Stanovenie drog zvyšujúcich pohlavie nezákonne pridané do výrobkov zdravotnej starostlivosti pomocou kombinovaných technológií TLC-Niｒs

Abstrakt:Na stanovenie detekčného modeludrogy zvyšujúce sexnezákonne pridané do chromatografie tenkej vrstvy (TLC) a kombinovanou technológiou v blízkosti infračervenej spektroskopie (NIｒS) pre rýchlu kvalitatívnu a kvantitatívnu analýzu drog nezákonne pridaných vzdravotnícke výrobky． SE Obsah chemických liekovv zdravotníckych výrobkoch je určená metódou HPLC ako referenčná hodnota． TLC sa použil v štúdii． Ako vyvíjajúce sa rozpúšťadlo sa použil hydroxid trichlórmetánu metylalkohol-amónia (1 0 ∶ 1 ∶ 0． 1) a doštička bola detegovaná pod ultrafialovou žiarovkou． Spektrum škvŕn chemických zložiek na TLC sa zbieralo Niｒs． Rýchly kvalitatívny a kvantitatívny model chemických liekov bol stanovený pomocou čiastočnej regresnej analýzy najmenších štvorcov (PLS) kombinovanú s metódou krížovej validácie． A potvrdené pre model． Zaviedla metódu analýzy HPLC s lepším stupňom separácie a širokým lineárnym rozsahom． Zaviedli modely analýzy TLC-Niｒs Sildenafil a noretilDenafil so širokým lineárnym rozsahom a lepšie stabilné a predpovedané výsledky． Korelačný koeficient (ｒ2), koreňová stredná štvorcová chyba validácie kalibrácie (ｒmsecv) a koreňová priemerná štvorcová chyba predikcie (ｒmsep) bola {{1 {0}}． 984, 0． 0 85 a 0． 081; 0． 982,0． 098 a 0． 087, respektíve． Použitím modelu TLC-Niｒs bolo zistených 9 šarží v 10 dávkach produktov zvyšujúcich pohlavie na pridanie sildenafilu a nekvalifikovanej rýchlosti 90%, priemerná relatívna odchýlka obsahu sildenafilu a nóracetildenafilu predpovedaných 1． bola 1． 86%, 1． 96%, respektíve． Výsledky ukázali, že modely analýzy TLC-Niｒs sa môžu použiť pre vyššie chemické komponenty rýchle stanovenie v produktoch zvyšujúcich pohlavie． Metóda so špecifickým a jednoduchým． Ktoré poskytli nápady na rýchle určenie pridaných nelegálnych drog v výrobkoch zdravotnej starostlivosti．

 

Prírodné bylinné doplnky cistanche pre sexuálny výkon

 

Kľúčové slová: zdravotnícke výrobky; nelegálne pridané; Tlc-niｒs; HPLC; produkt zvyšujúci pohlavia

 

S rastúcou informovanosťou verejnosti o zdravotnej starostlivosti sa rastie dopyt po zdravotných výrobkoch, najmä zdravotnícke výrobky označené ako tradičná čínska medicína. Zdravotné výrobky sú obľúbeným pojmom pre zdravé potraviny, ktoré sa nazývajú doplnky výživy v zahraničí. Nie sú to drogy a majú funkciu regulácie ľudských funkcií. Používajú ich konkrétne skupiny ľudí, ale nie sú určené na liečbu chorôb [1]. Tvárou v tvár pokušeniu vysokých ziskov nelegálni predajcovia dodávajú nadmerné dávky lacných chemických surovín so zjavnými vedľajšími účinkami na zvýšenie účinnosti výrobkov. To výrazne narušilo trh s výrobkami zdravia mojej krajiny a predstavovalo vážne ohrozenie zdravia ľudí. Napríklad v roku 2009 pomocný produkt hypoglykemického zdravia v regióne Xinjiang „Tangzhining Capsule“ pridal nadmerné dávky zakázaného chemického glibenclamidu, čo spôsobuje veľa úmrtí. V roku 2014 „kapsula na chudnutie Xianxian v provincii Shanxi pridala zakázané chemické lieky sibutramín a sildenafil, čo spôsobilo, že mnohí ľudia majú nepriaznivé reakcie alebo dokonca zomrú. V posledných rokoch sa pri náhodnej inšpekcii a hodnotení zdravotníckych výrobkov zistilo, že nelegálni výrobcovia pridali nadmerné dávky sildenafilu do výrobkov sexuálneho zdravia a tradičných prípravkov na zdravie čínskej medicíny na klamanie spotrebiteľov, ktoré vážne ohrozujú zdravie spotrebiteľov [2,3]; Podobné javy, ako sú nadmerné dávky zakázaných chemických liekov, ako sú fenafil, biguanidy, furosemid a fenolftale v sexuálnom zdraví, sa hypoglykemické a výrobky na zdravie na chudnutie objavili v nekonečnom prúde a zakrývanie pridávania sa stáva čoraz vyšším [4,5]; Takéto javy sa často vyskytujú v zahraničí [6]. Tieto nezákonné činy s rozsiahlym dopadom a veľkým poškodením si zaslúžia hlboké zváženie orgánov regulácie drog a je obzvlášť dôležité rozvíjať rýchle metódy vzorkovania a detekcie trhu.

V súčasnosti detekčné metódy používané na nezákonné pridávanie chemických liekov v tradičných čínskych liekoch a zdravotných produktoch zahŕňajú hlavne chromatografiu tenkej vrstvy (TLC) [7], vysoko výkonná kvapalina chromatografie (HPLC) [8], tekutá chromatografia-MS spektrometria (LC-MS) [9], Plynová chromatická chromasová spektrometria (GC-MS) [10], Ion mobility (RAMIS) a RAMIS SEFTROMS a RAMIS) [10], Ion (LC-MIS) [RAMIS) a RAMIS a RAMAS a RAMAS a RAMAS a RAMIS spektrometria (RS) [11].
Medzi rôznymi hlásenými detekčnými metódami boli LC-MS, GC-MS a IMS viac študované, ale kvôli vysokej cene nástrojov a komplexnej prevádzke nie je ľahké propagovať a je ťažké ich popularizovať v mestských a horských oblastiach s relatívne zaostalým hospodárskym rozvojom. TLC je jednou zo štyroch tradičných metód identifikácie liekov. Je rýchly, jednoduchý a má dobré separačné efekty. Všeobecne sa používa pri kvalitatívnej a kvantitatívnej identifikácii liekov. Jeho nevýhodou je však to, že musí mať zodpovedajúce referenčné látky alebo referenčné liečivé materiály [12, 13]. V posledných rokoch bola vyvinutá v blízkosti infračervenej spektroskopie (NIRS). Zhromažďuje informácie o absorpcii vibrácií a rotácie skupín CH, OH, SH, NH, C=C a C=O detegovanej látky v takmer infračervenom spektre pre kvalitatívnu a kvantitatívnu analýzu látok. Všeobecne sa používa v poľnohospodárstve, ropnom, chemickom priemysle, tabaku a potravinách. V súčasnosti sa postupne uplatňuje na farmaceutický a drogový dohľad. Má veľký rozvojový potenciál v rýchlej kvalitatívnej a kvantitatívnej detekcii a analýze liekov [14, 15].

Preto tento dokument používa existujúce populárne nástroje a testovacie metódy na vytvorenie kombinovanej technológie TLC-NIRS. Ako príklad sa ujme produktov sexuálneho zdravia, ustanovuje sa univerzálny kvalitatívny a kvantitatívny model detekcie na nezákonné pridávanie zakázaných chemických liekov na sexuálne zdravie. Môže sa používať efektívne, rýchlo a jednoducho na skríning a detekciu pridania zakázaných chemických liekov do výrobkov na zdravie trhu, čím sa znižuje detekčné náklady.

1 nástroje a testovacie drogy

1.1 nástroje

Fourier Transform Tensor 37 Niｒ Spectrometer (Bruker, Nemecko), opus 5. 0 analytický softvér; LC -20 pri vysoko výkonnom kvapalinovom chromatografe (Shimadzu, Japonsko), LC Solution Chromatography Workstation; Elektronická analytická rovnováha BS224S (Sartorius, Nemecko); Silikagél GF254 tenká vrstva (Qingdao Ocean Biochemical Co., Ltd.).

 

1,2 testovacie lieky

Sildenafil (510068-201401, 99,9%) a narodenafil (520039-201902, 96,5%) boli zakúpené od inštitútu pre výskum potravín a liečiv v Číne a štruktúry sú uvedené na obrázku 1. Metanol bol chromatograficky čistý, voda bola ultrapúrová voda a chloroforma, fosfórová kyselina a amónia boli všetky analytické. Vzorky zdravia boli vzorky trhu.

 

Obr. 1 Štruktúry chemických liekov zvyšujúcich pohlavie

 

2 metódy a výsledky

2. 1 Príprava referenčného roztoku a roztoku vzorky

Príprava referenčného roztoku: Zoberte približne 25 mg sildenafilu a narendenafilu, zvážte ich presne, vložte ich do 5 ml objemovej banky a rozpustite ich v metanole, aby sa pripravila zmiešaný referenčný zásobník približne 5 mg/ml; Potom vezmite približne 5 mg sildenafilu a narendenafilu, zvážte ich presne, vložte ich do 5 ml objemovej banky a rozpustite ich v metanolu, aby ste pripravili jediný identifikačný referenčný roztok približne 1 mg/ml.

Príprava roztoku vzorky: Zoberte dávku tohto produktu raz, vložte ho do 5 ml objemovej banky, pridajte metanol a ultrazvuku pre 3 0 min (100 W, 56 kHz), ochladte ju, pridajte metanol do značky a filtrujte, aby sa získal filtrát. Pri určovaní obsahu presne zmerajte 1 ml každého roztoku vzorky, rozpustite ho v mobilnej fáze na 25 ml a filtrujte ho 0,45 uM filtračnej membrány. Pretože hmotnostné koncentrácie komponentov detegovaných v pozitívnych vzorkách (zdravotné produkty s zakázanými chemickými liekmi) sa výrazne líšia, môže sa objem odberu vzoriek primerane zvýšiť alebo sa roztok vzorky môže primerane zriediť, aby sa dosiahla konečná koncentrácia hmoty v lineárnom rozsahu.
Príprava pozitívneho roztoku vzorky: Keďže sa pre Naringenfil nakreslila žiadna pozitívna vzorka, bola odobratá prázdna vzorka (Huangjingbajitian Capsule, Luoyang Kangti Biology, výsledok testu bol negatívny) sa odobral raz a pridal sa primerane zriedený referenčný roztok Naringenfil. Pozitívny roztok vzorky bol pripravený podľa prípravného metódy v roztoku vzorky, takže hmotnostné koncentrácie Naingenfil v pozitívnom roztoku vzorky boli približne 5, 7,5 a 10 mg/ml, respektíve 4, 3 a 3 kópie každej koncentrácie hmotnosti koncentrácie hmotnosti sa pripravili paralelne.

2. 2 Chromatografické a spektrálne podmienky

2. 2. 1 HPLC Chromatografické stavy

Phenomenex ODS C18 (25 0 mm × 4, 6 mm, 5 μm) sa použil chromatografický stĺpec; 45% metanol (a) -55% 0,3% vodného roztoku kyseliny fosforečnej (B) sa použil ako mobilná fáza pre eluciu počas 30 minút; Prietok bol 1 ml/min, detekčná vlnová dĺžka bola 290 nm; Teplota stĺpca bola 40 stupňov; Objem vstrekovania bol 10 ul.

 

2. 2. 2 TLC Chromatografické stavy

Použila sa chromatografická doštička so silikagélom GF254 a amónny chloroform-metanol (1 0: 1: 0. 1) sa použil ako vyvíjajúce sa rozpúšťadlo na vývoj a odparovanie. Po sušení v sušičke počas 1 hodiny sa značka skontrolovala pod ultrafialovou lampou 254 nm (pozri obrázok 2).

 

2. 2. 3 Podmienky akvizície NIRS

Na meranie sa použila sonda Bruker NIRS Solid Fiber, s rozsahom čísla vlny 12, 000 až 4, {{}} CM {{}}, 64 skenov, rozlíšenie 16 cm {{}}}, teplota 10 až 30 stupňov a vlhkosť 35% ± 5%. Ako referencia sa použila prázdna doska tenkej vrstvy GF254 GF254 a spektrum sa zhromaždilo po odčítaní pozadia. Každé miesto chemickej zložky sa merali paralelne 5 -krát a informácie NIRS sa uložili.

 

2.3 Vytvorenie metódy stanovenia obsahu HPLC

2.3.1 Vyšetrovanie lineárneho vzťahu

2.0 mL of the mixed reference stock solution (sildenafil 5.25 mg/mL; narcolepsy 5.15 mg/mL) was accurately aspirated and diluted to 10 mL with methanol, and then 0.25, 0.1, 0.5, 1. 0, 1,5, 2. {{2 {{0}, 2. 7. {{4 0}, 8. 0, 9. 0, 1 {0. 13. 0, 14. {{6 {0}, 15. 2 0. 26. 0, 27. {0, 28. 0, 29. {{{1 {1 {{1 {{1 {0}}}} 2}}} 0}}, 30,0, 31.0, 32.0, 34.0, 34.0, 34.0, 34.0, 35.0, 34.0, 34.0, 34.0, 35.0, 35.0, 35.0, 35.0, 35.0, 35.0 36,0, 37,0, 38,0, 39,0, 40,0, 41,0, 42,0, 43,0, 44,0, 5 ml, rozpustenie v mobilnej fáze a vymieňajú až 5 ml, dobre, dobre pretrepte.
Podľa chromatografických podmienok za „2.2.1“ sa uskutočnila analýza vzorky, bola stanovená plocha vrcholu a regresná čiara bola vypočítaná s píkovou plochou každej zložky ako súradnica (y) a hmotnostnou koncentráciou referenčnej látky ako abscissa (x): Sildenafil je y {3}} {{} {} {} {} {} {} {} {} {} {} {} {} {} {} {} {} {} {} {} {} {} {} {} {=0. 9989, lineárny rozsah 0. 0525 ~ 1,05 ug; Naftol je y=1 × 106x -3 184. 4, r=0. 9999, lineárny rozsah 0,0515 ~ 1,03 ug. Výsledky ukázali, že vyššie uvedené referenčné látky mali vo svojich lineárnych rozsahoch dobrú linearitu.

 

2.3. 2 Presnosť, stabilita, opakovateľnosť a test regenerácie

Vezmite zmiešaný referenčný roztok v rámci „2.3.1“ a prázdna vzorka (Huangjingbajitian Capsule, Luoyang Kangti Biological, výsledok testu je negatívny) a pripravte 6 roztokov vzoriek obsahujúcich sildenafil a Nardenafil paralelne podľa metódy pod „2.1“. Podľa chromatografických podmienok za „2.2.1“ sa zmiešaný referenčný roztok vstrekol 6 -krát nepretržite na presnosť; Jeden zo vzorových roztokov bol injektovaný na 0, 3, 6, 9, 12 a 24 hodín pre stabilitu; 6 roztokov vzorky sa pripravili paralelne na opakovateľnosť a zotavenie a každá vzorka bola injikovaná raz. Boli stanovené vrcholové oblasti Sildenafilu a Nardenafilu a vypočítalo sa zotavenie a jeho hodnota RSD. Výsledky Priemerná miera zhodnocovania sildenafilu a Nardenafilu bola 100. 16%, 100, 49%; Hodnoty RSD boli nižšie ako 3% (n=6), čo naznačuje, že prístroj mal dobrú presnosť, roztok vzorky bol stabilný do 24 hodín a metóda mala dobrú regeneráciu a opakovateľnosť.

 

2.3.3 Stanovenie obsahu

Presne aspirujte každý roztok vzorky, vstrekujte a analyzujte podľa chromatografických podmienok za „2.2.1“, zmerajte trikrát pre každú dávku, zaznamenajte plochu vrcholu a vypočítajte obsah. Výsledky ukazujú, že medzi 10 dávkami vzoriek sexuálneho zdravia sa zistilo, že 9 šarží obsahuje zakázaný chemický liek sildenafil a pridaná dávka sa výrazne líšila. Miera detekcie bola 90%. Výsledky sú uvedené v tabuľke 1 a na obrázku 3.

 

Tabuľka 1 Výsledky stanovenia látok nezákonne pridaných v 10 produktoch zvyšujúcich pohlavia (n=3)

 

Vzorka	Výrobca	Vzorka	Obsah (mg/čas)
Výťažok z kvetu zlata	Poľnohospodárska univerzita západnej Číny	1 × 0.88 g	58.79 ± 1.03
Repelent hmyzu	Hongkonská univerzita v oblasti vedy a techniky	2 × 0.50 g	73.62 ± 0.21
Nemecký harmanček	Haiyun biologický	2 × 0.50 g	22.47 ± 0.23
Skorá ranná rosa	Hongkonská univerzita v oblasti vedy a techniky	2 × 0.50 g	8.90 ± 0.03
Pruh	USA	2 × 0.50 g	61.83 ± 0.48
A. Niger	Poľnohospodárska univerzita západnej Číny	2 × 0.50 g	45.20 ± 0.04
Závit	Hongkonská univerzita v oblasti vedy a techniky	2 × 0.50 g	Nezistené

 

Obr. 3 HPLC z 10 výrobkov na zvyšovanie pohlavia

 

2.4 Zriadenie kvalitatívneho modelu TLC-NIRS pre chemické lieky na sexuálne zdravie

2.4.1 Zber spektrálnych informácií

Podľa podmienok v časti „2.2.3“ sa zbierali NIR referenčných škvŕn identifikovaných po vývoji na doske tenkej vrstvy TLC. Objemy škvrnitého referenčného roztoku boli 1, 2, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 a 50 ul a bodové objemy roztoku vzorky boli 2, 5 a 10 ul. Každé referenčné miesto zmiešaného referencie a vzorky s rôznymi bodovými objemami sa zbierali 5 -krát a diagram prekrytia NIRS je znázornený na obrázku 4. V experimente boli spektrá zmiešaného referencie s rôznymi bodovými objemami vybrané ako kalibračná sada a spektrum vzoriek s rôznymi bodovými objemami boli vybrané ako overovacia súbor, aby sa ubezpečila, že spektrum informácií o spektrine bolo v rozsahu spektrum spektrie v rámci rozsahu v rozsahu sada.

Obr. 4 Originálne spektrá chemických liekov