Echinakozid podporuje proliferáciu ľudských renálnych tubulárnych epiteliálnych buniek blokovaním signálnej dráhy NF-κB sprostredkovanej HBX/TREM2

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

YuFan ZHanG, QinFanG Wu, liMin ZHonG, donGWei GonG

Abstraktné.

Proteín X vírusu hepatitídy B (HBX) je potrebný na replikáciu HBV a hrá úlohu pri progresii hepatitídy u ľudí. Avšak základná funkcia HBX počas HBV-indukovanej chronickej glomerulonefritídy (HBV-Gn) nie je známa. (echinakozid z cistanche)(ecH) je fenyletanoidný glykozid z rodu Cistanche, ktorý má silné antiapoptózne a neuroprotektívne účinky. v tejto štúdii sa skúmala funkcia HBX a vzťah medzi HBX a ecH v ľudských renálnych tubulárnych epiteliálnych bunkách (rTecs; bunková línia HK-2). Na kvantifikáciu hladín expresie mRNA a proteínov HBX v bunkách HK-2 sa použili kvantitatívne analýzy Pcr s reverznou transkripciou a western blot. Na analýzu bunkovej proliferácie sa uskutočnil test súpravy na počítanie buniek-8. Na stanovenie rýchlosti apoptózy sa použila analýza prietokovou cytometriou. HBX vykazoval antiproliferatívne a proapoptotické účinky v HK-2 bunkách a bol pozitívne spojený so spúšťacím receptorom exprimovaným na expresiu myeloidných buniek 2 (TreM2). Okrem toho ECH narušila funkciu HBX v HK-2 bunkách, fungujúcich ako supresor HBX. Okrem toho sa na ďalšie skúmanie vzťahu medzi HBX a nF-KB použil špecifický inhibítor NF‑κB, PdTc. Výsledky naznačujú, že nF-KB sa podieľal na signálnej dráhe HBX / TreM2 a negatívne reguloval expresiu TreM2 v RTECS. Táto štúdia poskytla nový pohľad na funkciu HBX a tiež naznačila potenciálnu hodnotu ECH ako terapeutického činidla pre HBV-Gn.

Úvod

Vírus hepatitídy B (HBV) je vírus Hepadnaviridae, ktorý vedie k akútnej a chronickej hepatitíde u ľudí (1). HBV spôsobuje nielen pretrvávajúcu alebo prechodnú infekciu v pečeni, ale infikuje aj extrahepatálne tkanivo, vrátane pankreasu, žlčovodu, lymfoidného systému a obličiek (2). Okrem toho je infekcia HBV úzko spojená s chronickou glomerulonefritídou (HBV-Gn); avšak molekulárne mechanizmy HBV počas HBV-Gn nie sú úplne pochopené (3,4).

Regulačný proteín vírusu X vírusu hepatitídy B (HBX) HBV je potrebný na replikáciu HBV (5,6). množstvo štúdií uvádza, že HBX podporuje bunkovú proliferáciu počas hepatokarcinómu spojeného s infekciou HBV (7-9). Ľudské renálne tubulárne epitelové bunky (rTec) sú hlavnou súčasťou renálneho tubulárneho interstícia a zohrávajú aktívnu úlohu pri zápale obličiek (10). Apoptóza rTec je úzko spojená s dysfunkciou tubulárneho interstícia, ktorá následne vedie k progresii HBV-Gn (10). HBX je primárne exprimovaný v bunkách rTec a spôsobuje apoptózu rTec a lézie obličkových trubíc u pacientov s HBV-Gn (11,12). Okrem toho sa uvádza, že HBX potláča proliferáciu potkaních rTecs (13) a nadmerná expresia HBX urýchľuje progresiu bunkového cyklu z G1 do S fázy v primárnych rTecs, čo vedie k zastaveniu bunkového cyklu v S fáze (14). Preto identifikácia inhibítora HBX môže poskytnúť nové liečivo pre HBV-Gn. Presná molekulárna sieť HBX v ľudských rTec však nie je úplne pochopená.(echinakozid z cistanche)(ecH) je prírodná zlúčenina extrahovaná zCistancherastlín, ktorý vykazuje antiapoptotické a protizápalové účinky (15,16). Predchádzajúca štúdia uvádza, že ecH indukuje proliferáciu a zabraňuje apoptóze črevných epiteliálnych buniek (17). Okrem toho sa uvádza, že ecH urýchľuje regeneráciu kostí zvýšením proliferácie buniek osteoblastov (18). ecH môže tiež znížiť replikáciu HBV, expresiu antigénu a zápal v črevných epiteliálnych bunkách potkanov (16, 19). Biologický účinok ecH na rTecs však nebol úplne objasnený.

Nadmerná expresia TreM2 podporovala proliferáciu gliómových buniek (22). Naopak, knockdown TreM2 znižuje translokáciu nF-κB do jadra v degeneratívnych bunkách ľudského jadra pulposus (23). Okrem toho bol TreM2 identifikovaný ako nový terapeutický cieľ pre degeneráciu ľudských medzistavcových platničiek (23). Biologická funkcia TreM2 v ľudských rTecs však nebola hlásená. v tejto štúdii bola nadmerná expresia HBX (oeHBX) indukovaná v ľudských rTecs (bunková línia HK-2) ​​a následne účinok ecH(echinakozid z cistanche) na transfekovaných bunkách oeHBX. Cieľom tejto štúdie bolo preskúmať funkcie HBX a potenciálnu hodnotu ecH ako účinného terapeutického činidla pre HBV-Gn.

Materiály a metódy

Bunka kultúra.Ľudská bunková línia rTec HK-2 bola zakúpená od spoločnosti Shanghai Yaji Biotechnology co., ltd. Bunky HK-2 boli kultivované v médiu DME/F12 (kat. č. SH30023.01B; Hyclone; cytiva) doplnenom 10 percentami fetálneho bovinného séra (kat. č. 16000-044; Gibco; Thermo Fisher Scientific, inc. .), 2 mM l-glutamínu a 1 percento penicilín/streptomycín (kat. č. P1400-100; Beijing Solarbio Science & Technology co., Ltd.) pri 37 °C s 5 percentami CO2.

RNA izolácia a obrátene transkripčne-kvantitatívne PCR (RT-qPCR).Celková rna bola extrahovaná z buniek HK-2 pomocou Trizol® (kat. č. 1596 -026; Invitrogen; Thermo Fisher Scientific, Inc.), podľa protokolu výrobcu. Celková RNA bola reverzne transkribovaná do cDNA pomocou súpravy First-Strand cDNA Synthesis kit podľa protokolu výrobcu (kat. č. K1622; Thermo Fisher Scientific, Inc.). qPCR sa uskutočnilo s použitím SYBr-Green premixu podľa protokolu výrobcu (kat. č. K0223; Thermo Fisher Scientific, Inc.) na detektore ABI-7300 v reálnom čase (Applied Biosystems; Thermo Fisher Scientific, Inc.). Podmienky PCR boli: 95 °C počas 10 minút, po ktorých nasledovalo 40 cyklov 95 °C počas 15 sekúnd, 60 °C počas 45 sekúnd. Pre každú reakciu boli potrebné tri opakovania. Pre qPCR sa použili nasledujúce páry primérov: HBX forward, 5'-GGcTGcTaGGTTGTacTG-3' a reverzný, 5'-caGaGGTGaaGcGaaGTG -3'; TreM2 vpred, 5'-TGGcacTcTcaccaTTacG-3' a vzad, 5'-ccTccc aTcaTcTTccTTcac-3'; a GaPdH vpred, 5'-AAT cccaTcaccaTcTTc-3' a vzad, 5'-aGGcTGTTG TcaTacTTc-3'. Hladiny mRNA boli kvantifikované pomocou metódy 2‑ΔACq a normalizované na vnútorný referenčný génGAPDH (24).

Nadmerná expresia a knockdown.Na vyvolanie nadmernej expresie HBX a TreM2 sa sekvencie cDNA HBX alebo TreM2 s plnou dĺžkou vložili do vektora plVX-puro (cleantech laboratories, Inc.) dvojitým štiepením (Hindiii aEcoRI). Následne sa rekombinovaný plazmid (1,5 ug) transfekoval do buniek HK-2 (2x105). Falošný plazmid (prázdny vektor, 1 ug) bol prechodne transfekovaný do buniek HK-2 (2x105) ako negatívna kontrola (oenc) pomocou lipofectamine® 2000 (kat. č. 11668-027, Invitrogen, Thermo Fisher Scientific, Inc.). eH(echinakozid z cistanche)(kat. č. 82854-37-3; Biopurify Phytochemicals, ltd.) bol rozpustený v DMSO (kat. č. d2650; Sigma-Aldrich; Merck KGaa) v koncentrácii 1, 2,5, 5, 10, 20 a

50 mg/l; a pridal sa ku kultúre transfekovaných buniek oeHBX alebo oeTreM2. Následný experiment sa začal o 48 hodín neskôr.

Na zníženie expresie TreM2 boli syntetizované tri malé interferujúce (si)RNA (siTreM2-1, siTreM2-2 a siTreM2-3; 20 µM) zamerané na TreM2 (Shanghai Majorbio Bio-Pharm Technology co .ltd.) a následne transfekované do buniek HK-2 (2x105) s použitím lipofectamine® 2000 podľa protokolu výrobcu (Invitrogen; Thermo Fisher Scientific, Inc.). Ako negatívna kontrola sa použila nešpecifická zmiešaná sekvencia siRNA (5'uucuccGaacGuGucacGu3, 25 nM) si-negatívna kontrola (nc). Cielený lokus a sekvencie TreM2 sirnas sú uvedené v tabuľke Si. Následný experiment sa uskutočnil o 48 hodín neskôr.

západnej blotting.Celkový proteín bol extrahovaný z buniek HK-2

použitím RIPA lyzačného pufra (kat. č. BYl40825; Jrdun Biotech Co., Ltd.). Celkový proteín sa kvantifikoval pomocou testovacej súpravy Bicinchoninic Acid (kat. č. PICPI23223; Thermo Fisher Scientific, inc.) podľa protokolu výrobcu a 20 ug proteínu/pruh sa separovalo pomocou SDS-PaGe na 15 percentnom géli. Denzitometria vzoriek bola stanovená pomocou čítačky mikrodoštičiek (dnM-9602, Pulangxin). Následne boli oddelené proteíny prenesené na PVDF membránu. Po blokovaní 5 percentným odtučneným sušeným mliekom počas 1 hodiny pri izbovej teplote sa membrána inkubovala s primárnymi protilátkami (tabuľka SII) pri teplote 4 °C cez noc a znovu sa inkubovala so sekundárnou protilátkou proti myšiemu igG (1:1, 000, kat. č. a0216, Beyotime Institute of Biotechnology) počas 1 hodiny pri 37˚C. Imunoreaktívne proteínové pásy sa vizualizovali pomocou systému ecl (cytiva). Bloty sa uskutočňovali trojmo.GAPDHa H3 sa použili ako kontroly nanášania pre cytoplazmatické a jadrové proteíny, v danom poradí.

Výsledky

ECH (echinakozid z cistanche)potláča funkcia z HBX v HK-2 bunky.Posúdiť

funkcia HBX, nadmerná expresia HBX bola indukovaná v HK-2 bunkách. Relatívne hladiny mrna a proteínu HBX boli významne upregulované v bunkách oeHBX v porovnaní s bunkami oenc (obr. 1a a B). Následne boli oeHBX bunky kultivované s rôznymi koncentráciami ecH (1, 2,5, 5, 10, 20 a 50 mg/l; el, e2,5, e5, el0, e20 a e50, v tomto poradí). Nadmerná expresia HBX významne znížila proliferáciu HK-2 buniek a tento pokles bol zvrátený ecH spôsobom závislým od dávky po 24 a 48 hodinách (obr. 1c).

Okrem toho rýchlosť proliferácie buniek oeHBX nevykazovala žiadny významný rozdiel v porovnaní s bunkami ošetrenými E1 (obr. 1c). Na rozdiel od toho ošetrenie e10 významne zvýšilo rýchlosť proliferácie buniek oeHBX v porovnaní s ošetrením E20 a E50, ktoré nevykazovalo žiadny významný rozdiel (obr. 1c). Preto sa skúmal účinok ecH na apoptózu v bunkách ošetrených e2.5, e5 a e10-. Nadmerná expresia HBX významne zvýšila apoptózu buniek HK‑2 a miera apoptózy buniek oeHBX sa znížila s liečbou ecH v závislosti od dávky (obr. 1d). celkovo výsledky naznačujú, že ecH inhibuje funkciu HBX v bunkách HK-2 spôsobom závislým od dávky.

TREM2 výraz je inhibované podľa ECH(echinakozid z cistanche) v transfekované oeHBX

bunky.rT-qPcr a western blotting sa použili na skúmanie relatívnej hladiny expresie mrna a proteínu TreM2 v bunkách oeHBX. Hladiny expresie TreM2 mrna a proteínu boli významne upregulované v bunkách oeHBX v porovnaní s bunkami oenc (obr. 2a a B). Avšak ecH znížila hladiny expresie TreM2 v transfekovaných oeHBX bunkách spôsobom závislým od dávky (obr. 2a a B). Výsledky preto naznačujú, že expresia HBX bola pozitívne spojená s expresiou TreM2 a ďalej naznačovali supresívny účinok ecH na HBX v bunkách HK -2.

Knockdown a nadmerná expresia z TREM2 v HK-2 bunky.Na ďalšie posúdenie funkcie TreM2 sa v bunkách HK -2 indukoval knockdown a nadmerná expresia TreM2 pomocou interferencie rna a lentivírusového vektora. Pre knock-down test tri siRNA zamerané na ľudský génTREM2(siTreM2-1, siTreM{1}} a siTreM2-3) boli transfekované do buniek HK-2 a nešpecifická siRNA sa použila ako negatívna kontrola (sinc). všetky tri TreM2 sirna úspešne zrazili endogénnu expresiu TreM2 v HK-2 bunkách (obr. 3a a B). Najnižšie relatívne hladiny expresie TreM2 mrna a proteínu však boli pozorované v bunkách transfekovaných siTreM2-1 a siTreM2-2-(obr. 3a a B), teda siTreM2-1 a siTreM{{13 Transfekované bunky sa vybrali na následné experimentovanie. Pre experimenty s nadmernou expresiou sa skonštruoval plazmid obsahujúci úplnú ľudskú sekvenciu TreM2cdna a následne sa transfekoval do buniek HK-2 (oeTreM2). a

falošný plazmid slúžil ako negatívna kontrola (oenc). Úroveň expresie TREM2 bola významne zvýšená v bunkách oeTREM2 v porovnaní s bunkami oenc (obr. 3c a d). Preto sa bunky oeTreM2 použili na následné experimentovanie.

TREM2 stíšenie klesá a apoptóza z oeHBX bunky.Hodnotil sa profil apoptózy buniek oeHBX transfekovaných siTREM2 alebo sinc. Rýchlosť apoptózy buniek oeHBX plus sinc bola významne vyššia v porovnaní s otvorenými bunkami. Rýchlosť apoptózy sa však významne znížila v bunkách oeHBX plus siTreM2-1 alebo siTreM2-2 v porovnaní s bunkami oeHBX plus sinc (obr. 4a). Výsledky naznačujú, že knockdown TreM2 inhiboval funkciu HBX počas apoptózy HK-2 buniek.

Survivín patrí k inhibítoru rodiny apoptóznych proteínov, ktorý inhibuje apoptotickú aktivitu a potláča bunkovú smrť (25). Targeting Survivin bol identifikovaný ako nový prístup k liečbe karcinómu obličkových buniek (26). nF-κB je tiež inhibítor apoptózy, ktorý hrá úlohu v antiapoptotických nádorových procesoch (27). Okrem toho je aktivácia kaspázy 3 úzko spojená s apoptózou (28). v tejto štúdii bol kvantifikovaný obsah proteínov TreM2, survivín a štiepená kaspáza3 v bunkách HK-2. Úroveň expresie TREM2 bola významne znížená v bunkách oeHBX plus siTreM2-1/2 v porovnaní s bunkami oeHBX plus sinc (obr. 4B). Úroveň expresie survivínu bola významne zvýšená v bunkách oeHBX plus siTreM2-1/2 v porovnaní s bunkami oeHBX. okrem toho bola hladina expresie štiepenej kaspázy 3 významne znížená v bunkách oeHBX plus siTreM2-1/2 v porovnaní s bunkami oeHBX plus sinc (obr. 4B). Okrem toho oeHBX významne znížil translokáciu NF‑κB do jadra a transfekcia siTREM2‑1/2 významne zvýšila nukleárnu translokáciu nF‑κB (obr. 4B). Celkovo výsledky naznačujú, že TreM2 bol následným faktorom HBX v bunkách HK-2, preto môže HBX podporovať apoptózu reguláciou expresie TreM2 v ľudských rTecs.

TREM2 nadmerná expresia potláča a premiestnenie zNF‑κB do a jadro v HK-2 bunky.Účinok eH(echinakozid z cistanche)na oeTreM2-transfekovaných bunkách. Nadmerná expresia TreM2 podporila apoptózu buniek HK-2 (obr. 5a). Apoptóza buniek oeTREM2 bola významne znížená liečbou ECH (E10; obr. 5A). Okrem toho ECH významne znížil expresiu TreM2 v bunkách oeTreM2. Nadmerná expresia TREM2 významne znížila hladiny expresie survivínu, avšak tento pokles expresie bol zvrátený ecH. okrem toho boli hladiny proteínovej expresie štiepenej kaspázy3 významne zvýšené v bunkách oeTreM2 v porovnaní s bunkami oenc; účinok, ktorý bol významne znížený liečbou ECH. Okrem toho ecH podporovala translokáciu nF-KB do jadra v bunkách oeTreM2 (obr. 5B). Celkovo výsledky naznačujú, že ecH tiež potlačil funkciu TreM2 v ľudských rTec bunkách.

Funkcie HBX sú potlačené podľa a NF‑κB inhibítor PDTCv človek RTEC.Na ďalšie posúdenie vzťahu medzi

Bunky HBX a nF-KB, HK-2 sa kultivovali so špecifickým inhibítorom nF-KB, PdTc (10 umol/l; P10). Miera apoptózy buniek oeHBX buniek bola významne zvýšená v porovnaní s bunkami oenc (obr. 6a). Avšak bunky oeHBX plus PdTc vykazovali významne zvýšenú mieru apoptózy v porovnaní s bunkami oeHBX. Okrem toho sa relatívne hladiny expresie mRNA a proteínu TreM2 znížili v bunkách oeHBX plus PdTc v porovnaní s bunkami oeHBX (obr. 6B). Preto výsledky

naznačil, že nF-KB negatívne reguloval expresiu TreM2 v bunkách transfekovaných oeHBX.

NF‑κB inhibítor PDTC potláča TREM2 promótor činnosť v oeHBX bunky.bol skonštruovaný luciferázový reportér (pGl{0}}enhancer-luc2) obsahujúci sekvenciu promótora divokého typu TreM2 (pGl3-enhancer-luc2-pTreM2) a následne transfekovaný do oenc, oeHBX a oeHBX plus P10 kultivované bunky.

Aktivita luciferázy reportérového vektora obsahujúceho promótor TREM2 divokého typu bola významne zvýšená v bunkách oeHBX v porovnaní s bunkami oenc. PdTc však významne potláčal luciferázovú aktivitu reportéra v bunkách oeHBX (obr. 7). celkovo výsledky ukázali, že PdTc inhiboval transkripciu TreM2 potlačením promótorovej aktivity TreM2 v bunkách oeHBX.

Diskusia

HBX je primárne exprimovaný v rTec pacientov s HBV-Gn a funguje ako determinant vírusovej patogenézy (11,29). Preto je zvyšovanie vedomostí o funkcii siete molekúl HBX kritickým krokom vo vývoji nového prístupu na liečbu HBV-Gn. Cieľom tejto štúdie bolo ďalej preskúmať funkciu HBX a preskúmať jeho potenciálnu molekulárnu sieť v ľudských rTecs.

HBX inhibuje proliferáciu rTecs (11). v tejto štúdii boli identifikované antiproliferačné a proapoptózne funkcie HBX v ľudských RTEC, čo naznačuje, že HBX potlačil vývoj ľudských rTecs. Predchádzajúca štúdia naznačila, že ecH(echinakozid z cistanche)inhibuje replikáciu HBV a expresiu antigénu (19). v tejto štúdii eH(echinakozid z cistanche)liečba narušila funkciu HBX v HK-2 bunkách, preto môže byť HBX ovplyvnená eH v HK-2 bunkách.

SPRÁVY o molekulárnej medicíne 22: 1137-1144, 2020 1143

Okrem toho výsledky naznačujú, že ech(echinakozid z cistanche)môže slúžiť ako potenciálne terapeutické činidlo pre HBV-Gn.

TreM2 je vrodený imunitný receptor, ktorý hrá úlohu v zápalovej odpovedi (30). V tejto štúdii bola expresia HBX pozitívne spojená s expresiou TreM2 v ľudskom RTECS. Okrem toho knockdown TREM2 významne znížil rýchlosť apoptózy buniek oeHBX a ecH(echinakozid z cistanche)liečba znížila účinok oeTreM2 na apoptózu buniek. Celkovo tieto výsledky naznačujú, že TreM2 bol zacielený HBX v bunkách HK-2. Preto eH(echinakozid z cistanche)môže inhibovať apoptózu ľudských rTec blokovaním aktivity signálnej dráhy HBX/TreM2.

Predchádzajúca správa preukázala, že nF-KB nielen hrá úlohu pri apoptóze buniek, ale podieľa sa aj na regulácii imunitných reakcií a zápalu (31). Okrem toho je TreM2 sprostredkovaný nF-κB-senzitívnou mikroRNA-34a počas Alzheimerovej choroby a makulárnej degenerácie (32, 33). v tejto štúdii sa rýchlosť apoptózy buniek oeHBX významne zvýšila v prítomnosti PdTc. Podľa našich najlepších vedomostí táto štúdia po prvýkrát naznačila, že inhibítor NF-κB PdTc potlačil promótorovú aktivitu TreM2. Okrem toho výsledky naznačujú, že TreM2 negatívne reguloval translokáciu nF-KB do jadra v bunkách HK-2, ale bol pozitívne spojený s hladinami expresie štiepenej kaspázy3. TreM2 hral v bunkách HK-2 opačnú úlohu ako v ľudskom degeneratívnom nucleus pulposus a gliómových bunkách (22, 23). Súčasná štúdia preto naznačuje, že TreM2 môže mať rôzne funkcie v rôznych typoch ľudských buniek.

Súhrnne povedané, táto štúdia nielen naznačila, že nF-KB bol novou zložkou signálnej dráhy HBX / TreM2, ale tiež naznačila, že nF-KB negatívne reguluje expresiu TreM2 v ľudských rTecs. Hlavným obmedzením tejto štúdie však bol nedostatokv vivoexperimenty a klinické údaje. Preto ďalejv vivoa klinické štúdie sú potrebné na potvrdenie zistení tejto štúdie.

v tejto štúdii funkcia ecH(echinakozid z cistanche)bol skúmaný a výsledky naznačujú potenciálne účinky eH(echinakozid z cistanche)na signálnych dráhach v ľudských rTecs. Okrem toho táto štúdia zlepšila existujúce znalosti o biologickej funkcii ecH v ľudských rTec bunkách a tiež navrhla jej potenciál ako nového terapeutického činidla pre HBV-Gn.

Referencie

1. Karayiannis P: Vírus hepatitídy B: virológia, molekulárna biológia, životný cyklus a intrahepatálne šírenie. Hepatology international 11: 1-9, 2017.

2. Seeger c a Mason WS: Biológia vírusu hepatitídy B. Microbiol Mol Biol rev 64: 51-68, 2000.

3. Usamae, ana Maria S, W ray K a Fervenza Fc: Liečba nefropatie spojenej s vírusom hepatitídy B. nephron clin Pract 119: c41-c49, 2011.

4. Zhang Y, li J, Peng W, Yu G, Wang 1, chen J a Zheng F: Postinfekčná akútna glomerulonefritída spojená s HBV: správa o 10 prípadoch. PloS one 11: e0160626, 2016.

5. Slagle Bl a Bouchard MJ: Vírus hepatitídy B X a regulácia expresie vírusového génu. studená Spring Harb Perspect Med 6: a021402, 2016.

6. Guerrieri F, Belloni l , d'andrea d, Pediconi n, le Peral , Testoni B, Scisciani c, Floriot o, Zoulim F, Tramontano a,et al: Celogenómová identifikácia priamych genómových cieľov HBx. BMc genomics 18: 184, 2017.

7. Shi T, Hua Q, Ma Z a lv Q: downregulácia mir-200a-3p indukovaná proteínom X vírusu hepatitídy B (HBx) podporuje bunkovú proliferáciu a inváziu v súvislosti s infekciou HBV hepatokarcinóm. Pathol res Pract 213: 1464-1469, 2017.

8. Tian Y, Xiao X, Gong X, Peng F, Xu Y, Jiang Y a Gong G: HBx podporuje bunkovú proliferáciu tým, že ruší prehovory medzi mir-181}a a PTen. Sci rep 7: 40089, 2017.

9. Idris Me, Hachem H, Koering c, Merle P, Thénoz M, Montreux F a Wattel e: HBx spúšťa buď bunkovú senescenciu alebo bunkovú proliferáciu v závislosti od bunkového fenotypu. J Vírusová hepatitída 23: 130-138, 2016.

10. Wang X, Wangl, Zhun, Zhou Y, GulJ a Yuan WJ: Proteín X vírusu hepatitídy B moduluje T-bunkové a makrofágové reakcie indukované renálnymi tubulárnymi epitelovými bunkami. Immunol cell Biol 94: 266-273, 2016.

11. HeP, Zhang d, liH, Yang X, li d, Zhai Y, Ma 1 a Feng G: Proteín X vírusu hepatitídy B moduluje apoptózu v ľudských renálnych proximálnych tubulárnych epiteliálnych bunkách aktiváciou JaK2/STaT3 signálnej dráhy. int J Mol Med 31: 1017-1029, 2013.

12. Yang Y, Wang X, Zhang Y a Yuan W: Proteín X vírusu hepatitídy B a prozápalové cytokíny synergizujú na zvýšenie apoptózy renálnych tubulárnych buniek vyvolanej Trail upreguláciou dr4. int J Biochem cell Biol 97: 62-72, 2018.

13. He P, Zhou G, Qu d, Zhang B, Wang Y a li d: HBx inhibuje proliferáciu a indukuje apoptózu prostredníctvom zvýšenej regulácie Fas/Fasl v renálnych tubulárnych epiteliálnych bunkách potkanov. J nephrol 26: 1033, 2013.

14. Han W, luo M, He M, Zhu Y, Zhong Y, ding H, Hu G, liu l, chen Q a lu Y: Transfekcia génu HBx ovplyvňuje cyklus primárnych renálnych tubulárnych epiteliálnych buniek prostredníctvom regulácie expresie cyklínu. Mol Med rep 18: 1947-1954, 2018.