Analýza komponentov a antioxidačná aktivita polysacharidov z Cistanche Deserticola

Abstrakt: V tomto článku sú polysacharidy extrahované zCistanche deserticola, Cistanche deserticolahrubýpolysacharidCLP sa čistí DEAE celulózovou stĺpcovou chromatografiou a získa sa neutrálny cukor CLP a kyslý cukor CLP2 z Cistanche deserticola. Obsah celkového cukru, kyseliny urónovej a bielkovín vSurový polysacharid Cistanche deserticolaCLP, Cistanche deserticola neutrálny cukor CLPl aKyslý cukor Cistanche deserticolaCLP2 sa určuje UV spektrálnym skenovaním a určuje sa molekulová hmotnosť a monosacharidové zloženie polysacharidov. Súčasne sa analyzuje kapacita zachytávania radikálov DPPH a celková antioxidačná kapacita surového polysacharidu CLP Cistanche deserticola, neutrálneho cukru CLP1 a kyslého cukru Cistanche deserticola Cl.P2. Namerané údaje ukazujú, že zložky surového polysacharidu Cistanche deserticola CLP, neutrálneho cukru CLP1 Cistanche deserticola a kyslého cukru CLP2 Cistanche deserticola sú podobné, existujú však veľké rozdiely v ich obsahu, pri použití neutrálneho cukru Cistanche deserticola CLP1 a Cistanche sú veľké rozdiely. Kyslý cukor deserticola CLP2 sa separuje a čistí na DEAE celulózovej chromatografickej kolóne a distribúcia molekulovej hmotnosti je 0~10 000 Da, čo naznačuje, že hlavnými zložkami polysacharidov Cistanche deserticola sú cukry s nízkou molekulovou hmotnosťou. Výsledky stanovenia monosacharidov v neutrálnom cukre Cistanche deserticola CLPl ukazujú, že monosacharidy v neutrálnom cukre Cistanche deserticola CLP1 sú hlavne manóza, kyselina galakturónová, glukóza, galaktóza a arabinóza. kyslé cukry ClP2 sú hlavne ramnóza, kyselina galakturónová, glukóza a galaktóza, Výsledky experimentu na zachytávanie radikálov DPPH a experiment s celkovou antioxidačnou kapacitou polysacharidov z Cistanche deserticola ukazujú, že antioxidačná kapacita neutrálneho cukru CLPl Cistanche deserticola je vyššia ako u surového polysacharidu Cistanche deserticola CLP a kyslý cukor Cistanche deserticola CLP2.

Kľúčové slová:Cistanche deserticola; polysacharidy; analýza komponentov;antioxidačná aktivita; absorbancia.

Získajte extrakt z Cistanche Tubulosa pre cielený efekt

Cistancheje bylinná parazitická rastlina obsahujúca veľké množstvofenolový glykozids, biosyntéza,fenyletanoidové glykozidy, cukry a alkoholy. Glykány sú hlavne vo forme polysacharidov. Polysacharid Cistanche má silnú funkciu regulácie imunitnej aktivity [1-2].

Voľné radikály ako intermediárne metabolity v činnostiach ľudského života sú v nestabilnom stabilnom stave a majú vysokú intenzitu oxidačnej aktivity, ktorá môže spôsobiť biologické makromolekuly, preto je použitie prírodného antioxidantu. sa stali hlavným smerom súčasného výskumu potravín. Polysacharidové zloženieCistanchemá silnú antioxidačnú schopnosť, ktorá môže podporovať vychytávanie voľných radikálov v ľudskom tele. Polysacharidové zloženie Cistanches má silnú antioxidačnú schopnosť a môže podporovať vychytávanie voľných radikálov v ľudskom tele [3].

V tomto dokumente,polysacharidyv Cistanche stannic boli extrahované a klasifikované vysoko účinnou gélovou permeáciou. Molekulová hmotnosť polysacharidov v Cistanche bola stanovená vysokoúčinnou gélovou permeačnou chromatografiou. Molekulová hmotnosť polysacharidov Cistanche bola stanovená vysokoúčinnou gélovou permeačnou chromatografiou a zloženie polysacharidov bolo tiež Molekulová hmotnosť polysacharidov Cistanche bola stanovená vysokoúčinnou gélovou permeačnou chromatografiou a zloženie polysacharidov bolo analyzované.

Antioxidačná aktivita Cistanche bola analyzovaná stanovením schopnosti zachytávať voľné radikály a celkovej antioxidačnej kapacity polysacharidových zložiek. Stanovili sme tiež schopnosť zachytávať voľné radikály a celkovú antioxidačnú kapacitu polysacharidových zložiek Cistanchu a poskytli sme teoretický základ pre vývoj a využitie Cistanche a jeho pridanej hodnoty.

1 Príprava vzorky a extrakcia polysacharidových látok z Cistanche

Odvážte 2,5 kg cistanche, nakrájajte, pridajte 12,5 l destilovanej vody a varte 3 hodiny. Po varení počas 3 hodín sa filtrát zozbieral filtráciou a pridal sa k 75 % etanolu a nechal sa stáť 24 hodín. Po varení sa filtrát zhromaždil filtráciou, pridal sa k 75 % etanolu a nechal sa stáť 24 hodín, centrifugoval sa pri 4000 ot./min. počas 30 minút a zrazenina sa oddelila. Zrazenina sa zhromaždila, zmrazila a vysušila, čím sa získal surový polysacharid CLP Cistanche [4]. Zrazenina sa lyofilizovala, čím sa získal surový polysacharid CLP od Cistanche [4]. DEAE celulóza sa odobrala, namočila a nabobtnala, odplynila. Naniesla sa na DEAE celulózovú aniónomeničovú kolónu a ekvilibrovala sa destilovanou vodou a roztokom NaCI. Na ekvilibráciu sa použila voda a roztok NaCl. Odváženie 100 mg surového polysacharidu z Cistanche tubulosa CLP sa rozpustilo v 10 ml destilovanej vody a eluát sa zhromaždil po elúcii destilovanou vodou.

Eluát sa zhromaždil po elúcii destilovanou vodou a lyofilizoval sa zahustením, čím sa získal neutrálny cukor CLP1 od Cistanche; Eluát sa zhromaždil po elúcii roztokom NaCl a potom sa skoncentroval a lyofilizoval po dialýze, čím sa získal kyslý cukor Cistanche CLP1. Po elúcii roztokom NaCl sa eluát zhromaždil a zahustil dialýzou a lyofilizoval, čím sa získal kyslý cukor Cistanche CLP2 [5].

Neutrálny cukor CLP1 a kyslý cukor CLP2 z Cistanche tubulosa boli pripravené v koncentrácii 1 mg/kg. Roztoky polysacharidov boli pripravené v koncentrácii 1 mg/ml a polysacharidy boli analyzované UV spektroskopiou s použitím spektrofotometra pri 210-600 nm. UV spektrá boli skenované pomocou spektrofotometra pri 210-600 nm, a keď sa vrchol objavil pri 260-280 nm, keď sa vrchol objavil pri 260-280 nm, dokázalo sa, že roztok obsahuje proteín a nukleovú kyselinu [6].

2 Stanovenie zloženia polysacharidovej látky Cistanche

Na stanovenie celkového obsahu cukru vo vzorkách Cistanche bola použitá metóda fenol-kyselina sírová. Boli namerané roztoky glukózy 0,1 mg/ml, 0,2, 0,4, 0,6, 0,8 a 1 ml v sklenených skúmavkách a pridala sa destilovaná voda na fixáciu objemu na 1 ml. Potom sa do skúmaviek pridalo 0,5 ml fenolového činidla a 2,5 ml koncentrovanej kyseliny sírovej s koncentráciou 6 %, dobre sa pretrepali a ochladili na teplotu miestnosti. Absorbancia sa merala pri 490 nm pomocou spektrofotometra a štandardná krivka sa vyniesla s obsahom cukru ako horizontálnou súradnicou a absorbanciou ako vertikálnou súradnicou a vypočítala sa regresná rovnica [7-8].

Obsah bielkovín vo vzorkách Cistanche bol stanovený pomocou metódy Komas Brilliant Blue. Obsah proteínu vo vzorkách bol meraný spektrofotometrom pri 495 nm a obsah proteínu bol vypočítaný podľa rovnice štandardnej krivky [9].

Obsah glyoxalátu vo vzorkách Cistanche bol stanovený pomocou m-hydroxyfenylovej metódy. Rôzne koncentrácie štandardu a 0,4 ml roztoku vzorky s koncentráciou 0,1 mg/ml boli pridané do skúmavky s 2,5 ml koncentrovanej kyseliny sírovej, pretrepané

Do skúmavky sa pridala koncentrácia m-hydroxybifenylu a 0,5 % roztok hydroxidu sodného, ​​dobre sa pretrepali a nechali sa 30 minút. Absorbancia pri 525 nm sa merala spektrofotometrom a množstvo glyoxalátu vo vzorke sa vypočítalo podľa rovnice štandardnej krivky [10-11]. Relatívna molekulová hmotnosť polysacharidov Cistanche bola stanovená vysokoúčinnou gélovou chromatografiou a zloženie monosacharidov Cistanche bolo stanovené vysokoúčinnou kvapalinovou chromatografiou. Monosacharidové zloženie Cistanche bolo stanovené pomocou vysokoúčinnej kvapalinovej chromatografie [12].

3 Výsledky a analýza polysacharidového zloženia Cistanche Tubulosa

Z obr. 1 je vidieť, že neutrálny cukor CLP1 z Cistanche Tubulosa vykazoval zjavný absorpčný vrchol pri 280 nm, zatiaľ čo kyslý cukor CLP2 z Cistanche Tubulosa nemal zjavný absorpčný vrchol pri 260-280 nm, ale UV absorpčné spektrum bolo vyššie. Keďže tryptofán a tyrozín obsiahnuté v proteínoch mali väčšie absorpčné hodnoty pre UV pri 280 nm, dalo sa usúdiť, že neutrálny cukor CLP1 Cistanche obsahoval glykoproteíny, ale nedalo sa posúdiť, či kyslý cukor CLP2 Cistanche obsahoval nukleové kyseliny a proteíny.

Nie je možné určiť, či kyslý cukor CLP2 z Cistanche obsahuje nukleové kyseliny a proteíny.

DEAE celulózová negatívna iónomeničová chromatografická kolónová analýza môže adsorbovať iónové látky a nečistoty na kolóne, aby sa dosiahlo oddelenie polysacharidových látok a po zahustení a vysušení eluátu destilovanej vody sa získalo celkom 34,68 mg neutrálneho cukru Cistanche CLP1 a po s použitím roztoku NaCl na elúciu, zahustenie a vysušenie sa získalo celkom 16,52 mg kyslého cukru Cistanche CLP2. Rovnica štandardnej krivky celkového obsahu cukru, obsahu bielkovín a rovnica štandardnej krivky glyoxylátu. Boli získané merania celkového cukru, proteínu a glyoxylátu Cistanche. Celkový obsah cukru, bielkovín a kyseliny glukurónovej v Cistanche sa meral a uvádza sa v tabuľke 1.

Skenovacia krivka UV spektra fotometra od 210 do 600 nm je znázornená na obrázku 1.

Z obr. 1 je možné vidieť, že neutrofilný cukor CLP1 Cistanche vykazoval jasný absorpčný vrchol pri 280 nm, zatiaľ čo kyslý cukor CLP2 Cistanche vykazoval absorpčný vrchol pri 260-280 nm. a kyslý cukor CLP2 z Cistanche Tubulosa vykazoval jasný absorpčný vrchol pri 260-280 nm. Hoci pri 260-280 nm nebol zjavný absorpčný pík, UV absorpčné spektrum bolo vyššie. Keďže tryptofán a tyrozín obsiahnuté v proteínoch mali väčšiu absorpčnú hodnotu pri 280 nm pre UV absorpčnú hodnotu, možno usúdiť, že neutrofilný cukor CLP1 Cistanche obsahoval glykoproteíny, ale nebolo možné určiť, či kyslý cukor Cistanche CLP2 obsahoval nukleové kyseliny a proteíny. . Prítomnosť nukleových kyselín a proteínov v Cistanche CLP2 nebolo možné určiť.

DEAE celulózová negatívna iónomeničová chromatografická kolónová analýza môže adsorbovať iónové látky a nečistoty do kolóny. Separácia polysacharidových látok bola dosiahnutá adsorpciou iónových látok a nečistôt na kolóne. Eluát z destilovanej vody sa zahustil a vysušil, čím sa získal neutrálny cukor Cistanche. Po zahustení a vysušení eluátu z destilovanej vody sa získalo celkom 34,68 mg CLP1 a po zahustení a vysušení roztokom NaCl sa získal kyslý cukor CLP1. Kyslý cukor CLP2 z Cistanche sa získal ako 16,52 mg. Získala sa rovnica štandardnej krivky celkového obsahu cukru, obsahu bielkovín a obsahu glyoxylátov v Cistanche. a glyoxylátová štandardná krivka. Boli získané merania celkového cukru, proteínu a glyoxylátu Cistanche. Celkový obsah cukru, bielkovín a kyseliny glukurónovej v Cistanche sa meral a uvádza sa v tabuľke 1.

Tabuľka 1 Obsah celkového cukru, bielkovín a kyseliny urónovej v Cistanche deserticola

Môže sa určiť molekulová hmotnosť a plocha píku štandardnej vzorky a rovnica regresnej regresie sa môže získať nahradením signálu emisie svetla vzorky, ktorá sa má testovať, do regresnej rovnice. Môže sa získať molekulová hmotnosť vzorky, ktorá sa má testovať. Molekulová hmotnosť vzoriek, ktoré sa majú testovať, sa môže získať nahradením hodnôt signálu emisie svetla vzoriek, ktoré sa majú testovať, do regresnej rovnice. Získala sa priemerná molekulová hmotnosť, priemerná ťažká molekulová hmotnosť a disperzný koeficient Cistanche Tubulosa CLP1 a Cistanche Tubulosa CLP2. Cistanche neutrálny cukor CLP1 a Cistanche acidulous CLP2 boli stanovené vysokoúčinnou gélovou permeačnou chromatografiou. Výsledky výpočtu retenčného času a molekulovej hmotnosti sú uvedené v tabuľke 2. Pomer vysokej priemernej molekulovej hmotnosti k číselnej priemernej molekulovej hmotnosti sa použil na označenie šírky molekulovej distribúcie. Pomer vysokej priemernej molekulovej hmotnosti k číselnej priemernej molekulovej hmotnosti sa používa na označenie šírky molekulovej distribúcie.

Požiadajte o viac:

E-mail:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel: plus 86 15292862950