinovaná liečba s použitím lieku Madopar a receptov na tonizáciu obličiek zmierňuje motorické dysfunkcie pacientov s PD. Výsledok liečby bol lepší ako jedna terapia s použitím Madoparu. Liečebná účinnosť monoterapie TCM alebo predpisovania zlúčenín pri PD bola potvrdená na zvieracích modeloch PD a klinických aplikáciách. Aplikácie TCM na tonizáciu obličiek a podporu krvného obehu znížili dávkovanie monoterapie pri PD pomocou Madoparu. Niektoré štúdie naznačujú, že TCM zlepšila symptómy PD a chránila dopaminergné neuróny, čo mohlo úzko súvisieť s podporou endogénnej expresie GDNF (Hong-Juan et al., 2011; Qiao et al., 2012).

Zlúčenina na tonizáciu obličiek použitá v tejto štúdii,cistanchetubulosa nanoprášok, obsahoval Cistanche, epimedium a Rhizoma polygonal. Moderný výskum naznačuje, že chemické zloženie Cistanche je ECH, ktoré chráni dopaminergné neuróny v SN u myší s PD indukovanou MPTP a inhibuje redukciu DA a transportéra DA (Zhao et al., 2010). Okrem toho zabraňuje 6-OHDA-indukovanej redukcii DA a chráni striatálne dopaminergné neuróny (Chen et al., 2007). Epimedium inhibuje aktiváciu kaspázy-3 a vykonáva neuroprotektívne úlohy (Liu et al., 2011). Flavonoidy Epimedium účinne podporujú proliferáciu a diferenciáciu nervových kmeňových buniek (Yao et al., 2010).

V tejto štúdii,cistanchenanoprášok tubulosa antagonizoval zvýšenie apoptózy indukovanej MPP plus spôsobom závislým od dávky. Výrazne zlepšil expresiu TH v in vitro vehikule a mal významné antiapoptotické účinky v dopaminergných neurónoch. Myši s vehikulom indukované MPTP vykazovali poruchy správania a významne znížili expresiu TH v tkanivách stredného mozgu a hladiny DA, čo sú typické patologické znaky PD. Rôzne dávkycistanchenanoprášok tubulosa skrátil stacionárne trvanie, zvýšil autonómne aktivity, zlepšil poruchy správania, zvýšil hladiny DA v mozgu a zvýšil expresiu TH vo vozidlách. Tieto výsledky tomu nasvedčovalicistanchenanoprášok tubulosa mal ochranné účinky na dopaminergné neuróny, čím sa zlepšili poruchy správania vozidiel. Rôzne dávkycistanchenanoprášok tubulosa zvýšil expresiu GDNF proteínu a jeho receptorových proteínov v mozgu myší s vehikulom. Liečba vysokou dávkou cistanche tubulosa významne upregulovala expresiu Bcl2 a znížila expresiu Bax, čo naznačuje, že nanoprášok cistanche tubulosa môže podporovať expresiu a sekréciu GDNF v mozgu myši poškodenej MPTP. Okrem toho môže mať neuroprotektívne účinky v dopamínergných neurónoch a minimalizovať neuronálnu apoptózu prostredníctvom neurotrofických podporných úloh GDNF.

Táto štúdia to preukázalacistanchenanoprášok tubulosa vykazoval ochranné účinky v dopamínergných neurónoch in vitro aj in vivo a zvýšil expresiu TH na zlepšenie obsahu DA. Tiež zlepšil poruchy správania u myší s vehikulom indukovaným MPTP, reguloval proteínovú expresiu GDNF a jeho receptorových proteínov v SN a mal antiapoptotické účinky u PD myší. Mechanizmus, ktorý je základom klinických účinkovcistanchetubulosa nanoprášok pri PD môže zahŕňať zvýšenie obsahu endogénneho GDNF v mozgu a tým zníženie poškodenia dopaminergných neurónov.

Autorské príspevky

QX a WF sú spolu prvými autormi práce, S-FY, Y-BC, WQ a S-YC sa podieľali na experimentálnej práci a JC prácu navrhol a viedol.

Vyhlásenie o konflikte záujmov

Autori vyhlasujú, že výskum bol vykonaný bez akýchkoľvek obchodných alebo finančných vzťahov, ktoré by mohli byť chápané ako potenciálny konflikt záujmov.

Poďakovanie

Prácu podporila Natural Science Foundation of Fujian Province Grants (projekt 2015J01686), vedecký výskumný fond Národnej komisie pre zdravie a rodinné plánovanie v Čínskej ľudovej republike (projekt WKJ-FJ-38), Chen Keji fond pre rozvoj integratívnej medicíny (projekt CKJ2014012) a kľúčový predmet Fujianskej univerzity tradičnej čínskej medicíny (projekt X2014010-predmet).

For more information:1950477648nn@gmail.com